Инактивация ферментов кислотами

Ферменты являются белками, поэтому любые агенты, вызывающие денатурацию белка (кислоты, щелочи, соли тяжелых металлов, нагревание), приводят к необратимой инактивации фермента. Однако подобное инак-тивирование относительно неспецифично, оно не связано с механизмом действия ферментов. Гораздо большую группу составляют так называемые специфические ингибиторы, которые оказывают свое действие на какой-либо один фермент или группу родственных ферментов, вызывая обратимое или необратимое ингибирование. Исследование этих ингибиторов имеет важное значение. Во-первых, ингибиторы могут дать ценную информацию о химической природе активного центра фермента, а также о составе его функциональных групп и природе химических связей, обеспечивающих образование фермент-субстратного комплекса. Известны вещества, включая лекарственные препараты, специфически связывающие ту или иную функциональную группу в молекуле фермента, выключая ее из химической реакции. Так, йодацетат I H,—СООН, его амид и этиловый эфир, пара-хлормеркурибензоат lHg—С Н,—СООН и другие реагенты сравнительно легко вступают в химическую связь с некоторыми SH-группами ферментов. Если такие группы имеют существенное значение для акта катализа, то добавление подобных ингибиторов приводит к полной потере активности фермента [c.147]

Патоку крахмальную в СССР получают в основном способом кислотного гидролиза крахмала кукурузного кислотой соляной технической синтетической. Основные технологические процессы паточного производства включают подготовку крахмала к производству кислотный, кислотноферментативный или ферментативный гидролиз крахмала нейтрализацию при кислотном и кислотно-ферментативном гидролизе крахмала или инактивацию ферментов при ферментативном гидролизе фильтрование раствора от нерастворимых примесей обесцвечивание раствора активным углем или ионообменными смолами сгущение очищенных сиропов до необходимой плотности фильтрование, охлаждение и взвешивание патоки (рис. 24). [c.120]

Кинетические параметры гидролиза бензилпенициллина до 6-аминопенициллановой кислоты (6-АПК) под действием иммобилизованной пенициллинамидазы при 40° С равны йкат=15 сек- , Ят(каж)=3,1 10- м. Константа инактивации пенициллинамидазы в условиях проведения реакции равна 10 сек , причем связывание с ферментом субстрата или продуктов реакции не влияет на скорость инактивации фермента. Рассчитать, какое количество 6-АПК (мол. вес 217) можно получить с помощью иммобилизованной пенициллинамидазы в периодически действующем реакторе объемом 100 л (начальная концентрация активного фермента равна 3-10 М, начальная концентрация субстрата равна 1,0 М), если степень конверсии субстрата в каждом реакционном цикле должна составлять 99%. В расчетах учесть, что константа конкурентного ингибирования пенициллинамидазы вторым продуктом реакции, фенилуксусной кислотой, равна 2,8-10 М. [c.176]

Аналогично метиловый зфир N-дивзoaцeтилфeиилaлaнииa избирательно взаимодействует с оствтком аспарагиновой кислоты (А р-215) в активном центре пепсина, что приводит к полной инактивации фермента. [c.172]

Наконец, при денатурации происходит утрата белками биологической активности. Воздействие денатурирующих агентов приводит к инактивации ферментов, гормонов и вирусов. Эта потеря специфических биологических свойств считается важным критерием денатурации. Однако имеется и ряд исключений. Например, активность инсулина сохраняется при денатурации мочевиной, в растворах которой сохраняют свою активность также трипсин, папаин и пепсин рибонуклеаза и лизоцим обладают тепловой устойчивостью, и их активность слабо изменяется при кипячении в разбавленной кислоте. Наряду с потерей ферментативной активности наблюдается и изменение иммунологических свойств. Как известно, иммунологическая активность белков характеризуется двумя показателями — антигенностью, т. е. способностью возбуждать образование антител, и специфичностью. Исследование этих показателей привело к выводу, что при денатурации ряда белков происходит понижение антигенности, но сохраняется иммунологическая специфичность. [c.191]

Механизмы токсического действия органических ксенобиотиков весьма многообразны. Эффект может заключаться в изменении проницаемости и дезорганизации клеточных мембран (при действии низкомолекулярных углеводородов, фенола), инактивации ферментов, нарушении синтеза белков, АТР, воспроизводства нуклеиновых кислот, образования клеточной стенки. У гидробионтов ядовитые вещества могут нарушать ритм развития, в результате чего организм оказывается неготовым к сезонным изменениям и погибает. У животных чаще всего поражаются органы размножения. [c.359]

Инкубация. В2 пробирки, обозначенные номерами У и 2, вносят скальпелем немного мышечной кашицы (не превышающей по объему горошины). Пробирка 1 является контрольной в нее добавляют для инактивации фермента 5 капель раствора трихлоруксусной кислоты. Затем в каждую пробирку вносят раствор крахмала (до 1/2 объема пробирки) и по 7 капель вазелинового масла для создания анаэробных условий. Пробирки помещают в водяную баню на 1 ч при 37° С. [c.181]

Растворы пепсина. Пепсин — однокомпонентный про-теолитический фермент желудочного сока — может быть получен в виде белковых кристаллов, обладаюш их весьма высокой каталитической активностью. Пепсин является альбумином, имеет глобулярные молекулы и растворим в воде. Пенсин свертывается при нагревании, осаждается крепким спиртом, солями тяжелых металлов, дубильными веш ествами. Концентрированные кислоты и щелочи разрушают пепсин. Фильтровальная бумага адсорбирует значительные количества пепсина. Свет способствует инактивации фермента. [c.183]

Примечание. Соляная кислота извлекает из растительных тканей аскорбиновую КИСЛОТ) и способствует инактивации ферментов. [c.433]

III. Инактивация фермента, синтезирующего ключевые регуляторы клеточного ответа. Наиболее изучена инактивация вторичным мессенджером — арахидоновой кислотой — ферментов син- [c.366]

Методы, используемые для экстракции рибонуклеиновых кислот, частично зависят от природы органа или организма. В одном из ранних методов, использованном Левиным 11], к густому тесту из дрожжей добавляли щелочь, смесь перемешивали с пикриновой кислотой, фильтровали и нуклеиновую кислоту осаждали из фильтрата добавлением соляной кислоты. Такая довольно жесткая обработка приводила к тому, что полученная нуклеиновая кислота значительно отличалась от нативной рибонуклеиновой кислоты. Для выделения рибонуклеиновых кислот, приближающихся по структуре к нуклеиновым кислотам живой клетки, необходимо избегать применения жестких условий (pH, тедтература) в то же время необходимо, насколько возможно, затормозить ферментативный распад. Широко применялась экстракция рибонуклеопротеидов изотоническим раствором хлористого натрия [2,3]. Белки от нуклеиновых кислот могут быть отщеплены различными методами, такими, как обработка смесями хлороформа с октиловым спиртом [4], додецилсульфатом натрия [5], нитратом стронция [6] или спиртом [7], а также расщепление белковой фракции трипсином [8]. И снова эффективность каждого метода определяется природой рибонуклеопротеида. Для инактивации ферментов в процессе экстракции полезно применение хлоргидрата гуанидина (денатурирующего агента) [9] для выделения рибонуклеиновых кислот и нативных рибонуклеопротеидов из дрожжей был применен метод. [c.364]

Глюкоза+Кислород=Глюконовая кислота+Перекись водорода, тем меньше количество его регистрируется внутренней частью электрода. К сожалению, это устройство все еш.е работает недостаточно надежно, что не позволяет использовать его как имплантируемый аппарат для постоянной регистрации содержания глюкозы. Возникающие здесь проблемы связаны с наличием конкурентных отношений между глюкозой и кислородом в жидкостях тела, инактивацией фермента in vivo, сложностью калибровки и дрейфом характеристик электрода. Ведущиеся интенсивные исследования позволяют надеяться, что, усовершенствовав такие электроды с ферментами, удастся со временем создать датчик глюкозы для автономно работающего, полностью автоматического и небольшого по размеру протеза поджелудочной железы, нужного для лечения больных диабетом. В этой связи особенно интересны последние достижения в области разработки фермент-содержащих электр)рдов. Исследователи, работающие в Крзнфилдском технологическом институте Оксфордского университета и в госпитале Гая в Лондоне, разрабатывают глюкозный электрод, в котором для переноса [c.341]

Для анализа в две пробирки диаметром 18 и длиной 180 мм наливают по 10 мл субстрата и ставят их в ультратермостат или водяную баню с постоянной температурой 30 0,2° С на 5—10 мин (чтобы растворы приняли необходимую температуру). Затем, не вынимая пробирок из термостата, наливают в первую (контрольную) 5 мл дистиллированной воды, во вторую (опытную) — 5 мл рабочего раствора фермента. Смеси быстро перемешивают и выдерживают в ультратермостате в течение 10 мин, отмечая время по секундомеру. По истечении этого времени из пробирок отбирают по 0,5 мл раствора и переносят их в конические колбочки с предварительно налитыми туда 50 мл рабочего раствора йода и 0,1 н. раствора соляной кислоты. Жидкости взбалтывают, при этом одновременно происходит инактивация фермента и йодокрахмальная реакция. Растворы приобретают следующую окраску контрольный — сннюю, опытный — фиолетово-бурую различной интенсивности в зависимости от степени гидролиза крахмала. [c.299]

Этот факт необычен, если учесть, что низкомолекулярные эфиры хлорамфеникола не активны in vitro. Стрептомицин, содержащий альдегидную группу, присоединен к сополимеру винилпирролидона с виниламином альдиминовой связью, а с гид-разидом полиакриловой кислоты образовал полимерный гидра-зон. Аналогично канамицин, содержащий аминогруппы, переведен в полимерный альдимин. Все три полимера обладают значительной антибактериальной активностью, в то время как гидролитически стабильные продукты восстановления альдиминов были почти не активны. Последнее указывает на гидролитический механизм действия ФАП, как это и должно быть в соответствии с локализацией его мишени в рибосомах. Так же, как и для полимерных производных пенициллинов, для производных канамицина обнаружен значительный защитный эффект от инактивации ферментами альдимины канамицина в 50—100 раз активнее исходного антибиотика против устойчивых штаммов. [c.136]

Среди альдегидов и кетонов максимальную опасность ровью населения Земли вследствие загрязнения окружа-1ей среды представляет самый активный и производи-н в наибольших количествах формальдегид Это обус-1лено его способностью быстрого взаимодействия по эгим типам функциональных групп — метиленовой, 1Н0-, гидрокси-, альдегидной группам В результате про-одит блокирование и инактивация ферментов, сшивка [ковых молекул, например, коллагена и кератина кожи, [вводов (в частности, гиалуроновой кислоты, нуклеино-и кислот) Тем самым ускоряется дубление и старение ки, провоцируются аллергия и раковые заболевания Формальдегид попадает в организм человека с возду-л через дыхательные пути, проникает через кожу (в том ле и с косметическими препаратами), с пищей итд 1годаря бактерицидным свойствам формальдегид, к сопению, широко используется недобросовестными произ-штелями в качестве консерванта при производстве пи-вых и косметических товаров, хотя во многих странах [c.623]

Скорость окисления аскорбиновой кислоты перекисью водорода обратно ропорциональна концентрации перекиси ввиду инактивации фермента, катализирующего окисление (по Круковскому [265], пероксидазы). Следовательно, при низких концентрациях перекиси водорода окисление аскорбиновой кислоты происходит достаточно быстро для создания такого соотношения концентраций между этой кислотой и дегидроаскорбиновой, которое благоприятствует окислению липидов. При более высоких концентрациях перекиси водорода скорость окисления аскорбиновой кислоты меньше скорости последующего разложения лабильной и чувствительной дегидроаскорбиновой 1266], а поэтому до полного окисления аскорбиновой кислоты не может установиться соотношения концентрации ее и дегидроаскорбиновой кислоты, благоприятного для окисления липидов это и тормозит развитие сального привкуса. [c.521]

Периодическое добавление к ферментному раствору соляной, серной или уксусной кислот для поддержания pH электродиализуемого раствора в пределах 5—7 не предотвращало инактивации фермента. [c.324]

Две по рции препарата по 10 мл помещают в колбочки на 50 мл и одну из них нагревают до кипения и кипятят 1—2 минуты для инактиваций фермента, а затем охлаждают. Колбы ставят в термостат при температуре 37° и после добавления 10 мл раствора аскорбиновой кислоты инкубируют смесь в течение 30 минут. Затем содержимое обеих колб нагревают до кипячения и после охлаждения доводят водой до метки. [c.142]

Существуют различные методы выделения брадикинина из продуктов расщепления белков плазмы трипсином или змеиным ядом и его очистки, разработанные в различных лабораториях. Методика, применявшаяся Эллиоттом и сотр. [661, 666, 668, 669], заключалась в обработке фракционированной смеси белков из сыворотки быка 0,1 и. соляной кислотой при 37° (для инактивации ферментов, разрушающих брадикинин) и в последующей их инкубации с трипсином в течение 6 час. Полученную смесь осаждали спиртом, а из фракции, растворимой в 74%-ном спирте, чистый брадикинин удалось выделить с помощью противоточного распределения, хроматографии на, карбоксиметилцеллюлозе (ацетатно-аммониевый буферный раствор pH 6,5 и 5) и электрофореза. Сначала на основании неточных данных аминокислотного анализа считали, что брадикинин имеет следующий аминокислотный состав Ser Gly Pro Phe Arg= 1 1 2 2 2. Результаты кислотного гидролиза, расщепления химотрипсином и разложения по методу Эдмана позволили приписать бради-кинину следующую структуру [c.105]

При изучении аминокислотного состава активных центров ряда ферментов кислотно-основных процессов было установлено, что в формировании их каталитической активности большую роль играют остатки серина, блокировка которых приводит к полной инактивации фермента. Интересным оказалось то, что последовательность аминокислотных остатков вблизи серина почти одинакова для ряда различных ферментов. В табл. 12 приведены соответствующие данные для нескольких сериновых ферментов, откуда видно, что реактивный серин с одной стороны контактирует с неполярными остатками глицина или аланина, а с другой — с карбоксильными группами аспарагиновой или глутаминовой кислоты, за которым также следует остаток глицина. [c.160]

При добавлении к раствору РОН-синтетазы ацетилсалициловой кислоты наблюдается медленная потеря активности фермента в реакции окисления арахидоновой кислоты в РОН2. Скорость инактивации фермента увеличивается с ростом концентрации аспирина. Типичные наблюдаемые зависимости активности РОН-синтетазы от времени для фермента в микросомной фракции везикулярных желез барана представлены на рис. 2. Аналогичные зависимости наблюдаются для фермента из тромбоцитов человека. [c.6]

Известны ферментативные реакции, для которых наблюдается потеря активности ферментом в процессе ферментативного превращения. Так, арилсульфатаза полностью инактивируется в течение ферментативной реакции. Аналогичные эффекты наблюдались при исследовании кинетиьш катализа бактериальными гидрогеназами. Интерес к изучению кинетики ферментативных реакций с истощением системы по субстрату и с инактивацией фермента в процессе реакции в значительной степени стимулировало исследование про-стагландинсинтетазы — полиферментного комплекса, осуществляющего превращение арахидоновой кислоты в простагландины. [c.244]

Смотреть страницы где упоминается термин Инактивация ферментов кислотами: [c.103] [c.238] [c.168] [c.439] [c.70] [c.23] [c.34] [c.108] [c.105] [c.339] [c.217] [c.18] [c.163] [c.168] [c.268] [c.13] [c.347] [c.12] [c.31] [c.48] [c.32] [c.236] [c.347]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология