Альбумин сывороточный окисление

Этот метод был использован также для исследования нативного и денатурированного додецилсульфатом натрия гемоглобина [117], а также для изучения реакционной способности сульфгидрила в сывороточном альбумине до и после денатурации солянокислым гуанидином [135] и после окисления сульфгидрильных групп ферри-цианидом [134]. Если оказывается, что прямое титрование денатурированных белков дает заниженные результаты, то к альбумину сначала добавляют избыток титрующего вещества. По окончании периода денатурации измеряют ток после добавления ряда последовательных порций реагента. Прямую линию зависимости тока от общего количества добавленного реагента продолжают до линии, соответствующей нулевому току, точку пересечения с которой принимают за конечную точку титрования. [c.393]

Как известно, конформацию белковой молекулы можно нарушить посредством какого-либо внешнего воздействия. Такое нарушение ведет к увеличению объема молекулы, что проявляется в снижении объема выхода. Так, диаграмма элюирования сывороточного альбумина на сефадексе 0-200 мочевиной (5 М) содержит два пика, тогда как обычно его /Саг) = 0,43. Первый компонент элюируется гораздо раньше (/Са = 0,1) около 60% белка не претерпевает никаких изменений [76]. Вполне возможно, что часть молекул денатурировалась и занимает поэтому больший объем. По изменению объема выхода можно непосредственно проследить за различными стадиями денатурации белка [77]. Так, молекулярный вес рибонуклеазы, установленный на сефадексе 0-100, увеличивается после денатурации щелочью в 1,9 раза, после окисления надмуравьиной кислотой — в 3,0 раза, после обработки 4 М мочевиной — в 2,5 раза, а после обработки 8 М мочевиной — в 4,3 раза. Как можно убедиться с помощью гель-фильтрации на сефадексе 0-200 [160], химическая модификация сывороточного альбумина (ацилирование различными реагентами) приводит к весьма значительному увеличению объема. [c.171]

Окисленная рибонуклеаза в мочевине Овальбумин в мочевине Сывороточный альбумин в мочевине [c.104]

Далее было установлено, что нагретые до кипения растворы чистого сывороточного или яичного альбумина тоже тормозят действие фенолазы. Чтобы выяснить влияние реакции белкового раствора на появление задерживающих свойств, был поставлен опыт таким образом, что к одинаковым количествам раствора белка прибавлялись эквивалентные количества кислоты или щелочи и эти растворы нагревались до кипения. После охлаждения растворы тщательно нейтрализовались и испытывались их задерживающие свойства окисление велось в присутствии буфера. Активной оказалась только проба, нагревавшаяся со щелочью проба же с кислотой никакого торможения не дала. [c.564]

Окисленный бычий сывороточный альбумин 1 1060 —800 46 42 45 [c.229]

Окисленный бычий сывороточный альбумин То же 1 80 —420 23 18 20 [c.229]

Незначительные изменения конформации белка, например набухание молекул сывороточного альбумина при нодкислении раствора до pH 4 [384, 385], часто обратимы. Обратимость конформационных переходов особенно благоприятна в том случае, если полипептидная цепь имеет внутримолекулярные дисульфидные мостики, которые накладывают ограничения на разворачивание цени. Наглядным примером такой обратимой денатурации является проведенное Германсом и Шерагой [395] исследование рибонуклеазы, молекула которой состоит из простой полипептидной цепи, сшитой четырьмя дисульфидными группами. Известна полная последовательность аминокислот в этом ферменте, и схематическое изображение полипептидной цени с указанием места поперечных связей [396] приведено на рис. 45. Отсюда возникает вопрос, можно ли разрушить поперечные связи путем восстановления, что позволяет цепи разворачиваться и возобновлять нативную конформацию с соответствующими нарами тиольных групп, окисленных до дисульфидных мостиков. Решающий эксперимент был поставлен Уайтом [397], который показал, что большая доля ферментативной активности, утерянная при восстановлении дисульфидных групп, может быть в основном восстановлена путем повторного окисления. Особенно важные результаты были получены Анфинсеном и др. [398], которые обнаружили, что воссоздание дисульфидных связей происходит быстрее, чем восстановление ферментативной активности белка. Так как восемь аминокислотных остатков, принимающих участие в создании четырех дисульфидных мостиков, могут соединяться друг с другом 105 различными способами и поскольку образование межмолекулярных дисульфидных связей влияет на ход внутримолекулярной реакции [399], образование многих поперечных связей в начальной стадии может протекать нерегулярно. Такие молекулы [c.137]

НАДН убихинон-оксидоредуктазный комплекс дыхательной цепи митохондрий (комплекс I — см. с. 415) катализирует реакцию окисления НАДН эндогенным убихиноном. Активность НАДН убихинон-оксидоредуктазы специфически ингибируется такими веществами, как амитал, пиерицидин, реин и ротенон. Последний ингибитор наиболее широко применяется при изучении переноса электронов в дыхательной цепи и молекулярной организации комплекса I. Ротенон обладает сильно выраженными гидрофобными свойствами и способен помимо НАДН убихинон-оксидоредуктазы взаимодействовать с гидрофобными участками многих белков, в частности бычьего сывороточного альбумина, и фосфолипидными мембранами. [c.441]

Полисахариды активировались окислением путем одночасовой обработки 0,01—0,5 М перйодатом натрия. Образующийся альдегид реагирует с белкам. 10 ыг окисленных полисахаридов, промытых водой с помощью центрифугироза-ння, суспендировались в 1 мл забуференного фосфатным буфером (pH 8) физиологического раствора, содержащего 10 мг бычьего сывороточного альбумина, и непрерывно перемешивались 1В течение 20 ч. Последующее восстановление боро-гидридом натрия (свежеприготовленным 1%-ным раствором) привело к стабилизации связей. между белком и полисахаридом и к восстановлению остающихся альдегидных групп. [c.184]

Поскольку размеры молекул белкового адсорбата в исследованных системах сопоставимы с размерами мезопор (так, молекула сывороточного альбумина представляет собой в растворе эллипсоид вращения с размерами 14,0x4,0x4,0 нм), то в этом1 случае, по-видимому, нельзя говорить о миграции молекул адсорбата в адсорбционном слое основным фактором, определяющим скорость адсорбции молекул с большой молекулярной массой в мезопористых сорбентах, является диффузия растворенных молекул в порах. На скорость адсорбции влияют также pH раствора, наличие полярных групп на поверхности адсорбента. При увеличении количества кислотных групп (окисленный уголь СКН) адсорбция замедляется и максимальная величина адсорбции также снижается. При pH раствора, близком к изоэлектрической точке белка, величина адсорбции максимальна. Приведенные закономерности свидетельствуют о преобладающем вкладе дисперсионных сил в адсорбцию белков на углеродных сорбентах. [c.142]

Таким образом, один исходный радикал R может вовлечь в окислительный процесс нескольких молекул кислорода. Это действительно наблюдается при облучении некоторых полимеров. На один исчезнувший радикал R, например, в поливинилхлориде [293] и полипропилене [97] расходуется 3—7 молекул Oj, в полиметилметакрилате — 1,5 [101], в полиэтилене — 5 [95], в сывороточном альбумине — 3, в казеине 2 [314]. Следовательно, если происходит цепное окисление, то цепи очень короткие. Это может быть объяснено тем, что при низкотемпературном окислении происходит Зташтожение значительного числа радикалов. [c.357]

Свободные радикалы как чрезвычайно активные, богатые энергией осколки молекул (в том числе и осколки биологических молекул) могут явиться источником реакций, не свойственных организму в норме. Поэтому важным для понимания механизма защитного действия фенолов является выяснение принципиальной возможности обменного взаимодействия фенолов со свободными радикалами биохимических компонентов клеток, т. е. установление возможности уничтожения биологических свободных радикалов при добавках ингибиторов. Методом ЭПР было обнаружено наличие такого обменного взаимодействия в системе радикалов облученного сывороточного альбумина и 4-метил-2,6-ди-г/)ет-бутилфе-нола (исчезновение первоначального дублетного сигнала от белка и появление сигнала, характерного для феноксильного радикала из 4-метил-2,6-ди-грег-бутилфенола). Возникновение этого радикала в системе не может быть отнесено за счет окисления ингибитора, так как при замене облученного белка на интактный такой сигнал не появляется. Возможность обменного взаимодействия между фенолом и биорадикалами подтверждается и при исследовании более сложных биологических субстратов. Так, исследование развития лейкозного процесса у мышей показало, что в их селезенке наблюдается увеличение концентрации биорадикалов, достигающей максимального значения на четвертые сутки Введение в этот момент 4-метил-2,6-ди-грег-бутилфенола приводит к резкому снижению концентрации биорадикаловАналогичные изменения наблюдались и при других опухолевых процессах [c.329]

Существенным недостатком этой реакции является то обстоятельство, что ряд белков не выдерживает подоб1 ой обработки, денатурируется и выпадает в осадок даже тогда, когда еще не достигнуто полное дезаминирование. В этом случае количественное определение аминогрупп, равно как и изучение влияния дезаминирования белка на его биологическую активность становится невозможным. Примером таких белков может быть сывороточный альбумин. Вместе с тем при дезаминировании белков в реакцию могут вступать не только аминогруппы, но и индольные, имидазольные, гуанидиновые и дисульфидные группы. Некоторые авторы отмечали также и окисление сульфгидрильных групп. Поэтому весьма вероятно, что денатурация белка связана со вторичными реакциями азотистой кислоты с перечисленными группировками. [c.71]

Из табл. 26 следует, что действие фермента наиболее эффективно в отношении субстратов, содержащих более крупные боковые цепи. Ароматические остатки меиее чувствительны относительно медленно гидролизуются амиды аминокислот, имеющих полярные боковые группы. Скорости гидролиза пептидов зависят также от природы аминокислот, примыкающих к N-концевому остатку. В ряде случаев оказалось возможным частично выяснить N-концевую последовательность при подМощи лейцинаминонептидазы. Окисленные А и В-цепи инсулина легко гидролизуются ферментом до свободных аминокислот. Путем кинетического исследования удалось установить последовательность первых шести N-коицевых аминокислот В-цепи инсулина. При помощи лейцинаминопептидазы были получены важные данные об N-концевой последовательности ряда природных пептидов и пептидных фрагментов, полученных из белков. Некоторые белки, например рибонуклеаза, лизоцим, Zn-инсулин и сывороточный альбумин, устойчивы к действию фермента, но легко гидролизуются после окисления надмуравьиной кислотой или после удаления Zn (в случае инсулина). Полное расщепление пептида или белка до аминокислот указывает на L-конфигурацию всех входящих в его состав аминокислот. f [c.183]

Дезагрегацию молекулы кератина при воздействии восстанавливающих агентов, например сульфита, приписывают тому, что эти агенты разрывают мостики, образованные дисульфидными группами цистина (формула II). Однако при окислении входящих в состав яичного альбумина сульфгидрильных групп цистеина с образованием дисульфидных групп цистина молекулярный вес яичного альбумина не меняется [79]. Заметно не меняется и вязкость растворов яичного или сывороточного альбумина после обработки их перйодатом, обусловливающим полное окисление дисульфидных мостиков цистина [80, 81]. Эти данные свиде-татьствуют о том, что структура указанных белков скорее соответствует формуле (III), чем формуле (II). Такое заключение [c.133]

Многие белки весьма устойчивы к окислению тирозиназой. Так, например, сывороточный альбумин устойчив, инсулин относительно устойчив, а яичный альбумин вообще не подвергается действию тирозиназы [60, 65а]. Пепсин, будучи весьма чув-ствитель ньпм к окислению тирозиназой, повидимому, легче реагирует в денатурираваиной форме, хотя при рН 5,6 он окисляется также и в нативном состоянии [64]. Было высказано предположение о том, что относительная устойчивость большинства белков к воздействию тирозиназы, возможно, обусловлена либо пространственной недоступностью фенольных групп на поверхности молекулы, либо образованием водородной связи между фенолом и боковыми цепями других аминокислот, либо, наконец, одновременным действием обеих причин [65а]. Окисление тирозиназой производных тирозина, в которых карбоксильная и аминная [c.289]

В нейтральной или щелочной среде тирозиновые группы ряда белков реагируют с иодом легко и специфично, образуя 3,5-дииодтирозиновые группы. Тот факт, что замещение в этих случаях протекает селективно, был доказан тщательным анализом продуктов реакции сывороточного альбумина [93], зеина [94], пепсина [95], лактогенного гормона [96], инсулина [97] и шерсти [98]. Специфичности не наблюдалось в реакциях с гемоглобином [99] и рядом других белков [100], в которых происходило замещение или окисление имидазольных групп даже в нейтральной и кислой среде. [c.351]

В очень обстоятельном исследовании реакции иодирования сывороточного альбумина человека Хьюгс и Стрессли [102] использовали ряд аналитических и физико-химических методов для характеристики реакции. с иодом, ее специфичности в разных условиях и состава получаемых продуктов. Авторы нашли, что сначала происходит селективное окисление сульфгидрильных групп при незначительном сопутствующем замещении. Затем до 70% тирозиновых остатков подвергается дииодированию, причем эта реакция предшествует протеканию каких-либо других процессов замещения. Полное иодирование тирозиновых звеньев осуществляется лишь наряду с интенсивным замещением в гистидиновых остатках (предположительно). Максимальное количество иода было введено в состав белка при высоких pH и использовании 150-кратного молярного избытка иода на 1 моль белка в результате в одну молекулу белка вводилось 64 атома иода. Следует отметить, однако, что ири наличии большого избытка иода и pH 10,3 происходит интенсивная окислительная деструкция триптофане вых остатков, входящих в состав молекул белка. [c.352]

На основании обстоятельного изучения действия электронов с энергией 2 Мэе на твердый бычий сывороточный альбумин в бескислородных условиях Александер и Гамильтон [376] пришли к выводу, что в этом белке имеют место два типа радиационных повреждений во-первых, рас-кручивание молекулы, связанное с разрывом водородных связей, и, во-вторых, химические изменения, определяемые по исчезновению боковых цепей аминокислот и появлению карбонильных групп и групп, из которых при мягком гидролизе отщепляется аммиак. Раскручивание молекулы альбумина под действием излучения можно изучать, измеряя число дисульфидных связей, способных вступать в реакции. Так, в молекуле природного белка в изоэлектрической точке все семнадцать дисульфидных связей находятся в нереакционноспособном состоянии [377]. Если же облучать этот белок, то при увеличении дозы облучения до 50% дисульфидных связей приобретают реакционноспособность. Однако Александер и Гамильтон нашли, что при этом не происходит исчерпывающего образования межмолекулярных поперечных связей — 3 — 3 — за счет окисления сульфгидрильных групп. [c.431]

В табл. 25 приведены данные, полученные описанным аргининовым минрометодом, по активности пепсина и трипсина по трем различным белковым субстратам — окисленйому лизоциму, гемоглобину я сывороточному альбумину человека. Последние два белка перед опытом денатурировали нагреванием при 95 С в течение 30 тайн. Расщепление белков пепсином проводили при pH 2, а расщепление трипсином — при pH 8,5. [c.213]

Для создания цеоаенаправленного действующего дауномицина этот антибиотик был присоединен разными методами к антителам против бычьего сывороточного альбумина (модель) или к опухоль-специфическим антителам [147, 169]. Карбодиимидный метод и метод с глутаровым диальдегидом оказались неудачными из-за сшивания молекул антител друг с другом. Конъюгаты были лишены как противоопухолевой, так и иммунологической активности. Периодатное окисление углеводной насти антибиотика и восстановительное алкилирование антител образовавшимся диальдегидом привели к получению стабильного конъюгата, который содержал 2—5 моль антибиотика на моль белка. Производные дауномицина в основном сохраняли как противоопухолевое, так и иммунологическое действие, причем чем меньше было связано антибиотика, тем выше была его активность. Селективность токсичности по отношению к клеткам, к которым были специфичны антитела, оказалась невелика, а содержание антибиотика недостаточно для исследований in vivo. Антитела как носители противоопухолевых ФАВ имеют низкую емкость, так как увеличение степени замещения белка приводит к потере антителами специфичности [170]. Поэтому обычно используют промежуточный носитель, который объединяет в единое целое обе части ФАП — противоопухолевое ФАВ и антитело или другой целенаправляющий вектор . [c.127]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология