Константа диссоциации комплекса концентрации субстрата

ТОГО, если данный комплекс важен при катализе, то константы диссоциации, измеренные при изучении связывания, должны приближаться к константам, определенным при изучении начальной скорости реакции в целом, хотя различие в используемых концентрациях белка может вызвать в некоторых случаях трудности при интерпретации. Необходимые константы могут быть получены из изучения начальной скорости для иона металла Ка) и для лиганда, если он является ингибитором Кг). Однако константы диссоциации комплексов фермент — субстрат и фермент — продукт не так легко получить, пока не сделаны допущения относительно скоростьопределяющей стадии реакции и (или) порядка присоединения субстрата (или отщепления продукта). Следовательно, утверждение о кинетической важности таких комплексов, наиболее интересных с точки зрения изучения механизма действия металлоферментов, связано с большими сложностями. [c.450]

Здесь Со и с, — концентрации переносимого вещества снаружи и внутри соответственно s и Ср — концентрации субстрата и продукта метаболической реакции, создающей движущую силу для транспорта К — константа равновесия реакции Rs пропорционально k 2 — константе скорости перехода 1 2, общего для циклов а и 6, и константе диссоциации комплекса переносчик— субстрат и является функцией других констант скорости цикла Ь Rf — аналогичное выражение для цикла а. Если Со с i и p/ s == К, ТО o/ i — 1) 1п (Со/С/) = X/RT и (1 — [c.229]

Следовательно, и в случае, когда концентрация А и В существенно различаются, степень диссоциации определяется соотношением между константой диссоциации и концентрацией, но в данном случае концентрацией компонента, присутствующего в избытке. Например, полнота превращения фермента в комплекс с субстратом, чем в значительной мере определяется скорость ферментативной реакции, определяется концентрацией субстрата. Концентрация фермента может быть очень низкой. [c.230]

К-рые по экспериментальным данным позволяют определять V и К . Еще более сложный вид имеют ур-ния кинетикн двухсубстратных ферментативных реакций, в особенности обратимых реакций, в к-рых фермент-субстратные комплексы претерпевают многостадийные иревращения. Однако в значительном числе случаев, исследуя завпсимость начальной скорости реакции от концентрации субстрата, оказывается возможным вычислить основные кинетич. константы — максимальную скорость реакции (К) и константу Михаэлиса (К ). В случав простых механизмов (см. выше), если известна молярная концентрация фермента, по величине V может быть рассчитана константа скоростп распада фермент-субстратного комплекса, поскольку /с-)-2=7/[Е] ). Нетрудно видеть, что эта величина представляет собой молекулярную активность фермента. Величина константы Михаэлиса даже для простейших ферментативных реакцпй более сложна для интерпретации, поскольку определяется соотношением трех констант скорости. В случае, когда к+ <к х, К хк Цк 1 = К , следовательно, представляет константу диссоциации комплекса Е8 на Е и 8, к-рая в ферментативной кинетике наз. константой субстрата и обозначается К . Константа субстрата служит мерой сродства фермента к субстрату (сродство обратно пропорционально величине А д) и, следовательно, является важной мерой каталнтич. эффекта Ф. Кон- [c.208]

Это выражение при концентрации субстрата, существенно превышающей концентрацию фермента, по характеру зависимости скорости от концентрации субстрата 5 идентично (6.2), однако вместо константы диссоциации комплекса стоит несколько более сложная величина [c.209]

Поэтому для определения константы диссоциации комплекса необходимо знать величины к и кх- Определить их можно учитывая, что концентрация субстрата во много раз больше, чем концентрация фермента. Концентрации фермента составляют обычно 10 —10 ° моля. При этих условиях в процессе течения реакции концентрация промежуточного комплекса фермент — субстрат будет практически постоянной, т. е. будет соблюдаться условие стационарности [c.254]

Подход к измерению константы продукта может быть двояким. Продукт реакции вводится заранее в систему фермент — субстрат, после чего измеряется зависимость начальной стационарной скорости реакции в ряду концентраций субстрата и продукта. Этот способ фактически ничем не отличается от способа исследования обычных обратимых ингибиторов. Он позволяет выяснить характер ингибирующего действия продукта реакции, т. е. установить, является ли он конкурентным, неконкурентным или смешанным, и измерить константу диссоциации комплекса фермент -г- продукт. [c.99]

При анализе действия обратимых ингибиторов мы рассмотрели взаимосвязь между величиной /во и рациональной мерой реакционноспособности этих ингибиторов — константой диссоциации комплекса фермент — ингибитор. При этом было установлено, что величина /бо лишь в случае чисто неконкурентных ингибиторов совпадает с Кг- Уже для конкурентных обратимых ингибиторов при переходе от Ьо к Кг необходим учет величин константы Михаэлиса и концентрации субстрата, поскольку в системе устанавливается равновесие между Е, 3 и I (стр. 87). Что касается необратимых ингибиторов, то в этом случае использование /во для оценки их реакционноспособности без учета времени реакции не имеет никаких оснований. [c.113]

Решая уравнение (И) графо-аналитическим методом но зависимости обратной начальной скорости реакции от обратных концентраций. субстратов при фиксированных концентрациях другого субстрата, нашли константу скорости реакции и константы диссоциации комплексов (табл. 1). Значения констант скоростей при разных температурах [c.21]

Конкурентное ингибирование проще всего можно распознать экспериментальным путем, определив влияние концентрации ингибитора на зависимость начальной скорости реакции от концентрации Субстрата. Для выяснения вопроса о том, по какому типу-конкурентному или неконкурентному-происходит обратимое ингибирование фермента (дополнение 9-3), весьма удобно преобразовать уравнение Михаэлиса-Ментен в линейную форму. Чаще всего для этой цели используют метод двойных обратных величин. Из графиков, построенных в двойных обратных координатах, можно определить также значение константы диссоциации комплекса фермент-ингибитор. Для реакции диссоциации [c.246]

Для анализа закономерностей в такого рода системах целесообразно рассматривать группу механизмов, включающую различные последовательности равновесных и кинетических стадий. В табл. 8 приведен ряд кинетических схем, их схематическое обозначение и уравнение,. которое описывает зависимость скорости от концентрации обоих субстратов. Индексом Ь обозначена бимолекулярная необратимая стадия взаимодействия с субстратом т — мономолекулярная ея — быстрая обратимая стадия комплексообразования. Индексами К, К2 обозначены константы диссоциации комплексов кг, к2 — константы скорости их мономолекулярного превращения — константы скорости бимолекулярных реакций с первым и вторым субстратами соответственно. Индексом 1/каф обозначена сумма обратных констант скоростей всех мономоле- [c.57]

Если константа диссоциации комплекса достаточно мала, можно определить число эквивалентов лиганда, которое вызывает максимальное изменение в спектре это максимальное изменение имеет место в том случае, когда заняты все центры связывания. Например, к раствору белка, концентрация которого по крайней мере в 10 раз больше константы диссоциации, добавляются возрастающие количества субстрата. Для установления стехиометрии строят график, представленный па рис. 6.8. [c.207]

Таким образом, видно, что константа Михаэлиса всегда будет больше константы диссоциации фермент-субстратного комплекса Л з. В случае если V будет равно Ч2У, то т=[5], иными словами, константа Михаэлиса будет равна той концентрации субстрата, при которой наблюдается скорость реакции, равная половине максимальной. [c.131]

Кт (называется константой Михаэлиса) — константа диссоциации в реакции образования комплекса фермент — субстрат. Как и все константы диссоциации, константа Михаэлиса имеет размерность концентрации и при V = величина [c.151]

Влияние соли на константу диссоциации фермент-субстратного комплекса, по крайней мере, в случае химотрипсина, можно объяснить так называемым высаливающим эффектом, т.е., влиянием на активность субстрата (7g) при постоянстве активностей фермента (7 ,) и фермент-субстратного комплекса (7j.g) [2416]. Это справедливо при относительно больших концентрациях соли. При переходе от низких ее концентраций к высоким (больше 0,5 М) происходит, по-видимому, изменение конформации фермента [2416,2417], что проявляется в параллельном с изменением активности изменении поглощения белка при 282 нм [2416]. [c.224]

Для проведения измерения готовят раствор субстрата и фермента (в качестве субстрата используют 1-диметиламиноиафта-линсульфонил-пептид в качестве фермента — пепсин) в 0,1 М формиатном буферном растворе (pH 3,1). Концентрации субстрата (моль/л) 0,02-10-3 0,06-10- 0,Ы0- 0,15-10- 0 2-10-з. Концентрация фермента постоянна 7,14-10 моль/л. Измеряют флуоресценцию образовавшегося фермент-субстратного комплекса (А-воаб = 285 нм, >ифл = 500 нм) в каждом из растворов и строят график зависимости aji от l/[So]. По тангенсу угла наклона определяют константу диссоциации комплекса /(,. [c.86]

Простые ферментативные реакции. Превращение субстрата 5 под действием фермента Е протекает через предварительное образование фермент-субстратного комплекса Е5. В ферментативном катализе приняты следующие обозначения и — скорость ферментативной реакции V — значение V в условиях насыщения фермента субстратом А т — константа Михаэлиса, равная концентрации субстрата, при которой V = У/2 Ка — субстратная константа, константа равновесия (диссоциации) реакции Е + 8 8 А , й — константы скорости прямой и обратной реакции л-й стадии ферментативной реакции 1Е], 181, 1Р1, [II, [А1 — концентрации Армента, субстрата, продукта, ингибитора и активатора соответственно. [c.242]

В качестве аффинных лигандов можно использовать любые соединения, прочно, специфично и обратимо связывающиеся с выделяемым веществом. Химическое строение аффинных лигандов может быть самым различным. Поскольку в настоящее время метод аффинной хроматографии применяется главным образом для выделения ферментов и их ингибиторов [89J, мы рассмотрим примеры, взятые из этой области. Как уже упоминалось, при выделении фермента аффинными лигандам1И могут служить его ингибитор, аналогичный субстрату, а также эффектор, кофактор и в отдельных случаях даже субстрат. Это справедливо и для фермента, требующего длл реакции два субстрата, но способного достаточно сильно связываться только с одним из них. Субстрат также можно использовать для адсорбции фермента в таких условиях, когда фермент связывается, но сам не способен катализировать реакцию (например, в отсутствие ионов металлов, необходимых для реакции), а также когда константа Михаэлиса зависит от pH или температуры. Аффинный адсорбент для выделения белков обычно трудно получить из аффинного лиганда, если константа диссоциации его комплекса с белком превышает (0,5—1,0)-Ю [16]. Однако Стире и сотр. [84] показали, что очень эффективный адсорбент для р-галактозидазы можно получить даже из такого относительно слабого ингибитора, как н-аминофенил-р-о-тиогалактопирано-зид (/i , 5-10 ). Этого удается достигнуть, повышая концентрацию нерастворимого аффинного лиганда и увеличивая расстояние между аффинным лигандом и матрицей носителя, что приводит к максимальной доступности аффинного лиганда, для белка в растворе. [c.9]

Мономолекулярный аналог циклоамилоз — а-метилглюко-зид — значительно слабее влияет на скорости реакций. Уравнения типа (12.26) встречаются во многих ферментативных процессах. Константу скорости ккзт и константу диссоциации комплекса С-5 К, которая равна отношению можно определить графически методом Лайнуивера — Берка (уравнение (12.27)] при условии, что [С]о>[5]о, где (С]о и [5]о —начальные концентрации циклоамилозы и субстрата соответственно. Зависимость 1/( набл— нек) ОТ 1/[С]о [c.321]

Видно, что взаимодействие гормон — рецептор намного эффективнее. Физиологические ответы, вызванные образованием комплекса гормон — рецептор, наблюдаются при концентрациях гормона, соизмеримых с константой диссоциации комплекса, т. е. при концентрациях —10 ° М. Ферментативные реакции in vivo и in vitro идут с заметными скоростями при концентрациях субстратов (метаболитов), соизмеримых с Кт, т. е. при концентрациях на 5—6 порядков выше. [c.209]

Однако при проведении таких экспериментов в трактовке получаемых результатов следует соблюдать известную осторожность. Необходимо исключить температурный сдвиг pH буфера, влияние температуры на величины констант диссоциации комплексов субстрата с ионами-активаторами (например, Мд-АТФ) или комплексона с ионом, концентрацию которого он должен стабилизировать (оксалат Са или М -ЦДТА и т. д.), и, наконец, наличие критических температур для физико-химического состояния бислоя, его гидрофобный объем, легкость образования мицелл (например, в присутствии детергентов) и тем самым доступность субстрата или ионов-активаторов гидролитическим и эффектор-ным центрам в белково-липидных комплексах мембранных ферментов (Блюменфельд, 1977). [c.95]

Отметим такл<е, что одна из главных проблем состоит в связывании субстрата сорбционная полость недостаточно аполярна, открыта с обеих сторон и константы диссоциации циклодекстриновых комплексов больше, чем ферментсубстратных. Иммобилизация субстрата не всегда отвечает предъявляемым требованиям обычно необходима высокая концентрация циклодекстрина, а ко формация субстрата с наиболее низкой энергией может [c.304]

В работе [8] было показано, что окисление тестостерона в Д -андростен-3,17-дион под действием р-оксистероид-дегидрогена-зы при увеличении начальной концентрации субстрата проходит через максимум, достигая 76% теоретической максимальной скорости реакции, при [S]опт = 6-10- М. На основании полученных данных рассчитать значение константы диссоциации неактивного тройного комплекса ES2 (см. схему 6.1). [c.118]

Более сложные реакционные схемы с большим числом интермедиатов описываются более сложными уравнениями, сохраняющими, однако, ту же общую форму (4), где /Скат — константа стадии, определяющей скорость процесса, Т( = (/С2+ к-ъ)/к- — константа Ми-хаэлиса, мера сродства субстрата к ферменту. В простых случаях, когда связывание является быстрым предравновесным процессом (т. е. /С2 к-г), Км становится равной константе диссоциации фер-мент-субстратного комплекса. При высоких концентрациях субстрата, определяемых как [5] /(м, выражение (4) упрощается в [c.454]

Используя полное уравнение, можно определить Ка и Къ при низких концентрациях субстрата, в то время как при высоких его концентрациях можно определить К п и К ъ- Знание этих констант диссоциации позволяет проникнуть в природу групп в комплексе и свободном ферменте на основании этих данных можно определить, какие группы подвергаются влиянию комплексообразования, и поэтому получить некоторые сведения о группах, являющихся активными при образовании комплекса с субстратом. Лэйд-лер [62[ составил таблицу данных, показывающих влияние на величину К комплексообразования, протекающего по тем местам молекулы, которые подвергаются ионизации, и, кроме того, связывающих эти эффекты с изменениями скорости и константы Михаэлиса при изменении pH. Там, где такие сведения оказываются непол ными, иногда для вычисления Ка или Къ можно воспользоваться методом, предложенным Диксоном (381. Сведения о группах, участвующих в комплексообразовании, были получены для взаимного превращения ионов фумаровой и малеиновой кислот в присутствии фумаразы [63J, для гидролиза сахарозы в присутствии сахаразы [64[, для гидролиза ацетилхолина при наличии холинэстеразы и ацетилхолинэстеразы [65[ и для окисления 2-амино-4-оксиптеридина в присутствии ксантиноксидазы [38]. [c.135]

Л, у VI г С соответствующими акцепторными центрами фермента (обозначены треугольником, кружком и квадратом). Скорость ферментативной реакции будет определяться концентрацией такого комплекса (рис. 17, Л). Однако при некоторых условиях не исключена возможность образования комплексов с участием двух или даже трех молекул субстрата (рис. 17, Б, В, Г), но так, что каждая молекула субстрата образует лишь одну или две связи с ферментом. Соответственно состав таких неактивных комплексов будет отвечать брутто-формуламЕЗз (случаи Б и В) я Е5з (случай 7 . Соотношение концентраций активного к неактивных комплексов будет определяться при данной концентрации фермента в первую очередь концентрацией субстрата. Чем больше концентрация субстрата, тем более вероятно образование неактивных комплексов — ЕЗа и ЕЗз. Наконец образование неактивных комплексов будет зависеть от констант скорости образования последующих связей (например, у — О и 2 — о) реакционных центров молекул субстрата после образования первой связи (например, д — Л). Если эти константы скорости существенно больше, чем константа скорости образования связей у — О и 2 — о новой молекулой субстрата, то ингибирования избытком субстрата не произойдет. При обратном соотношении будет наблюдаться эффект субстратного торможения. Ввиду того, что образование комплекса Михаэлиса (за счет всех или части связей с субстратом) представляет собой обратимую реакцию с отчетливо выраженным равновесием, определяющей величиной является соответствующая константа равновесия или, как принято в ферментативной кинетике, обратная ей величина — константа диссоциации. [c.91]

Смотреть страницы где упоминается термин Константа диссоциации комплекса концентрации субстрата: [c.196] [c.86] [c.311] [c.208] [c.51] [c.5] [c.208] [c.21] [c.73] [c.64] [c.264] [c.147] [c.245] [c.159] [c.136] [c.262] [c.92] [c.95] [c.101] [c.22] [c.156] [c.477] [c.233]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология