Ферменты методы выделения и очистки

Аффинная хроматография высокоспецифичный и эффективный метод выделения специфических белков. Вследствие того что молекулы большинства белков легко разрушаются при использовании для их выделения и очистки многих традиционных методов, применяемых в органической химии, таких, как возгонка и экстрагирование различными растворителями, биохимики вынуждены были разработать для этой цели специальные методы. Нередко удается выделить какой-нибудь один белок, присутствующий в смеси, содержащей несколько тысяч других биомолекул, в концентрации 10 -10 М. Один из таких методов, известный под названием аффинной хроматографии, сыграл решающую роль при выделении и очистке ряда ферментов, иммуноглобулинов и рецепторных белков. В основе метода лежит тот [c.163]

Применение принципа иммобилизации не только к ферментам, но и к их субстратам, ингибиторам и кофакторам, т. е. в-вам, имеющим избирательное сродство к ферментам, позволило создать методы выделения и очистки послед)шх, основанные на аффинной хроматографии. Тем самым существенно расширяются возможности получения чистых ферментов для использования в И. э. [c.236]

Принцип иммобилизации был применен не только к ферментам, но и к их субстрата , ингибиторам и кофакторам, т. е. веществам, имеющим избирательное сродство к ферментам. Это позволило создать метод выделения и очистки ферментов, основанный на хроматографии по сродству, или аффинной хрома- [c.11]

Молекулы белков очень сложны и обладают уникальными свойствами, поэтому нет универсальных методов выделения и очистки белков каждый белок требует индивидуального подхода и специальных методов. Подходящей процедурой будет та, которая позволяет получить максимальное количество белка в наиболее чистом виде и с сохранением природных свойств (как принято говорить - в нативном состоянии). При выделении ферментов очень важно сохранить их активность. [c.24]

ВЫДЕЛЕНИЕ, ОЧИСТКА, СУБСТРАТНАЯ СПЕЦИФИЧНОСТЬ И МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ [c.117]

Помимо очистки ряда ферментов, их ингибиторов или субстратов, которые можно попеременно фиксировать на матрице, аффинная хроматография позволяет выделять антитела и антигены, белки, осуществляющие транспорт гормонов и связывание витаминов. К аффинной хроматографии близко примыкает метод выделения ЗН-содержащих белков на ртутьорганических производных агарозы. Явление фиксации антител на производных агарозы открывает широкие возможности. В отличие от [c.453]

Вплоть до 10-20-х годов XX столетия основным направлением исследований явления биокатализа было изучение самого каталитического акта, фиксирование и анализ изменений, происходящих в присутствии биокатализаторов-фермен-тов. Начиная с этого времени, основные успехи в изучении явлений биокатализа связывают с изучением изолированных ферментов, а на первых порах - даже с развитием методов выделения и очистки ферментов. Этот путь дал много нового в познании свойств ферментов. [c.133]

И, наконец, если ферменты по своим физико-химическим свойствам приближаются к растворимым белкам, то они должны, подобно последним, осаждаться из водных растворов без потери активности водоотнимающими средствами, в частности ацетоном, спиртом и сернокислым аммонием. Опыт показывает, что концентрированные растворы нейтральных солей щелочных металлов действительно вызывают осаждение ферментов, причем получаемые осадки полностью сохраняют свои ферментативные свойства. Один из наиболее важных и эффективных методов выделения и очистки ферментов сводится именно к осаждению их нейтральными солями щелочных металлов. [c.121]

Обнаружение, выделение, очистка и изучение свойств фермента зависят прежде всего от наличия достаточно точного и быстрого метода определения активности фермента, а также подходящего метода определения общего белка. Точное определение активности фермента на ранних стадиях очистки часто бывает сопряжено со значительными трудностями, поскольку посторонние ферменты, присутствующие в препарате, могут конкурентно действовать на субстрат. Например, в присутствии АТФ-азы затруднено определение АТФ-зависимых синтетаз, а присутствие р-амилазы мешает определению а-амилазы. Многих трудностей, связанных, например, с подавлением активности продуктами реакции, инактивацией фермента и изменением степени его насыщения субстратом, можно избежать, если измерять начальные скорости реакции. [c.98]

Анализ продуктов жизнедеятельности организмов является одной из самых трудных задач биологии, химии и физики. В живом организме в процессе обмена веществ синтезируются и распадаются сложнейшие соединения (белки, углеводы, жиры, ферменты, витамины, гормоны и т. д.). Для очистки и разделения веществ в органической химии и биохимии широко применяются методы, основанные на различиях в упругости пара (обычная перегонка, перегонка с водяным паром, фракционная перегонка, перегонка в вакууме, сублимация и др.) и растворимости веществ (распределение между двумя несмешивающимися жидкостями, экстракция, осаждение специально подобранными веществами или изменением pH раствора и другие приемы). Бурное развитие химии в XX в. вызвало необходимость создания принципиально нового метода выделения и очистки природных веществ, применяемого в тех случаях, когда приведенные выше приемы вызывают глубокие изменения состава выделяемых веществ и когда последние находятся в природном материале в сложных смесях или в ничтожном количестве. Новый метод разделения веществ был открыт в 1903 г. выдающимся русским ученым М. С. Цветом и назван им хроматографическим методом. [c.5]

Докладчик привел данные о методе выделения и очистки фермента, о роли левана-акцептора, об обратимости реакции. Так, например, оптимальным молекулярным весом для левана-акцеп-тора оказался вес 6600. [c.327]

А. Я. Данилевский (1839—1923), который разработал метод выделения и очистки ферментов. Им впервые синтезировано белковоподобное вещество — пластеин. Ученый предположил, что в молекуле белка остатки аминокислот соединяются пептидной связью —С—NH—. [c.3]

На примерах хорошо изученных ферментов рассмотрены современные представления об активном центре, механизме действия, специфичности, активации и ингибировании ферментов. Вопросы, связанные с кинетикой ферментативных реакций, изложены весьма кратко (более подробно с этими вопросами можно познакомиться в книгах М. Диксон, Э. Уэбб Ферменты и Ферменты под ред. А. Е. Браунштейна). Поскольку основные методы выделения и очистки белков описаны в разделе Белки , в данном разделе затронуты только вопросы, связанные со специфическими свойствами белков-ферментов. [c.188]

Ферменты являются очень лабильными, легко инактивируемыми соединениями. Этим и объясняется специфичность методов выделения и очистки белков-ферментов. [c.198]

Комбинирование перечисленных методов выделения и очистки дает возможность получать в чистом виде даже те ферменты, которые в живом организме находятся в очень незначительных количествах. [c.202]

Методы выделения и очистки ферментов [c.126]

Указанные выше методы являются универсальными приемами очистки и выделения ферментов. Однако применение их на последних стадиях очистки недостаточно эффективно, так как могут оставаться в растворе различные белки, сходные по растворимости и другим физико-химическим свойствам с ферментами. Для дальнейшей очистки используют ионообменную хроматографию и электрофорез. [c.128]

МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ ФЕРМЕНТОВ [c.97]

Фермент гиалуронидаза (КФ 3.2.1.35) гидролизует р-1,4-глико-зидные связи между повторяющимися дисахаридными звеньями гиа-луроновой кислоты и является действующим веществом таких лекарственных препаратов, как лидаза и ронидаза. Целью нашей работы являлась разработка технологии очистки гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота с использованием сорбентных методов выделения. [c.96]

Раздел Энзимология рассчитан на студентов, уже иознакомиз-" шихся с некоторыми современными методами химии белка определением концентрации белка, хроматографией, электрофорезом и др. Основная цель его состоит в том, чтобы дать возможность студентам приобрести навыки экспериментальной работы, необходимые для начинающего энзимолога. В ходе практикума студенты осваивают методы выделения и очистки какого-либо фермента, а также изучают свойства полученного препарата. В связи с этим приводятся общие указания по работе с ферментами, способам их очистки, правилам определения каталитической активности и кинетических свойств. Во второй части раздела описываются методы выделения ферментов из пекарских дрожжей и животных тканей (скелетных мышц, печени). Поскольку современные методы очистки ферментов включают большое разнообразие приемов, в ряде случаев для получения одного и того же фермента дается описание 2—3 методик, которые могут быть использованы в соответствии с уровнем оснащенности лаборатории. Кроме того, для ферментов из разных источников приводятся различные методы выделения. [c.196]

Вышеописанное окисление сульфидов в сульфоксиды может проводиться также и с использованием ацетонированной культуры А. niger [10]. (Получение ацетонированной культуры представляет собой первую стадию одного из обычных методов выделения и очистки фермента. В данном случае ищут окисляющий фермент. Клетки микроорганизма разрушаются механически, после чего их обрабатывают на холоду ацетоном, отделяют нерастворимый в ацетоне порошок и последний сушат, удаляя ацетон. После этого субстрат встряхивают с полученным порошком в воде или подходящем буферном растворе.) В общем случае выход сульфоксидов, полученных в результате окисления сульфидов, в первом приближении тот же, что и с неповрежденной культурой. Кроме того, сульфоксиды, полученные при использовании ацетонированной культуры, будут обладать [c.203]

Однако наиболее важным и самым распространенным методом выделения и анализа ферментов является хроматография. Об этом можно судить по множеству публикаций и специальных обзоров, посвященных различным аспектам хроматографии ферментов. (См. обзор по колоночной хроматографии [20 и табл. 36.1.) В последние годы получили дальнейшее развитие новые высоко избиратетгьные методы выделения, такие, как аффинная хроматография [21—26 и гл. 7, 14], хроматография на гидроксиапатите [27 и гл. 35], хроматография на геле фосфата кальция [28 и гл. 35], гель-хроматография в градиенте детергента как метод очистки мембраносвязанных ферментов [29, 30], гель-проникающая хроматография [31 и гл. 5, 12], электрохроматог-рафические методы [11], ионообменная хроматография [32, 33 и гл. 6, 13], субетрат-специфичное элюирование [34]. [c.9]

При изучении свойств НАД-киназы из скелетных мышц использовали высокоочищенные, но ие гомогенные препараты НАД-киназы. Препарат фермента из сердца голубя был электро-форетически получен в гомогенном состоянии. Метод выделения и очистки в качестве последних стадий включал ионообменную хроматографию на ДЭАЭ-сефадексе А-50 и гель-фильтрацию на сефарозе 6В [5]. Сравнение свойств частично очищенных и гомогенных, по данным электрофореза, препаратов фермента позволило установить следующую закономерность. Частично очищенные ферментные препараты НАД-киназы из сердца голубя подобно ферменту из скелетных мышц кролика гетероген ны и представлены не менее чем пятью молекулярными формами, число которых могло варьировать от препарата к препарату НАД-киназную активность проявляли формы с молекулярными весами, равными 300 000—270 000, 230 000—200 000, 180 000, 120 000 и 45 000. Из распределения общей активности фермента между различными молекулярными формами следует, что большая часть НАД-киназы представлена олигомерами с молекулярным весом 180000. [c.138]

Белковый характер ферментов. Выше уже отмечалось, каким путем были получены водные экстракты, соки или даже твердые аморфные осадки, содержащие различные ферменты. До выделения чистых ферментов невозможно было оценить концентрацию фермента в этих сырых ферментативных препаратах. Однако на этом этапе исследований удалось получить в результате различных операций очистки препараты, в тысячу раз более активные, чем исходные тем самым было доказано, что ферменты являются, как правило, крайне активными катализаторами, действующими дан е в очень малых концентрациях. Этот результат не давал, естественно, никаких указаний в отношении абсолютной концентрации фермента. Среди методов очистки и концентрирования, примененных прежними исследователями, следует особо отметить метод, которым пользовались Вильштеттер и его ученики, очень сходный с современньш хроматографическим методом, а именно адсорбцию на таких твердых материалах, как каолин или окись алюминия, и последующее элюирование солевыми растворами. Эти исследования показали, что ферменты имеют коллоидный (на современном языке макромолекулярный) характер, но они не позволили уточнить их химический характер. [c.792]

Макромолекулы, такие, как белки, полисахариды и нуклеиновые кислоты, внутри своих индивидуальных групп отличаются по физико-химическим свойствам лишь незначительно поэтому их выделение, основанное на различиях в этих свойствах, например, с помошью ионообменной хроматографии, гель-фильтрации или электрофореза сопряжено с известными трудностями и требует много времени. Вследствие этого в ходе выделения существенно падает их активность из-за денатурации, расщепления, ферментативного гидролиза и т. п. Одним из наиболее характерных свойств этих биологических макромолекул является их способность обратимо связывать другие вещества. Например, ферменты образуют комплексы с субстратами или ингибиторами, антитела— с антигенами (против которых получены), а нуклеиновые кислоты, такие, как информационная РНК, гибридизуются с комплементарными ДНК и т. д. Образование специфических диссоциирующих комплексов биологических макромолекул служит основой метода их очистки, известного как аффинная хроматография. [c.9]

Химический анализ природного соединения, как известно, включает в себя ряд общих процедур, таких, как экстракция, выделение, очистка и определение его химической структуры. Для извлечения неизвестных соединений обычно используют путь ступенчатой экстракции растворителями по мере возрастания их полярности петролейный эфир, бензол, серный эфир, этилацетат, спирты и вода. Преимуществом спиртовых экстракций перед водными является низкая точка кипения этих растворителей, однако в этом случае возможно расщепление эфирных связей, например эфиров фенолов с сахарами (Swain, 1965). Недостатки водной экстракции извлечение большого количества посторонних веществ, невозможность предотвращения действия всех ферментов, функцию которых не может устранить даже кипячение. Дифференцированный подход следует избирать и при выборе метода разделения веществ. Разделение на бумаге Ватман 3 ММ удобно применять в том случае, когда нужно получить до 0,5 г вещества, разделение на колонках — для выделения больших количеств вещества. Ниже приводится схема препаративного выделения, использовавшаяся для изолирования и идентификации природного ингибитора роста капусты (фенольное вещество, 12 мг из 500 г листьев), ивы (халконглюкозид, 75 мг из 1000 г листьев), гороха (кверцетин-гликозил-кумарат, 500 мг, п-кумаровая кислота, 10 мг) и кукурузы (л-кумаровая кислота, 4 мг из 250 г листьев). Из листьев гороха была выделена также кофейная кислота. [c.34]

Для выделения фермента из природных смесей (или систем) его нужно отделить от небелковых веществ, причем в первую очередь от тех, которые могут соединяться с белком, а, кроме того, от разнообразных других белков, входящих в состав смеси. Степень трудности такого отделения, проводимого до желаемого уровня очистки фермента, может сильно варьировать, и хотя принципиальных затруднений может и не быть, но получить вы-сокоочищенный препарат бывает очень трудно, а иногда (в настоящее время ) даже невозможно. Процесс выделения ферментных белков отчасти облегчается тем, что очистку производят, контролируя на всех этапах удельную активность выделенного препарата (активность на 1 мг белка). Специфическая функция фермента является как бы меткой, позволяющей различать его в сложной биологической смеси. Необходимо подчеркнуть, что рациональные способы и методы выделения ферментов могут быть разработаны только на основе изучения их физико-хими-ческих и биохимических свойств. По этому вопросу имеется значительная литература. [c.138]

Существуют различные методы выделения брадикинина из продуктов расщепления белков плазмы трипсином или змеиным ядом и его очистки, разработанные в различных лабораториях. Методика, применявшаяся Эллиоттом и сотр. [661, 666, 668, 669], заключалась в обработке фракционированной смеси белков из сыворотки быка 0,1 и. соляной кислотой при 37° (для инактивации ферментов, разрушающих брадикинин) и в последующей их инкубации с трипсином в течение 6 час. Полученную смесь осаждали спиртом, а из фракции, растворимой в 74%-ном спирте, чистый брадикинин удалось выделить с помощью противоточного распределения, хроматографии на, карбоксиметилцеллюлозе (ацетатно-аммониевый буферный раствор pH 6,5 и 5) и электрофореза. Сначала на основании неточных данных аминокислотного анализа считали, что брадикинин имеет следующий аминокислотный состав Ser Gly Pro Phe Arg= 1 1 2 2 2. Результаты кислотного гидролиза, расщепления химотрипсином и разложения по методу Эдмана позволили приписать бради-кинину следующую структуру [c.105]

Модификация [173] метода выделения ЛАП из почек свиньи позволяет получить активный фермент, содержащий 4—6 молей цинка в расчете на молекулярную массу 300 000, и очень малые количества других металлов [180]. ЛАП, выделенная этим методом, устойчива в отсутствие Mg +, однако этот ион необходим во время очистки. Таким образом, ЛАП, по-видимому, представляет собой металлофермент. Ингибирование о-фенантролином и бипи-ридилом и отсутствие ингибирования фторидом и ЭДТА подтверждают это предположение [180]. Пока не удалось получить свободную от металла форму фермента, способную к реактивации, однако некоторые ионы, например Са +, замещают цинк с одновременным изменением активности. Интересно, что замена немногим более половины цинка на Жп + приводит к видимому увеличению активности по отношению к лейцил-га-нитроанилиду. Данные [170] по влиянию на активность ионов некоторых других металлов, включая 0(1 +, Со + и Ni +, нуждаются в пересмотре. [c.555]

Большая часть методов выделения основывается на методике Чарльза и Скотта [5], которые использовали бычью печень и бычьи легкие как недорогой источник гепарина. Ткань подвергают автолизу и затем экстрагируют щелочным раствором. Растворимый белок удаляют, разрушая его с помощью ферментов, а жиры извлекают спиртом. Эта методика была упрощена обработке протеолитическими ферментами подвергалась непосредственно ткань [6, 7]. Предложен ряд методик окончательной очистки гепарина. Наибольшую ценность имеет метод, предусматривающий приготовление бензидиновой соли, которую затем превращают в кристаллическую кислую бариевую соль [8]. Кристаллическую кислую или нейтральную бариевую соль фракционируют. Новейшие методы заключаются во фракционировании цетилпиридиниевой соли [9 — 10] (см. также стр. 288) и адсорбции на колонках с различными ионообменными смолами [11 ] и ЭKTEOЛA-цeлJtюлoзoй [12]. Приведенная ниже методика основана на первоначальной методике Чарльза и Скотта [5, 8], и очистка проводится с использованием кристаллической кислой бариевой соли [13]. [c.365]

Изучение закономерностей ионообменных процессов, протекаю- щих с участием нонов органических и особенно физиологически активных веществ, привлекает внимание в связи с развитием методов выделения, тонкой очистки и фракционирования органических электролитов, а также в связи с созданием новых форм лекарственных веществ, что двхмонстрируется, в частности, получением иммобилизованных ферментов, антибиотиков и гормонов пролон- [c.126]

Число известных ферментов с каждым годом увеличивается и в настоя-П1,ее время их известно уже свыше 900. Благодаря разработке эффективных методов выделения и очистки мнопте ферменты получены в высокоочищен-ном виде, что позволило углубить знания о их структуре, специфике, механизме действия и умножить области практического использования ферментов. [c.289]

Гидрогеназы многих прокариот также обнаруживают высокую чувствительность к молекулярному кислороду, которая in vitro в большой мере зависит от метода выделения и степени очистки. Как правило, более устойчивы к Оа неочищенные ферментные препараты. По сравнению с мембрансвязанным ферментом устойчивость к О2 гидрогеназы, отделенной от мембраны, обычно ниже. Фермент, полученный из клеток анаэробов, более чувствителен к О2, чем выделенный из клеток аэробных прокариот. [c.295]

Поскольку остаток пролина в структурном отношении принципиально отличается от других аминокислотных остатков и вместе с тем относится к природным аминокислотам и входит в состав многих белков, можно было рассчитывать, что в природе существует фермент, расщепляющий соответствующие пептидные связи. Подобный фермент представлял бы несомненный интерес, поскольку пролин — редкая аминокислота и его присутствие ограничивает возможность атаки соседних пептидных связей другими протеолитическими ферментами. До настоящего времени выделен только один постпролинспецифичный фермент [54]. Выделение и очистку этого фермента из почек ягненка проводили методом аффинной хроматографии. По предварительным данным фермент относится к классу сериновых протеаз [123 " тах [c.155]

При очистке ДНК и РНК в основном используются одни и те же приемы [62]. Различия в методах их фракционирования определяются значительно большей чувствительностью молекул РНК к гидролитическому расщеплению из-за присутствия у ри-бонуклеотидов, входящих в состав РНК, свободных 2 -ОН групп, их более низкой молекулярной массой и наличием у одноцепочечных молекул характерной (компактной) пространственной структуры. Все современные методы выделения нуклеиновых кислот состоят из трех этапов разрушения клеток, инактивации нуклеаз и собственно очистки. Для выделения нуклеиновых кислот в нативном состоянии необходимо соблюдать, по крайней мере, две предосторожности следует использовать мягкие условия разрушения тканей биологического объекта и инактивировать гидролитические ферменты (ДНКазы или РНКазы) до того, как [c.40]

Препараты мембран, предназначенные для анализа липидов, необходимо защищать от автоокисления и расщепления протеолитическими и липолитическими ферментами. Для этой цели рекомендуется проводить обработку быстро, при низкой температуре и при определенной ионной силе и pH, а также защищать препарат от вспенивания и интенсивного контакта с кислородом. В настоящее время используется эффективный и быстрый метод выделения и очистки липидов в мягких условиях. Для экстракции используют смесь метанола и хлороформа, которая разрушает липопротеидные комплексы и тем самым дает возможность достаточно полно извлечь липиды. [c.255]

В высокоочищенном состоянии КФ получена из скелетных мышц [20, 23, 35], сердца [36, 37, 38] и печени 1[39—42], а в частично очищенном виде она выделена из ряда других тканей. В качестве объектов для выделения фермента были использованы ткани кролика, акулы, крысы, быка, а также человека. Разработанный Кребсом и др. [35] метод выделения КФ основан на изо-электрическом осаждении и дифференциальном центрифугировании. Дополнительные этапы очистки включают осаждение сульфатом аммония, гель-хроматографию на сефарозе 4В и ионнообменную хроматографию на ДЭАЭЦ [20, 23]. Описаны и другие методы выделения—с помощью гидрофобной хроматографии [43], хроматографии по сродству на иммобилизованной фосфорилазе, специфических антителах, на кальмодулин-сефарозе [44—46]. Очищенная до гомогенного состояния КФ из скелетных мышц представляет собой большую молекулу с м. в. 1,27x10 —1,33X10 [20, 23, 35 Коэффициент седиментации ее равен 23—26 5 [20, 23, 47, 48 При хранении фермента появляются агрегаты с коэффициентами седиментации 37 5 и 485 [23]. В двух разных лабораториях был определен аминокислотный состав молекулы КФ [20, 23]. Изо-электрическая точка фермента р1 равна 5,77 [21]. В спектре поглощения имеется максимум при 279 нм и минимум при 251 нм [21]. [c.56]

Выделяют ферменты так же, как и другие белки, хотя есть приемы, применяемые преимущественно для ферментов. Из них можно отметить экстракцию глицерином, в котором сохраняются нативные свойства ферментов, а также метод ацетоновых порошков, состоящий в осаждении и быстром обезвоживании при температуре не выше —10° С тканей или вытяжек из них, содержащих ферменты. К их числу относится также получение ферментов путем адсорбции с последующей элюцией (снятием) с адсорбента. Этот метод был введен в химию ферментов А. Я. Данилевским и дал мощный толчок развитию ферментологии. Сейчас адсорбционный метод вьщеления и очистки ферментов разработан детально. Наряду с ним широко применяют метод ионообменной хроматографии, метод молекулярных сит. электрофорез и особенно изоэлектрофокусирование. Oiona из остроумнейших модификаций адсорбционного метода—аффинная хроматография, где адсорбентом служит вещество, с которым фермент взаимодействует избирательно. В результате лишь один этот фермент задерживается на колонке, а все сопутствующие ему выходят с током проявителя. Изменяя характер проявителя, исследуемый фермент элюируют с колонки. Этим методом достигают очистки фермента в несколько тысяч раз, применяя всего лишь одноэтапную (аффинная сорбция—элюция) схему выделения. [c.97]

Основными этапами выделения любой рестриктазы является получение бесклеточных экстрактов и собственно очистка целевых ферментов, осуществимая с применением традиционных приемов препаративной биохимии белковых соединений (высаливание, хроматографическое фракционирование и т. д.). Вместе с тем следует отметить, что процессам выделения рестриктаз, как и других ферментов нуклеинового обмена, характерен ряд специфических особенностей. В первую очередь это замечание относится к тому вниманию, которое уделяется разделению целевых ферментов и нуклеиновых кислот, в принципе способных влиять на перераспределение как рестриктаз, так и нуклеаз между фракциями, получаемыми в результате применения различных методов выделения целевых ферментов. Поэтому этот этап является одним из ключевых в схемах выделения рестриктаз, от результатов проведения которого во многом зависит успех дальнейшей их очистки. [c.143]