Дрожжи выделение ферментов

Выделение фермента из дрожжей [c.251]

Подготовка исходного материала. Свежие пекарские дрожжи сушат в токе теплого воздуха. В герметически закрытой посуде высушенные дрожжи могут храниться в холодильнике около года. Выделение фермента, где это специально не оговаривается, проводят в холодной комнате. [c.283]

Термолабильность ферментов т. е. инактивация их, связанная с разрывом полипептидных связей при повышении температуры,— денатурация белков, приводит к появлению оптимума температурного действия. С ростом температуры увеличивается скорость ферментативной реакции, но увеличивается и инактивация фермента. Поскольку белки являются амфотер-ными электролитами, для ферментов характерен также оптимум pH. Так, например, оптимум действия пепсина лежит в зоне pH = 1,5 —2,5, трипсина —8—11, сахаразы, выделенной из. дрожжей, — 4,6—5,0, сахаразы из кишечника — 6,2, амилазы из слюны или поджелудочной железы — 6,7—6,8 и т. д. Некоторые ферменты могут иметь различную величину оптимума pH для разных субстратов. Так, оптимум pH пепсина несколько меняется для разных белковых субстратов, тогда как карбогидразы [c.249]

Выделение фермента из пекарских дрожжей [c.264]

Продуцентами ферментов могут быть бактерии, грибы, дрожжи и актиномицеты. Для промышленного получения ферментных препаратов используются как природные штаммы микроорганизмов, выделенные из естественных сред, так и мутантные, селекциониро- [c.145]

Работу по выделению фермента начинают с разрушения клеточной оболочки тканей, в результате чего фермент переходит в экстрагирующий раствор. Мышечную ткань можно разрушить с помощью мясорубки, а также гомогенизатора. Клеточную оболочку в ткани печени удобно разрушать обработкой ацетоном. Для этого ее помещают в гомогенизатор, заливают несколькими объемами ацетона, предварительно охлажденного до —20° С, и гомогенизируют на холоде 1—2 мин. Полученный гомогенат быстро фильтруют на воронке с отсасыванием. Осадок еще раз аналогично обрабатывают ацетоном, затем измельчают вручную (в ступке) при комнатной температуре и помещают в вакуум-эксикатор. Ацетоновый порошок может храниться в холодильнике несколько месяцев и использоваться по мере надобности. Обработка ацетоном не только разрушает клеточную оболочку, но также обезвоживает тка нь и освобождает ее в значительной степени от липидов. Одним из наиболее часто применяемых способов разрушения клеточной оболочки дрожжей является автолиз. Дрожжи предварительно можно высушить, что позволяет хранить их, как и ацетоновые порошки животных тканей, длительное время в холодильнике (в герметической упаковке). От условий высушивания дрожжей часто зависят выход фермента и его удельная активность. [c.198]

При сбраживании сусла дрожжами необходимо предохранять их от посторонних микроорганизмов — бактерий и диких дрожжей, вносимых с сырьем, водой и воздухом. Попадая в дрожжевые и бродильные аппараты, они могут накапливаться в значительных количествах и даже вытеснить производственную культуру дрожжей, Инфицирующие микроорганизмы потребляют из сусла часть питательных веществ, что снижает выход спирта. Кроме того, они образуют органические кислоты и другие продукты, инактивирующие ферменты осахаривающих материалов и снижающие бродильную энергию дрожжей, в результате чего в зрелой бражке повышается количество несброжениых сахаров и крахмала. Хлебопекарные дрожжи, выделенные из инфицированной мелассно-спиртовой бражки, имеют низкую ферментативную активность и стойкость, [c.209]

Молекулы А. класса 11 состоят из двух субъединиц общей мол. м. 65-80 тыс. Для них характерна узкая область pH, в к-рой они проявляют оптим. каталитич. активность оптимальный pH существенно зависит от того, из какого организма выделен фермент. Для проявления каталитич. св-в необходимо присутствие ионов Zn , Са и Fe . Ионы К активируют, а этилендиаминтетрауксусная к-та ингибирует эти ферменты. А. класса II не катализируют расщепление фруктозо-1-фосфата. Содержатся в дрожжах, грибах, бактериях и водорослях. [c.113]

Химические методы разрушения клеточных стенок включают обработку щелочью, органическими растворителями или детергентами. Если белковый продукт не разрушается при pH от 10,5 до 12,5, то можно без труда и дешево ли-зировать большие количества бактериальных клеток. Например, рекомбинантный гормон роста человека очень просто выделить из клеток Е. соИ обработкой гидроксидом натрия при pH И. После обработки щелочью не остается практически ни одной жизнеспособной клетки, что автоматически решает проблему утечки рекомбинантных микроорганизмов. Обработка органическими растворителями - это простой и недорогой способ разрушения клеток, который используется для выделения ферментов из дрожжей. Однако, чтобы убедиться в том, что в подобранных условиях белковый продукт не денатурирует, необходимо провести предварительное тестирование. Под действием детергентов в мембранах бактериальных клеток образуются поры, через которые белки и другие молекулы выходят из клетки. К сожалению, детергенты дороги, в больщинстве случаев в их присутствии белки денатурируют, а кроме того, они могут загрязнять конечный продукт. [c.365]

Начиная с 1926 г. многие ферменты были получены в чистом виде в форме кристаллов. В кристаллическом виде была получена уреаза, фермент, расщепляющий мочевину на ЫНз и СО2. Затем были получены кристаллические препараты ферментов пепсина и трипсина, которые при изучении оказались белками. Позже удалось выяснить, что многие ферменты имеют, кроме белка, небелковый компонент. Так, из бактерий и дрожжей был выделен фермент, активирующий водород при окислительно-восстановительных процессах. Оказалось, что в его со- [c.82]

Важным свойством сахаров - простейших углеводов - является способность к брожению. Брожением называется процесс расщепления молекул сахаров с выделением СО2 под влиянием ферментов. Брожению подвергаются сахара с числом атомов углерода, кратным трем. Наиболее известно спиртовое брожение, происходящее под влиянием фермента дрожжей зимазы. Механизм спиртового брожения сложен, он включает более 10 отдельных стадий, в которых участвуют сложные эфиры глюкозы, фруктозы, глицерина с фосфорной кислотой, уксусный альдегид, пиро-виноградная кислота СН3—СО—СООН, а конечными продуктами являются этиловый (винный) спирт и СО2 [c.426]

Флавинмононуклеотид образуется в результате фосфорилирования рибофлавина аденозинтрифосфатом при участии ионов двухвалентных металлов (например, из дрожжей выделен фермент флавокиназа, катализирующая этот процесс в присутствии Мд +) [c.260]

Раздел Энзимология рассчитан на студентов, уже иознакомиз-" шихся с некоторыми современными методами химии белка определением концентрации белка, хроматографией, электрофорезом и др. Основная цель его состоит в том, чтобы дать возможность студентам приобрести навыки экспериментальной работы, необходимые для начинающего энзимолога. В ходе практикума студенты осваивают методы выделения и очистки какого-либо фермента, а также изучают свойства полученного препарата. В связи с этим приводятся общие указания по работе с ферментами, способам их очистки, правилам определения каталитической активности и кинетических свойств. Во второй части раздела описываются методы выделения ферментов из пекарских дрожжей и животных тканей (скелетных мышц, печени). Поскольку современные методы очистки ферментов включают большое разнообразие приемов, в ряде случаев для получения одного и того же фермента дается описание 2—3 методик, которые могут быть использованы в соответствии с уровнем оснащенности лаборатории. Кроме того, для ферментов из разных источников приводятся различные методы выделения. [c.196]

В процессе выделения фермента из дрожжей происходит частичное отщепление от него тиаминпирофосфата. Полное отделение можно получить, выдерживая фермент в щелочной среде (pH 8,0) или путем диализа против раствора ЭДТА. Взаимодействие кофермента с апо-ферментом осуществляется при участии ионов двухвалентных металлов, таких как Mg +, ea +, Мп2+ и др. В нативной холотранскетолазе обнаружен только кальций в количестве 2 г-атом на моль белка. [c.279]

Брожение — процесс разложения органических веществ, главным орбазом углеводов, под влиянием микроорганизмов (бактерий, дрожжей) или ферментов, выделенных из них, сопровождается выделением энергии, которая необходима для жизнедеятельности микроорганизмов. Спиртовое Б. лежит в основе ряда пищевых производств (виноделие, пивоварение) молочнокислое Б.— в производстве молочных продуктов (получение кефира, простокваши, сыра). [c.27]

PQQ оказался производным хинона, довольно широко распространенным у микроорганизмов, в животных тканях и растениях. Среди бактериальных ферментов, в состав которых PQQ входит в качестве кофермента, следует указать на метанолдегидрогеназу и алкогольдегидро-геназу. Из тканей животных, растений, грибов и дрожжей выделен медьсодержащий фермент метиламиноксидаза, в котором также есть ковалентно связанный PQQ в качестве кофермента. [c.244]

Следует отметить, что, помимо ФМН, ФАД и двух производных ФАД, выделенных из животных тканей, дрожжей и ферментов, из культуральной жидкости Rhizopus oryzae выделена ФMH-D-rлюкoзa [375]. [c.553]

Получают 3. обработкой дрожжей протеолитич. ферментом трипсином (по Пиллемеру) с последующей очисткой нерастворимого остатка 3. извлечением его водой и спиртом или фенол-водной экстракцией дрожжей. 3. используют для выделения пропердина из сыворотки или плазмы по методу Пиллемера и его модификациям, в основе к-рых лежит реакция образования пропердин-зимозанового комплекса и для определения титра пропердина в крови. [c.55]

Путем трансглюкозирования при участии УДФ-глюкозы могут быть осуществлены и другие реакции. Например, из диализиро-ванного дрожжевого сока пивных дрожжей выделен специфический фермент, катализирующий реакцию биосинтеза трегалозы [c.384]

Ферменты этого типа могут быть не только конститутивными, но и адаптивными. Например, у Sa haromy es fragilis таковым является инвертаза, образование которой усиливается очень резко на среде с сахарозой и которая почти не образуется на средах с рафинозой, лактозой или мелибиозой (Девис и др., 1966). У других дрожжей адаптивным ферментом является энзим, участвующий в усвоении галактозы, образование которого стимулируется выделенным из них термостабильным фактором. [c.158]

Своеобразную и важную роль играют многие процессы ферментативного катализа. Катализаторами в них служат ферменты (энзимы), которые представляют собой сложные органические вещества, принадлежащие обычно к белкам с высоким молекулярным весом, вырабатываемым в животных или растительных организмах и обладающим высокой каталитической активностью. Каждый фермент катализирует определенный химический процесс или определенную группу химических превращений. Ферментативный катализ играет больщую роль п жизнедеятельности организмов и широко используется в промышленности н в быту, в особенности при переработке пищевых продуктов (хлебопечение, квашение, винокурение и др.). При этом основными являются процессы брожения, т. е. такие процессы, в которых изменение химического состава вещества происходит в результате жизнедеятельности тех или других микроорганизмов, например дрожжей, плесеней или соответствующих бактерий. Действующим началом в этих случаях служат различные ферменты, вырабатываемые этими микроорганизмами, Ферменты сохраняют свою активность и способндсть действовать и будучи выделенными из микроорганизмов. [c.494]

Этиловый, или винный, спирт СаНйОН — одно из органических веществ, известных с глубокой древности в виде вина и других спиртных напитков. Однако чистый спирт был выделен лишь в XI столетии. Древнейший способ его получения, не утративший значения до настоящего времени, — спиртовое брожение. Это сложный биохимический процесс, в результате которого сахара (в первую очередь глюкоза) под действием ферментов — биологических катализаторов, вырабатываемых дрожжами, превращаются в спирт [c.159]

Впервые витамин Вг был выделен в виде желтого пигмента из молочной сыворотки, названный лактохромом, а затем из дрожжей был выделен желтый дыхательный фермент Варбурга , состоящий из белка и желтого красителя. Последний был идентифицирован как витамин Вг и назван лактофлавином. Подобные желтые пигменты (флавины) были выделены из яичного желтка (овофлавин), лимона (цитрофлавин), печени (лиохром) и др [c.402]

История открытия и выделения тиамина описана в дополнении 8-А. В 1937 г. К. Ломан и П. Шустер выделили чистую кокарбоксилазу — диализируемый кофермент, необходимый для декарбоксилирования пирувата при помощи фермента из дрожжей. Было показано, что им является тиаминдифосфат (рис. 8-2). Moho-, три- и тетрафосфаты также встречаются в природе, но в меньших количествах. [c.207]

Роль рибофлавина в биологическом окислении была установлена в результате большого интереса биохимиков к процессам дыхания клетки. В 20-х годах Варбург обнаружил, что кислород реагирует с каким-то железосодержащим катализатором дыхания. Позже было показано, что краситель метиленовый синий часто может замещать кислород в качестве окислителя. Окисление в эритроцитах глюкозо-6-фосфата метиленовым синим требовало присутствия как фермента , так и кофермента , позднее идентифицированного как NADP+. Было установлено, что выделенный из дрожжей желтый белок обладает примечательным свойством обесцвечиваться под действием восстановительной системы, содержащей глюкозо-6-фосфат, белок и кофермент из эритроцитов. [c.253]

Впервые пигмент, содержащий флавин, выделен в 1879 г. из сыворотки коровьего молока [129]. Затем из молока был выделен желтый водорастворимый фактор [130, 131], названный лактохромом [131], он же был выделен из одуванчика, солода [132], яичного желтка [133], печени [133, 1341 из свиного сердца вьщелено желтое вещество — цитофлав (оказавшееся фосфорнокислым эфиром рибофлавина) [1351. Варбург и Христиан [22] в 1932 г. выделили из дрожжей желтый окислительный фермент, в котором ими был открыт рибофлавин (лактофлавин), являющийся составной частью этого фермента. [c.522]

Остаток после выделения сока состоит из опорожненных дрожжевых клеток, которые, как и живая, нераздавленная клетка, также богаты ферментами. Эти раздавленные клетки, одни или в смеси с другими веществами, могут быть употреблены для приготовления пластических масс. Дрожжевые остатки после получения сока, также как и цельные дрожжи, как вещество богатое ферментами, должны быть в первую очередь стабилизированы путем разрушения ферментов. [c.206]

Расщепление линейного глюкана с а-1,4-связями под действием фосфорной кислоты, катализируемое фосфорилазой (у животных) или Р-ферментом (выделенным из растений и дрожжей), приводит к а-О-глю-козо-1-фосфату , который может включаться далее в процессы энергетического обмена (см. гл. 13) [c.617]

Наличие гуанина в моче человека показано Вейссманом, Бромбергом и Гутманом [207, 208]. Сообщается о выделении из сапропеля аналога витамина Bi2, который содержит гуанин и рибозу [209, 210]. На основании данных ультрафиолетового спектра предположено, что рибоза присоединена к седьмому атому пуринового ядра. По своему строению этот аналог близок витамину Bi2, только вместо бензимидазольного заместителя в нем содержится гуаниновый остаток. Сходный гуанинсодержащий аналог витамина В12 выделен из ферментативной жидкости No ardia [211]. Нуклеотид, в состав которого входят гуанин и фукоза, выделен из овечьего молока [212]. Гуанин обнаружен также в нуклеотидном ферменте (гуанозиндифосфат маннозы), который содержится в дрожжах [213—215]. [c.137]

В 1857 г., после того как Шёнбайном было сформулировано представление о трех аллотропных формах кислорода, претерпела изменение и схема окислительных процессов. В статье Химические контактные действия [15] окислительные процессы в организме представлены им как результаты каталитических актов, однако эти представления, так же как более ранние представления о возбудителях и переносчиках кислорода, ему не удалось связать с какими-либо г веществами тканей или выделенными препаратами. Попытку приписать наличие каталитической активности у красных кровяных телец необходимо признать неудачной, хотя она и вызвала большое число спекуляций и попыток экспериментальных проверок. Однако последовательное развитие этих представлений применительно к процессам (а не веществам) имело большое принципиальное значение. Особенно важным было распространение Шёнбайном взгляда на каталитические процессы, протекающие в организме, как на разновидность процессов, катализируемых платиной и другими подобными металлами, с той лишь разницей, что биологические катализаторы могут быть чисто органическими по природе [16]. Здесь уже имела место попытка проверить окислительную ( озонобразующую ) активность отдельных ферментов из числа известных в то время — диастаза, эмульсина, мирозина, реннина и др., а также дрожжей клейковины, тканей и соков более чем 100 видов растений и, наконец, некоторых веществ животного происхождения. [c.185]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология