Агар как носитель

Электрофорез проводят либо в свободной незакрепленной среде (в свободной жидкости) — фронтальный электрофорез, либо в закрепленной среде — зональный электрофорез — на крупнопористых носителях (фильтровальная бумага, целлюлоза, порошкообразная пластмасса, агар-агар, ацетилцеллюлоза, стеклянный порошок) или на мелкопористых носителях (силикагель, полиакриламидный гель, целлюлоза, оксид алюминия, крахмал и др.). [c.237]

Широкое распространение в настоящее время получил так называемый зональный электрофорез — электрофорез на твердом носителе (на бумажных полосах, агаре, крахмале, акриламиде), пропитанном буферным раствором с нужным значением pH. Положение белков на бумаге или геле определяют путем фиксации и последующего окрашивания их тем или иным красителем (обычно бромфеноловым синим, ами-довым черным или кумасси синим). Количество белка в каждой фракции можно ориентировочно определять по интенсивности окраски связанного красителя. Такое определение не дает строго количественного соотношения белковых фракций, так как количество красителя, связываемого различными белками, неодинаково. [c.89]

В качестве гелевых носителей могут быть использованы силикагель или агар. Последний имеет ряд преимуществ по сравнению с силикагелем. Так, силикагель применяют лишь для разделения иизкомолекулярных веществ, тогда как агар пригоден для разделения веществ с очень широким интервалом молекулярных весов (до нескольких миллионов). Силикагель применим лишь при работе в кислой и нейтраль- [c.536]

Электрофорез с носителем практикуется чаще. В этом случае ионы мигрируют по бумажному носителю или по гелю, такому, как агар, полимер или силикагель. Носитель насыщен раствором буферного электролита и его концы опущены в буферный раствор с электродами (рис.5.5-1,б). К фильтровальной бумаге, пропитанной раствором электролита, прикладывается постоянное напряжение в несколько киловольт или больше. [c.303]

Внутренний носитель представляет собой слой геля агара или крахмала подходящей консистенции толщиной 1—2 мм и имеет форму удлиненного прямоугольника. [c.118]

В качестве крупнопористых носителей применяют фильтровальную бумагу, крахмал, целлюлозу, порошкообразную пластмассу, агар-агар, ацетилцеллюлозу, стеклянный порошок. [c.146]

Электрофорез в тонком слое проводится в закрепленном толщиной 1—2 мм слое силикагеля, агара, агарозы, крахмала, полиакриламидного геля, сефадекса, целлюлозы, кизельгура, окиси алюминия, алебастра. Проводящую жидкость вводят в слой носителя нли ею опрыскивают слой после его формирования. Раствор исследуемого вещества вносят на поверхность слоя или внутрь отверстий, вырезанных в слое. Электрофоретический процесс можно проводить в устройствах, предназначенных для электрофореза на бумаге. [c.147]

АГАРОЗА ж. Полисахарид, нейтральный компонент агара используется как носитель для гель-хроматографии и гель-электрофореза биополимеров. [c.9]

Гели с иммобилизованной ДНК применяют в качестве неподвижной фазы, например при гибридизации в агаре [126], при выделении кодирующей нити ДНК [127]. ДНК, связанную с различными носителями, можно использовать для очистки ДНКаз [122—130] или других ферментов, участвующих в метаболизме и биосинтезе ДНК (полимераз, лигаз и т. п.). [c.82]

В качестве пористого носителя для зонного электрофореза используют различные вещества фильтровальную бумагу и картон, стеклянный порошок, кварцевый песок, крахмал, ацетилцеллюлозу, агар-агар и любой другой пористый материал, не проводящий электричество. Наибольшее распространение благодаря своей простоте получил зонный электрофорез на бумаге [7, 18—22]. [c.26]

Для выделения, очистки и проверки гомогенности отдельных классов липопротеидов плазмы используют также электрофорез на различных носителях (бумага, ацетат целлюлозы, агар-агар, акриламид и т. д.). Разделение липопротеидов плазмы на классы и очистка возможны и с помощью методов осаждения [298, р. 15]. Наиболее распространенный вариант их основан на способности липопротеидов образовывать нерастворимые комплексы с различными полимерами поликатионами (поли-винилпирролидон и др.), полианионами (сульфаты полисахаридов) и [c.369]

Электролит можно стабилизировать в вертикальной колонке путем создания градиента его плотности в направлении от верхнего конца колонки к нижнему, однако обычно неподвижность электролита обеспечивается в результате его абсорбции различными природными или синтетическими полимерами. В соответствии с природой носителя различают методы электрофореза на бумаге, мембранах из ацетилцеллюлозы, в гелях агара или крахмала, полиакриламидном геле и т. п. Электрофоретические методы можно также классифицировать по способу разделения или по типу применяемой аппаратуры (например, колоночный и тонкослойный электрофорез). [c.28]

Электрофорез используется для выделения и разделения ферментов на конечных стадиях очистки, а также для препаративных и аналитических целей. Для препаративного выделения и очистки ферментов проводят зонный электрофорез па бумаге и в блоках или на колонках с различными наполнителями (целлюлозным порошком, крахмалом и другими), а также электрофорез в гелях — агар-агаровом, крахмальном, полиакриламидном. Электрофорез в гелях отличается от электрофореза на порошкообразных или пористых носителях. Здесь сочетаются два метода разделения ферментов — электрофоретический и метод, основанный на гель-фильтрации. Фракционирование ферментов на основе различной электрофоретической подвижности оказывается одним из самых эффективных методов. [c.201]

Разрешающая способность электрофоретических методов исследования значительно повысилась благодаря использованию в качестве поддерживающих сред таких носителей, как гель сефадекса, крахмальцый, агар агаровын или полиакриламидный гель. [c.219]

Как уже упоминалось, ковалентная посадка НК на матрицу может оказаться непригодной для создания аффинного сорбента с индивидуальной специфичностью, поскольку многие основания полинуклеотидной цепи будут заблокированы химической связью с носителем. По этой причине широкой популярностью пользуются различные методы нековалентной фиксации НК на матрицах. Исторически они были разработаны значительно раньше, но до сих пор не утратили своего значения. Простейший из этих методов использовал протяженность и гибкость нитей высокомолекулярных денатурированных ДНК, которые просто заплавляли в 4%-ный агар при температуре выше 90° [Bendi h, Bolton, 1968]. Около половины внесенных в расплавленный агар молекул ДНК после его затвердевания оказываются столь надежно запутанными в сеть геля, что не выходят цз него да ке после длительной промывки. Агар затем нарезали ку- [c.391]

Для выделения ртути применяется метод осадочной хроматографии [234]. Известно, что на осадочной хроматограмме зоны расположены в порядке увеличения растворимости осадков. В качестве носителей применяют окись алюминия, целлюлозу, силикагель, гель из агара [231—234] в роли осадителей используют как неорганические соединения, так и органические, способные образовывать малорастворимые осадки с ртутью. Для проявления используют неорганические и органические соединения (комплексообразующие, внутрикомплексообразующие вещества, вещества-индикаторы). Применяют растворы КТ, тиомочевины, NaOH для разделения ионов Hg (I) и Hg (II) из азотнокислых солей, спиртовые растворы дифенилкарбазона, родизоната натрия и т. д. По величине зоны делаются выводы о количественном содержании Hg (I) или Hg (II) в смеси. [c.59]

Агароза Сефароза СМ-сефароза Поперечно сшитый полиса-1 харид на основе нейтрального компонента агара Сшивка -СН2-СН(0Н)СН2-0-СН2- образуется в результате взаимодействия с 2,3-дибромпро-панолом Карбоксиметильная -О-СНг -СОО- Для фракционирования очень крупных молекул, высокополимерных ДНК вплоть до вирусов Носитель для аффинной хроматографии Катионообменная хроматография [c.239]

В капиллярной О. х. носителем с осадителем заполняют капилляр, запаянный с одного конца другой конец погружают в исследуемый р-р. Твердой фазой в данном случае может служить и чистый осадитель, если р-римость его в применяемом р-рителе мала. В диффуз. О. х. в кач-ве твердой фазы использ. гель желатины или агар-агара, в к-рый заранее введен осадитель анализируемый р-р вносят в пробирку или чашку Петри с застывшим гелем разделение осуществляется благодаря диффузии. [c.417]

НА в структуру КПА-1 и БД в структуру КПА-П вводили посредством реакции азосочетания. Для исследования иммуногенно-сти КПА-1 и КПА П проводилась иммунизация кроликов водными растворами КПА-1 или КПА-П. Методом встречной иммунодиффузии в агаре было установлено [102], что полученные иммуносыворотки (соответственно, А и Б) не взаимодействуют с исходным полимером-носителем - терполимером ВП-КК-п-КАФ, но реагируют с соответствующим КПА, использованным в низкой концентрации (2.010 мол/л). [c.185]

При равновесном потенциале как следует из определения ( 6), через фазовую границу не идет внешний ток, й на ней, судя по внешнему балансу, не протекают никакие электрохимические реакции. Но на молекулярном уровне, как уже отмечалось в 6, через границу идет непрерывный обмен носителями зарядов (ионами или электронами). Обмену соответствуют некоторые плотности анодного и катодного тока. При равновесном потенциале они в точности равны между собой и полностью компенсируют друг друга, так что нет ни внешнего тока, ни видимого протекания реакции (см. 17, 24, 49, 51, рис. 45 и 46). При этом плотность обоих токов приобретает значение, которое назысвается плотностью тока обмена о. По определению, это положительная величина. Она характеризует скорость установления равновесного электродного потенциала и чувствительность его к различным нарушениям. Впервые величина о была использована Бауденом и Агаром , а незадолго перед тем упомянута в краткой заметке Батлером . Фрумкин, Эршлер и Долин ввели для неё удачное выражение ток обмена . Геришер и Феттер распространили ее использование с водородного на другие электроды, и с тех пор она стала в электрохимической кинетике одной из важнейших величин. [c.31]

Неспецифическая сорбция является осложняющим фактором в аффинной хроматографии. Это уже неоднократно подчеркивалось и детально рассматривается в разд. 10.3. Например, в агаре — одном из наиболее часто используемых носителей—как отмечают Порат и др. [55], два типа групп ответственны за сорбцию, а именно моносульфатные эфирные и карбонильные группы. [c.237]

Основной трудностью при изучении бактериальных аэрозолей является отсутствие идеального пробоотборника, с помощью которого. можно было бы точно измерить число бактерий в 1 см воздуха и распределение частиц-бацилло-носителей по размерам. Для определения концентрации живых бактерий в воздухе необходимо осадить их на питательную среду дать вырасти колониям и сосчитать их. Хотя многие микроорганизмы могут быть отобраны теми же методами что и частицы обычных аэрозолей (см. главу 7), в некоторых случаях следует серьезно позаботиться о том, чтобы процесс отбора проб не оказал вредного влияния на жизнеспособность микроорганизмов. Для спор вполне пригодна фильтрация, но большая часть вегетативных форм при фильтрации через сухой фильтр погибает. Для не очень чувствительных к внешним условиям микроорганизмов хорошие результаты получаются при использовании миллипоровых фильтров 22. Следует также указать на прямое осаждение бактерий на слой агара д жидкость, откуда затем отбирается определенная [c.353]

Более практичным и эф- Поп проницаеыые мембраны фективным оказался, однако, электрофорез с применением тех или иных опорных сред, так называемый зональный электрофорез, т. е. электрофорез в растворах, которыми пропитывается какой-либо твердый пористый или порошкообразный носитель — фильтровальная бумага, крахмал, целлюлоза, стеклянный порошок и др. Еще более эффективным, хотя и менее удобным для препаративных целей, оказалось электрофоретическое разделение в гелях — агар-агаровом, крахмальном, полиакриламидном. [c.31]

Твердый неорганический слой состоит из кислых соединений (акцепторов электронов) типа атапульгита, галлоизита, каолина, трикремнекислого магния или цеолита. Жидкий органический слой представляет собой раствор бесцветных триарилкарбинолов в гидрофобном растворителе (например, в хлорированном дифениле). При контакте с кислотами эти соединения переходят в окрашенную сопряженную форму. При надавливании крошечные капсулы из желатина или агар-агара раздавливаются и бесцветный карбинол превращается в краситель на поверхности твердого носителя, давая окрашенные отпечатки в точке соприкосновения [120, 135—137]. [c.158]

Фильтрование через гели. Разделение веществ по молекулярному весу было впервые обнаружено при фильтровании через слои набухших зерен крахмала и агар-агара белков. Оказалось, что низкомолекулярные соединения достаточно глубоко диффундируют в объем зерен геля и по этой причине труднее вымываются носителем. Высокомолекулярные соединения, чья диффундирующая способность ниже, остаются в токе носителя и быстрее выходят из колонки. В настоящее время в качестве гелеобразующих веществ широко применяют декстраны с поперечными связями, известные под фирменным названием сефадексы . [c.89]

Майерс и Смит [27] описали методику биоавтографического анализа на незакрепленных слоях эритромицина и других антибиотиков. После заверщения разделения хроматограммы сущат и покрывают увлажненной фильтровальной бумагой, положенной на чистую стеклянную пластинку. Затем хроматографическую пластинку переворачивают и края фильтровальной бумаги загибают назад, на носитель слоя. Удалив аружную стеклянную пластинку, прижимают бумагу, покрывающую слой, к зернистому слою агара (авторы приводят подробную методику приготовления такого слоя агара с использованием Strepto o us la tis) и выдерживают 2 ч при 37 °С. [c.536]

Фильтровальная бумага из-за ее пригодности для многих разделений и доступности остается наиболее популярной в качестве стабилизирующей среды, особенно для систем, в которых не требуется анализа большого количества компонентов. Если разрешающая сила является чрезвычайно важным фактором разделения смеси,то вместо бумаги используют полоски ацетилцеллюлозы, которая обладает большей проницаемостью для продвижения крупных молекул, например,протеинов. В качестве других пористых носителей буферного электролита были предложены картон, стеклянный порошок, кварцевый песок, ряд дающих лучшее разделение, чем бумага гелей (крахмал, агар-агар, акриламад, поливинилхлорид и др). Помимо этого для разделения небольших количеств смесей использовали тонкие пленки кизельгура, а также специальную асбестированную бумагу для электрохроматографии в расплавленных солях. Если объемы образца больше, чем те.которые могут быть нанесены на фильтровальную бумагу или тонкий слой другого носителя, можно применять колонки, заполненные тем или иным пористым материалом. Для препаративных разделений существуют различные мод икации установок непрерывного электрофореза,в которых используется ряд рассмотренных выше носителей. [c.163]

Наряду с ионообменной хроматографией для разделения белков широко применяют зонный электрофорез, основанный на различной подвижности заряженных белковых молекул в поле постоянного тока. Обычно деление происходит при прохождепии тока через буферный раствор, содержащий смесь белков, причем используется как электрофорез в растворе так и электрофорез на носителях. Для быстрого предварительного анализа белковой смеси удобен бумажный электрофорез В препаративных целях используют электрофорез в блоке В качестве носителя в этом случае можно применять крахмал, стеклянный и целлюлозный порошки, поливинилхлорид. Наибольшей разрешающей способностью для белков обладает электрофорез в геле По-видимому, здесь играет роль не только заряд частиц, но и их величина, т. е. гель действует и как опорная среда, и как молекулярное сито. Наряду с крахмальным используют агар-агаровый и полиакриламидный гели. [c.20]

Зонный электрофорез предполагает использование неподвижного носителя, по поверхности или через объем которого осуществляется миграция ионов. Носители могут применяться в виде полос (например, бумаги), колонок, дисков, тонких слоев и т. д. Для зонного электрофореза чаще всего используют фильтровальные бумаги (Ватман № 1 и № ЗММ), а также ацетат целлюлозы, гели агара, крахмала и полиакриламида 24, 25]. Электрофорез осуществляется под действием электрических полей низкого (<1000 В) и высокого (от 1000 до 10000 В) напряжения. При непрерывном электрофорезе (препаративный метод с использованием низкого напряжении) образец непрерывно подается на носитель (чаще всего бумага Ватман № ЗММ или Шлейхер-Шюлль 2230). Электрофорез с высоким напряжением электрического поля проводят, как правило, на бумаге этот метод дает хорошие результаты при анализе аминокислот и других небольших молекул и непригоден для анализа больших молекул. [c.403]

Наиболее изученным следует признать процесс получения этанола, осуществляемый растущими клетками Sa h. erevisiae. Лучшим из примененных носителей (ПААГ, каррагинан, агар, полиуретан) при производстве этанола оказался Са-альгинатный гель. [c.233]

Существенного улучшения свойств агара можно достичь сшиванием эпихлоргидрином, диэпоксидными соединениями и т. д. Сшитый агар с регулируемой проницаемостью устойчив к нагреванию даже в щелочной среде, обладает высокой механической прочностью, а наличие большого количества оксигрупп позволяет легко модифицировать носитель. Это дало основания Дж. Порату (1976) считать агар почти идеальным носителем. [c.16]

Подобные электроды вместе с иммобилизованными ферментами, образуя единую конструкцию, представляют собой ферментный электрод. Каким образом создается такая единая конструкция В простейшем случае растворимый фермент или фермент, иммобилизованный на растворимом носителе, помещается в приэлектродном слое, отделенном от остального пространства диализной мембраной. Однако чаще ферменты включают в полимерные или гелевые пленки альбумина, желатина, коллагена, агар-агара, гидроксида алюминия или ковалентно присоединяют к полупроницаемым целлюлозным, поли-карбонатным мембранам или к поверхности стеклянных дисков. Затем такая пленка (или диск) прикрепляется к поверхности электрода. Дж. Гилболт (1973) при изготовлении электрода наносил раствор альбумина или желатина с ферментом на поверхность электрода, перемешивал, затем добавлял каплю глутарового альдегида, и через несколько минут на поверхности электрода образовывался плотный гель, содержащий ф Рмент (рис. 13). [c.92]

В качестве матрицы в аффинной хроматографии наиболее широко используется агароза. Это очиш,енный линейный содержащий галактозу (рис. 1) аэрогель-ксерогелевый коллоид, выделяемый или из агара или непосредственно из содержащих агар морских водорослей. Агароза характеризуется хорошей гелеобразующей способностью она относительно биологически инертна и поэтому удобна в качестве носителей не только для аффинной хроматографии, но также и для гель-фильтрации. Агар и агароза — не синонимы, и различные агарозные препараты также могут значительно отличаться друг от друга по своим физико-химическим свойствам. Некоторые агарсодержащие морские водоросли приведены в табл. 1. [c.11]

Методы культивирования в полужидкой среде основаны на ее высокой вязкости, что обеспечивает разъединенность внесенных в культуру клеток и, следовательно, дискретность развивающихся колоний. Растворимые компоненты легко диффундируют в полужидком носителе — матриксе и вследствие этого равномерно распределяются по всему объему культуры. Два главных преимущества клонирования клеток в полужидком агаре состоят в том, что с помощью этого метода легко проанализировать большое число клеток и легко визуализировать образующиеся клоны. Правда, недостаток всех методов клонального анализа — возможность случайного совмещения клонов, — разумеется, присущ и культивированию в полужидкой среде. Вероятные при этом ошибки оценивают в экспериментах по титрованию, которые позволяют установить порядок наблюдаемых событий. Для этого подбирают условия, при которых в ограниченном числе оказываются клетки только одного типа. Данные условия определяют по линейной зависимости между числом вносимых в культуру клеток и числом подсчитываемых событий (т. е. числом колоний). Таким образом были найдены условия как для роста sIg+В-клеток (Kin ade, 1981 а, Ь), так и для роста предшественников В-клеток (Paige, 1983, 1984 Paige et al., 1984). [c.255]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология