Пептиды метилирование

Электростатическое взаимодействие фермент-субстрат играет положительную роль также и в катализе карбоксипептидазой А, которая специфически отщепляет аминокислоты от С-конца пептидов и полипептидных цепей белков. Заряженная карбоксильная группа концевого аминокислотного остатка при образовании комплекса Михаэлиса электростатически взаимодействует с положительно заряженной гуанидиновой группой Arg-145 (см. схему на стр. 19 и рис. 7). Метилирование концевой карбоксильной группы, которое элиминирует электростатическое взаимодействие фермент—субстрат, практически полностью тормозит катализ карбоксипептидазой А [17]. [c.46]

Проведенное рассмотрение решения обратной структурной задачи на уровне шейпов и форм основной цепи показывает, что даже простейшие химические модификации пептидной последовательности, такие, как единичная аминокислотная замена, N-метилирование и изменение конфигурации асимметрического центра остатка, могут существенно сказаться на конформационных возможностях молекулы. Благодаря исключению из последующего рассмотрения целого ряда типов пептидного остова, а в каждом типе - форм основной цепи и, следовательно, большого числа конформационных состояний, на этом этапе достигается значительное сужение границ поиска нужной структуры. Особенно важно то обстоятельство, что стерические последствия всех отмеченных изменений химического строения, сделанных по отдельности или в комбинации, можно заранее предвидеть при рассмотрении задачи в общем виде. Кроме того, они имеют универсальный характер, т.е. справедливы для любой аминокислотной последовательности. Перейдем теперь к завершающей стадии решения обратной задачи, требующей строгой количественной оценки влияния химических модификаций на конформационные состояния пептида. [c.555]

Наиболее интересным примером применения этого принципа является, несомненно, метод ДНФ-производных [150] (стр. 119), который уже сослужил большую службу еще раз он будет рассмотрен на стр. 164 и 165..После полного гидролиза ДНФ-пептида N-концевые остатки легко определяются в виде ДНФ-аминокис-лот. Ограничения этого метода для качественного и, особенно, количественного определений обусловлены главным образом частичным разложением ДНФ-производных при гидролизе, причем вводимые поправки вносят, к сожалению, элемент некоторой неопределенности. Можно указать также на N-метилирование пептидов [390, несмотря на то, что метальный радикал определяется с гораздо большим трудом, чем радикал ДНФ- [c.158]

Гидролиз метилированного пептида проводят нагреванием с 0,5 мл [c.484]

Предложено также использовать К-метилированные производные пептидов. При этом образуются более летучие вещества, что позволяет анализировать с помощью масс-спектрометрии 12—15-членные пептиды Крупным достоинством метода является быстрота проведения анализа (несколько часов) и малые количества вещества (10 мкг). [c.85]

Это позволило определить строение аминокислоты, из которой получен данный метилтиогидантоин. Новые сведения о порядке чередования аминокислотных остатков в коротких пептидах были получены па основанни исследоваиия масс-спектров этиловых эфиров ацетилпептидов, аминоспиртов и диаминоспиртов [208, 209]. В работе Н. К. Кочеткова и сотрудников масс-спектрометрический метод использовался для определения размера цикла в метиловых эфирах моносахаридов [210], установления конфигураций гликозидной связи в метилглюкозидах [211] и выяснения места свободного гидроксила в частично метилированных моносахаридах [212, 213]. [c.124]

L-M.-необходимый компонент пищи для человека и животных (незаменимая кодируемая аминокислота). Встречается во всех организмах в составе молекул белков и пептидов, входит в состав опиоидного пептида энкефалина особенно богат М. казеин. М. играет важную роль в биосинтетич. метилировании. [c.71]

S-Метилированный L-M. (метионинметилсульфонийхлорид, или активный М.)-витамин для млекопитающих и человека. L-M. применяют для обогащения кормов и пищи, а также как лек. ср-во для лечения и предупреждения заболеваний и токсич. поражений печени, лечения атеросклероза используют для синтеза пептидов. Специфич. расщепление пептидных связей по остаткам М. при обработке бромцианом используют при определении первичной структуры белков. Колориметрич. определение М. основано на образовании окрашивания при действии нитропруссида Na в сильнощелочной среде. Впервые L-M. выделен из казеина в 1922 И. Мюллером. Его мировое произ-во ок. 150 т/год (1982). В.В. Баев. [c.71]

Инграм предложил использовать для определения концевых аминных групп реакцию восстановительного метилирования по Бауману. При действии на пептиды формальдегидом и одновременном восстановлении над палладием образуются N-диметильные производные пептидов, гидролизующиеся до диметиламинокислоты и аминокислот. [c.511]

Ситуация существенно изменилась после того, как стали метилировать Л -ацетилированные пептиды. Такая обработка не только увеличивает летучесть образцов, но и значительно упрощает масс-спектр, так как в нем обычно преобладают ионы ацилия. Из нескольких методов полного метилирования, как правило, выбирают смесь метилиодида, гидрида натрия и диметилсульфоксида 128, 29]. При малом времени реакции (1—3 мин) и небольщом избытке метилиодида достигается метилирование амидного азота как в пептидной цепи, так и в боковых группах аспарагиновых и глутаминовых остатков, при минимальном образовании ониевых производных атомов азота (кватернизация) и серы в боковых группах гистидина, аргинина, метионина и цистеина. Образование ониевых производных понижает летучесть. [c.278]

Возможно идентифицировать и смеси коротких пептидов, получаемых после обработки белков ферментами, частичного разделения с помощью гель-фильтрации и ионообменной хроматографии. Сопоставление масс-спектров, полученных при различных температурах источника, а также использование полного метилирования и дейтерометилирования, обычно позволяют правильно идентифицировать пики исходных пептидов. [c.278]

Указанные общие направления фрагментации пептидов могут затушевываться или дополняться частными, зависящими от природы аминокислот, входящих в исследуемые пептиды. Например, наличие в составе пептида моноаминодикарбоновых кислот приводит к появлению в масс-спектре пиков ионов [(в)—А1кОН]+ и [(г)—А1кОН]+ [505]. При исследовании серосодержащих пептидов полезным оказалось их десульфирование или исчерпывающее Ы-метилирование. [c.291]

Вилкас и Ледерер [4г применили эту методику для О- и N-ме-тилиронания природных глпконротеинов и считают, что она эффективнее метилирования по Куну. Метилирование является удобным приемом при устанонлеиии строения пептидов методом масс-спект-рометрии. [c.135]

Что касается скорости, чувствительности и стоимости, любой из газохроматографических методов выгодно отличается от существующих автоматических анализаторов на смоле, но последние удобнее и проще в обращении. Более широкое использование ГХ будет зависеть главным образом от развития автоматизированных методов. Нетрудно представить себе прибор с помещенным в нем рядом образцов пептидов или белков, которые обрабатываются по очереди определенными реагентами и затем по одному подаются на хроматографическую колонку в ходе элюирования пики идентифицируются, интегрируются, а результаты печатаются в виде количества наномолей аминокислоты. Сароф (личное сообщение) уже работает в этом направлении, используя газофазное получение производных. Реагенты для приготовления ТФА-метиловых эфиров проходят вместе с газом-носителем над образцом, который затем упаривают в токе горячего газа и подают на колонку. Следует отметить, что при метилировании раствором НС1 в метаноле может протекать алкоголиз пептидов и белков, что позволяет обойтись без длительной и утомительной стадии гидролиза [11]. Сароф также снизил время элюирования менее летучих аминокислот и отказался от программирования температуры, применив колонку из трех секций с уменьшающейся температурой, каждая секция работает в изотермическом режиме [84]. С помощью кранов между секциями аминокислоты направляются или на следующую секцию, или же непосредственно в детектор. Этот метод должен облегчить автоматизацию, ускорить разделение и значительно увеличить срок службы колонки. [c.132]

Метиловые эфиры М-ТФА-пептидов с гидроксил содержащими аминокислотами (такими, как серин, треонин или оксипролин) лучше всего превращаются в триметилсилильные (ТМС) производные при кипячении с гексаметилдисилазаном в течение приблизительно 20 мин [17]. Без силилирования наблюдались многочисленные пики, обусловленные разложением. Метиловые эфиры Ы-ТФА-пептидов, содержащих тирозин, дают асимметричные пики [17], возможно, из-за сильных водородных связей фенольной оксигруппы. Несмотря на то, что эта проблема может быть решена метилированием диазометаном, силилирование и в этом случае является предпочтительным. Серин- и треонинсодержащие пептиды нужно силилировать в любом случае, а тирозин в соответствующих пептидах силилируется в тех же условиях. [c.148]

Вейганд и сотр. [17] предлагали проводить десульфирование путем нагревания пептидов с никелем Ренея в 90%-ном метаноле, в результате чего из каждого остатка цистеина образуются производные аланина. Все другие серусодержащие аминокислоты также претерпевают элиминирование серы метионин, например, превращается в а-аминомасляную кислоту. Другим примером из работы Вейганда и сотр. [17] является определение последовательности глутатиона. Тетраэтиловый эфир дисульфида ди-Н-ТФА-глутатиона сначала десульфировали, а затем после частичного гидролиза, метилирования и трифторацетили- [c.148]

Масс-спектрометрическое изучение пептидов, содержащих функциональные группы в боковых цепях, затруднено вследствие их низкой летучести. Эти функциональные группы необходимо модифицировать перед масс-спектрометрированием. Аминогруппы боковых цепей (лизин, орнитин) и карбоксильные группы (аспарагиновая и глутаминовая кислоты) модифицируются одновременно с концевыми группами в ходе методики ацилирования— этерификации. Спиртовые группы (серин, треонин и т. п.) можно превратить в их 0-ацетильные производные [24] или, что еще лучше, метилировать (см. ниже). Тирозинсодержащие пептиды дают удовлетворительные масс-спектры только после метилирования фенольного гидроксила [25]. Трудности, возникающие в случае аргининсодержащих пептидов, могут [c.191]

В масс-спектрах гистидинсодержащих пептидов наблюдаются пики, которые на 14 м. ед. больше соответствующих пиков аминокислотного типа фрагментации. Эти пики обусловлены основностью имидазольной иминогруппы, которая претерпевает меж-молекулярное метилирование. Шемякин и сотр. [13] наблюдали, что пептиды, содержащие два остатка гистидина, дают два типа сопутствукйцих пиков на 14 и 28 м. ед. больше. Сенн и сотр. [31] показали с помощью дейтериевой метки, что источником дополнительной метильной группы является либо метилирующий реагент, либо карбметоксильная группа пептида. [c.197]

Повышение летучести, обусловленное перметилированием, проиллюстрировано также на примере пептида (XV) (М483), который испаряется в масс-спектрометре при 210 °С, в то время как перметилиро-ванный продукт (XVI) (М 539) дает спектр при температуре ионного источника 150°С. Более простые спектры, полученные в результате пер метилирования, конечно, обусловлены уменьшением реакций пиролиза за счет использования более низкой температуры. [c.214]

Некоторые аминокислоты при использовании для метилирования окиси серебра с иодистым метилом дают нежелательные результаты [88, 89]. Например а) в результате метилирования пептидов, содержащих аспарагиновую кислоту, получается сложная смесь соединений [88] Ь) остатки глутаминовой кислоты обычно не дают осло Жнений, но некоторые производные пептидов претерпевают частичное расщепление цепи с образованием остатка пироглутаминовой кислоты [88, 89] с) остаток триптофана гладко образует диметильное производное после метилирования но было отмечено, что триптофан в положении 9 грамицидинов А к В представляет исключение (табл. 1), так как появляются примеси на 30 м. ед. выше молекулярного веса. [c.216]

При ацилировании и метилировании аргининовых пептидов обычным способом могут быть получены хлороформ-раствори-мые продукты, обладающие достаточной летучестью, но в масс-спектрах обнаруживаются пики, соответствующие аминокислотному типу фрагментации, только до остатка аргинина. После обработки гидразином по методу Шемякина и сотр. [26] образующиеся соответствующие орнитиновые пептиды могут быть перметилированы. [c.218]

Спектры перметилированных метионинсодержащих пептидов содержат пики, соответствующие расщеплению пептидной цепи до метионинового остатка (ситуация, аналогичная наблюдаемой для метилированных аргининсодержащих пептидов). [c.219]

Удаление защитных групп обработкой натрием в жидком аммиаке может сопровождаться отщеплением S-метильной группы, которую затем можно снова ввести алкилированием иодистым метилом [350, 583]. В ряде случаев при синтезе высших пептидов, а также некоторых ди- и трипептидов такое повторное S-метилирование не описано [1021, 1033]. Бреннер и Пфистер [350] наблюдали полную потерю оптической активности при декарбобензоксилировании СЬо-L-Met-L-Met-L-Met-OHдействием натрия в жидком аммиаке. Оптическая активность [c.311]

Число свободных карбоксильных групп в пептидах определяется путем частичного метилирования диазометаном на бумаге, число окси-групп —обработкой концентрированной серной кислотой при —40°С с образованием кислых сернокислых эфиров число свободных сульфгид-рильпых групп — реакцией с хлормеркурфепилсульфокислотой. Наибо- [c.407]

Ингрэм [1, 3] разработал для оиределения К-концевых групп пептидов метод восстановительного метилирования, которы является видоизменением весьма простого и широко применяемого метода определения мпкро-количеств пептидов. [c.484]

Солянокислый пептид растворяют в метанольном растворе фор.маль-дегида и восстанавливают водородом, применяя в качестве катализатора палладий П105). При этом К-концевая аминокислота пептида превращается в соответствующую диметиламинокислоту. После гидролиза метилированного пептида идентифицируют диметилпроизводное К-концевой аминокислоты и неизмененную аминокислоту оставшейся части пептида. [c.484]

Пептиды, плохо растворяющиеся в водо, переводят в солянокислые соли. К раствору 1—2 мг пептида в 50%-ном водном метаноле добавляют 2 канли 37%-иого формальдегида и 5 мг катализатора (1 3 Р(1С12 растворяют в 1 мл 10 н. соляной кислоты и разбавляют водой до объема 100 мл после добавления 5 з уксуснокислого натрия и 5 3 активированного угля суспензию насыщают водородом катализатор фильтруют, промывают кодой и сушат на воздухе). Метилирование нроводят в копической колбочке емкостью 10 жл, которая снабжена пробкой с двумя отверстиями. В одно отверстие вставлена трубка, опущенная до дна, а в другую — трубка, по которой отводится водород. После удаления воздуха в раствор вводят водород, насыщенный парами метанола и формальдегида. Насыщение водородом продолжается обычно иесколько часов до отрицательной реакции раствора с нингидрином. После центрифугирования раствор упаривают в токе воздуха в пробирке при 100°. Упаривание проводят несколько раз, нока не исчезнет запах формальдегида. [c.782]

Метиловые эфиры пептидов можно получить в результате обработки их ацилпроизводных диазометаном, путем их исчерпывающего метилирования [290], а также обработки тионилхло-ридом в метаноле или метанольном раствором НС1 [282, 291]. В последнем случае этерификация сопровождается частичным расщеплением пептидных связей [292]. Трифторацетилирование пептидов следует проводить при значительно более низкой температуре, чем соответствующую обработку аминокислот [293, 294], или использовать в этих целях вместо ангидрида трифторуксусной кислоты ее метиловый эфир и проводить реакцию в метаноле в присутствии триэтиламина в качестве катализатора [253]. Перечень некоторых производных пептидов и подробные методики их получения приведены в руководстве Кнаппа [187]. [c.83]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология