Протеазы, АТР-зависимые

Последние работы [87] по рентгеноструктурным исследованиям а-литпческой протеазы показали, что Asp-102 находится в сильно полярном окружении и имеет рКа = 4,5. Далее, с помощью гистидинового ауксотрофа Myxoba ter 495 [88] в состав а-литической протеазы был включен гистидин, обогащенный N. Изменение спектров N-ЯМР такой а-литической протеазы, меченной по каталитической триаде , в зависимости от pH ясно указало на существование водородной связи между NH-группой в 3-положении гистидина (N61) и соседней спрятанной карбоксильной группой аспарагиновой кислоты. [c.224]

Давать названия многим вновь описанным специфическим ферментам стало весьма затруднительно. Первоначально их называли в зависимости или от источника их получения, или по методу их выделения. По мере увеличения количества известных ферментов их стали называть более упорядоченно, добавляя окончание аза к корню наименования субстрата. Субстрат фермента — это соединение или же тип вещества, на которое действует фермент. Например, сахараза катализирует процесс гидролиза сахарозы, липаза — фермент, который гидролизует липиды, уреаза — фермент, расщепляющий мочевину. Эта система использована и при выборе названий для таких ферментов, как протеазы, оксидазы [c.331]

Протеаза из сухих семян гороха была получена в очищенном виде [70] оказалось, что по своей удельной активности она близка к трипсину, имеет оптимум pH 8,0 (с казеином в качестве субстрата) и не нуждается для активации в сульфгидрильных группах. Роль этой протеазы, однако, неизвестна. В семенах гороха содержится также протеаза с оптимумом pH, варьирующим от 6 до 7, в зависимости от используемого субстрата. Активность этой протеазы максимальна в развивающихся семенах [24]. В семядолях земляного ореха содержится протеаза с оптимумом pH 8,0, по специфичности сходная с трипсином. Активность этой протеазы несколько возрастает при прорастании [40]. [c.480]

УФ-чувствительность, наруше- АТР-зависимая протеаза, связывающая- Одна активность может контролироваться [c.439]

На этапе активации фактора X происходит соединение внешнего и внутреннего путей и образуется общий конечный путь свертывания крови (рис. 55.10). Фактор X представляет собой зимоген сериновой протеазы с мол. массой 55000 и содержит остатки Gla. Как и в протромбине, остатки Gla фактора X обеспечивают Са-+-зависимое связывание с кислыми фосфолипидами мембран тромбоцитов. Для превращения фактора X в его активную форму (XJ необходимо расщепление связи аргинин-изолейцин с помощью другой сериновой протеазы. Известны две сериновые протеазы, расщепляющие связь Arg— Пе в молекуле фактора X. [c.327]

Многие из вновь синтезированных белков, предназначенных для внутренней мембраны, матрикса и межмембранного пространства, имеют на своем N-конце лидерный пептид, который во время транспортировки отщепляется специфической протеазой, находящейся в матриксе. Для переноса белков в эти три митохондриальных компартмента необходима энергия электрохимического протонного градиента, создаваемого на внутренней мембране. Механизм переноса белков для наружной мембраны иной в этом случае не требуется ни затрат энергии, ни протеолитического расщепления более длинного белка-предшественника. Эти и другие наблюдения позволяют думать, что все четыре группы митохондриальных белков транспортируются в органеллу с помощью механизма, схематично представленного на рис. 9-69 и 9-70. Предполагается, что все белки, кроме тех, которые предназначены для наружной мембраны, включаются во внутреннюю мембрану в результате процесса, требующего затраты энергии и происходящего в местах контакта наружной и внутренней мембран. По-видимому, после этого первоначального включения белка в мембрану он подвергается протеолитическому расщеплению, которое приводит к изменению его конформации в зависимости от того, как изменится конформация, белок либо закрепляется в мембране, либо выталкивается в матрикс или в межмембранное пространство (рис. 9-70). [c.65]

Д. Неправильно. Убикитин-это небольшой белок, который присоединяется к белку-мишени, маркируя его тем самым для после- дующей деградации под действием особой протеазы, зависимой от АТР. [c.363]

Др. тип регуляции активности ключевых ферментов-их хим. модификация (напр., обратимое ковалентное фосфорилирование, гликозилирование). Нек-рые ферменты активны в модифицированном, а ряд ферментов - в немодифици-рованном состоянии. Хим. модификация и превращение модифицированного фермента в исходную форму катализируются разными ферментами, чаще всего аллостерич. природы, к-рые, т. обр., выступают в роли регуляторов активности ферментов. Так, катализирующая фосфорилирование белков, в т. ч. ферментов, цАМФ-зависимая протеинкиназа-тетрамерный белок, состоящий из двух типов субъединиц (полипептидов). Фермент активен лишь после связывания двух молекул циклич. аденозинмонофосфата (цАМФ) с двумя регуляторными субъединицами в результате такого связывания фермент диссоциирует на две каталитически активные субъединицы и димер, с к-рым связаны две молекулы цАМФ. Т. обр., изменение активности ферментов путем их хим. модификации дополняет аллостерич. регуляцию и составляет часть каскадного механизма регуляции. Хим. модификацию ферментов осуществляют также специфич. протеазы, катализирующие ограниченный протеолиз и тем самым инактивирующие ферменты (напр., разрушая апоформы ферментов) или, наоборот, превращающие неактивные проферменты (напр., проферменты пищеварит. протеаз-пепсина и трипсина) в каталитически активные формы. [c.219]

В таблице 3 приведена рН-зависимость кинетических параметров гидролиза л-нитрофенилацетата, катализируемого бактериальной протеазой ЕзоШ [3]. Определить значение рК ионогенной группы активного центра свободной формы фермента. [c.227]

Биологические функции имидазола самым тесным образом связаны с основностью его молекулы. Именно по этой причине остаток гистидина в белке содержит в физиологической области pH около 7,4 одновременно заметные количества свободного основания и протонированного имидазолия. Это означает, что он может функционировать как акцептор и как донор протонов в зависимости от потребностей своего ближайшего окружения. Такую же роль играют остатки гистидина и в различных ферментах, например в рибонуклеазе, альдолазе, некоторых протеазах. Другим важным результатом проявления основных свойств имидазола является буферное действие гистидина в системе гемогло-бин-оксигемоглобин [7]. Отмечалось [7], что имидазольная группа в гистидиновой единице полипептидов — самое сильное основание, какое присутствует в каких-либо количествах при физиологических значениях pH, а катион имидазолия является самой сильной из кислот, обнаруженных в заметной концентрации (колебания р/(а зависят от местного окружения). [c.439]

Многие ГТ.ф. прочно ассоциированы с клеточньаш мембранами и поэтому действуют только на определенные белки (т. наз. компартментализация). К шш относят, напр., сигнальные протеазы, участвующие в транспорте белков во внеклеточное пространство. В зависимости от локализации фермента протеолиз происходит при разл. pH. Так, П. ф. желудка (напр., пепсин, гастриксин) функционируют при pH [c.113]

В гиппокампе и других органах имеется по крайней мере два типа глутаматных рецепторов, причем один из них зависит от концентрации Na+, а другой — нет. Число рецепторов гиппокампа увеличивается при стимуляции. Этот эффект носит долговременный характер, коррелирует с постсинаптической по-тенциацией (гл. И) и, что интересно, связан, по-видимому, с Са +-зависимым протеолизом периферического мембранного белка (названного фодрином), осуществляемым тиоловой протеазой кальпаином I [25]. [c.296]

Дефектные и чужеродные белки деградируют в клетке при участии АТФ-зависимой системы протеолиза. У эукариот (все организмы, кроме ба> терий и синезеленых водорослей) эта система включает низкомол. белок убикитин, образующий с белками-субстратами конъюгат, и протеазы, расщепляющие этот конъюгат. [c.113]

Механизм действия сульфгидрильных протеаз — папаина, фпцина и бромелаина — принципиально аналогичен изображенному на рис. 6.3. В роли акцептора ацильной группы здесь выступает сульфгидрильная группа входящего в состав активного центра остатка цистеина. Об этом свидетельствуют данные, полученные при изучении действия химических ингибиторов и рН-зависимости каталитической реакции (группа с р/Са 8,4 появляется на стадии ацилирования, а не на стадии деацилирования), а также тот факт, что методами спектроскопии в ацил-ферменте была обнаружена сложная тиоэфирная связь. При замене воды на оксид дейтерия катализируемые папаином реакции проявляют значительный кинетический изотопный эффект следовательно, лимитирующей стадией является перенос протона. О химической природе группы, выступающей в роли общего основного катализатора, мы уже говорили выше. Поскольку сложные тиоэфиры легче взаимодействуют с аминами, чем с кислородными сложными эфирами, папаин является лучшим катализатором реакции транспептидации по сравнению с химотрип-сином. [c.146]

Расщепление химерных белков В зависимости от предназначения белкового продукта клонированного гена он может использоваться как таковой или в составе химерного белка, причем последний вариант встречается нечасто. Например, из-за присутствия фрагмента хозяйского белка большинство химерных белков оказываются непригодными для применения в клинике, а сам продукт клонированного гена-мишени может оказаться неактивным. Кроме того, для химерных белков предусмотрена более сложная процедура тестирования, которую они должны пройти, чтобы получить разрешение к применению у соответствующих организаций. Все это заставляет искать способы удаления лишних аминокислотных последовательностей из молекулы получаемого продукта. Один из таких способов основан на присоединении белка, кодируемого геном-мишенью, к белку клетки-хозяина, содержащему короткий пептид, распознаваемый специфической протеазой небактериального происхождения. Такое присоединение тоже программируется на уровне ДНК. Олигонуклеотидные линкеры, несущие сайты для протеаз, можно пришить к клонированному гену до того, как такая конструкция будет введена в экспрессирующую векторную систему слияния. Линкером может служить, например, олигонуктеотид, кодирующий пептид Пе-01и-01у-Аг . После синтеза и очистки химерного белка для отделения белкового продукта, кодируемого клонированным геном, можно использовать фактор свертывания крови Х , который является специфической протеиназой, разрывающей пептидные связи исключительно на С-конце последовательности Ile-Glu-Gly-Arg (рис. 6.6). Более того, поскольку такой пептид [c.112]

Мы уже упоминали, что в аксоплазме имеются такие филамент-ные структуры как нейрофиламенты. Диаметр этих структур 10 НхМ, они располагаются между нейротрубочками (диаметр 24 нм) и филаментами актина (диаметр 6 нм). Поэтому нейрофиламенты составляют класс промежуточных филаментов [6], которые были найдены в различных клетках и к которым принадлежат кератиновые филаменты эпителиальных клеток, глиальные филаменты и десминовые филаменты клеток мышц. Их функциональная роль заключается в создании своеобразного клеточного скелета. В электронном микроскопе видны разветвления волокон. Нейрофиламенты из нерва кролика состоят нз трех белков с 68 000, 150 000 и 200 000. До сих пор только два белка нейрофиламентов с Л1 200 ООО и 60 000 были выделены из гигантского аксона кальмара [7]. Они чувствительны к действию Са +-зависимой протеазы и поэтому их нелегко получить в интактном состоянии. Все белки нейрофнламейтов фосфорилируются сАМР-зависимой киназой. [c.312]

Выбор метода вьщеления и очистки ферментов микроорганизмов различны и определяются в зависимости от локализации (в клетках фермент или s вульгу-рапьиой среде) и целями применения. Неочищенные ферментные препараты получают путем сущки и размельчения мицелия фиба вместе с твердым субстратом (отрубями, жомом и др,) или высушиванием продуцента вместе с культуральной жидкостью на распылительной сущилке. Высушенные препараты размалываются в порошок и в таком виде используются. Удельная ферментная активность таких препаратов невелика, но они дешевле и достаточно устойчивы при хранении. Таким способом получают амилазы, протеазы, целлюлазы для сельского хозяйства и некоторых отраслей промышленности. [c.57]

Тонопласты - крупные прозрачные вакуоли, которые окружены типичными мембранами, встречаются у грибов и растений. Вакуоли содержат различные гидролитические ферменты 2 типа протеаз, эс-теразу, РНКазу, аминопептидазу и липоамиддегидрогеназу (НАДН-зависимую). Высказываются предположения, что эти ферменты не связаны с тонопластом. Вероятно, их роль транспортная, хотя есть много вопросов. [c.43]

Влияние pH. Как показал Сёренсен (1909 г.) активность ферментов зависит в значительной степени от концентрации водородных ионов в растворе (или, точнее, от термодинамической активности водородных ионов, т.е. от pH раствора). Кривые, изображающие зависимость скорости реакции от pH, обнаруживают, как правило, выраженный максимум при определенном pH, тогда как при значениях pH, отличающихся на 1 от этого максимума, скорость реакции значительно меньше (см. примеры карбогидраз и протеаз). В силу этой особенности [c.794]

При выборе энзимов для СМС необходимо учитывать их термостабильность в моющем растворе. Поскольку протеазы, как и другие белковые структуры, денатурируются при сильном нагреве, температура стирки с применением энзимсодер-жащих СМС должна быть не выше 60° С. Следует, однако, иметь в виду, что термостабильность энзимов в зависимости от ряда факторов неодинакова. Ранее полученные нами данные [c.91]

Так, например, трипсин расщепляет быстрее метиловый эфир бензоиларгинина, чем амид бензоиларгинина [24], а карбоксипептидаза расщепляет с одинаковой скоростью как гиппурил-фенилмолочную кислоту, так и пептид гиппурилфенилаланин [25], Эти опыты сильно поколебали основы классификации ферментов. Поскольку мы не можем классифицировать ферменты иначе, как по их действию на определенные субстраты, мы подразделяем их в зависимости от субстратов на протеазы, эсте-разы, карбогидразы и т. д. Если, однако, трипсин и карбоксипептидаза способны расщеплять эфирные связи и если это расщепление протекает с большей скоростью, чем расщепление соответствующих пептидов, то следует отвергнуть представление о том, что специфичность ферментов характеризуется только типом расщепляемых связей. [c.279]

Метод количественного онределения фермента в капле крови позволил А. Н. Баху ежечасно учитывать активность каталазы и протеазы в течение суток. При этом оказалось, что в крови животных и человека эта активность подвергается весьма существенным изменениям в зависимости от времени взятия проб для анализа. Этот установленный А. Н. Бахом суточный ритм ферментативной активности имеет выдающееся общебиологи-ческое значение. Впоследствии он был подтвержден и развит в работах Института биохимии Академии Наук СССР на многочисленных растительных объектах. [c.666]

Цитозоль, составляющий обычно около половины объема эукариотической клетки, преоставляет собой все внутриклеточное пространство за вычетом органелл. В цитозоле протекает большинство реакций промежуточного обмена и синтеза белка. Если вновь синтезированные белки не имеют сигналов для транспорта в органеллы, они остаются в цитозоле Некоторые из этих белков разрушаются вскоре после синтеза. Единственная дестабилизирующая аминокислота на их N-конце способствует присоединению множества молекул убикитина к специфическим остаткам лизина в белке-мишени. Затем убикитин- и АТР-зависимая протеаза разрушает такой белок. Дефектные копии большинства цитозольных белков разрушаются при помощи того же убикитин-зависимого механизма [c.23]

Во многих клетках, в том числе и в клетках некоторых высших растений, содержатся мелкие, сферические, окруженные мембраной тельца, в которых находятся те или иные ферменты или группы ферментов. Число этих телец, их распределение и свойственный им набор ферментов весьма сильно варьируют в зависимости от условий, в которых находится клетка. В лизо-сомах обычно содержатся ферменты, катализирующие литичес-кие процессы (процессы распада) протеазы разрушают белки, нуклеазы катализируют распад ДНК и РНК, а липазы осуществляют расщепление жиров. До тех пор пока лизосомы остаются интактными, ферменты эти не могут войти в контакт с клеточным содержимым однако любое повреждение клетки, способное вызвать разрыв лизосом, освобождает ферменты. В результате этого в клетке начинаются некоторые биохимические реакции, иногда вредные для нее, а иногда и полезные, поскольку они могут, например, послужить средством борьбы с патогенами, такими, как вирусы, бактерии или грибы. [c.65]

Тиреоглобулин представляет собой форму хранения Тз и Т4 в коллоиде и при нормальной функции щитовидной железы обеспечивает поступление этих гормонов в кровь на протяжении нескольких недель. После стимуляции щитовидной железы тиреотропином (или с АМР) уже за несколько минут заметно увеличивается число микроворсинок на апикальной мембране. В ходе зависимого от микротрубочек процесса происходит захват тиреоглобулина, а последующий пиноцитоз обеспечивает его перенос обратно в фолликулярную клетку. Фагосомы сливаются с лизосомами с образованием фаголизосом, в которых различные кислые протеазы и пептидазы гидролизуют тиреоглобулин на аминокислоты, включая иодтиронины. Т4 и Т3 высвобождаются в кровь из базальной части клетки, вероятно, путем облегченной диффузии. Отношение Т4/Т3 в крови ниже, чем в тиреоглобулине, откуда следует, что в щитовидной железе должно иметь место избирательное деиодирование Т4. Ежедневная секреция гормонального иода щитовидной железой составляет 50 мкг. С учетом среднего захвата иодида (25—30% потребленного иодида) дневная потребность в нем колеблется от 150 до 200 мкг. [c.187]

Описанный метод усиления ОСАГ принципиально отличается от используемых обработка нейраминидазой, протеазами, использование перекрестно-реагирующих АГ. Все эти методы основаны на эксплуатации уже существующих ОСАГ, которые не являются, как уже подчеркивалось выше, обязательными для опухолевой клетки. Изложенная картина опирается на физическое различие в организации плазматической мембраны, не зависимое от способа перерождения ОСАГ создаются в самом процессе обработки клетки ППАВ и не требуется их предсуществования. [c.157]

Смотреть страницы где упоминается термин Протеазы, АТР-зависимые: [c.224] [c.227] [c.181] [c.279] [c.294] [c.600] [c.114] [c.225] [c.273] [c.114] [c.225] [c.340] [c.740] [c.261] [c.439] [c.202] [c.193] [c.700] [c.741] [c.441] [c.21] [c.22] [c.22] [c.164] [c.287]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология