Молекулярные сита сефадексы

Степень полимеризации иолисахаридов ГМЦ в большинстве случаев находится в диапазоне 30—300. Для характеристики величины молекулярной массы широко используются химические методы, основанные на определении восстанавливающей способности полисахарида. Из физических методов находят применение вискозиметрия, осмометрия, светорассеяние, ультрацентрифугирование, определение скорости седиментации и др. [57,77,78]. Распространено определение молекулярных масс полисахаридов с помощью молекулярных сит — сефадексов, биогелей. [c.56]

Разработаны оптимальные условия и принципиальные технологические схемы сорбции амилазы из культуральной жидкости силикагелем в динамических и статических условиях. Приведен механизм сорбции ферментов ионитами. Показано, что сорбция может протекать за счет поверхностно-молекулярного взаимодействия без ионного обмена, а также за счет сил Ван-дер-Ваальса в сочетании с ионообменным процессом и путем так называемой сорбции высаливанием (силикагель, крахмал). Возможна также сорбция ферментов способом гель-фильтрации с одновременным взаимодействием с матрицей молекулярного сита (сефадекс А-50). [c.116]

Снижение конденсированности и молекулярного веса реагента показывает также адсорбционное разделение (гельфильтрация) на колонках сефадекса, представляющих собой обратные молекулярные сита [1501. При обработке хроматами, как видно из наших измерений, исчезает высокомолекулярная фракция с молекулами более 10 тыс. мк. Для УЩР и окисленного УЩР на рис. 17 и 18 [c.117]

К молекулярным ситам относятся не только цеолиты, но и некоторые другие вещества, например ряд ионообменников, при помощи которых удается разделять молекулы по их величине. Внутрь зерен таких ионообменников (в набухшем состоянии) могут проникать ионы небольшого диаметра и удерживаться в большом внутреннем объеме. Ионы большей величины могут, наоборот, удерживаться на относительно небольшой внешней поверхности зерен ионообменника. Разделение веществ по величине их молекул можно производить также при помощи так называемых ультрафильтров, пропускающих или не пропускающих компоненты смеси в зависимости от величины их молекул. При фильтровании гелей через столб такого молекулярного сита скорость продвижения вещества зависит от размера его молекул. К этому типу молекулярных сит относится, например, сефадекс (см. стр. 204). [c.331]

Гель-хроматография. В препаративных целях, особенно при очистке белков от примесей, щироко используют метод молекулярных сит, или гель-хроматографию. При обработке эпихлоргидрином полисахарида дек-страна образуются различной степени выраженности поперечные связи, приводящие к формированию крупных гидрофильных зерен, нерастворимых в воде и называемых сефадексами. Благодаря большому сродству к воде зерна сильно набухают в водной среде с образованием геля, которым заполняют хроматографическую колонку. Разделение веществ этим методом основано на том, что большие молекулы не проникают во внутреннюю водную фазу геля, являющуюся стационарной, и остаются снаружи, двигаясь вместе с подвижной фазой вниз вдоль колонки небольшие молекулы, напротив, свободно диффундируют внутрь зерен, образуя равновесную систему между подвижной и стационарной фазами, и соответственно с меньшей скоростью двигаются вдоль колонки (рис. 1.5). Обычно момент появления веществ в вытекающем из колонки с сефадексом элюенте выражают формулой [c.30]

Если раствор, содержаш,ий веш,ества различного молекулярного веса, пропустить через колонку, заполненную гелем сефадекса, то более мелкие молекулы проникнут во внутреннюю часть гель-образующих гранул и в результате их миграция через колонку будет замедлена. В то же время вещества большего молекулярного веса не проникают внутрь гранул геля и мигрируют быстрее мелких молекул. Разные скорости миграции приводят к разделению веществ при их прохождении через молекулярные сита . [c.24]

Справочник содержит сведения о различных сорбентах и хроматографических носителях, таких как ионообменные смолы, силикагель, окись алюминия, молекулярные сита, активные угли, целлюлозы, сефадексы и другие гранулированные гели, твердые носители для газо-жидкостной хроматографии. В книге обобщены данные о промышленных образцах материалов, выпускаемых в СССР, США, Англии, Франции, Швейцарии Японии, ФРГ, ГДР, Венгрии, Чехословакии и других странах (отражена продукция примерно 200 фирм). Вместе с перечнем марок сорбентов и носителей приведены основные сведения, необходимые для наиболее рационального использования. [c.2]

Как сообщают некоторые авторы [17, 18], применение молекулярных сит, например сефадекса 0-25 или 0-10, позволяет получать лишь частичное разделение этих соединений. В настоящее время основным методом разделения таких соединений [c.282]

Фармацевтические препараты стрептомицина могут содержать в качестве примесей соли щелочных металлов. В связи с этим была подробно исследована методом гель-фильтрации на сефадексе G-10 смесь сульфата стрептомицина с солями щелочных металлов [19]. При элюировании деионизованной водой получается практически обессоленный антибиотик с выходом 95%. Однако стрептомицин в этом случае дает две фракции. При элюировании буферными растворами (например, 0,2 М ацетатом аммония, pH 6,5) разделение идет как на обычных молекулярных ситах. [c.210]

Этот недавно предложенный метод основан на разделении белков соответственно их молекулярному весу с помощью продажного препарата, названного сефадексом . Сефадекс представляет собой нерастворимый, но гидрофильный декстран с поперечными сшивками, который действует как молекулярное сито и разделяет белки по размеру их частиц. [c.14]

Из материала, рассмотренного в предыдущем разделе, становится очевидным, что хроматография на молекулярных ситах обладает тем преимуществом, что позволяет оценивать размеры молекул исследуемых веществ причем для этого вовсе не обязательно иметь тщательно очищенные образцы. Единственное требование состоит в том, чтобы имелась возможность специфического анализа вещества в элюате, например с помощью ферментативной реакции. Однако необходимо отметить, что полученные таким путем величины следует рассматривать как ориентировочные. В некоторых случаях расхождение между фактическим молекулярным весом и рассчитанной величиной слишком велико, особенно если неизвестна форма молекул (большинство формул, приведенных в предыдущем разделе, применимы лишь в случае глобулярных макромолекул). Например, полиэтиленгликоль (молекула которого линейна) с молекулярным весом 15000 мигрирует на сефадексе G-100 примерно со свободным объемом [36], что в случае глобулярного белка соответствует молекулярному весу около 100000. [c.243]

Декстраны — 6 (а-2)-глюкопиранозил)-(6-а-Г)-глюкониранозил) -1)-глю-козы с числом звеньев в несколько десятков или сотен. Вырабатываются бактериями на растворах сахарозы. Служат для получения молекулярных сит сефадекс. [c.482]

Декстраны служат исходными веществами при получении молекулярных сит — сефадексов, нашедших сейчас широкое применение в лабораторной практике. Описаны также многие другие технические применения декстранов (см. обзор ). [c.548]

Декстраны используются (после частичного гидролиза — доведения молекулярной массы до 50 000—100 ООО) в качестве кровозаменителей (при кровопотерях). Советский декстран, применяемый в клинике, называется полиглюкином. Декстраны применяются также для изготовления молекулярных сит — сефадексов. [c.366]

Некоторые адсорбенты, так называегше молекулярные сита , пог.чощают из раствора вещества в зависимости от их молекулярного веса. Они обладают большим объемом пор и адсорбируют только такие соединения, молекулы которых способны проникнуть в поры поглотителя. Молекулы большего размера адсорбентом этого типа не задерживаются. К таким адсорбентам относятся некоторые природные алюмосиликаты, известные под названием цеолитов. Цеолиты очень быстро и энергично поглощают воду при применении их для высушивания газов или жидкостей можно добиться остаточной влажности порядка 0,001%. Синтетические молекулярные сита, сефадексы, представляющие собой полимеры дек-страна, набухают в воде, образуя зерна, которые используют в хроматографических колонках для так называемой гель-фильтрации , обычно применяемой для разделения соединений относительно большого молекулярного веса (см. табл. 98), например некоторых биополимеров. [c.269]

Декстраны — 6- (а-/)-глюкопиранозил) - (6-а-0-глюкопиранозил) -Л-глюкозы с числом звеньев в несколько десятков или сотен. Вырабатываются бактериями на растворах сахарозы. Водные растворы декстра-нов употребляются в медицине как заменители плазмы крови они служат также для получения молекулярных сит — сефадексов, которые являются декстранами, имеющими поперечную сшивку молекул. [c.453]

В ТСХ используются также иониты на основе сефадексов — сшитых декстранов. Это диэтиламиноэтил-, сульфоэтил-, карбокси-метил- и фосфоэтил-сефадекс. Они одновременно сохраняют свойства молекулярных сит. Поэтому для разделения пептидов и белков с молекулярной массой до 30 000 применяют сефадексы марок 25 , обладающие в несколько раз меньшим удельным объемом, чем сефадексы марок 50 , применяющиеся для разделения белков с молекулярной массой до 200 ООО. [c.131]

Новым чрезвычайно перспективным методом хроматографического анализа является гельфильтрация или метод молекулярных сит. В основе метода лежит различная скорость продвижения молекул через гель специального материала — сефадекса или молселекта. Сефадекс представляет декстран, подвергнутый химической обработке с образованием пористых гранул, внутрь которых могут проникать различные вещества. При увеличении числа внутренних связей в грануле размер молекул,способных проникать [c.172]

Для разделения и концентрирования ферментных белков часто используют метод гель-фильтрации с применением сефадексов—полимерных цепей полисахарида декстрана, соединенных через определенные промежутки поперечными связями и образующих своеобразные молекулярные сита, способные разделять белки в соответствии с их молекулярной массой [48, 49]. [c.170]

В последние годы все большее распространение получает хроматографическое разделение веществ по их молекулярному весу, причем первое место среди таких вариантов хроматографии принадлежит гель-фильтрации на сефадексах . Сефадекс представляет собой полусинтетический -сорбент полисахаридной природы, гранулы которого обладают порами определенного размера, так что диффузия внутрь этих гранул возможна только для молекул, величина которых не превышает величину пор. Поэтому сефадекс работает как своего рода молекулярное сито , задерживающее проникающие внутрь гранул низкомолекулярные вещества и не задерживающее полимеры. Гель-фильтрация незаменима для быстрого отделения полимера от низкомолекулярных примесей (неорганических солей, мономеров и т. д.). Ее применяют и для разделения полимеров, причем одновременно можно приблизительно оценить их молек лярный вес, так как существует набор сефадексов, различающихся величиной пор. Есть все основания полагать, что в химии полисахаридов этот перспективный метод будет находить все большее применение. Особенно интересным является использование сефадексов для разделения высоко- и низкомолекулярных осколков, образующихся при расщеплении биополимеров различными реагентами , и для выделения полисахаридов из различных природных источников Хроматография на модифицированных сефадексах, обладаюш.их ионообменными свойствами, например на диэтиламиноэтилсефадексе, также может служить эффективным приемом фракционирования полисахаридов . [c.487]

Сефадексы используют в качестве молекулярных сит при жидкостной хро-) матографии методом гель-фильтрации (синонимы гель-хроматография, гель-проникающая хроматография, молекулярно-исключакщая хроматография, экс-клюзиониая хроматография). Вещества с размерами молекул больше, чем размер пор геля, проходят через колонки с сефадексами без проникновения внутрь частиц геля, и элюируемый объем равен свободному, т. е. не занятому частицами геля объему колонки (обычно 38—42%). Мо/.екулы размером меньше, чем размер пор геля, будут проходить через зерна геля по этим порам, и в результате увеличения сечения колонки, проницаемого для таких молекул, их движение по колонке будет более медленным (элюируемый объем таких веществ будет больше свободного объема колонки). Другими словами, скорость движения отдельных веществ в колонках связана с коэффициентами распределения этих веществ между гелем и данным элюирующим раствором, чем больше коэффициент распределения, тем медленнее элюирование и тем больше величина элюируемого объема. [c.161]

В качестве примера на рис. 2.1—2.3 приведены кривые гель-фильтрации некоторых полисахаридов ГМЦ, полученные ири ис-иользовании различных носителей [150, 189, 213]. Большой интерес представляют ДЭАЭ-сефадексы, сочетающие свойства молекулярных сит и анионитов [186]. [c.49]

Наконец, разделение может проводиться по размеру частиц с использованием ситового эффекта. Молекулярные сита представляют собой материалы с порами определенного размера или с порами, размер ко4ч)рых находится в некотором определенном не очень широком диапазоне. Вещества, молекулы которых по размеру меньше, чем размеры пор молекулярного сита, при пропускании через колонку с таким ситом задерживаются на некоторое время в этих порах и движутся медленнее, чем большие молекулы, которые обтекают частички сита и выходят в свободном объёме раствора. В качестве молекулярных сит в биохимии наиболее широкое применение нашли так называемые сефадексы, представляющие собой полисахарид декстран, обработанный эпихлоргидрином, в результате чего слабо разветвленные цепи декстрана оказываются соединены (сшиты) трехуглеродными мостиками [c.235]

Свойствами молекулярного сита обладают многие пористые материалы. Наиболее часто для этой цели применяют органические полимеры с трехмерной сетчатой структурой Например, гели полисахарида декстрана (коммерческое название — сефадексы). При изготовлении [c.28]

Сефадекс Ч Молекулярные сита, или сефадексы, представляют гобой сшитые декстраиы (гидрофильные полисахаридные цепи, поперечно связаиные друг с другом и образующие устойчивую трехмерную макромолекулярную структуру). [c.18]

Разделяющая способность сефадексов зависр1т главным образом от степени сшивания молекул полисахаридной цепи друг с другом п размера молекул веществ, разделяемых таким молекулярным ситом [60]. [c.19]

Та же фирма выпускает ионообменники на основе сефадексов диэтпламиноэтил(ДЭАЭ)-, сульфоэтил-, карбокси-метил-, фосфоэтилсефадекс. Ионообменники на основе сефадексов сохраняют свойства молекулярных сит. Так, ДЭЛЭ-сефадекс А-25 применяют при молекулярном весе меньше 10 ООО, а тип А-50 — при значительно большем молекулярном весе [61]. [c.19]

Лецитины яйца были достаточно хорошо отделены от нейтральных липидов. Киселев [86] фракционировал липиды, содержащиеся в тканях мозга, на сефадексе LH-20. В смеси хлороформ—метанол (2 1) сефадекс вел себя как слабоосновный анионит, так что фосфолипиды разделялись в соответствии с их основными свойствами. Однако в смеси хлороформ—метанол— вода (65 35 8) сефадекс выступает в роли молекулярного сита, и поэтому вещества разделялись согласно их молекулярным массам. Использование метилированного сефадекса рассмотрено в обзоре [87] сефадекс G-25 был метилирован так, чтобы содержать 40% метоксигрупп липиды элюировали смесью хлороформ—метанол—вода (85 85 30). При этих условиях фосфолипиды элюировались в первой фракции наряду с липопептидами и глиголипидами. DEAE-целлюлоза оказалась полезна для фракционирования кислых липидов, содержащихся в Es heri hia соИ [88]. Фосфолипиды успешно были выведены также с помощью гель-хроматографии на сефадексе LH-20 [77, 89]. [c.208]

Изучение гелевой хроматографии аминокислот стало возможным лишь после создания гелей с небольшими размерами пор. Оказалось, что аминокислоты разделяются на молекулярных ситах не по размерам молекул, а в соответствии с их адсорбцией на матрице геля. Детально были исследованы условия адсорбционной хроматографии на сефадексе 0-10 [29]. Достаточно высокая степень разделения была достигнута в основном для ароматических аминокислот, сорбирующихся гелем [30]. Набухшие гели непригодны для скоростной хроматографии аминокислот, однако в настоящее время уже выпускаются достаточно жесткие молекулярные сита нового типа. [c.335]

С выпуском мелкопористых молекулярных сит появилась возможность осуществлять препаративное разделение аминокислот на сефадексе G-10 [29], например на колонках типа KS-370 (Pharma ia, Uppsala, Sweden), составленных из отдельных сегментов. Однако в настоящее время этот метод представляется неэкономичным. [c.357]

Идеальная матрица должна работать только по принципу молекулярного сита. Сшитые декстраны и полиакриламидные гели нельзя считать идеальными матрицами, и это необходимо учитывать при проведении эксперимента. Во-первых, эти материалы сильно сорбируют пептиды, содержащие остатки ароматических аминокислот (триптофана, тирозина и фенилаланина). При элюировании буферными растворами, содержащими вещества ароматической природы, мочевину или роданид калия, адсорбция несколько снижается, однако полностью не исчезает. Известно также, что адсорбция на сефадексе несколько возрастает при увеличении ионной силы [19], однако удовлетворительного объяснения этому явлению не дано. Во-вторых, матрица содержит небольшое количество карбоксильных групп. Вследствие этого независимо от молекулярного веса пептидов может наблюдаться ускорение компонентов, несущих отрицательный заряд, и удерживание или необратимая адсорбция основных пептидов. Этот эффект подавляется в том случае, если ионная сила буферного раствора превышает 0,02. [c.396]

При хроматографии на молекулярных ситах мононуклеотиды обычно элюируются в одной зоне. Тем не менее сефадекс G-10 и биогель Р-2 можно использовать для разделения полифосфатов аденозина и тимидина в соответствии с их молекулярными массами (при элюировании формиатным буферным раствором с рн 6 [47]) или, например, при изучении взаимодействия нуклеотидов с ионами металлов [116]. Молекулярные сита успешно применяли при разделении олиготимидиловых кислот и при изучении влияния концевой фосфатной группы на результаты разделения [69, 117]. [c.56]

Далее оказалось, что на пористых гелях декстрана (сефадекс G-200) и агарозы (сефароза) достигается эффективное разделение ДНК и РНК (рис. 38.11 и рис. 38.12 соответственно) [122, 123]. Эти примеры показывают, что разделение на молекулярных ситах основано на различиях в молекулярных массах и форме молекул. Как уже отмечалось (стр. 67), хроматография на сефарозе в буферном растворе постоянного состава является одним из наиболее мягких [30] методов очистки ДНК от трудно удаляемых примесей [124, 125]. Этот метод сравнительно недавно вошел в лабораторную практику и, по-видимому, является достаточно перспективным. По аналогии с фракционированием низкомолекулярных веществ разрешение в этом случае зависит от отношения образец—сорбент. [c.82]

При выделении птеридинов из природного сырья используют молекулярные сита, например сефадексы G-10 и G-25 [73, 80, 82]. [c.196]

Для выделения соединений этого типа используют иониты и молекулярные сита, например амберлит XAD-1 и XAD-2 [85], DEAE-целлюлозу [86] и DEAE-сефадекс А-50 [86, 88]. Из катионитов применяют СМ-целлюлозу [89, 90], дауэкс 50W-X2 [90], SP-сефадекс С-25 [91] и СМ-сефадекс С-50 в сочетании с другими молекулярными ситами [86, 92]. [c.197]

Молекулярные сита типа сефадекс имеют большое значение в изучении качественного состава и количественного соотношения кобаламинов и их белковых носителей. Белки — переносчики кобаламинов — были выделены из многих физиологических жидкостей (сыворотка крови, желудочный сок, лейкоциты человека и др.) на сефадексах G-50 [96], G-25 [94], G-100 [89, 92, [c.197]

С DEAE-целлюлозы корриноиды элюируют в градиенте концентрации и pH фосфатного буфера [87, 92], а с DEAE-сефадекса А-50 — в градиенте хлорида натрия и фосфатного буферного раствора [92]. В случае амберлита в качестве элюентов служат этанол и ацетон [85]. При разделении на молекулярных ситах чаще всего используют трис—натрийхлоридный буферный раствор [93, 96] и фосфатный буферный раствор [95]. [c.198]

Хроматография гаироко применяется для разделения и очистки полинуклеотидов. Методы, разработанные для определения РНК и ДНК, будут рассмотрены в следующих главах подробное описание этих методов можно найти в соответствующих обзорах [32, 33]. При разработке методов хроматографирования были испытаны колонки из фосфата кальция [34—36], метилированного альбумина [37, 38], полиметакрилата магния (амберлит ШС-50) [39, 53] и като-2 (катионный крахмал) [54] наилучшие результаты были получены при использовании замещенных производных целлюлозы, например эктеола-целлюлозы (целлюлоза, обработанная апихлоргидрином и триэтаноламином) [19, 23, 31, 40—42] или ДЭАЭ-целлюлозы (диэтиламиноэтилцеллюлоза) [43, 44]. При использовании таких колонок наиболее эффективное разделение олигонуклеотидов, содержащих от двух до семи нуклеотидов, достигается путем градиентной элюции мочевиной. С успехом применяются также колонки с сефадексом, обладающим свойством молекулярного сита [45]. Для очистки информационной РНК употребляют колонки из ДНК [46, 47, 48, 49] (стр. 234). [c.34]

Молекулярные сита. Для очистки белков могут использоваться молекулярные сита, разделяющие молекулы в зависимости от их размера. Наиболее удобны для этой цели некоторые полисахариды и полиакриламиды с порами разных размеров, известные под коммерческими названиями сефадекс и биогелъ. Недавно появились молекулярные сита с диэтиламиноэтильными [c.80]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология