Молекулы маркеры. Маркеры

Основные кинетические закономерности протекания ферментативных реакций. В иммуноферментных методах анализа в качестве метки антигенов и антител могут использоваться как ферменты, так и их субстраты. Если меткой служит молекула фермента, то выбранный способ детекции должен обеспечивать регистрацию сигнала, пропорционально зависимого от концентрации (количества) фермента, а в случае применения в качестве метки субстрата — концентрации (количества) субстрата. В первом случае фермент выполняет роль маркера (он ковалентно связан с молекулой антигена или антитела), во втором — детектора (свободный фермент). Оптимизация условий каталитической реакции (выбор pH, оптимальных концентраций фермента и субстратов) осуществляется в соответствии с используемой модификацией ИФА. [c.61]

Поверхностные молекулы Обозначения маркеров Функции [c.150]

При разделении нуклеиновых кислот используют те же методы, что и при фракционировании белков, однако имеются ограничения, обусловленные большим диапазоном величин молекулярной массы (2-10 —Ы0 ° Да), отклонениями от глобулярной формы, различиями в четвертичной структуре (двухнитевые, однонитевые, кольцевые), значительным отрицательным зарядом в нейтральной области pH. Поэтому методы гель-фильтрации и ионообменной хроматографии не получили широкого распространения при фракционировании нуклеиновых кислот и значительно уступают ультрацентрифугированию и электрофоретическому разделению в геле агарозы, полиакриламидном геле или их смеси. Поскольку величина отрицательного заряда нуклеиновых кислот и продуктов их расщепления мало зависит от pH, а отношение заряда к молекулярной массе сохраняется практически неизменным, разделение нуклеиновых кислот при электрофорезе определяется не их зарядом, а размером молекул. При наличии маркеров с известной молекулярной массой возможно определение молекулярной массы препаратов нуклеиновых кислот и их фрагментов. [c.171]

Электрофорез в присутствии додецилсульфата натрия (ДДС-N3). В этой системе суммарный заряд белка маскируется добавлением ДДС-Ыа, который окутывает белки облаком отрицательных зарядов. Предполагается, что все комплексы ДДС-белков имеют заряды одинаковой плотности, процесс разделения происходит только по одному параметру — размеру молекулы. Эта система позволяет в то же время определять молекулярную массу изучаемых белков с помощью маркеров — набора белков с заранее известными значениями молекулярной массы. [c.40]

Чтобы определить относительную молекулярную массу разделенных фрагментов, одновременно проводят электрофорез маркерных макромолекул с известными молекулярными массами. Набор маркеров должен охватывать весь диапазон молекулярных масс в данной системе. Образец маркерных молекул вносят в отдельную лунку, расположенную вблизи одного из краев пластинки (или в две лунки у двух разных краев). Логарифм относительной молекулярной массы маркера линейно связан с его электрофоретической подвижностью Rf — величиной, равной отношению расстояний, пройденных маркерной молекулой и красителем (фронтом растворителя). Построив график зависимости логарифма относительных молекулярных масс маркеров от Кр можно найти относительную молекулярную массу каждого компонента образца. Относительная мол. масса белков измеряется в Дальтонах, двухцепочечных нуклеиновых кислот — в числе пар нуклеотидов, одноцепочечных — в числе нуклеотидов. [c.54]

Следующий этап электрофореза проводится в буферном растворе, имеющем pH 1,9 или 2,0. Поэтому полоску бумаги с нейтральными аминокислотами нужно пришить на анодном краю листа так, чтобы она служила стартовой зоной. При pH 1,9—2,0 диссоциация всех карбоксильных групп аминокислотных молекул подавлена, и в связи с этим все нейтральные компоненты смеси ведут себя как катионы. Пришив полоску бумаги, лист переворачивают и лезвием бритвы осторожно вырезают тот его участок, который расположен под пришитой полоской. Это необходимо делать осторожно, чтобы не повредить швы и саму полоску. Затем фильтровальную бумагу смачивают буферным раствором, имеющим pH 1,9 или 2,0, как описано выше. В качестве маркера рядом с пришитой полоской наносят -ДНФ-лизин. Электрофорез проводят до тех пор, пока этот маркер не мигрирует на 8—10 см по направлению к катоду. [c.102]

Особое значение имеет специфическая функция углеводов — участие в образовании гибридных (комплексных) молекул, а именно гликопротеинов и гликолипидов. Так, гликопротеины служат маркерами в процессах узнавания молекулами и клетками друг друга, определяют антигенную специфичность, обусловливают различия групп крови, выполняют рецепторную, каталитическую и другие функции. [c.223]

Молекула вектора должна отвечать определенным требованиям быть небольшой, содержать уникальные участки расщепления рестрикционными эндонуклеазами, иметь маркеры для оптимальной селекции рекомбинантных клеток. В качестве векторов для включения чужеродной ДНК в клетки Е. соИ используются плазмиды (термин предложен Дж. Ледербергом) и бактериофаги. И те и другие являются репликонами. [c.430]

Многочисленные попытки установить количественную корреляцию между оптическим вращением и структурой органических соединений в конце концов позволили Маркеру (1936) составить последовательность перенумерованных заместителей при асимметрическом атоме углерода и сформулировать для соединений СЙК К"В " правило если атом водорода находится в вершине тетраэдра, удаленной от наблюдателя, а три других заместителя в плоскости, обращенной к наблюдателю то моделям, в которых рост порядковых номеров групп В, К, К" идет по часовой стрелке, отвечает левое вращение, и наоборот. Позднее (1959) Брюстер для распределения заместителей в такой ряд использовал данные по их поляризуемости на первом месте стоят заместители с большей поляризуемостью. Таким путем Брюстеру удалось в хорошем соответствии с опытными данными рассчитать угол вращения для многих органических соединений алифатических и алициклических углеводородов и их производных, терпенов и других молекул с двойной связью в цикле. [c.205]

Формальдегид сильно препятствует образованию водородных связей в денатурированной ДНК [395—397[, стабилизируя довольно вытянутую конформацию ее молекул это приводит к уменьшению устойчивости по отношению к ферментативному гидролизу и намного увеличивает эффективность образования комплексов антиген — антитело [396]. На микрофотографиях ДНК, обработанной формальдегидом, видны длинные тонкие нити с диаметром, значительно меньшим, чем у нативной ДНК [397]. Очень удачные микрофотографии были получены для денатурированной ДНК, обработанной диазониевой солью 8-амино-1,3,6-нафталин-трисульфокислоты (связывающейся, по-видимому, с Сз гуаниновых остатков) с последующим прокрашиванием уранилацетатом в разбавленном растворе формальдегида. Маркер отчетливо виден на микрофотографии, и вполне вероятно, что этот метод может быть использован для электронномикроскопического определения последовательности оснований в нуклеиновых кислотах [397]. [c.608]

Это проверялось в следующем эксперименте. К ДНК, содержащей трансформирующие молекулы с маркером 8ш>, добавлялась ДНК из другого штамма пневмококков, перезистептного к стрептомицину. В пределах линейной части кривой добавка второй неактивной ДНК никак не сказалась, т. е. различные молекулы ДНК сорбировались независимо друг от друга. Однако высота плато понижается при наличии неактивной ДНК, что свидетельствует о конкуренции активных молекул ДНК и разбавляющих инертных молекул за места на клетках. Эта закономерность напоминает изотерму Лэнгмюра для обычной адсорбции в случае, когда число мест на поверхности ограничено. Количество молекул [c.345]

Рис. 8-73, Один из возможных механизмов, позволяющих направлять окаймленные транспортные пузырьки к определенной внутриклеточной мембране. В этой гипотетической модели молекулы груза - это лизосомные гидролазы. а приемщик груза -это белок-репептор мапнозо-6-фосфата Изображенные здесь молекулы маркера стыковки и приемщика пока еще не охарактеризованы. Однако недавно открытые клатрип-связывающие белки, которые также связывают цитоплазматические хвосты некоторых мембранных белков, удовлетворяют данному

Ферментные метки. Каким образом ферменты могут выступать в качестве маркеров иммунохимических реакций, т. е. каким образом можно детектировать ферменты и в каких минимальных количествах Попадая в раствор, молекула фермента за одну секунду может превратить определенное количество субстрата в продукт. Допустим, что фермент за секунду может образовать тысячу молекул продукта, тогда за 17 мин это количество составит миллион. Если минимальное количество продукта, которое можно обнаружить фотометрическим методом, составляет 10 молекул/мл, то это означает, что для получения такого количества продукта необходимо 10 молекул/мл фермента, т. е. 10 моль/л. Чем выше чувствительность метода, тем меньшее количество фермента может быть обнаружено. Так, например, используя хемилюминесцентный или флуоресцентный метод детекции продукта, можно определять до 10 молекул фермента в 1 мл. Фотометрические или флуоресцентные методы могут быть использованы не во всех случаях например, если измерение проводят в очень мутной среде, применяются другие методы определения ферментативной активности электрохимические, микрокалориметрические и т. д. [c.108]

Известно, что компетентные клетки способны включать-большое количество донорной ДНК, причем одна реципиентная клетка может включать несколько разных молекул донорной ДНК в один геномный сайт. Этот феномен позволяет выделять компетентные субпопуляции из общей массы реципиентных клеток и маркировать геном млекопитающих. Если донорная ДНК смешана с плазмидной, кодирующей селективный для клеток млекопитающих маркер, селекция по плазмидному гену после трансфекции позволяет выделить популяцию трансфицированных клеток. Такое обогащение облегчает дальнейшую очистку реципиентных клеток. Этот прием оказался успешным при клонировании генов, кодирующих клеточные поверхностные антигены. В данном случае для обогащения использовали антитела, а для разделения субпопуляций клеток флуоресцентный сортер (FA S) [46]. [c.28]

I В- и Т-лимфоциты экспрессируют на своей поверхности антигенсвязывающие рецепторы и другие молекулы (маркеры), необходимые для осуществления разнообразных функций. [c.18]

На клетках мыши не удалось пока идентифицировать ряд СО-молекул, эквивалентных маркерам человека. (МФР - рецептор для маннозил-фукозильных остатков.) [c.35]

Часто тот или иной аллерген (антиген, ставший причиной аллергической реакции) служит стимулом дегрануляции тучных клеток или базофилов. Для этого он должен перекрестно сшить соседние молекулы IgE, связанные с высокоаффинными рецепторами для IgE (F eRI) на плазматической мембране тучной клетки или базофила. В результате дегрануляции происходит мгновенное высвобождение всего содержимого гранул. Сначала гранулы сливаются между собой внутри цитоплазмы, затем их содержимое выбрасывается из клетки рис. 2.41). Секретируемые в результате дегрануляции медиаторы, например гистамин, вызывают патологические проявления аллергии, но, с другой стороны, играют положительную роль в антипаразитарном иммунитете, усиливая воспалительную реакцию. Функциональные маркеры фанулоцитов и тучных клеток приведены на рис. 2.42. [c.41]

В тимусе происходит положительная и отрицательная селекция развивающихся Т-клеток Положительная селекция Т-клетки распознают антигенные пептиды только представленными в контексте собственных молекул МНС на поверхности АПК (см. гл. 7 и 9). В действительности Т-клетки осуществляют двойное распознавание - и антигенных пептидов, и полиморфной части молекул МНС. (Маркер С04, присутствующий на поверхности Т-клеток одной из субпопуляций, распознает неполиморфную часть молекул класса II.) Положительная селекция (называемая также обучением в тимусе ) заключается в том, что дальнейшей дифференцировке подвергаются только те клетки, ТкР которых обладают невысокой аффинностью к собственным молекулам МНС. По имеющимся данным, положительную селекцию осуществляют эпителиальные клетки тимуса, выступающие в роли АПК рис. 12.8). Т-клетки, рецепторы которых обладают очень высокой или очень низкой аффинностью к собственным молекулам МНС, подвергаются в корковой зоне тимуса апоптозу и погибают. Апоптоз — это запрограммированное самоубийство клетки, осуществляемое активированными эндогенными нуклеазами путем расщепления ДНК на фрагменты рис. 12.9). [c.224]

Наибольшее распространение получили методы введения ферментной метки, основанные на образовании ковалентной связи между молекулами антитела и фермента. Наибольшее практическое применение нашел метод получения иммунопероксидазных конъюгатов окислением углеводного компонента фермента перйодатом натрия. В случае использования щелочной фосфатазы в качестве фермента-маркера применяют глутаровый альдегид, взаимодействующий с е-аминогруп-пами белковых молекул. [c.317]

В тканях человека и других животных, а также в зеленых растениях и грибах значительная часть железа находится в форме ферритина, красновато-коричневого водорастворимого белка . Ферритин представляет собой резервную форму Fe(lII) в растворимом и нетоксичном состоянии, легко пригодном для использования. Ферритин — несколько необычный белок. Содержание железа в ферритине составляет 17—23%, причем оно находится в виде расположенной в центре плотной массы гидратированной гидроокиси железа (III), заполняющей пространство диаметром 7 нм. Эта масса окружена белковой оболочкой из 24 субъединиц, распол( женных в соответствии с кубической симметрией, во многом аналогично тому, как это показано на рис. 8-17. Внешний диаметр частицы составляет 12 нм. Молекулярный вес апоферритина равен 445 ООО, а каждая субъединица имеет молекулярный вес 18 500. Полностью заполненная (до 23% Ре) молекула ферритина содержит свыше 2000 атомов железа, упакованных почти как в кристаллической решетке. Сердцевина молекулы легко различима в электронном микроскопе, н в микроскопии ферритин часто используют как своеобразный маркер. Другая резервная форма железа, гемосидерин, по-видимому, состоит из молекул ферритина вместе с добавоч- [c.126]

На рис. 183 представлены результаты эксперимента, проведенного в 1971 г. [4] в камере К8 к половине пластинки был обеспечен доступ парам ацетона (правая часть рисунка, а) до начала элюирования левая половина пластинки от такого доступа была изолирована. Элюировгши ацетоном, в котором был растворен жирорастворимый красный краситель, для которого в ацетоне Кг = 1.00 (т.е. вещество движется по пластинке со скоростью, характерной для молекул растворителя, и является идеальным маркером фронта). На левой стороне рисунка краситель поднялся до фронта (при условиях, соответствующих элюированию в сэндвич-камере) справа, при условиях, соответствующих эт ированию в обычной камере, бесцветная жидкость двигалась впереди окрашенного фронта (предполагается, что такой жидкостью бьш поглощенный из газовой фазы ацетон). Положением окрашенного фронта указан уровень, занятый фронтом поднимающегося из залитой части камеры растворителя. Уровень этого второго фронта понизился до Кг 0.6. Ясно, что истинные значения Кг должны отсчитываться по такому второму фронту. Краситель с Кг = 1 является удачным (не радиоактивным) маркером, способствующим обнаружению действительного фронта. [c.116]

Однако стабильность белков может не только повыщаться. Так, включение некоторых аминокислотных последовательностей во внутреннюю часть белковой молекулы делает ее более чувствительной к протеолитическому расщеплению. Такие последовательности обогащены остатками пролина (Р), глутаминовой кислоты (Е), се-рина (S) и треонина (Т), отсюда и их название -PEST-последовательности. Они часто бывают фланкированы кластерами из положительно заряженных аминокислот и, возможно, служат маркерами для протеаз. Стабильность белков, содержащих такие последовательности, можно было бы повысить, внося изменения в соответствующие гены. При этом, однако, необходимо позаботиться о том, чтобы не произошло нару-щений функции белка-мишени. [c.122]

D1 Кортикальный маркер тимоцитов, исчезающий на последней стадии созревания Т-клетки. Его находят также на клетках Лангерганса . Молекула D 1 состоит из трех полипептидных цепей с ММ 49 кДа ( Dla), 45 кДа ( DIb) и 43 кДа (СД1с) и каждая из них закодирована соответствующим геном на первой хромосоме. Названные цепи ассоциированы с p-2-микроглобулином и, следовательно, антиген аналогичен классическим антигенам гистосовместимости, хотя и закодированным на другой хромосоме. [c.568]

Данный метод основан на предположении, что разделение белков в полиакриламидном геле зависит не только от заряда, но в значительной степени и от размера молекул. Установлено соотношение между электрофоретической подвижностью и молекулярным весом различных белков. Сравнение подвижности исследуемой полипептидной цепи с подвижностями белков-маркеров дает молекулярный вес этой цепи. Кроме того, электрофоретическая подвижность зависит от количества метилен-бисакриламида, взятого для приготовления геля. Например, подвижность фумаразы (Л150 000) изменяется от 0,28 до 0,63 [c.419]

В какой-то степени с этой идеей Маркера перекликается более поздняя расчетная схема Брустера [82, который для последовательного распределения заместителей в ряд использовал данные по их поляризуемости на первом месте стоят заместители с большей поляризуемостью. Правда, для расчета молекул, в которых асимметрический атом является частью цепи (циклической или нециклической), способной участвовать в различных конформациях, Брустер вводит дополнительные поправки. С помощью своей таким образом усложненной схемы ему удается в хорошем соответствии с опытом рассчитать вращение многих органических соединений алифатических и алициклических углеводородов и их производных, терпенов и других молекул с этиленовой связью в цикле. [c.88]

Определены оптимальные условия ренатурации ДНК после ее тепловой денатурации I308]. Концентрация ионов патрия должна быть выше 0,4 М, а температура на 25 ниже температуры плавления. Так как переход спираль — клубок воспроизводим (в отношении физических свойств и тепловой инактивации биологических маркеров), при охлаждении образуется та же вторичная структура, а сколько-нибудь заметного образования неспецифических водородных связей не происходит. Полнота ренатурации увеличивается с увеличением молекулярного веса ДНК и, как и следовало ожидать, заметно зависит от гомогенности препарата. Степень реконструкции вторичной структуры убывает в последовательности для ДНК из бактериофага > мелких бактерий > бактерий > животных тканей, и этот порядок отражает изменение числа различных молекул ДНК и различие нуклеотидного состава, которыми характеризуется каждый из источников ДНК 1308]. Как было показано фракционированием ренатурированной трансформируюшей ДНК при иомош,и ультрацентрифугирования в градиенте плотности, ренатурация не относится к процессам типа все или ничего>л а образование двойной спирали вновь после разрушения может происходить в различной степени [309]. В основном это есть результат случайного расщепления ковалентных связей в полин клеотид-ной цепи при нагревании. При стандартных условиях тепловой денатурации и последующего охлаждения можно рассчитать, что в каждой цепи ДНК с молекулярным весом 10 может происходить в среднем по три разрыва. Поэтому в процессе ренатурации будут участвовать комплементарные цепи с длиной, различающейся на i/i—1/2, что понижает ренату рацию на 20—30% [310]. Действительно, на микрофотографиях часто наблюдаются клубки на одном или на обоих концах ренатурированных цепей, которые соответствуют выступающим концам однотяжных цепей. [c.605]

Вторая больщая популяция лимфоцитов у птиц первоначально заселяет фабрициеву сумку, или бурсу, где проходит инструктаж , в связи с чем они получили название В-лимфоцитов, или В-клеток. У млекопитающих и человека аналог бурсы пока не найден, поэтому В-лимфоциты нередко просто называют тимуснезависи-мыми или лимфоцитами костномозгового происхождения. Эта популяция лимфоцитов расселяется в мозговом и герминальном слоях лимфатических узлов, красной пульпе селезенки, пейеровых бляшках кишечника и представлена более мелкими и короткоживущими клетками с большим содержанием ДНК и плотно расположенными на поверхности иммуноглобулиновыми рецепторами, относящимися к классам 1дМ, 1 0, 1 Е и, возможно, к IgA. Эти рецепторы неоднозначны. Одни из них распознают детерминанты антигенов, т. е. специфичную группу атомов, являющуюся маркером всей молекулы, другие предназначены для соединения с комплементом, а третьи — для удерживания Рс-фрагментов (невариабельный, неспецифический участок антитела) 1 Т. Следует иметь в виду, что в ряде работ иммуноглобулиновые рецепторы называют антителами, что химически вполне оправдано, хотя и может несколько путать читателя. Основная функция В-лимфоцитов заключается в продукции антител. [c.9]

Вторым типом эксперимента является трансдукция, когда фрагменты генетического вещества и свойственные им маркеры переносятся из одной клетки в другую бактериофагом вместе с его собственной ДНК. Характерной особенностью трансдукции, так же как и трансформации, является перенос из клетки в клетку именно ДНК, а не нуклеопротеида. Мы знаем, что в хромосоме ДНК не существует в изолированном виде молекулы ДНК застроены в нуклеопротеидную структуру. То же можно утверждать и о вирусах, в частности фагах. Однако по опытам Херши, выполненным методом радиоактивной метки, при заражении клетки фагом последний как бы впрыскивает в клетку свою ДНК, белок же при этом не переходит (с точностью до долей процента). В последнее время удался также опыт заражения клеток выделенной и очищенной вирусной ДНК (подобно тому, как раньше удался опыт заражения растений вирусной РНК). [c.286]

Смотреть страницы где упоминается термин Молекулы маркеры. Маркеры: [c.352] [c.204] [c.269] [c.165] [c.73] [c.75] [c.24] [c.25] [c.72] [c.71] [c.299] [c.518] [c.118] [c.506] [c.70] [c.139] [c.79] [c.110] [c.201] [c.487] [c.427]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология