ДНК затравочная активность

Затравочная активность ДНК при различных воздействиях [43] [c.202]

Скольжение при репликации — механизм затравочной активности химически синтезированных олигонуклеотидов, в частности олигонуклеотида д(А—Т) (рнс. 30). [c.81]

С другой стороны, кратковременное воздействие незначительного количества ДНК-азы I на нативную ДНК [43] приводит к усилению ее затравочной активности (табл. 16). По-видимому, [c.202]

Обработка ДНК Относительная затравочная активность Преимущественный способ включения нуклеотидов [c.202]

К настоящему времени в этом направлении накоплен значительный экспериментальный материал. По данным многих исследователей, затравочная активность ДНК в ДНК- и РНК-полимеразных системах заметно угнетается при облучении в относительно низких дозах — порядка 1000 и даже 500 р. Рентгеновское облучение препаратов ДНК дозой 5000 рад снижает их матричную способность в РНК-полимеразной системе до 30% от контроля. Физико-химический анализ макромолекул, используемых в качестве затравки, показал, что облучение этой дозой приводит к уменьшению молекулярного веса ДНК в результате деполимеризации (до 60%), к снижению температуры плавления двуспиральной структуры с 75 до 67° и повреждению 0,2% оснований. Более резкое падение затравочной активности ДНК по сравнению с ее молекулярным весом, свидетельствует, по-видимому, о том, что радиационная инактивация матрицы обусловлена совокупностью всех этих нарушений структуры. [c.186]

Контактирование сиропа с активным углем проводят при перемешивании в течение 30—35 мин, после чего его фильтруют на рамном фильтр-прессе. Первые порции фильтрованного сиропа возвращают в исходную емкость, а прозрачный бесцветный сироп поступает в сборник перед контрольным фильтрованием. Прозрачный, без посторонних примесей сироп поступает в сборник перед холодильником, затем в холодильник, где он охлаждается проточной водой до 48—53 °С и через фильтр с капроновым ситом № 73 поступает в кристаллизаторы, где в качестве затравочных кристаллов оставляют не менее 10 % утфеля от предыдущего цикла кристаллизации. [c.110]

Расщепление рацематов А. на оптич. антиподы производят затравочной кристаллизацией их солей с арилсульфо-кислотами или кристаллизацией диастереомерных солей ацильных производных А. с оптически активными основаниями или солей эфиров А. с оптически активными к-тами. Часто используют энантиоселективный гидролиз ацилами-нокислот ацилазами или гидролиз эфиров А. эстеразами, причем ферменты атакуют в первую очередь Ь-А. Перспективно расщепление рацематов лигандообменной хроматографией. Хроматографию используют также для анализа энантиомерного состава А. [c.138]

Образующиеся при нейтрализации кристаллы сульфата кальция чрезвычайно малы. Для того чтобы эти кристаллы можно было удалить из щелока, их необходимо довести до размеров, соответствующих эквивалентному радиусу не менее 10— 20 мкм. Протекающее во времени созревание кристаллов ускоряют механическим воздействием — перемешиванием щелока с помощью мешалки или воздуха, а также созданием центров кристаллизации путем введения в количестве 0,1—0,15 кг/м щелока свежеприготовленных затравочных кристаллов сульфата кальция (приготовление затравки, применяемой и для предотвращения отложения минеральной накипи в теплопередающих аппаратах, описывается в гл. 9). Следует учитывать, что затравка проявляет активность лишь в период роста кристаллов, завершающегося за 5—6 ч, после чего она представляет собой обычный шлам. Операцию созревания кристаллов выполняют в емкости, получившей название выдерживателя. [c.255]

К наиболее существенным факторам, влияющим на скорость роста, могут быть отнесены следующие Т — температурный перепад между камерами роста и растворения 5, — площадь поверхности затравочных пластин — площадь активной поверхности растворения шихты С — интенсивность циркуляции раствора между камерами роста и растворения (массовый расход) б,, бг — толщина диффузионного слоя соответственно около растущей грани кристалла ( дворник кристаллизации ) и растворяющейся поверхности шихты. [c.35]

Выявленные особенности одновременного роста и растворения затравочных кристаллов алмаза в р, 7-условиях, отвечающих области устойчивости графита зона метастабильного роста), при наличии градиента температуры величиной до б-Ю" К/м можно объяснить тем, что вблизи поверхности затравки создается достаточно большое концентрационное пересыщение к алмазу (см. рис. 134, область С), а не только к графиту. При этом грань кристалла, располагавшаяся перпендикулярно к потоку и ориентированная к источнику углерода, естественно, должна расти с наибольшей скоростью, а теневая — растворяться, что и наблюдается в эксперименте. Растворение теневой поверхности затравок приводит к появлению шероховатого рельефа, выступы которых являются пассивными местами растворения и потенциально активными для роста. При достаточной высоте выступа и наличии локального градиента температуры вдоль него вершина выступа оказывается в условиях достаточного перепада температуры, чтобы расти за счет растворения своей подложки. Ясно, что скорость роста усов должна быть соизмерима со скоростью растворения затравки. Качественно это иллюстрирует рис. 136, а. В среднем скорость роста нитевидных кристаллов алмаза имеет величину порядка 3-10 м/с, что соответствует скорости растворения затравок. Ориентирующее воздействие подложки на нитевидный кристалл безусловно, но наблюдается также влияние условий питания уса в направлении его роста. [c.387]

В этих условиях возможно, в частности, получение тонких слоев с различной по сравнению с затравочным кристаллом типом проводимости за счет введения в шихту соответствующих электрически активных примесей. [c.390]

Метод Вернейля основан на плавлении тугоплавких веществ в кислород-водородном пламени (рис. 58 а) и заключается в том, что исходное вещество (шихта) в виде порошка диаметром частиц 2 100 мкм из бункера через газовую горелку попадает на верхний оплавленный торец затравочного монокристалла. Пролетая через кислород-водородное пламя, частицы шихты оплавляются, подпитывая тем самым тонкую пленку расплава (толщиной порядка 100 мкм). Так как затравочный монокристалл опускается, то пленка расплава кристаллизуется с нужной скоростью, постоянно пополняясь исходной шихтой. При согласованных расходах, с одной стороны, шихты, водорода и кислорода, а с другой — скорости опускания монокристалла, толщина пленки расплава поддерживается практически постоянной. Этот метод относится к методам с ограниченным объемом расплава. На рис. 59 представлен один из первых аппаратов Вернейля, конструкция которого в настоящее время значительно изменена. В нашей стране работами по усовершенствованию этих аппаратов активно занимались С. К. Попов [94] и выдающийся конструктор кристаллизационной аппаратуры Н. П. Ильин, создавший серию кристаллизационных аппаратов различного назначения. [c.87]

Для реакции необходимы ионы магния, затравочная ДНК и 5 -трифосфаты всех четырех дезоксирибонуклеозидов. При этих условиях происходит прирост количества ДНК, в 10—20 раз превышающий количество добавленной затравки. Фермент из данного вида активен с затравочной ДНК, полученной из самых различных организмов. Имеются данные, что перед тем, как стать затравкой, ДНК должна перейти в односпиральную форму. ДНК-полимераза из зобной железы теленка не активна с нативной ДНК, но активна с односпиральной ДНК, выделенной из фага Х-174, или с нативной ДНК, предварительно нагретой. [c.476]

Корнберг и его сотрудники [51, 149] предположили, что механизм, обусловливающий затравочную активность такого олигонуклеотида, как д (А—Т), носит следующий характер (фиг. 74), На первом этапе происходит репликация матрицы, причем образование новой цепи начинается с З -гидроксильного конца матрицы. Затем вновь образованная спираль плавится и вновь отжигается таким образом, что в результате освобождается участок матрицы, делая возможным дальнегтшую репликацию. В результате такого соскальзывания новая цепь сдвигается вдоль матрицы сразу на целое звено АТ, что обеспечивает условия для правильного образования пар оснований. Повторяющиеся последовательно акты репликации и соскальзывания позволяют образовать на короткой матрице длинный полимер д (А—Т). Процесс этот строго зависит от температуры в то время как д (А—Т)4 лучше всего работает как затравка при 10°, д (А—Т) гораздо продуктивнее при 37°, поскольку он связан со своей репликой множеством водородных связей, что затрудняет скольжение. [c.213]

Осадок, возможно, состоит из соли кальция с фосфонатом [21], хотя это еще не подтверждено. Если принять, что одна молекула фосфоната будет покрывать примерно 0,1 нм2 поверхности затравки, то при концентрации этого вещества 10 М будет занято около 0,6 м л поверхности в условиях описанных здесь опытов. Так как поверхность затравки гидроксифосфата кальция составляла около 6 м /л (30 м г), то для полного ингибирования роста кристаллов необходимо покрыть около 10% поверхности затравки. Это довольно малая величина, так как для фосфоната эффективное покрытие поверхности может составлять 0,3 нм /молекула. Удельная поверхность твердых фаз была измерена путем адсорбции азота эффективная поверхность для твердо-жидкостного взаимодействия могла отличаться от этой величины по крайней мере в 2 раза. Таким образом, получается, что для полного ингибирования осаждения фосфата кальция должно быть покрыто минимум около 10% и максимум около 50% поверхности затравки. Учитывая, что фосфонат может занимать около половины поверхности, следует сделать вывод, что при концентрации (1+3) 10 М фосфоната, при которой наблюдается эффект полного ингибирования, будет достигнуто мономолекулярное покрытие поверхности. Результаты данной работы показывают, что скорость осаждения значительно снижается, когда фосфонат покрывает от 1 до 10% поверхности (см. рис. 2.4). Важно, что количество ионов магния и цитрата, адсорбированное на поверхности при полном ингибировании, оказывается примерно таким же, как для фосфоната. При снижении концентрации этих ионов менее чем до 0,1 этих уровней влияние их на скорость осаждения фосфата кальция также уменьшается. Данные результаты согласуются с изотермой адсорбции Ленгмюра, и можно предположить, что число активных центров роста на затравочном материале из гидроксифосфата кальция относительно мало. Подобные предположения были сделаны также для процесса роста затравочных кристаллов других умеренно растворимых солей [22]. Изотерма ограничена областями самопроизвольного осаждения цитрата кальция, фосфата магния или фосфоната кальция. [c.25]

В ряде опытов был изучен фосфоролиз, т. е. обращение реакции полимеризации [158, 166, 168]. Для этого используемый полинуклеотид инкубировали с ферментом в присутствии избытка неорганического фосфата, что приводило к образованию нуклеозиддифосфатов в результате последовательного отщепления моно-нуклеотидных единиц. Оказалось, что легко фосфоролизируются не только полимеры, полученные путем биосинтеза, но и обладающие затравочной активностью олигонуклеотиды. Динуклеотиды же и динуклеозидмонофосфаты, как и следовало ожидать, не поддаются фосфоролизу. РНК вируса табачной мозаики и высокополимерная РНК дрожжей могут легко подвергнуться фосфоролизу, но если дрон<жевую РНК предварительно обрабатывают щелочью, то фосфоролиз протекает медленно. Медленно протекает и фосфоролиз многочисленных тяжей, образованных, например, из поли-А и поли-У. Неполностью (па 20—30%) протекает фосфоролиз транспортной РНК клеточной цитоплазмы, что можно объяснить особенностями вторичного строения s-PHK. По-видимому, фосфоролиз затрагивает преимущественно концевые группы. [c.256]

Для ферментов из мышц и из растений необходимы разные затравки. В случае фосфорилазы картофеля активной затравкой с наименьшим размером молекул служит мальтотриоза, однако она малоактивна. Высшие мальтодекстрины, а именно мальтотетраоза, мальтопентаоза и мальтогексаоза, значительно более эффективны, их затравочная активность фактически равна активности крахмала [170]. При наличии эффективной затравки синтез амилозы протекает по механизму, при котором все цепи затравки удлиняются примерно с одинаковой скоростью. В случае мышечной фосфорилазы в качестве затравки могут служить также разветвленные полисахариды, такие, как гликоген или амилопектин, тогда как амилаза и мальтодекстрин оказываются неактивными. [c.149]

В связи с этим можно предложить некоторые рекомен дации по обработке затравки для повышения ее активности После получения затравочные кристаллы необходимо в течение нескольких минут промывать водой для образования на их поверхности ямок травления. Время травления не должно быть СЛИШКОК1 большим, так как при значительных размерах ямки травления могут стать неактивными. Следует также учитывать и то, что некоторые параметры адсорбции и кристаллизации (В, Е, Сро) существенно зависят от условий получения и обработки затравочных кристаллов. В процессе синтеза или травления кристаллов можно создать условия для повышения вероятности соударения их друг с другом, например, увеличивая скорость перемешивания. Это должно привести к повышению дефектности получаемых кристаллов. Тогда при травлении их водой поверхностная плотность ямок возрастает и это также вызовет увеличение затравочной активности кристаллов. [c.29]

Наши рассуждения по поводу значения метастабильного состояния структуры ДНК в радиационном эффекте на клетку основываются на фактах, устанавливающих эти состояния структуры ДНК как в клетке, так и в растворе. Дашкевич [7] показала, что в регенерирующей печени увеличивается фракция ДНК, переходящая в интерфазный слой после обработки хлороформом. Об этом свидетельствуют также данные Рольфа [69, который выделил из бактериальных клеток фракцию ДНК, обладающую высокой затравочной активностью. Тихоненко [30, 78], исследуя механизм тепловой денатурации ДНК в растворе, показал, что переход ДНК в интерфазный слой после обработки хлороформом связан с метастабильным состоянием структуры ДНК. [c.67]

Ларк, Кавальери и Розенберг (14, 43] выделили из синхронизированных бактерий 107о ДНК в состоянии затравочной активности. [c.68]

Следует отметить, что гидратация метаболизирующих участков в хромосоме и наличие особого метастабильного состояния структуры ДНК в процессе репликации являются не единственными условиями, определяющими высокую радиочувствительность клетки. В определенный момент метаболической активности клетки высокий радиобиологический эффект может определяться повреждением тех участков хромосомы, которые ответственны за ключевые процессы в метаболизме клетки. Так, например, высокая радиочувствительность клеток в предсинтетиче-ский период может быть связана с повреждением структуры гена-регулятора, от которого зависит переход ДНК в состояние затравочной активности и, таким образом, будет нарушен такой уникальный процесс, как репликация ДНК. [c.69]

И. В. Филиппович. Вы не совсем правы. Я имел в виду работу Леннерта и Окада, выполненную в 1964 г. Авторы изучали включение С -лн-зина в ядерные белки и Н -тимидина в ДНК ядер регенерируюш,ей печени П vivo после облучения животных в дозе 800 р. Включение лизина в гистон, а также количество гистона в расчете на ядро после облучения не отличались от контроля, а включение тимидина в ДНК сильно угнеталось, В результате, отношение гистоны ДНК увеличивается, а это, как известно, приводит к понижению затравочной активности ДНК- Авторы вовсе не считают этот вывод абсолютно неправомочным , а указывают на то, что этот механизм не является единственным, объясняющим известный факт угнетения синтеза ДНК ядерными белками. Как известно, большую роль в изменении метаболической активности ДНК играют и другие белки ядра, и, в первую очередь, остаточный белок. [c.129]

Прежде всего необходимо отметить очень близкое совпадение между дозами, вызывающими угнетение синтеза ДНК, и дозами, при которых наблюдается отчетливое поражение ДНК и ДНП, выявляемое при физико-химическом исследовании. Известно, что 30—40%-ное угнетение синтеза в клетках млекопитающих наступает при дозах 500—1000 р. При этих же дозах происходит существенное изменение структуры ДНК и ДНП. Есть прямые указания на изменение затравочной активности ДНК и ДНП при облучении. Ленертом и Окада было обнару- [c.136]

Еще не открыта ДНК-полимеразная активность, которая способна инициировать синтез дезоксирибонуклео-тидной цепи. Все известные ферменты удлиняют ранее начатые цепи. Следовательно, необходимым звеном аппарата репликации является обеспечение затравочной активности, которая способна запустить синтез цепи ДНК. Эта стадия обычно включает синтез короткой рибону-клеотидной последовательности, которая позднее удаляется. [c.410]

Затравочная активность ДНК, т. е. ее способность служить матрицей для синтеза комплементарных нитей ДНК или РНК, также служит важным критерием инактивации нуклеиновых кислот ионизирующим излучением. Путем соответствующей постановки эксперимента можно дифференциально оценить способность ДНК служить матрицей для синтеза ДНК или РНК. Для этого облученную ДНК инкубируют в полной ДНК-полимеразной (или РНК-полимеразной) системе, содержащей меченые иуклео-зидтрифосфаты, а затем измеряют индекс метки в кислотонерастворимой фракции. Интересно, что для подавления способности молекул ДНК служить матрицей для синтеза ДНК необходима доза облучения, в 40 раз меньшая, чем для синтеза комплементарных РНК. Это можно объяснить, если учесть, что в первом случае транскрибируется вся матрица, а во втором — только ее ограниченные участки. [c.64]

Как было указано, инициация биосинтеза дочерних цепей ДНК требует предварительного синтеза на матрице ДНК необычного затравочного олигорибонуклеотида, названного праймером, со свободной гидроксильной группой у С-3 рибозы. Этот короткий олигорибонуклеотид синтезируется комплементарно на матрице ДНК при участии особого фермента-праймазы, наделенной РНК-полимеразной активностью. [c.485]

В литературе до сих пор появляются сообщения, в которых пытаются поставить под сомнение дислокационную природу линейных дефектов в синтетическом кварце. В качестве основных доводов выдвигаются чрезмерно большая ширина этих дефектов и их необычно сильная травимость в таких растворах, как плавиковая кислота, приводящая к образованию протяженных каналов длиной до нескольких десятков миллиметров. Однако оба указанных эффекта могут получить разумное объяснение, если предположить, что ростовые дислокации активно адсорбируют такие примеси, как вода и щелочные металлы, что должно привести к редкому локальному повышению растворимости в области, прилегающей к ядру дислокации. Основным аргументом, подтверждающим дислокационную природу линейных дефектов, является, конечно, наблюдающийся дифракционный контраст. Приведем еще одно наблюдение, свидетельствующее о дислокационной природе этих дефектов. Часто в начальный период ввода автоклава в режим роста наблюдается интенсивное растворение затравочных пластин. Причем растворяются в основном области, прилегающие к линейным дефектам, пронизывающим затравку. Растворение может быть столь интенсивным, что в затравочной пластине образуется множество дырок , так что она приобретает вид ажурного дырчатого образования. Последующее наращивание кристалла приводит к залечиванию большинства повреждений и формированию весьма совершенных кристаллов. При этом, если травление было сильным, то часть дислокационных дырок остается в виде вытянутых газожидких включений. Однако, если отдельное включение порождается одиночным линейным дефектом в затравке, то, как правило, в нарастающем кристалле от этого включения также исходит лишь один линейный дефект, что, несомненно, свидетельствует в пользу его дислокационной природы. [c.95]

Механические повреждения затравочной пластины, такие, как трещины, а также искусственно образованные отверстия и запилы, являются источниками дислокаций. Многочисленные подтверждения этому были получены при съемке рентгеновских то-пограмм. На рис. 20 видны пучки дислокаций, исходящие от трещины в затравочной пластине. На поверхности пинакоида этого кристалла на фоне рельефа булыжной мостовой в участке над трещиной расположена гряда активных акцессорий роста. [c.97]

Количество адсорбированных частиц примеси варьирует на различных участках поверхности акцессорий. Следствием этого является сложное макромозаичное распределение неструктурной примеси, которое наиболее отчетливо прослеживается в наружных зонах кристалла. Весьма малые (в пределах градуса) искривления поверхности базиса вызывают резкие изменения градиента концентрации примеси вдоль зон, параллельных растущей поверхности. На разрезах, параллельных плоскости х, видно, что наиболее активно примесь адсорбируется склонами акцессорий, обращенными в стороны грани отрицательного ромбоэдра. Вдоль границ секторов <с> и <х>, а также <с> и часто наблюдаются примесные шлейфы , возникающие в результате адсорбирования неструктурной примеси поверхностями положительной и отрицательной бипирамиды. Такие поверхности интенсивно развиты вдоль ребер с/—X и / + s на кристаллах, удлиненных вдоль оси у. Если интенсивность молочно-белой окраски на затравке выше, чем в прилегающих слоях кристалла, то это свидетельствует о более высокой концентрации неструктурной примеси в кристалле, из которого вырезаны затравочные пластины. [c.115]

Проведенные опыты гидротермальной кристаллизации собственно затравочных материалов, активно стимулирующих и направляющих кристаллизацию эрионита, показали, что в конечном счете, судя по рентгенограммам, они превращались в цеолит Ь, К-шабазит, гармотом, фожазит и филлипоит (табл. 1). [c.19]

Аналогичные процессы, вероятно, происходят и при затравочной эмульсионной полимеризации. Роль мицелл в этих системах в значительной мере, а иногда и полностью подавлена. Если инициирующие группы химически или адсорбционно связаны с поверхностью частиц затравочного латекса, то это приводит к дополнительному снижению вероятности выхода радикалов из частиц, Например, при получении АБС-пластиков под влиянием поверхностно-активного инициатора процесс полностью реали- [c.130]

С другой стороны, РНК-зависимая РНК-полимераза, выделенная из клеток животных, по своим свойствам значительно отличается от ДНК-зависимого фермента [136]. В опытах с экстрактами из асцитных опухолей Кребс II количество включенного рибонуклеотида увеличивалось линейно по мере возрастания количества затравочной РНК и не зависело от источника использованной затравки [137]. Ферментные препараты этих экстрактов содержат некоторое количество РНК. Если эту эндогенную затравку разрушить рибонуклеазой, которую затем можно удалить с помощью бентонита, то активность изучаемого фермента оказывается сильно ингибированной, в то время как активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы в этих условиях не меняется. Добавление же дезоксирибонуклеазы не действует на РНК-зависнмую РНК-поли-меразу, но угнетает ДНК-зависимый синтез. Более того, обе ферментные системы отличаются по оптимуму pH и потребности в различных ионах. ДНК-зависимая ферментная система имеет оптимум pH около 7,5 при этом ее действие усиливается добавлением меркаптоэтанола и ионов марганца. РНК-зависимый фермент активнее всего при pH 9,5, но в этих условиях ионы марганца м меркаптоэтанол подавляют его активность. [c.246]

Каков же механизм этого превращения В этом вопросе полной ясности еще нет. Обычно считают, что повреждение тканей, сопровождающееся переходом в плазму крови некоторого количества тканевого тромбопластина, создает предпосылки для образования минимального (затравочного) количества тромбина (из протромбина) и в отсутствие активных конвертина и акцелерина. Этого минимального образования тромбина недостаточно для быстрого превращения фибриногена в фибрин и, следовательно, для свертывания [c.471]

Смотреть страницы где упоминается термин ДНК затравочная активность: [c.213] [c.19] [c.65] [c.67] [c.127] [c.137] [c.423] [c.309] [c.309] [c.181]

Биохимия нуклеиновых кислот (1968) -- [ c.202 ]

ПОИСК

Смотрите так же термины и статьи:

ДНК-затравочная

Справочник химика 21

Химия и химическая технология