Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Электрофорез аминокислот и пептидов

    В установках другого типа, где бумага зажата между твердыми поверхностями или погружена в непроводящую жидкость, испарение полностью предотвращается. В этом случае легче добиться воспроизводимости положения зон и измерить подвижность, но зоны часто получаются более широкими, вероятно, из-за влияния слоя жидкости, образующегося между поверхностью бумаги и оболочкой, даже если последняя и не смачивается водой. При такой конструкции прибора легче осуществить хороший теплоотвод и можно резко повысить напряженность поля до 50 в см и более, уменьшив время разделения до десятков минут. Такой высоковольтный электрофорез, часто в сочетании с хроматографией, успешно применяется для быстрого разделения аминокислот, пептидов и других низкомолекулярных объектов. Белки этим методом разделяются плохо. [c.94]


    ЭЛЕКТРОФОРЕЗ АМИНОКИСЛОТ И ПЕПТИДОВ [c.331]

    Первое разделение заряженных молекул на бумаге под действием электрического поля было проведено в 30-е годы незадолго до открытия метода бумажной хроматографии. С тех пор в литературе появилось большое число сообщений о разделении аминокислот, пептидов, белков и нуклеотидов [1—3] методом электрофореза на бумаге. Электрофорез на бумаге оказался не очень эффективным способом разделения высокомолекуляр- [c.132]

    Оси. работы посвящены исследованию адсорбции и электрофореза. Создал (1931 —1935) метод фронтальной адсорбционной хроматографии, с помощью которого смог анализировать качественно и количественно смеси, содержащие аминокислоты, пептиды, углеводы. В результате проведенных им (с 1935) исследований электрофореза разработал метод электрофоретического анализа биоколлоидов с его различными модификациями (микроэлектрофорез, электрофорез на бумаге, иммуноэлектрофорез). Применил электрофоретический метод для решения ряда прикладных задач биохимии — исследования и разделения нормальной и патологической сывороток, изучения чистых белков и их смесей, ферментов, нуклеопротеидов, нуклеиновых и аминокислот и др. С помощью иммуноэлектрофореза заложил основы изучения белковой структуры нормальной сыворотки крови, выделив из нее три различных белка (теперь их обнаружено более 20). [c.428]

    Второй раздел практикума ставит своей целью познакомить студентов с особенностями выделения, фракционирования, идентификации и количественного определения различных природных азотсодержащих < оединений. белков, пептидов, аминокислот, нуклеиновых кислот, нуклеотидов и пр Предлагаемые экспериментальные работы включают аиболее широко используемые в лабораторной практике современные методы разделения и анализа этих соединений различные виды электрофореза, хроматографии, спектрофотометрии, колориметрии и др. Работа проводится как на готовых коммерческих препаратах высоко- и низкомолекулярных азотсодержащих соединений, так и на препаратах, выделяемых студентами из различных тканей лабораторных животных. [c.79]

    Для лучшего разделения соединений с близкими значениями R , а также для увеличения часто проводят хроматографирование в нескольких (обычно двух) системах растворителей, пропуская второй растворитель в том же направлении, что и первый. Это приводит к уплощению пятен разделяемых соединений в направлении, перпендикулярном пропускаемому растворителю, и способствует их лучшему разделению. Более полное разделение аминокислот и пептидов достигается при двухмерной хроматографии (второй растворитель пропускают в направлении, перпендикулярном первому) или при сочетании хроматографии (одно направление) и электрофореза (второе взаимно перпендикулярное направление). Последний метод носит название метода пептидных карт или отпечатка пальцев . [c.126]


    С помощью БХ можно разделить и анализировать практически все классы хим. соед., в т. ч аминокислоты, сахара, стероиды. Кроме того, БХ в сочетании с двумерным электрофорезом используется как микропрепаративный метод разделения природных в-в, в частности пептидов. [c.325]

    Хотя электрофорез на бумаге первоначально был разработан для разделения аминокислот и белков, он в настоящее время применяется в самых различных областях органической химии и биохимии (см., например, [4, 91). При помощи электрофореза на бумаге разделяют сахара, пептиды, алкалоиды, антибиотики, витамины и т. д. [c.541]

    Наиболее широкое применение электрофоретический метод получил в биохимии, в частности, для разделения сывороточных белков, гидролизатов нуклеиновых кислот, аминокислот и пептидов. Методы электрофореза подробно рассмотрены в обзорах [32— 34 , а метод электрофореза на бумаге в монографиях [3, 35, 361. [c.27]

    Электрофорез на бумаге весьма часто применяют для разделения пептидов и качественного анализа аминокислот. Принцип, по которому классифицируются аппараты для электрофореза, обычно учитывает либо используемое напряжение, либо расположение листа бумаги в пространстве. [c.95]

    Первые аналитические приложения КЭ бьши связаны с разделением полярных заряженных образцов наиболее подходящими оказались неорганические катионы и анионы, а также низкомолекулярные карбоновые кислоты [72, 100, 101, 137, 163]. В это же время происходит частичная замена традиционного электрофореза его капиллярным исполнением, таким образом, КЭ начинают использовать в биотехнологии для анализа нуклеиновых кислот, аминокислот, макромолекул — белков и пептидов [106, 149, 176, 177]. [c.364]

    Для установления строения пептида прежде всего определяют его аминокислотный состав. С этой целью пептид расщепляют на составляющие аминокислоты (как правило, путем кислотного гидролиза) и гидролизат анализируют методом бумажной хроматографии, электрофореза или ионообменной хроматографии. Для точного анализа этими методами требуются весьма малые количества пептидов (порядка десятых долей миллиграмма). [c.811]

    Электрофорез пептидов. Если ионизированные аминокислоты и пептиды поместить в электрическое поле, то в зависимости от pH они движутся в сторону катода или анода (см. рис. 6-5). Этот метод широко используется ддя разделения пептидов, различающихся по величине суммарного заряда. Возможности метода особенно велики благодаря тому, что суммарный заряд пептида можно изменять, изменяя pH среды. [c.162]

    В книге подробно рассматриваются автоматический метод анализа пептидов и белков с помощью ионообменной хроматографии, газожидкостная хроматография аминокислот и пептидов, очистка белков с помощью гель-фильтрации и электрофореза, изучение функциональных групп в белках с привлечением химических методов. Отдельная глава посвящена изучению четвертичной структуры белков. [c.2]

    Методика получения пептидных карт или отпечатков пальцев очень полезна при определении идентичности полипептидных цепей. Согласно этой методике, белок обрабатывают трипсином, который избирательно гидролизует пептидные связи, образованные карбоксильными группами основных аминокислот, аргинина и лизина. Образующаяся смесь пептидов разделяется с помощью хроматографии и электрофореза. Эквивалентный вес полипептидной цепи рассчитывают по количеству аргинина и лизина в белке и числу разных пептидов, получаемых при триптическом гидролизе. Теоретически общее число пептидов должно равняться сумме числа остатков аргинина и лизина плюс один, [c.401]

    Самые важные проблемы (тепловая конвекция и сложность детектирования) были преодолены с введением капиллярного электрофореза. Как высокоэффективный метод КЭ обеспечивает основу для большинства анализов смесей аминокислот пептидов, белков, нуклеинових кислот и других биополимеров. [c.307]

    Неионообменная порошковая целлюлоза применяется в качестве носителя при распределительной хроматографии и электрофорезе на колонках и в слоях. Целлюлоза используется для хроматографического разделения сахаров, глицеридов, спиртов, фенолов, аминов, карбоновых и аминокислот, пептидов, белков, нуклеиновых кислот, уроновых кислот, липидов, алкалоидов, антибиотиков, гормонов, ферментов, витаминов, гербицидов и инсектицидов, неорганических ионов, красителей, углеводородов и других веществ. Применяется также для электрофореза белков, пептидов, аминокислот, нуклеиновых кислот, нуклеотидов. [c.127]

    Электрофорез аминокислот и пептидов на бумаге проводили методом Михля с охлаждением инертными жидкостями [69], который может быть успешно использован даже для получения пептидных карт. Примеры разделения пептидов приведены на рис. 12.25, а состав буферов для разделения —в табл. 12.13. Аминокислоты и пептиды разделяли также методом электрофореза в тонком слое целлюлозы [28] и силикагеля [42]. В этом методе хроматография (в основном ТСХ) предшествует электрофорезу, который применяется для анализа во втором направлении (см. табл. 12.5). [c.333]


    Примеры применения ТСЭ встречаются в литературе довольно редко, однако этим методом разделяли меченые аминокислоты, пептиды и нуклеотиды. В лаборатории автора методу ТСЭ отдают предпочтение перед методом электрофореза на бумаге из-за быстроты разделения и простоты проведения анализа и используют при обнаружении соединений с кислым и основным характером в смесях метаболитов пестицидов. Можно указать случай, когда без применения ТСЭ лабильную малонил-грунну в менаболитах растений обнаружить невозможно [20]. [c.138]

    Многие важные в биологическом отношении молекулы, такие, как аминокислоты, пептиды, белки и нуклеиновые кислоты, содержат ионизуюш,иеся группы, поэтому в растворе они могут существовать в заряженной форме, в виде катионов (-Ь) либо анионов (—). Кроме того, молекулы с близкими по величине зарядами, но> различающимися молекулярными весами отличаются друг от друга отношением заряда к массе. На всех этих различиях основано разделение ионов при движении их в растворе под действием электрического поля в этом и состоит принцип электрофореза. [c.114]

    Электрофорез используется для разделения молекул, несущих суммарный заряд. Низковольтный электрофорез на бумаге нашел широкое применение для разделения аминокислот, пептидов, белков, нуклеотидов, нуклеиновых кислот и заряженных производных углеводов. Однако при низковольтном электрофорезе на бумаге имеет место значительная диффузия малых молекул, поэтому для их разделения применяют, как правило, высоковольтный электрофорез, при котором время разделения сводится до минимума и вследствие этого уменьшается диффузия. Вместо бумаги в качестве носителя зачастую используют ацетат целлюлозы, высокая чистота которого обусловливает уменьшение адсорбции образца, а следовательно, и лучшее разделение его компонентов. Одним из преимуществ ацетата целлюлозы является также его слабое фоновое окрашивание, что облегчает выявление соединений после рааделе-ния. Электрофорез на ацетате целлюлозы нашел широкое применение в клинике для разделения белков сыворотки крови (включая гликопротеиды и липопротеиды) и гемоглобинов он применяется также при иммуноэлектрофорезе. Высоковольтный электрофорез, как бумажный, так и тонкослойный, используется для разделения аминокислот, концентрация которых в плазме крови и моче при различных нарушениях обмена может быть довольно высокой. Особенно велика ценность тонкослойного электрофореза при разделении малых молекул, таких, как аминокислоты и нуклеотиды, поскольку [c.136]

    С-Концы пептидных цепей определяются избирательным отщепле нием концевой аминокислоты с помощью специфического фермента — карбоксипептидазы и последующей идентификацией этой аминокислоты. Если макромолекула белка состоит из двух (или более) пептидных цепей, как в случае инсулина (см. рис. 53), то избирательно разрушают дисульфидные мостики окислением (например, надмуравьиной кислотой) и затем полученные полипептиды разделяют путем фракционирования на ионитах. Для определения последовательности расположения аминокислот в каждой полипептидной цепи ее подвергают частичному кислотному гидролизу и избирательному расщеплению с помощью ферментов, каждый из которых разрывает полипептидную цепь только в определенных местах присоединения какой-то одной определенной аминокислоты или одного типа аминокислот (основных, ароматических). Таким образом получают несколько наборов пептидов, которые разделяют, используя методы хроматографии и электрофореза. [c.376]

    Химические, физико-химические свойства белков и их структура определяются аминокислотным составом. Поэтому исследование аминокислотного состава является важным аналитическим методом характеристики этих соединений. Исследование аминокислотного состава белков и пептидов включает расщепление этих соединений до свободных аминокислот, разделение последних, их идентификацию и количественное определение. Изучению аминокислотного состава предшествует, как правило, определение однородности изучаемых препаратов. О чистоте препаратов белка судят на основании данных ульт-рацентрифугирования, электрофореза, в частности диск-электрофореза ) [c.122]

    Исследуемое вещество (пептид, аминокислота, аминоуглевод) вводят в реакцию с различными количествами ДНФБ (например, на 1 эквивалент исследуемого соединения берут 1/4, 1/2, 1 и 2 эквивалента ДНФБ). В результате реакции образуются продукты различной степени замещения по аминогруппам, которые легко могут быть разделены методами электрофореза и бумажной или тонкослойной хроматографии, По числу ДНФ-производных судят о числе свободных ННг-групп в исследуемом соединении. [c.147]

    По сравнению с хроматографией на бумаге разделение веществ при помощи электрофореза происходит гораздо быстрее (время разделения при высоковольтном электрофорезе составляет от 1 до 2 час). Подбором соответствующего pH при помощи буфера можно добиться разделения даже очень близких веществ. На рис. 486 показаны примеры разделения смеси аминокислот и пептидов на приборах со средним и высоким напря кением. [c.541]

    Вследствие тенденции метильных групп к подаче электронов заряд на азоте диметиламинокислот несколько повышен, амфотерные свойства их выражены столь же ярко, как и у самих аминокислот. Разделение их методами электрофореза и хроматографией менее четко, чем разделение динитрофенильных производных аминокислот. Диметильные производные аминокислот не имеют широкого применения при исследованиях строения пептидов. [c.511]

    Тонкослойный электрофорез впервые был использован в 1946 году Конеденом для разделения аминокислот и пептидов. Преимуществами метода являются более эффективная система охлаждения, высокая чувствительность, [c.101]

    Последовательность аминокислотных остатков в белковой цепи называется ее первичной структурой. Определение первичной структуры производится путем частичного гидролиза белка с помощью протеаз, катализирующих расщепление пептидной связи лишь нежду определенными остатками. Так, трипсин режет лишь связи, образованные СО-группами остатков основных аминокислот — Apr или Лиз. В результате образуется смесь пептидов — коротких фрагментов белковой цепи. Их идентификация производится посредством химических и физико-химических методов (хроматография, электрофорез). Воздействуя вторым ферментом, можно разрезать другие связи в белке и получить смесь других фрагментов (пептидов) и т. д. [c.33]

    На первом этапе лучше всего провести электрофорез в буферном растворе с pH 6,5 или 5,0 либо в двухбуферной системе. Весьма трудно дать определенные рекомендации относительно величины pH буферного раствора, так как вариации электрофоретической подвижности у белков и пептидов гораздо значительнее, чем у аминокислот. Поэтому на первом этапе разделения величину pH буферного раствора следует подобрать эмпирически. Опытным путем необходимо также определить наиболее подходящее месторасположение стартовой зоны и оптимальную продолжительность электрофореза, поскольку компоненты разделяемой смеси могут [c.104]

    В 1973 г. Н. С. Егоровым была установлена полная структурная формула полимиксипа М с применением впервые разработанных методов специфического химического расщепления по остаткам треонина (метод К->0-ацильной миграции и окислительный метод ) [53]. Из смеси продуктов расщепления методом электрофореза выделены три К-Опр-пентида (рис. 3.5). Идентификация С-концевых аминокислот и аминокислотный анализ этих пептидов позволили определить их строение и с учетом ранге полученных данных по частичной структуре полимиксипа М [54,66] порядок их чередования в антибиотике  [c.133]

    Благодаря работе Санжера были достигнуты большие успехи в установлении структуры ряда других гормонов, в частности адренокортикотропных гормонов (АКТГ) из передней доли гипофиза [100, 102]. Было установлено, что АКТГ имеют 39 аминокислотных остатков в нолипентидной цепи. Для установления последовательности аминокислот двумя группами исследователей были использованы различные протеолитические ферменты в сочетании с частичным кислотным гидролизом или без него. В первом случае после переваривания трипсином и химотрипсином были получены пептидные фрагменты, разделение которых достигалось с помощью электрофореза, противоточного распределения, ионообменной и бумажной хроматографии. Затем проводили определение последовательности аминокислот с помощью фенилизотиоциа-ната и метода динитрофенилирования для К-концевых аминокислот соответствующих пептидов, а также гидролиз карбоксипептидазой аминокислот с С-конца гормона. Таким образом была определена последовательность аминокислот для бычьего кортикотро-пина VI [103]  [c.412]

Смотреть страницы где упоминается термин Электрофорез аминокислот и пептидов: [c.342]    [c.511]    [c.359]    [c.224]    [c.252]    [c.112]    [c.511]    [c.419]    [c.32]    [c.488]    [c.396]    [c.226]    [c.82]    [c.261]    [c.269]   
Смотреть главы в:

Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам Часть 2 -> Электрофорез аминокислот и пептидов



ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Электрофорез



© 2025 chem21.info Реклама на сайте