Вытесняющий электрофорез

Бумажный электрофорез — самый простой и, возможно, наиболее широко применяемый из электрофоретических методов. Он годится для разделения целого ряда заряженных веществ, однако в настоящее время его в ряде случаев вытеснил электрофорез на ацетате целлюлозы и в гелях, обладающий более высоким разрешением. При использовании всех этих носителей наблюдается значительная диффузия малых молекул наилучших результатов удается достичь при работе с высоким напряжением (разд. 4.4.1). [c.121]

Электрофорез [79]. Для разделения можно использовать различие в скоростях движения ионов в электрическом поле. Следует различать явление простого электрофореза и электрофореза на носителе. Явление свободного электрофореза известно давно, но в последние 20 лет этот метод вытесняется методами электрофореза, проводимого на агаровом геле, крахмале, стекляН [c.386]

Больщое число исследований посвящено адсорбции полимерных молекул на твердых поверхностях дисперсных поглотителей. Это связано в первую очередь с запросами практики строительство очистных сооружений использование адсорбции полимеров для пластифицирования суспензий оксидов и силикатов в производстве композиционных материалов повышение агрегативной устойчивости дисперсных частиц посредством защитного действия (см. раздел Х1П.6), что особенно важно для неводных сред (раздел ХП.З, электрофорез) и других целей. Исследования показали, что адсорбция ВМС в основном описывается уравнением Ленгмюра (У1.25) и законом действия масс поскольку одна молекула полимера вытесняет с поверхности п молекул растворителя, уравнение приобретает форму [c.347]

Электрофоретическое нанесение лакокрасочных материалов, растворимых в воде, представляет собой усовершенствованный способ погружения, недостатки которого устранены действием электростатического поля. Электрофорез основан на ориентированном перемещении коллоидных частиц в диэлектрической среде. При наложении электрического тока возникают два процесса. Первый — это электролиз, характеризующийся перемещением ионов, образовавшихся при диссоциации электролита. Второй — собственно электрофорез, т. е. движение коллоидных частиц под действием электрического поля в среде с высокой диэлектрической постоянной. Частицы в соответствии со своей полярностью движутся к одному из электродов. Отрицательно заряженные частицы движутся к аноду, т. е. к изделию. На аноде или в непосредственной близости от него происходит потеря электрического заряда и коагуляция частиц. Одновременно с электрофорезом происходит и электроосмос, т. е. процесс, при котором под действием разности потенциалов из лакокрасочного материала вытесняется диспергирующий агент, например вода, и слой загустевает. Технологическим достоинством этого способа является возможность обеспечения высокой степени автоматизации, при которой потери лакокрасочного материала не превышают 5%. Достигается равномерная толщина слоя, которую можно регулировать в пределах 8—45 мкм. Слой не имеет пор и видимых дефектов. Коррозионная стойкость его примерно в 2 раза выше, чем у лакокрасочных покрытий, полученных способом погружения. Линия, в которой использована такая технология, -в основном состоит из оборудования для предварительной подготовки поверхности, оборудования для непосредственно электрофоретического нанесения, включая соответствующую промывку, и оборудования для предварительной и окончательной сушки лакокрасочного покрытия при температуре 150—220° С в течение 5—30 мин. Способ нашел применение в автомобильной промышленности, на предприятиях по производству мебели, металлических конструкций для строительства и в других областях. [c.87]

Электрофорез в пористой среде можно вести как в горизонтальном, так и в вертикальном направлении. В первом случае часто говорят об электрофорезе в блоке , а во втором случае — в колонке . Нам кажется более оправданной классификация, при которой различие проводится в зависимости от способа извлечения зон если после опыта зоны вытесняются новыми порциями растворителя вдоль направления движения, прибор называется колонкой . Блоком же следует называть прибор, в котором предусмотрено механическое разделение пористого носителя на слои, каждый из которых промывается отдельно. [c.80]

Анализ гелей после извлечения их из трубок. Извлеченные из трубок гели можно сканировать, не подвергая их никакой дальнейшей обработке или после окрашивания. Окрашенные гели можно также разрезать на сегменты и проанализировать материал, полученный путем элюирования. Кроме того, гели можно солюбилизировать, например для определения в них радиоактивности. Гели извлекают из трубок и окрашивают сразу же после электрофореза во избежание диффузии полос. Извлечение гелей связано с трудностями, и для того, чтобы успешно провести эту процедуру, не повредив поверхности гелей, необходим определенный опыт. Один из возможных способов заключается в том, что в пространство между стенкой трубки и гелем медленно вводят вращательным движением иглу шприца длиной около 8 см, выдавливая из шприца воду или 50%-ный глицерин. Иглу вынимают после того, как гель начинает свободно перемещаться в трубке или когда его можно вытеснить под давлением с помощью медицинской капельницы с грушей, заполненной водой. Это следует делать над лотком с водой или в самом лотке. [c.268]

При электрофорезе в первом направлении для улучшения растворимости белков нередко вводят неионный детергент, например 1%-ный раствор Тритона Х-100. Можно вести электрофорез в агарозе и в присутствии ДДС-Na (также только в интересах растворимости, ведь разделение белков по размерам в геле агарозы производить не целесообразно). ДДС-Na при перекрестном иммуноэлектрофорезе под действием поля может переходить в слой агарозы, смешанной с антисывороткой. Этого следует избегать, так как уже упоминалось, что ДДС-Na мешает образованию иммунного комплекса антиген — антитело. В этом случае гель первого направления предварительно вымачивают в буфере, содержащем избыток Тритона Х-100, а иногда его вводят и в состав геля агарозы с антисывороткой. Тритон Х-100 вытесняет ДДС-Na из комплекса с белком й образует с ним смешанные мицеллы, не препятствующие иммунопреципитации. [c.149]

Электрофорез в полиакриламидном геле проводят или в колонках с гелем, или на пластинках геля (рис. 9.6 и 9.7). В последнее время колонки быстро вытесняются пластинками геля, использование которых позволяет одновременно на одной пластинке анализировать большое число образцов. [c.230]

Золь железа, вытекая из пипетки, постепенно вытесняет надстилающую жидкость в боковых коленах, образуя резкую границу между ЗО- Рис. 49. Прибор для демонст-лем и раствором соляной рации электрофореза кислоты. Как только грани- -общий вид, б - приспособле- [c.179]

Эмульсии первого рода (при ионных эмульгаторах) обычно разрушают при помощи электролитов или введением эмульгатора, способствующего образованию эмульсии другого типа. Разрушить эмульсию с неионными стабилизаторами труднее. В этом случае приходится подбирать такое ПАВ, которое вытеснило бы эмульгатор из адсорбционного слоя, но само не могло бы стабилизировать данную эмульсию. В качестве такого вещества применяют изоамиловый спирт и др. Эмульсии могут быть разрушены и при В1нещних воздействиях — нагреве, центрифугировании, пропускании электрического тока (электрофорез), прибавлении большого количества электролита (высаливание) и т. д. С. С. Воюцким разработан действенный метод непрерывного разрущения [c.257]

Промышленные анализаторы не только полезны для технологического контроля в реальном масштабе времени, но также используются в научньпс организациях для уменьшения времени разработки и оптимизации новых процессов. Возможно, эта область получит широкое развитие в будущем, поскольку промышленные анализаторы позволяют значительно увеличить продуктивность научных исследований. В производственных областях промышленный анализ будет играть все возрастающую роль, поскольку в перспективе предполагается замена всех off-Ипе-анализов на более прогрессивные варианты. Однако современная технология промышленных анализаторов пока не позволяет окончательно решить задачи подобного типа. Методы высокоскоростного разделения, такие как капиллярный электрофорез, могут вытеснить жидкостную хроматографию. [c.670]

Для определения концентрации гормона смешивают меченный, например ИОДОМ-125, гормон с антителами к данному гормону. Образуется комплекс — гормон—антитело. При добавлении исследуемого экстракта немеченный гормон, находящийся в исследуемом растворе, конкурирует с меченым в реакции связывания с антителом, вытесняя последний из комплекса. Далее освобождеиный гормон отделяют от связанного электрофорезом, хроматографией или осаждением и количественно определяют его, измеряя радиоактивность. Из полученных данных можно рассчитать количество исследуемого немеченого гормона, так как радиоактивность свободного гормона зависит от того, насколько много меченого гормона было вытеснено из комплекса антиген — антитело. Более подробно с этим вопросом можно ознакомиться по литературе [582, 591]. [c.240]

В целом следует отметить, что техника препаративной энзимологии быстро совершенствуется и сложные операции, затруднительные в настоящее время, становятся все более доступными. Уже в ближайшем будущем тонкие и совершенные способы, такие как адсорбция, ионообменная хроматография, гель-фильтрация или электрофорез, применяемые сейчас недостаточно, широко войдут в практику. Возможно, что они вытеснят частично или полностью многие из привычных, простых способов, но это приведет к ускоренному развитию и совершенствованию производства ферментов. [c.157]

ТОГО, с ПОМОЩЬЮ ТСХ можно контролировать результаты разделения, проведенного другими способами, например перегонкой, колоночной хроматографией, рекристаллизацией и т. п. Можно также использовать ТСХ для предварительной оценки структуры хроматографируемого соединения. Область применения ТСХ, которая с самого начала ее развития была достаточно широкой [38, 76], еще более расширилась благодаря универсальности метода (непрерывное и двумерное элюирование, электрофорез и гель-фильтрация в тонком слое). Благодаря своим преимуществам метод ТСХ часто вытесняет, а во многих случаях уже вытеснил бумажную хроматографию, в которой также используется плоскостное расположение хроматографической системы. Одпако в последнее время количество опубликованных статей, посвященных ТСХ, несколько уменьшилось, несмотря на то что разработаны новые модификации метода, увеличивающие его разрешающую способность и чувствительность [22а, 54а]. [c.86]

С того времени как Дуррум [18] предложил электрофорез белков на бумаге, описано большое число примеров разделения сывороточных белков, ферментов и других растворимых белков. В настоящее время бумага в качестве электрофоретического носителя для разделения белков вытеснена, например ацетатом целлюлозы. Тем не менее бумага все еще используется, поскольку это дешевый, удобный в обращении материал, который легко хранить. Недостатком бумаги является ее сродство к белкам, например к сывороточному альбумину и гликопротеинам, сорбция которых в процессе разделения приводит к образованию удлиненных пятен. [c.341]

Несмотря на то что полиакриламид стал применяться в качестве носителя для электрофореза лишь после 1960 г., этот материал в настоящее время наиболее широко используется при разделении смесей макромолекул кислого или основного характера. Сейчас полиакриламидный гель как носитель практически вытеснил бумагу и крахмальный гель, поскольку в случае белков и нуклеиновых кислот он дает очень хорошее разрешение. Гель получают полимеризацией акриламида в присутствии метиленбисакриламида или других соединений, служащих сшивающими агентами. В работе Сарджента [3] подробно описаны способ получения гелей, процедура нанесения пробы и условия разделения. [c.138]

Ультразвук, центрифугирование, электрофорез и т. д. приводят к разрыву пленок и к коалесценции капель. При замораживании по мере превращения воды в лед капли масла сдавливаются и межфазная пленка рвется. Нагревание приводит к увеличению числа капель и интенсивности соударений их, способствует уходу эмульгатора с их поверхности (десорбция) или растворению в дисперсной фазе. ПАВ с относительно короткой углеводородной цепочкой проникают в межфазную пленку, вытесняя высокомолекулярные эмульгаторы, тогда в результате происходящих соударений капельки коалес-цируют. [c.32]

Возможности газовой хроматографии могут быть значительно расширены в результате введения в практику исследований сверхкритической (флюидной) газовой хроматографии [72] и других методов, обеспечивающих селективность подвижной фазы. Многообещающим методом разделения веществ с очень большой молекулярной массой является фрационирование в поле потока. Этот процесс родствен хроматографии, в которой для селективного удерживания веществ используется внешнее поле [73]. Естественно, нельзя исключить, что хроматография и(или) электрофорез будут в конце концов вытеснены ка-ким-то новым методом разделения, однако это вряд ли произойдет в обозримом будущем. [c.33]

В настоящее время большинство описанных выше приемов вытеснены методами хроматографии и электрофореза. Применяли адсорбцию на смеси древесного угля с целитом с последующим элюированием водным этанолом [24, 251, однако полученные результаты не всегда воспроизводимы [26]. Другие авторы удаляли аминокислоты и низшие пептиды с помощью дауэкса-50 X 8 или зеокарба 225, трехмерная структура которых почти полностью исключает возможность сорбции гликопептидов [6, 25]. Хорошее отделение гликопептидов от аминокислот и других пептидов было достигнуто путем хроматографии продуктов протеолитического расщепления орозомукоида на колонке с бумажным порошком со гмесью к-пропанол — этанол — вода — уксусная кислота (5 15 5 0,75) в качестве растворителя [27]. Во многих случаях высокую степень очистки дает электрофорез на колонках типа описанных Поратом [28], в которых в качестве удерживающей фазы используется целлюлоза, подвергнутая этанолизу. Ли и Монтгомери [19] подвергали такую целлюлозу обработке борогидридом натрия, что приводило к более инертному материалу с низким электроэндоосмотическим фактором. [c.242]

Эффективным методом, позволяющим изучать изменчивость белков в природных популяциях и определять частоты генотипов и аллелей в популяциях, служит электрофорез в гелях (см. дополнение 22.1). Маса-тоши Ней предложил удобный способ оценки генетической дифференциации популяций по данным электрофореза (дополнение 26.1). При этом используются две величины 1) генетическое сходство I, оценивающее долю структурных генов, которые идентичны в обеих популяциях, и 2) генетическое расстояние (или дистанция) )-оценка среднего числа замен аллелей в каждом локусе, произошедших за время раздельной эволюции двух популяций. Замены аллелей имеют место тогда, когда в результате мутаций аллели в отдельных локусах замещаются другими аллелями или когда сразу замещается целый набор аллелей. Этот метод учитывает то обстоятельство, что замены аллелей могут быть неполными в какой-то части популяции новый аллель может вытеснить старый , который тем не менее с большей или меньшей частотой продолжает присутствовать в популяции. [c.214]

Электрофорез в капиллярах, заполненных градиентным гелем. Для приготовления градиентных гелей в капиллярах было предложено [1196] погружать их в раствор с предварительно сформированным градиентом концентрации амриламида (5—25%). Скорость погружения капилляра регулировали, используя специальный держатель, связанный через эксцентрик с электромотором. Чтобы избавиться от капиллярного эффекта и получить требуемый градиент, капилляры сначала снизу наполняли буфером для геля, содержавшим 0,2% тритона Х-100, и лишь затем постепенно погружали в градиентный раствор. Предварительно их устанавливали вертикально в прикрепленную к стальному стержню полиэтиленовую трубку с нижиим отверстием, затянутым нейлоновой сеткой. В конце заполнения в систему добавляли 50%-ную сахарозу, которая вытесняла раствор акрилам ида в капилляры и препятствовала его поли-.меризации на нейлоновой сетке [915]. [c.110]

Годоон [444] исггользовал для ИЭФ в градиенте плотности трубки с припаянными боковыми отводами (рис. 55). Такие J-образные трубки помещают в стандартный прибор для диск-электрофореза. Верхнюю часть трубки, содержащую градиент плотности, вставляют, как обычно, в верхний электродный сосуд, а боковой отросток, заполненный этилендиамином и 50%-ным раствором сахарозы, погружают в нижний электродный сосуд. После завершения ИЭФ в колонку снизу накачивают насооом раствор с высокой плотностью, вследствие чего весь градиент плотности поднимается вверх и вытесняется сначала в анализатор (фирма IS O, США), а затем, в коллектор фракций. Описанное устройство позволяет разделять 0,1—1 мг белков в градиенте объемом 10 мл. Помимо простоты конструкции еще одно важное преимущество данного прибора состоит в том, что он дает возможность исследовать одновременно несколько образцов при идентичных условиях. [c.135]

Гель-электрофорез нуклеиновых кислот [34]. Если в 60-х годах разделение нуклеиновых кислот по молекулярным массам вели в основном путем ультрацентрифугирования в сахарозном градиенте, то в 70-х годах этот метод вытесняется методом электрофореза в геле. Впервые он был широко применен болгарским исследователем Р. Цаневым и сотр., и затем быстро завоевал общее признание. Оказалось, что в геле ДНК и РНК движутся тем быстрее, чем ниже их молекулярная масса. Пройденное расстояние обратно пропорционально логарифму молекулярной массы. Особенно важно, что разрешающая способность метода благодаря низкой диффузии гораздо выше, чем у ультрацентрифугирования. Для низкомолекулярных нуклеиновых кислот электрофорез ведется в полиакриламидном геле, для высокомолекулярных — в агарозном. Чем ниже концентрация геля, тем более высокомолекулярные нуклеиновые кислоты могут в нем разделяться. Подбирая условия, можно разделить как короткие олигонуклеотиды, отличающиеся по длине всего на один нуклеотид, так и молекулы ДНК размером до нескольких миллионов пар нуклеотидов. [c.27]

В этом случае общий подход остается тем же, что и раньше в одном направлении белки фракционируют по размерам методом электрофореза в присутствии ДДС-Na, а в другом —по значениям р1 методом ИЭФ, но последовательность применения этих двух методов меняется. Уже упоминалось, что ДДС-Na, используемый для растворения белков, можно вытеснить из комплекса с ними избытком неионного детергента NP-40, однако речь шла о сравнительно небольших добавках ДДС-Na. Можно ли добиться достаточно полного для целей последующего ИЭФ удаления ДДС-Na с белка, прошедшего жесткую обработку высокой концентрацией ДДС-Na и -маркаптоэтанола при 100 , как это предусмотрено в соответствующих методах электрофореза Оказывается, можно. [c.58]

Сканирование радиоактивных пятен торцевыми счетчиками на пластинках после ТСХ и бумаге после хроматографии или электрофореза одно время практиковалось широко, а затем былО вытеснено намного более чувствительными методами счета жидких сцинтилляторах. Однако фирме Berthold (ФРГ) удалось в такой степени усовершенствовать сканирующую аппаратуру и чувствительность торцевых газопроточных счетчиков, чтО метод вновь стал конкурентоспособным по чувствительности, а по своей экономичности и быстроте он имеет явное преимущества перед использованием жидкостных сцинтилляционных счетчиков для этой цели. Чувствительность метода возросла в такой мере,, что его можно успешно использовать и для сканирования высушенных пластин после электрофореза в ПААГ. [c.233]

Мы не случайно в качестве примеров двумерного электрофореза рассмотрели только случаи фракционирования щелочных белков. Для кислых белков все другие варианты двумерного фракционирования вытеснила уже упоминавшаяся система О Фарелла. Щелочные белки до последнего времени плохо разделялись в этой системе, однако недавно была предложена ее модификация, позволяющая успешно вести разделение и щелочных белков. [c.82]

Сейчас методы фракционирования низкомолекулярных биологических объектов электрофорезом на твердых носителях настолько энергично и успешно вытесняет жидкостная хроматография под высоким давлением (ЖХВД), что рассматривать их уже не имеет смысла. Впрочем, изредка электрофорез на твердом носителе еше используют и для фракционирования белков. Так, сравнительно недавно было описано очень хорошее разделение девяти модификаций казеина молока электрофорезом на полосках ацетатцеллюлозы. Эти модификации различались уровнем фосфорилирования белка, и разделение шло по величине электрического заряда [West, Towers, 1976]. [c.120]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология