Ферменты стабильность

Все значения нормированы относительно соответствующих значений для исходного фермента. Стабильность в плазме обратна времени, необходимому для осветления плазмы чем больше приведенная величина, тем выше стабильность. Сродство к фибрину коррелирует с эффективностью растворения сгустков. По отношению к активности в плазме имеет место отрицательная корреляция. [c.175]

Растворы ферментов нельзя длительно хранить при комнатной температуре, так как они неустойчивы и быстро денатурируют. Кроме того, как всякие белковые растворы, они представляют собой хорошую питательную среду для развития бактерий. С повышением концентрации белка (фермента) стабильность ферментов возрастает. [c.160]

Применение очищенных препаратов -- логически наиболее естественный способ практического использования активности отдельных ферментов микробных клеток для трансформации органических веществ. Однако технически этот подход реализуем лишь в том случае, если ферментные препараты могут быть получены сравнительно легко, если ферменты стабильны и не требуют кофакторов и т. д. [c.538]

При селекции продуцентов ферментов генетики промышленных микроорганизмов стремятся улучшить желаемые их свойства высокий выход фермента, стабильность фермента, независимость синтеза фермента от индуктора, легкое его извлечение из среды и т. п., тогда как нежелательные качества стараются устранить или ингибировать. К числу последних относятся наличие вредных побочных метаболитов, неприятный запах, нежелательный цвет препарата и т. п. Сложная генетическая техника, однако, еш,е не нашла широкого применения и большинство производств использует главным образом приемы мутагенеза в сочетании с хорошо отработанными селекционными методами. Обш,им недостатком большинства промышленных микроорганизмов является их малая генетическая изученность, что, естественно, снижает возможности улучшения полезных свойств продуцентов ферментов за относительно короткий период времени. Однако технология переноса генов вместе с белковой инженерией способны изменить эту ситуацию и обусловить развитие новых направлений в области ферментной технологии. [c.82]

Общие представления о кинетической роли ферментов впервые были сформулированы Михаэлисом и Ментеном [100]. Они предположили, что молекула, подвергающаяся реакции (субстрат 8), обратимо адсорбируется на определенных местах Е фермента, образуя стабильный комплекс З-Е фермент — субстрат. Последующий распад этого комплекса с образованием продуктов реакции является лимитирующей стадией процесса. Схема реакции аналогична схеме Ленгмюра, предложенной для катализа на поверх- [c.561]

Ингибитор связывается аналогично, но дальнейшие химические превращения совершенно иные. Введение конъюгированной системы значительно облегчает атаку соседнего нуклеофила на апофермент. При этом образуется новая стабильная ковалентная связь, что приводит к необратимому ингибированию фермента и препятствует нормальному метаболическому функционированию системы, н [c.451]

Малую стабильность ферментов, выделяемых из органов животных, растений или культур микробов, повышают, осуществляя так называемую иммобилизацию ферментов. С этой целью ферменты вводят в среду, в которой протекают процессы полимеризации. После окончания полимеризации ферменты оказываются прочно закрепленными и долго сохраняют каталитическую активность. [c.363]

Термин изо используется для описания механизмов, включающих стадию изомеризации между двумя стабильными формами фермента. [c.195]

Пин-понг -механизм соответствует случаю, когда одна или более молекул продукта выделяется прежде, чем все молекулы субстратов присоединятся к макромолекуле фермента. Число кинетически существенных субстратов или продуктов в данной реакции обозначается моно-, OU-, три-, тетра-н т. д. Термин изо используют для описания механизмов, включающих стадию изомеризации между двумя стабильными формами фермента. Например, обратимая реакция с одним субстратом и одним продуктом относится к типу моно-моно- и графически изображается как [c.249]

Третьей областью применения теории саморазвития открытых каталитических систем может стать моделирование и перенесение в промышленные реакторы моделей ферментативных систем, представляющих если не всю, то часть живой клетки, обеспечивающей стабильную работу биокатализаторов. Речь идет об освоении каталитического опыта живой природы в том отношении, которое касается стабилизации ферментов и их синтетических аналогов не путем искусственной иммобилизации, а посредством закономерностей, присущих естественному отбору в ходе химической эволюции. [c.210]

Область, в пределах которой реагирующие молекулы прилегают одна к другой (образуя переходный комплекс или переходное состояние), называется активным центром фермента. Для уреазы эта область не должна быть очень большой — она должна лишь немного превышать размеры молекулы мочевины. Напрашивается вопрос, почему же тогда столь велика молекула фермента, насчитывающая тысячи атомов. Частично это объясняется, по-видимому, тем, что атомы, образующие активную область, должны прочно удерживаться в определенных положениях, и другие атомы молекулы фермента обеспечивают стабильность таких положений. Кроме того, локальное атомное окружение во многих ферментативных реакциях очень сильно отличается (например, в случае гидрофобности) от окружения в водной среде, в которой действуют ферменты, и большие молекулы фермента обеспечивают возможность таких локальных изменений. [c.396]

В обычных условиях ферментативной реакции фермент-субстратный комплекс — образование эфемерное, так как сразу же после его возникновения происходит основная реакция. Однако, если реакция по тем или иным причинам заторможена (например, при низкой температуре), то фермент-субстратный комплекс становится способным к длительному существованию. Такая ситуация возникает, в частности, для ферментативной реакции типа А + В -> С + В при недостатке одного из субстратов. Например, фермент и субстрат А образуют нормальный комплекс, но в отсутствие субстрата В он не способен к дальнейшему превращению и потому стабилен. Именно такой механизм образования стабильного фермент-субстратного комплекса, согласно излагаемой гипотезе, лежит в основе специфического, взаимного распознавания и сцепления клеток в ряде случаев межклеточных взаимодействий. [c.160]

В исходном экстракте ферменты относительно стабильны, что объясняется наличием большого количества других белков. В процессе очистки стабильность выделяемого фермента снижается, поэтому [c.196]

Скорость ферментативной реакции зависит от концентрации субстрата (субстратов), pH, температуры, присутствия активаторов или ингибиторов, природы буфера, его ионной силы и др. Ряд факторов оказывает влияние на стабильность фермента, вызывая необратимые-изменения его нативной конформации. Это необходимо учитывать, подбирая условия измерения активности (pH, температура, время инкубации). Подробное исследование стабильности ферментов описано, ниже. [c.206]

ИССЛЕДОВАНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ ФЕРМЕНТОВ [c.214]

Влияние pH на стабильность фер- мента. Готовят серию пробирок, в каждую из которых помещают буферный раствор с определенным pH (учитывают чувствительность фермента к ионам различной природы) и одинаковое количество фермента. Выдерживают, пробы в течение определенного времени при фиксированной температуре, после чего отбирают из. каждой пробы определенный объем ра [c.214]

Влияние температуры на стабильность ферментов. Фермент (концентрация его в пробе может варьировать в широких пределах) инкубируют в течение определенного интервала времени при серии фиксированных значений температуры (2° С, 20° С, 40° С, 60° С), после чего отбирают пробы для определения активности в стандартных условиях. [c.214]

ЭДТА может связывать нежелательные примеси (следы ионов тяжелых металлов меди, свинца, ртути и др. —в реактивах), тормозящие активность фермента. Одно из непременных условий сохранения стабильности ферментов—хранение их в высущенном или замороженном состоянии (в условиях холода). Многие ферменты стабильны в виде суспензии в концентрированных растворах сульфата аммония. [c.120]

О других модификациях носителей до сих пор не упоминалось в основном потому, что в большинстве случаев все необхп. димые процедуры могут быть проведены с помощью одного ка-тионообменника и одного анионообменника. При слишком большом выборе материалов много времени затрачивается на то, чтобы опробовать каждый из них. Теперь мы все же дадим описание некоторых других материалов и их свойств. При крайних значениях pH как КМ-, так и ДЭАЭ-заместители становятся незаряженными. Если необходимо использовать анионообменник при pH выше 9 или катионообменник при pH ниже 4 (лишь немногие ферменты стабильны в этих условиях), нужны другие модификации. К гранулам целлюлозы или декстрана были при- [c.108]

Значение pH в микроокружении ионообменника отличается от его значения в наносимом на колонку или вытекающем из колонки буфере, так как протоны вну11ри матрицы адсорбента могут отталкиваться или притягиваться за счет эффекта Доннана. В общем pH матрицы бывает обычно на 1 единицу выше, чем рН окружающего буфера, в анионообменнике и на 1 единицу ниже — в катионообменнике (рис. 4.11). Чем ниже ионная сила буфера, тем значительнее эта разница. Такое явление имеет очень важные последствия, когда речь идет о стабильности фермента в зависимости от pH. Фермент, стабильный при pH [c.112]

О мкл в час при концентрации лактата в диапазоне 1-12 ммоль/л и погрешности 5%. езультаты получают через 2-3 мин после взятия крови у пациента. Сенсор, содержа-дай около 2 ед. активности фермента, стабильно работает в течение одного месяца, коэффициент корреляции с данными оптического метода анализа с помощью LDH = 0,998 (у = 1,094х — 0,215 ммоль/л). [c.265]

Любопытно сравнить пенициллин с другими необратимыми ингибиторами ферментов. Стабильный, неактивный пеницилли-ноил-ферментный комплекс совершенно аналогичен фосфорил-ферментному комплексу, образуюш емуся при взаимодействии органических фторфосфатов с ацетилхолин-эстеразой или сериновыми иротеиназами. Однако специфичность пенициллина намного выше, чем у фтор фосфатных ингибито- [c.225]

Следовательно, необходимо, чтобы состав белков мог меняться в широких пределах, так чтобы они узнавали различные субстраты и взаимодействовали с ними. Для некоторых белков требуется присутствие других соединений (небелковой природы) для участия в процессах узнавания и превращения. Такие соединения называются коферментами. Поэтому можно заранее сказать, что катализаторы белковой природы, или ферменты, должны обладать высокой степенью упорядоченности и организации. Кроме того, вся необходимая информация должна быть записана наиболее компактным образом. Такие упорядоченные биополимеры, с помощью которых работает и самовоспроизводится двигатель внутреннего сгорания клетки, также должны совершеиио точно воспроизводиться. Было установлено, что действие ферментов высокоспецифичио структуре субстратов. Следовательно, информация о молекулярной организации белков (ферментов) должна надежно храниться, будучи записанной на стабильном, относительно консервативном языке. И вот тут-то выходят на сцену нуклеиновые кислоты. Значит, существует еще одно соответствие [c.15]

Такая техника иммобилизованных ферментов соединяет уникальные возможности двух видов катализаторов специфичность ферментов со стабильностью, простотой в обращении н хранении гетерогенных катализаторов на подложке, более того, иммобилизованные ферменты можно использовать повторно, а также применять для синтеза в потоке. Поэтому они находят все более широкое прнме-нёние в различных областях анализа и в медицине. [c.259]

Для удобства применения холинэстеразы иммобилизуют в по.шмер-ные пленки или гели. При этом существенно увеличивается устойчивость фермента к влиянию внешних факторов. Так, при иммобилизагщи холинэстеразы в желатиновый гель срок ее хранения составляет 2-3 года, а при непрерьганой работе активность препарата падает на 20% лишь через 10 дней. Наряд) с повьпиением стабильности иммобилизация хо.пинэстераз обеспечивает многократное использование препарата. Заметим, что при определении необратимых ингибиторов, например фосфорорганических пестицидов, повторное использование фермента в каждом случае требует специальных исследований В качестве реактиваторов применяют гидро-ксиламин, оксимы и др [c.290]

Молекула три-Ы-ацетилхитотриозы (Gl NA )з образует стабильный непродуктивный комплекс с лизоцимом, располагаясь на первых трех участках — А, В, С. На участках А и С ацет-амидные группы первого и третьего остатков N-ацетилглюкозамина, ориентированные внутрь щели, образуют водородные связи с ферментом, что приводит к весьма низкой константе диссоциации комплекса (эффективному связыванию). [c.151]

Следовательно, формаль1го переход сахаридного остатка у расщепляемой связи от конформации кресла к конформации полукресла в переходном состоянии реакции может привести к ускорению ферментативного превращения в 10 —Ю раз [90]. Несколько позже эти данные и расчеты серьезно пересматривались [89], и было показано, что лактонная концевая группа (153) связывается с участком D активного центра лизоцима лишь в 30 раз более эффективно, чем обычный N-ацетилглюкозаминный остаток. При этом карбонильный атом кислорода лактонной группы образует дополнительную водородную связь с остатком Asp 52 лизоцима и тем самым может вносить дополнительный вклад в связывание с активным центром тем самым достоверность данных о необычно эффективном взаимодействии лактона с лизоцимом становится вообще неопределенной [89]. Однако в любом случае, взаимодействует ли лактон с ферментом прочно или нет, не имеет никакого отношения к напряжению или деформации субстрата в активном центре лизоцима. Даже если лактон и является аналогом цереходного состояния в катализе лизоцимом, опыты по его связыванию с ферментом не могут дать никакого ответа на то, в какой форме — искаженной или обычной (стабильной) — субстрат находится в комплексе Михаэлиса с ферментом. Таким образом, по эффективности связывания лактонов с лизоцимом нельзя судить о деформациях в активном центре. [c.167]

Теоретические расчеты величин энергий фермеит-субстратиого и фермент-ипгибиторного комплексов в различных конформациях, основанные, иа данных рентгеиоструктурного анализа, показали [95], что при взаимодействии с участком D активного центра лизоцима соответствующее сахаридное кольцо субстрата сохраняет свою обычную стабильную конформацию кресла. Более того, участок D вообще не проявляет повышенного сродства к конформа-цип полукресла [95]. К этим же выводам пришли и авторы независимой теоретической работы [96], базируясь на квантовомеханических и классических структурных расчетах конформаций фермент-субстратного комплекса. [c.168]

Продуктами расщепления полностью метилированной сахарозы оказались тетра-О-метил-О-глюкоза П и неизвестная в то время тетра-0-метилфруктоза 111. Структуру последней установили только десять лет спустя, причем было показано, что она имеет фуранозный 2, 5-окисный цикл. Кроме того, найдено, что свободная, несвязанная фруктоза имеет более стабильную пиранозную структуру. Глюкоза связана с фура-нозой а-глюкозидной связью, так как сахароза расщепляется ферментом мальтазой (а-Д-глюкозидазой) фруктозидная связь имеет р-кон-фйгурацию. [c.555]

Из амилолитических ферментов, например, а-амилаза активируется ионами кальция, который способствует сохранению нужной конформации и повышению стабильности третичной структуры макромолекул фермента к денатурации и действию иептидгндролаз. На плесневые а-амилазы стабилизирующее действие оказывают ионы алюминия. Все а-амилазы инактивируются ионами металлов ртути, меди, серебра и ионами галоидов — хлора, брома, фтора и йода. [c.121]

О биостойкости материалов можно судить по действию на них ферментов тех микроорганизмов, которые идентифицированы в данных условиях эксплуатации. Коррозию металлов в этом случае называют микробиогенной (или ферментативной). Целесообразно проверять стабильность материалов относительно определенных классов ферментов (дегидрогеназы, оксидазы, гидролазы и др.). Эти испытания можно отнести к ускоренным или экспресс-методам. Так как ферменты действуют на материалы быстрее, чем микроорганизмы, возможно увеличение концентраций ферментов для интенсификации процесса возможно моделирование условий ферментативных реакций и выявления действительного характера процесса (при сравнении с протекающими в реальных условиях) возможна оценка ингибиторного действия биоцидных веществ [7, с. 68]. [c.76]

Препараты олигомерных ферментов, связанных с матрицей через одну из субъединиц, могут быть использованы для получения иммобилизованных форм ферментов разной степени олигомерности. Сравнение каталитических свойств этих форм и их стабильности позволяет сделать выводы о роли четвертичной структуры в функционировании ферментов-олигомеров. Диссоциация олигомерного иммобилизованного фермента может быть индуцирована специфическими воздействиями (например, диссоциация иммобилизованной глицеральдегид-З-фосфат-дегидрогеназы из дрожжей на димеры) или обработкой денатурирующими реагентами (например, мочевиной). [c.300]

Ферменты, используемые в ИФА в качестве маркеров, должны отвечать ряду требований иметь высокую активность и стабильность в условиях анализа чувствительный и простой метод определения продуктов или субстратов ферментативной реакции сохранять активность и стабильность после конъюгирования с антителами быть доступным при высокой степени чистоты. Непременным условием является отсутствие фермента и его ингибиторов в исследуемых биологических жидкостях. Всем этим требованиям отвечают наиболее часто применяемые в ИФА пероксидаза и щелочная фосфатаза. [c.317]

Удобным объектом для изучения свойств мембранных ферментов является Са-АТФаза (КФ 3.6.1.38) СР скелетных мыщц кролика, поскольку содержание этого белка в легкой фракции мембран ретикулума достигает 80—90% выделяемые препараты СР стабильны при хранении и имеют постоянный белковый и фосфолипидный состав. Цель работы — знакомство с методическими подходами к изучению взаимодействия мембранных ферментов с субстратами и регуляторами, к анализу конформационной подвижности мембранных белков, а также характера и роли белок-липидных взаимодействий в биологических мембранах. [c.358]

Целью работы является получение активного мономера лактатдегидрогеназы (ЛДГ) из мышц свиньи сравнение каталитических характеристик растворимого фермента и различных форм иммобилизованного белка (тетрамера и мономера), а также изучение стабильности иммобилизованного и растворимого ферментов. [c.386]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология