Антигены конкуренция

В этих методах применяются мечение антигенов или антител и иммобилизация на твердой подложке одного из реагентов [34] под таким названием разработано много вариантов [113]. Иммобилизация выполняется на дне пробирок или чаще в микрокюветах, вмонтированных в пластиковые планшеты. Для мечения часто используют пероксидазы, щелочные фосфатазы, глюкозооксидазу. Возможно использование реакций конкуренции между мечеными и немечеными реагентами пример такого рода схематически представлен на рисунке 4.9. Можно описать еще один вариант метода, не основанный на реакциях конкуренции [c.106]

Обсуждая практические аспекты этой проблемы, как правило, разбирают лишь роль конкурентных взаимоотношений антигенов при использовании ассоциированных вакцин или при последовательном применении различных бактерийных препаратов. Между тем не менее, а пожалуй и более, важным фактом служит проявление конкуренции между химическими аллергенами, влиянию которых постоянно подвергается житель современного технически развитого общества. [c.50]

Рис. 7. Схема подавления иммунного ответа при межмолекулярной конкуренции антигенов.

Таким образом, опыты с конъюгатами чужеродных носителей с ограниченным числом химических гаптенов и с искусственными полимерными антигенами показали, что конкуренция между ними, как правило, приводит к подавлению иммунного ответа на один или несколько антигенов при сохранении или небольшом угнетении ответа на доминантный антиген. Однако возникает вполне закономерный вопрос насколько этот вывод соответствует реальным условиям сенсибилизации организма химическими аллергена(ми Ведь в последнем случае носитель окажется своим белком, к которому в определенной мере будет сохранена естественная толерантность. При этом можно ожидать, что чем сильнее будет химическая детерминанта и чем меньше ее присоединение к белку будет модифицировать последний, тем в большей степени окажется сохраненной естественная толерантность к носителю, а следовательно, менее вероятным будет участие белкового носителя в качестве доминантного антигена во внутри- и межмолекулярной конкуренции. [c.56]

Подобная же конкуренция между субстратами и ингибиторами (в ферментативных реакциях) и между антигенами и гап-тенами будет рассмотрена в гл. XII и XIV. [c.226]

Третий метод состоит в приготовлении моноклональных антител, меченных ферментом или радиоизотопом, и определении возможности меченых и немеченых моноклональных антител конкурировать за одни и те же центры связывания на антигене. Этот метод обладает высокой точностью, однако требует введения метки в каждый вид антител и оценки конкуренции для каждой пары. Этот метод не применяется, если необходимо проанализировать моноклональные антитела большого количества гибридом. Необходимо иметь в виду, что на ранних стадиях получения гибридом количество имеющихся в наличии моноклональных антител ограничено. Это делает невозможным их отбор рассматриваемым методом. [c.174]

Этот метод применяют для антигенов с несколькими эпитопами (рис. 2-11). Избыток иммобилизованных антител смешивают с анализируемым раствором, а после инкубации и промывания добавляют антитела, меченные ферментом. Ферментативная активность иммобилизованного комплекса прямо пропорциональна содержанию антигена в исследуемом образце. В ИФА по методу сэндвич не происходит конкуренции между меченым и немеченым антигенами. По сравнению с конкурентными методами сэндвич-ИФА потенциально чувствительнее и обладает тем преимуществом, что не требует очищенных антигенов. [c.26]

Молярное соотношение антиген (Аг) связанные антитела (Ат), исходя из предположения об отсутствии конкуренции и 1(К (% Ном связывании антител, [c.231]

Такая схема анализа вполне пригодна для тестирования антигенов любого размера (как гаптенов, так и крупных белков), она широко применяется в научных исследованиях и клинической диагностике. Тем не менее ей присущи и некоторые принципиальные недостатки. Один из них — это предел чувствительности определения, непосредственно связанный с принципом конкуренции. При конкурентном анализе невозможно использовать большой молярный избыток меченых антител по отношению к количеству тестируемого антигена, поскольку это привело бы к значительному снижению отношения интенсивностей сигналов в опыте и в контроле. [c.244]

В принципе большинство этих методов представляет собой варианты метода изотопного разбавления, где реакцией, выявляющей конкуренцию радиоактивных и нерадиоактивных (разбавляющих) предшественников, служит реакция образования иммунного комплекса антиген—антитело. Разнообразие радиоиммунных методов связано главным образом с различием способов обнаружения этих комплексов или удаления их из раствора. Значение радиоиммунных методов для современной молекулярной биологии столь велико, что их необходимо рассмотреть подробнее-и посвятить этому отдельную главу, тем более что это — методы новые и многие биохимики с ними еще плохо знакомы. Между тем, складывается впечатление, что в ближайшие годы ни одно серьезное исследование без них обойтись не сможет. [c.269]

Как будет видно из дальнейшего, радиоактивную метку чаще всего вводят в антигены для использования их в методах конкуренции. Но иногда метка в антиген включается плохо (мало тирозина ) или нарушает антигенные свойства белка (тирозин в антигенном детерминанте). В этих случаях бывает целесообразно ввести метку в специфические антитела, [c.277]

При действии химических аллергенов возможно развитие двух видов антигенной конкуренции — внутримолекулярной и межмолекулярной. Внутримолекулярная конкуренция возникает в любом сложном антигене, имеющем не менее двух детерминант. Так, в искусственных комплексных антигенах всегда конкурируют детерминанты гаптена и носителя. При образовании комплексных антигенов in vivo с аутобелками, к которым сохранена естественная толерантность, внутримолекулярная конкуренция может иметь место на уровне гаптенных детерминант, если химический аллерген имеет несколько [c.50]

Антигенная конкуренция. Теоретические аспекты проблемы антигенной конкуренции, особенно важной в случае определения антител минорных классов, таких, как IgE, проиллюстри- [c.230]

Рис. 43. Конкуренция между антителами при связывании с антигеном, сорбированным на микропланшете /—АТ 1, 2 —АТ 2, <3 — АТ 1-ЬАТ 2.

В книге обобщены материалы по изучению аллергии к промышленным химическим соединениям. На основании данных современной литературы и собственного многолетнего опыта авторы высказывают оригинальное суждение по ряду теоретических и прикладных аспектов проблемы. В книге дано представление оо иммунных механизмах различных типов аллергических реакций, о химической структуре и конкуренции гаптенов и полных комплексных антигенов, об иммунологической толерантности и гипосенсибилнзации к химическим аллергенам. Освещены приемы выявления сенсибилизирующего действия промышленных химических соединений, сложных и полимерных продуктов, методы определения опасности контакта с ними в условиях производства и в повседневной жизни, принципы установления их гигиенического норматива. Представлены методы специфической диагностики аллерго-зов химической этиологии и методы применення промышленных химических аллергенов при постановке кожных, провокационных, клеточных и серологических тестов. Рассмотрены возможные всходы сенсибилизации к промышленным химическим аллергенам. [c.2]

После внедрения антигена в организм происходит акт его распознавания, т. е. соединение антигена с антиген-распознающим лимфоцитом Ti, имеющим комплементарные для антигенной детерминанты рецепторы IgT. Общепринято, что в комплексных антигенах рецепторы распознают детерминанту носителя. Такое представление вполне логично, когда в организм вводится искусственный комплексный антиген (конъюгат) химического гап-тена с чужеродным для организма носителем, и обусловлено внутримолекулярной конкуренцией сильных детерминант белка с более слабыми химическими (см. главу 3). Если же комплексный антиген образовался in vivo и носитель представлен аутобелком, то распознавание его, по-видимому, связано с так называемой общей или пограничной детерминантой, образованной изменением трехмерной конфигурации участка белковой молекулы носителя в месте соединения ее с химической группой (см. главу 2). На схеме представлен общий случай — соединение с детерминантой носителя. [c.12]

Термин конкуренция используют для обозначения как общего, так и частного вида взаимодействия антигенов. В более широком плане конкуренцией называют любое взаимодействие in vivo или в культуре ткани in vitro антигенов (аллергенов) независимо от его характера подавление иммунологического эффекта одного или всех конкурирующих аллергенов, потенцирование действия одного из них (нередко при подавлении других), синергизм их эффекта. [c.50]

Конкуренция антигенов является одним из основных механизмов иммунологического гомеостаза и принимает участие в защите организма от чужого , в том числе и от новообразований, последствий мутаций, действия комплексных аутоантигенов и т. д. Она является также важным звеном регулирования иммунного ответа, включая развитие толерантности, РТПХ и сенсибилизации [112, 141]. [c.50]

Было выявлено, что при создании толерантности к доминантной детерминанте, т. е. в условиях искусственной безответности на нее, явления конкурентного подавления иммунного ответа на вторую, ранее подавляемую, детерминанту отменяются. Отмену подавления вызывает и пассивное введение антител против доминантной детерминанты [125]. В свете этих фактов внутримолекулярную конкуренцию объясняют конкуренцией В-лимфоцитов различной специфичности. Предполагают, что если число В-клеток одной специфичности больше или их специфичные рецепторы более авидны (например, в результате иммунологической памяти к одной из детерминант антигена или даже к родственной группировке), то такие В-лимфоциты будут иметь преимуш,ество в соединении со своей детерминантой антигена (рис. 6). В результате иммунный ответ на эту детерминанту окажется более активным, а на вторую — несколько ослабленным, так как антиген будет захвачен В-клетками первого типа. Эту гипотезу подтверждает и факт увеличения явлений конкурентного подавления при уменьшении дозы антигена. Вполне понятно, что в таких условиях конкуренция становится очень жесткой и потеря даже небольшого числа молекул антигена, необходимого для активации функционально менее активных В-клеток, может существенно сказаться на результате. [c.52]

Подавление иммунного ответа при межмолекулярной конкуренции антигенов пытались связать с различными механизмами. Так, на основании меньшей способности фагоцитов поглощать подавляемые (неиммуногенные) искусственные полимерные антигены высказывалось предположение о конкуренции на уровне макрофагов. Однако значительно чаще результаты экспериментов указывали на нарушение кооперации Т- и В-лимфоцитов как на причину подавления иммунного ответа под влиянием доминантного антигена [112, 141]. [c.55]

Предположение о конкуренции на уровне В-лимфо-цитоБ достаточно правдоподобно объясняет подавление иммунного ответа при одновременной сенсибилизации несколькими антигенами, но вряд ли подходит для объяснения этого эффекта в случае последовательного введения антигенов через достаточно длительные сроки. В последнем случае более уместным представляется вторая гипотеза, по которой подавление иммунного ответа связывают с действием Т-супрессоров, активированных доминантным антигеном. Вполне вероятно, что супрессивный эффект имеет место и при одновременной сенсибилизации. Следовательно, межмолекулярная конкуренция в любом варианте осуществляется и на уровне Т-клеток, что хорошо согласуется с выявлением конкурентного подавления иммунного ответа при изучении ГЗТ. [c.56]

Поставленный вопрос тем более закономерен, что практическая аллергология повседневно сталкивается с явлениями усиления аллергического (иммунного) ответа при смешанной и последовательной сенсибилизации. В то же время, как видно из ранее приведенных данных, в экспериментальной иммунологии исследователи имеют дело исключительно с подавлением иммунного ответа при конкуренции искусственных, созданных in vitro, антигенов и естественных чужеродных белков. [c.57]

Потенциирующий эффект при конкуренции химических аллергенов скорее всего можно объяснить усилением неспецифического влияния гуморального фактора хелперов, активированных доминантным антигеном (рис. 9). Но следует иметь в виду, что потенциирование было выявлено нами и на уровне ГЗТ, на которую по общепринятому мнению действие Т-клеток-хелперов не распространяется. Приходится предположить, что хелперы, как и супрессоры, принимают участие в реализации не только гуморального, но и клеточного иммунитета, или же активация клеточного иммунитета осуществляется под влиянием неспецифических факторов, образующихся в месте неаллергической воспалительной реакции в ответ на раздражающее действие химического аллергена. Последнее предположение неплохо согласуется с наблюдаемым нами эффектом усиления ГЗТ при добавлении к аллергенам эмульгаторов ОС-20 — вещества почти неиммуногенного, но имеющего выраженные раздражающие свойства. [c.64]

Применение аффинной хроматографии в качестве метода изучения взаимодействий находится еще на ранней стадии развития, несмотря на то что количественная аффинная хроматография была введена уже десять лет назад [1—3]. Действительно, количество исследований, касающихся методологических аспектов аффинной хроматографии, примерно равно количеству сообщений по применению этого метода в конкретных экспериментальных системах. Большинство этих исследований способствовало применению аффинной хроматографии для оценки равновесия с участием ферментов и модификаторов, ингибиторов или субстратов [1—12], но метод был также использован и для характеристики взаимодействий белок — лекарственный препарат [13], система антиген — антитело [14] и, в меньшей степени, белок-белковых взаимодействий [15, 16]. По существу метод заключается в иммобилизации биоспецифической реагирующей группы X на инертной хроматографической матрице (например, часто на сефарозе) и определении средневзвешенных величин объема элюирования Уа распределяющегося растворенного вещества А в ряде хроматографических экспериментов, в которых растворенное вещество мигрирует в присутствии различных концентраций лиганда 5, также специфически взаимодействующего с А и/или X, В некоторых примерах различные изменения значения Уа отражали конкуренцию между растворенными и иммобилизованными реагентами за одно и то же положение в А [2—5, 7—14] в других изменения в величинахГд были обусловлены наличием взаимодействия иммобилизованного реагента X с бинарным А5-комплексом, образованным растворенным веществом и растворимым лигандом [1, 6]. Цель количественной аффинной хром ографии — объяснить возникновение изменений в величинах Га в предложении существования тех или иных равновесий. Поскольку положение равновесия зависит от концентрации (в соответствии с законом действия масс), точное определение состава смеси реагентов, к которой относится Га, обеспечивает применение фронтальной хроматографии [3, 4]. [c.192]

Однако чувствительность одностадийной схемы ниже чем двухстадийной, а контакт фермента с анализируемой средой может неблагоприятно отражаться на результатах анализа. Данная схема налагает также дополнительные требования на соотношение концентраций меченых и иммобилизованных антител с целью исключения их конкуренции за связывание с ограниченным числом антигенных детерминант на молекуле антигена. В этой связи целесообразным является использование в-анализе моноклональных антител, специфичных к различным антигенным детерминантам на мдлекуле антигена. Следует подчеркнуть, что данный метод анализа не может быть отнесен к конкурентному типу, так как формирование комплекса антигена с мечеными иди иммобилизованными антителами не [c.88]

Физический смысл третьего условия состоит в том, что иммобилизованный антиген может значительно смещать равновесие зеакций, проходящих в растворе (и тем самым существенно ухудшать калибровочную кривую по сравнению с кривой титрования), голько в случае, если он способен связывать значительную часть антител, за которые идет конкуренция. С другой стороны, теоретически выгодное значительное снижение концентрации комплекса на носителе (В,<С[Ат]о) может приводить к трудности его де-гекций, осуществляемой с помощью меченых антивидовых антигел, что лимитируется чувствительностью регистрации метки. [c.252]

Приведенные в разд. 3.2 данные о сходстве антигенного строения активных центров ряда изученных к настоящему времени рецепторов, с одной стороны, и антител к тем же лигандам — с другой, согласуются с изложенной выще гипотезой. Однако оставался вопрос, на который еще не было получено ответа. Как известно, гормоны белковой природы (например, инсулин) и еще более сложные по строению белки, каким является lq-компо-нент комплемента, имеют различные по строению антигенные детерминанты. При изучении рецепторов нелимфоидных клеток, распознающих такие сложные по строению лиганды, как перечисленные белки, невозможно достаточно простыми средствами строго доказать, действительно ли одни и те же структуры в молекуле лиганда распознаются клеточным рецептором и антителами к тому же лиганду, так как к каждой антигенной детерминанте этого лиганда образуется особое по специфичности антитело. При сравнении строения активных центров рецептора сложного по строению лиганда, с одной стороны, и антитела к одной из детерминант этого лиганда — с другой, недостаточно установить факт конкуренции за лиганд рецепторного белка и антиидиотипического антитела. Следует считаться с тем, что рецептор через свой активный центр может распознать значительно больший по величине участок молекулы лиганда, нежели активный центр сравниваемого антитела. Антиидиотипическое антитело и в этом случае может создать стерическое препятствие для связывания рецептором лиганда. Вот почему для более строгого доказательства обсуждаемой гипотезы необходимо обнаружить на нелимфоидных клетках рецепторы, способные распознавать простые по строению гаптены, и изучить строение активных центров таких рецепторов, сопоставив его со строением активных центров антитела к тому же простому гаптену. [c.53]

Часто радиоиммунный анализ основан 11а принципе конкуренции меченого антигена с немеченым. Например, требуется установить, содержится ли в изучаемом препарате данный антиген Существует тест-система, состоящая из такого же антигена, меченного радиоактивным г одом, и антител к нему. Исследуемый препарат инкубируют первоначально с антителом, а затем добавляют меченый тест-антиген. Затем иммунный комплекс осаждают либо сульфатом аммония, либо антииммуноглобу-линовой сывороткой. Если радиоактивность в опытной пробе ниже, чем в контрольной (где содержатся только компоненты тест-системы), значит п изучаемом образце содержится антиген, сходный или идентичный радиоме-ченому антигену тест-системы. Тот же метод может быть построен на принципах иммуносорбции с использованием иммобилизованных антител. При этом отпадает необходимость осаждения иммунного комплекса. Методы, основанные на принципе конкуренции, нетрудно выполнить на количественной основе. Именно таким способом могут определяться различные гормоны, причем в количе- [c.261]

Для разных целей требуются сыворотки с различными свойствами, поэтому нельзя разработать единый способ иммунизации животных, который бы гарантировал получение продукта, идеально удовлетворяющего всем требованиям. Тем не менее существуют определенные принципы получения антител, которые могут быть приняты за основные правила . Идеальные антисыворотки получают в определенной степени методом проб и ошибок, поскольку каждый иммуноген отличается от других и процесс образования антител у каждого животного имеет свои особенности. Необходимые свойства антисыворотки — это высокий титр в сочетании с высокой средней авид-ностью, а также специфичность. Первые (на которые оказывают влияние различные адъюванты) зависят от достижения баланса между неограниченной стимуляцией антиген-чувстви-тельных клеток в лимфоидных тканях животных при условии персистирования иммуногена, с одной стороны, и от конкуренции между клетками за лимитированное количество антигена таким образом, чтобы отвечали лишь клетки с наибольшей аффинностью,— с другой. Специфичность же критически зависит от чистоты иммувогена, поскольку даже небольшие примеси могут вызвать непропорционально сильное антителообразование. [c.33]

Реагентами для анализа служат глюкозо-6-фосфат—дегидрогеназа, иммобилизованная на гранулах агарозы совместно с антигеном (IgG человека), и антитела против IgG человека, меченные гексокиназой. При выполнении иммуноанализа эти реагенты смешивают с образцами. От конкуренции между антигеном из образца и иммобилизованным антигеном зависит количество антител, меченных гексокиназой, которое присоединится к твердой фазе. Активность пары ферментов, измеряемая по скорости образования NADH после добавления субстратов (глюкозы, АТР и NAD), уменьшается с ростом концентрации антигена в образце (рис. 8-11). IgG удалось определить при концентрации в конечной реакционной смеси 1 нг/мл. Чувствительность метода ограничена явлениями принципиального характера. При измерении ферментативной активности концентрация глюкозо-6-фосфата вначале ниже величины /См для глюкозо-б-фосфат—дегидрогеназы. Таким образом, по мере накопления глюкозо-6-фосфата скорость ферментативной реакции возрастает. Когда гексокиназа связывается с гранулами агарозы (в отсутствие антигена в образце), концентрация глюкозо-6-фосфата внутри гранул быстро повышается вследствие их малого объема и медленной диффузии. Напротив, когда гек- [c.115]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология