Нингидрин как реагент

Общий проявляющий реагент — нингидрин (Н) окраска пурпурная. [c.137]

Для разделения веществ с помощью бумажной хроматографии нарезают полоски бумаги длиной 15— 30 см и шириной несколько сантиметров. На расстоянии 2—3 см одного из концов полоски бумаги наносят каплю исследуемого раствора и место старта отмечают простым карандашом. После испарения растворителя конец бумаги, на который нанесена проба, приводят в соприкосновение с растворителем (ПФ). Затем бумагу и растворитель помещают в закрытый сосуд (обычно цилиндр или стеклянный колпак), чтобы предотвратить потери при испарении. После прохождения растворителя через полоски бумаги ее вынимают, сушат и определяют положение различных компонентов, С этой целью опрыскивают бумагу соответствующими реагентами, которые с компонентами разделенной смеси образуют окрашенные соединения. Для обнаружения аминов или аминокислот, например, действуют раствором нингидрина, который с этими веществами образует соединение голубого или пурпурного цвета. [c.616]

Проявление флуорескамином. Помимо нингидрина для проявления аминокислот в настоящее время используют реагенты, дающие с аминокислотами пептидами и белками флуоресцирующие [c.129]

Образование продуктов, обладающих флуоресценцией (сами реагенты не флуоресцируют), позволило значительно увеличить чувствительность метода. С флуорескамином открывается 10 —10 " молей аминокислот. В отличие от нингидрина реакции не мешает присутствие аммиака. Реакция протекает при комнатной температуре при pH 7,0— 9,0. Поскольку флуорескамин в водной среде разрушается (в течение нескольких секунд), для приготовления раствора используют безводные жидкости (ацетон, ацетонитрил, диметилсульфоксид и др.). Продукт реакции стабилен в течение нескольких часов. Пептиды и белки, проявленные флуорескамином, могут использоваться для определения аминокислотного состава и аминокислотной последовательности. [c.130]

Реакция сводится к получению производных уже разделенных зон образца. Обычно требуется тщательный подбор аппаратуры и реагентов. Этот метод был применен Стайном и Муром для анализа аминокислот, не имеющих окраски. Аминокислоты после выхода из колонки взаимодействуют с нингидрином, превращаясь в окрашенные соединения, способные поглощать свет на длине волны 570 нм и обнаруживаемые фотометром. Принципиальная схема установки для получения производных после колонки приведена на рис.3.1. [c.70]

Практически в любом биохимическом исследовании очень важно уметь обнаруживать и точно определять ничтожные количества специфических соединений. Чаще всего для этого используют особые реагенты— индикаторы, которые при взаимодействии со специфическими соединениями определенным образом окрашиваются. Например, для выявления на хроматограмме аминокислот или пептидов, присутствующих в очень малых количествах (доли микромоля), хроматограмму опрыскивают нингидрином (дополнение 8-Е). Если выявляемое соединение находится в растворе, то по интенсивности окрашивания можно определить его количество. Фенолы и концентрированная серная кислота окрашивают сахара (в растворе или на хроматографической бумаге) в красный цвет. Эта реакция лежит в основе колориметрического анализа углеводов. Восстанавливающие сахара выявляют на хроматограммах, опрыскивая последние раствором нитрата серебра. [c.179]

Идентификация аминокислот производится в больщинстве случаев с помощью окращенных или флуоресцирующих производных или с помощью радиоактивных реагентов [118]. Особенно важными являются реакции с нингидрином и флуорескамином. [c.56]

Окрашенная нингидрином бумага выцветает под действием воздуха и света. Для более длительного сохранения окраски можно дополнительно опрыскать реагентом, содержащим Си(НОз)2. К 1 мл насыщенного раствора ц(NOз)2 добавляют 0,2 мл 10%-ной ННОз и доводят до 100 мл 95%)-ным этанолом. Лучше всего бумагу покрыть пленкой, погрузив ее в насыщенный раствор полиметилметакрилата в хлороформе. [c.390]

Один из недостатков нингидрина состоит в том, что пролин может быть легко замаскирован пятнами других аминокислот. Были описаны два реагента, лишенные этого недостатка и в то же время обеспечивающие широкий диапазон цветов при хроматографическом определении аминокислот. [c.390]

За опрыскиванием нингидрином может следовать опрыскивание а-нитрозо-р-нафтолом или реагентом Эрлиха. За ним могут также следовать реагенты, дающие пониженную чувствительность обработки (реагент Паули или Сакагучи). Изатину может предшествовать нингидрин или за изатином может следовать реактив Эрлиха или а-нитрозо-Р-нафтол (чувствительность последнего теста при этом снижается). За реактивом Эрлиха может следовать обработка по Сакагучи, даже если предшествующими операциями были опрыскивание нингидрином или изатином. УФ-облучение и обработка иодом не метают проведению любых последующих тестов. [c.394]

Если вещества, подвергаемые хроматографированию на бумаге, бесцветны, то для обнаружения образовавшихся зон следует, после высушивания хроматограммы, применить соответствующий реагент, раствором которого обрызгивают бумагу при помощи пульверизатора. В случае хроматографирования смеси аминокислот обычно применяют нингидрин, вещества кислотного или основного характера обнаруживают соответствующим индикатором, иногда пользуются разбавленным раствором перманганата и т. п. Нередко лучшие результаты можно получить при рассматривании хроматограммы в ультрафиолетовом свете. [c.303]

С сотр. [46] и Герке с сотр. [47], определяются главным образом природой ионообменной смолы. В обоих случаях детектирование осуществляли реакцией с нингидрином и по поглощению при длине волны 570 нм. Время выдерживания реагентов в змеевике при температуре 100°С [c.275]

В процессе развития аминокислотного анализа состав нингидринового реагента неоднократно подвергался изменениям, однако основные принципы, заложенные в первых работах Мура и Стайна [10, 33], остались неизменными. Основу буфера составляет концентрированный раствор ацетата натрия с pH 5,0, что является оптимальным для полноты реакции и измерения поглощения. Водный раствор метилцеллозольва обеспечивает хорошую растворимость как органических соединений, так и неорганических солей. Восстановленный нингидрин, необходимый для запуска реакции, получают под действием хлорида олова (И). Реагент готовят и хранят в отсутствие кислорода воздуха, например в атмосфере азота. [c.338]

Наиболее общим методом определения концентрации пептидов является колориметрия продуктов реакции с нингидрином [2]. Это один из наиболее чувствительных колориметрических методов. Для обнаружения аминокислот и пептидов разработаны как обычный, так и полностью автоматизированный варианты, причем нингидриновый реагент не вызывает коррозии и его можно подавать обычным микронасосом. Реакция идет по свободным аминогруппам, но в некоторых случаях хромофор образуется с низким выходом. Данные по окрашиванию дипептидов можно найти в работе [3]. У всех дипептидов, содержащих в качестве Ы-концевой аминокислоты аргинин, треонин, серин, глутаминовую кислоту, глицин, фенилаланин, метионин, лейцин и тирозин, интенсивность окраски составляет 1,6-10 у лейцина эта величина составляет 1,7-10 . У дипептидов с М-концевым лизином и аспарагиновой кислотой интенсивность окраски несколько выше (на 20 и 29% соответственно), а дипептиды с Ы-концевым гистидином и триптофаном проявляются несколько слабее (42 и 67% соответственно от средней интенсивности). Дипептиды с М-концевым пролином, валином и изолейцином окрашиваются очень слабо [2,7 6,4 и 8,5% от средней (1,6- 10 ) интенсивности]. [c.391]

Анализ проводится так. Крохотные и очень точные насосы-дозаторы прокачивают буфер через колонку, причем в онределенные моменты времени по заданной программе происходит переключение с одного элюирующего буфера на другой. После колонки жидкость, содержащая аминокислоты, автоматически смешивается с нингидринным реагентом, накачиваемым вторым насосиком. Нингидринный реагент — раствор нингидрина (дикетогидрин-денгидрата) [c.19]

Соединение IV — нингидрин, хорошо известный реагент, ис-ттользуемый для обнаружения и определения а-аминокислот. [c.203]

Реагентом-индикатором на аминокислоты — наиболее общим н чувствительным — является нингидрин (трикетогидр-индеи) [c.153]

Важный аналитический реагент, применяемый в биологических исследойаниях, нингидрин (моногидрат индан-1,2,3-триона), подобно пиридоксальфосфату образует с аминокислотами реакционноспособные шиффовы основания (кетими- [c.212]

В случае реакции с нингидрином получается сиие-фиолетовая окраска (максимум поглощения 570 нм для пролнна 440 им) в результате взаимодействия си-аминогруппы и реагента по схеме [c.56]

Для обнаружения аминокислот и пептидов применяют иингидрин. Сухую хроматограмму (рис. 8.40) пофужают в раствор нингидрина в ацетоне, обычно 0,2%-ный (при этом достагается однородное покрытие бумаги реагентом), сушат непродолжительное время. При комнатной температуре пятна аминокислот проявляются примерно через 1 ч, а их окраска достигает максимальной интенсивности примерно за 8 ч. Пятна пептидов обнаруживаются медленнее. Проявление ускоряется, если ф0мат0фамму нафевают при 50—60 С в сушильном шкафу. [c.336]

Готовят два раствора 1) 0,2%-ньгй раствор нингидрина в 50 мл этанола + 10 мл уксусной кислоты + 2 мл коллидина 2) 1 %-ный раствор Си(ЫОз)2 ЗН2О. Хроматограмму опрыскивают свежеприготовленной смесью 25 мл раствора 1 и 1,5 мл раствора 2 высушивают и нагревают в течение 1,5-2 мин при 105°С. Таким же образом обрабатывают пластинки ТСХ. Пластинки высушивают, опрыскивают реагентом и подогревают так, чтобы за окраской можно было наблюдать по мере ее появления. [c.390]

Для обнаружения N-мeтилaминoки лoт (которые обычно дают очень слабую окраску с нингидрином) в присутствии свободных аминокислот используют специальный реагент. Смешивают равные объемы 0,33%-ного раствора нингидрина в трет-бутиноле и смеси ледяная уксусная кислота - вода - пиридин (1 5 5). Опрыскивают и нагревают 10-15 мин при 100-110°С. Первичные амины и Н-метиламинокислоты дают пурпурные пятна сравнимой интенсивности. При опрыскивании водным раствором нингидрина, приготовленным путем растворения нингидрина в н-бутаноле, насыщенном водой и содержащем 2% уксусной кислоты, N-мeтилaминoки лoты дают пятна слабой интенсивности. [c.390]

Нингидрин-NaH O . Хроматограмму прокрашивают нингидрином (см. выше Групповые реагенты , разд. 1, пункт 1). При опрыскивании нагретой бумаги разбавленным (0,15 -h 10%) раствором ЫаНСОз устойчиво только пятно фенилаланина. [c.393]

Нингидрин. Хроматограмму опрыскивают 0,05%-ным раствором нингидрина в н-ВиОН. Прогреварот при 105-110°С в течение 10 мин. Аминосахара дают красную окраску. Для определения свободных сахаров после опрыскивания этим реагентом можно опрыскать оксаниловой кислотой (разд. 22. пункт 3). [c.404]

Нингидрин. Хроматограмму опрыскивают 0,2%-ным раствором нингидрина в н-ВиОН, насыщенном водой и содержащем 5% СН3СООН. Для тироксина чувствительность 20 мкг. Этот реагент можно использовать также для определения иодотиронинов и иодотирозинов его нельзя применять для определения дезаминированных аналогов, а также тестировать препараты с высоким содержанием примесей аминокислот. См. Аминокислоты , разд. 1. [c.405]

Концентрированный раствор нингидрина в л-бутаноле (1 мг/мл) разбавляют 2,4-лутиди-ном (20%, об.) непосредственно перед использованием. Проявляют при 120°С в течение 5 мин. Окраску усиливают путем погружения хроматограммы в 2 М НС1 на 2 мин с последующим промыванием и высушиванием перед опрыскиванием реагентом. [c.407]

Полученные хроматограммы рекомендуется проявлять нингид-рин-коллидиновым реагентом (1,0 г нингидрина, растворенного в смеси 700 мл этанола, 29 мл 2,4,6-коллидина и 210 мл уксусной кислоты). При окрашивании этим реагентом можно обнаружить следующие минимальные количества аминокислот 0,05 мкг для Ала, Асп и Вал 0,1—0,2 мкг для Иле, Сер и Арг 0,3—0,5 мкг для Гис, Лиз, Мет и Тир. [c.235]

Для получения проявителя смешивают 100 мл раствора I и 20 мл раствора 2. Кадмий-нингидриновый реагент дает стабильную красную окраску со всеми аминокислотами (кроме Про, который в первые минуты проявления желтеет, а через несколько минут обесцвечивается). При одномерном разделении 16 аминокислот для достоверного отличия Гли от Ала, имеющих близкие значения Яр целесообразно применять коллидиновый раствор нингидрина, [c.248]

В качестве детектора используют фотометр видимой области (А, = 440 и 570 нм), либо флуориметр. Разделенные аминокислоты переводят в производные, используя специальную гидравлическую схему, устанавливаемую между ионообменной колонкой и детектором. С помощью отдельного насоса подают раствор реагента (чаще всего нингидрина), который смешивается с элюатом. Полученная смесь поступает в реактор, который в простейшем случае представляет собой отрезок тефлонового капилляра. Объем реактора, его температура и расход раствора реагента подбирают таким образом, чтобы при минимальном размывании зон Лримерно за 1 мин реакция аминокислот с нингидрином произошла полностью. [c.329]

Так, при исследовании состава сложных смесей липидов на пластинах с силиказолевым связующим пластину последовательно опрыскивают нингидрином (липиды со свободной аминогруппой), молибдатным реактивом (главные фосфолипиды) с последующим нагреванием при 180°С (все присутствующие в смеси липиды), реактивом на основе малахитового зеленого (контроль результатов, полученных с помощью молибдатного реактива, и обнаружение фосфолипидов, присутствующих в очень малых количествах). Для опрыскивания пластин применяют пульверизаторы разной конструкции или продажные реагенты в аэрозольной упаковке. Точность количественных определений сильно зависит от качества и воспроизводимости детектирования, в особенности при опрыскивании хроматограмм. [c.364]

Было обнаружено, что нингидрин может образовывать сильно флуоресцирующие продукты с соединениями, содержащими аминогруппу [70, 71]. Чувствительность метода, основанного на измерении флуоресценции, выше в 10—100 раз. Фенилаланин в реакции с нингидрином образует фенилацетальдегид, который реагирует с избыточным нингидрином и первичным амином, образуя сильно флуоресцирующий продукт. Было установлено строение этого продукта [72] и на основе этого исследования был синтезирован новый реагент [73]. Это 4-фенилспиро [фуран-2(ЗН), Г-фталан]ДИОН-3,3, получивший название флуорескамина, зеагирует с первичными аминами непосредственно, образуя такие же флуоресцирующие соединения (возбуждение при 390 нм, излучение при 475 нм), как и при реакции нингидрина с фенилаце- [c.486]

Обратимся к жидкостной хроматографии, где часто прибегают к по-слеколоночным реакциям для облегчения детектирования. Например, аминокислотные анализаторы, в которых разделенные на колонке с сорбентом компоненты последовательно элюируются и смешиваются с потоком реагента — нингидрина (нингидрин дает с аминокислотами окра- [c.410]

Избирательными реагентами для определения первичных алифатических аминов являются нингидрин, 1,2-нафтохинон-4-сульфо-нат калия и л-нитрофенилдиазоний. [c.88]

Для обнаружения многих соединений можно опрыскивать пластинки специфичными реагентами, которые окрашивают эти соединения в определенный цвет примером может служить нингидрин, применяемый для обнаружения а-аминокислот. Такие специфичные реагенты обладают большими преимуществами. Во-первых, неразделившиеся соединения, которые не дают окраски с реагентом, не будут мешать анализу. Во-вторых, процесс обнаружения становится одновременно и идентификацией. Если пятно не проявляется соответствующим образом, то это означает, что что-то было сделано неправильно. [c.564]

При получении слоя силикагель — гипс для разделения аминокислот необходимо соблюдать ряд условий [82]. Не следует активировать иластинку нагреванием, достаточно просушить ее на воздухе нри разделении не допускать подъема нчидкости выше 10 см от линии старта. Наносить аминокислоты на пластинку следует в количествах, не превышающих 1—5 Л1кг. При соблюдении этих условий получают воспроизводимые результаты. Смесь аминокислот разделяли в нескольких системах 96 о-ный этанол — вода (70 30) и.нронанол — вода (70 30) н.бутанол — уксусная кислота — вода (80 20 20) фенол — вода (75 25) н.пропано.л — 34%-ный аммиак (70 30) 96%-ный этанол — 34%-ыый аммиак (70 30). Более четкое разделение достигнуто в системах н. бутаиол — уксусная кпслота — вода (60 20 20) и фонол — вода (75 25) (табл. 15) особенно хорошие результаты получены прн двумерном разделении в этих системах. Для обнаружения пятен иластинку опрыскивали реагентом нингидрин — нитрат меди. [c.91]

Нингидриновый реагент готовят в бутыли объемом 4 л, через которую тем или иным способом продувают очищенный азот. 3 л метилцеллозольва перемешивают магнитной мешалкой при продувании азотом в течение 15 мин. Добавляют 80 г нингидрина соответствующей степени чистоты и вновь перемешивают при барботировании азота в течение 15 мин. После растворения нингидрина добавляют 1 л 4 н. ацетата натрия с pH 5,5 и смесь перемешивают в атмосфере азота еще в течение 30 мин. Наконец, к раствору добавляют 1,6 г дигидрата хлорида олова (П) (хч, негидратированный). После получения прозрачного раствора прекращают подачу азота и закрывают бутыль пробкой с двумя вводами. В заключение готовый реагент передавливают азотом по тайгоновому шлангу в резервуар прибора. Предварительно продувают азотом все соединительные линии. Процедура передавливания нингидринового реагента должна занимать не более 5 мин. [c.339]

В последнее время наряду с детектированием по реакции с нингидрином широкое распространение получило детектирование по флуоресценции продуктов реакции с флуорескамином [93]. Реакция идет при комнатной температуре, а в остальном анализ напоминает обычную схему с использованием нингидрина [94]. Анализируемые вещества разделяются по колонке с ионообменной смолой, затем проходят через реакционную спираль (реактор), а флуоресценция регистрируется с помощью флуориметра. Показано, что эту систему можно использовать для анализа белковых гидролизатов [95, 96]. Схема модифицированного анализатора аминокислот приведена на рис. 32.11. Для работы на одной колонке необходимо три микронасоса первый — для подачи буферного раствора на колонку второй — чтобы довести величину pH элюата до значения 9 и третий предназначен для смешивания элюата с реагентом, представляющим собой раствор флуорескамина в ацетоне. Скорость реакции достаточно высока, что позволяет использовать короткую реакционную спираль. Далее смесь проходит через проточную кювету флуориметра, и интенсивность флуоресценции регистрируется самописцем. Одновременно много внимания было уделено выделению продуктов реакции аминов с флуорескамином, обладающих низкой полярностью, для анализа которых могла оказаться пригодной высокоскоростная хроматография. Более того, в этом случае можно было бы обойтись без реакционной спирали. Такой путь оказался приемлемым для анализа первичных аминов [97—99]. Что касается аминокислот, то большинство из них, вопреки ожиданиям, давали с флуорескамином два продукта реакции, соотношение которых определялось природой аминокислоты. [c.340]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология