Дипептиды, разделение

Проведение хроматографического разделения. На листе хроматографической бумаги нужного размера на расстоянии 4 см от нижнего края проводят стартовую линию, на которую наносят исследуемый раствор, содержащий дипептиды. Безбелковый экстракт ткани после упаривания на роторном испарителе чаще всего растворяют в смеси НСООН—СНзСООН—Н2О (7 5 13) или в 10%-ном изопропаноле, чтобы 1 мл раствора соответствовал 1,5—2 г ткани и наносят на хроматограмму небольшими порциями (0,01—0,03 мл), подсушивая бумагу теплым воздухом. На эту же хроматограмму наносят стандартные растворы карнозина и анзерина, содержащие по 0,03—0,05 мкмоль в пятне. Бумагу сшивают в виде цилиндра (следят, чтобы края не соприкасались) и помещают в хроматографическую камеру в строго вертикальном положении. Когда фронт растворителя дойдет до верхнего края бумаги, хроматограмму вынимают и высушивают под тягой в течение 2—3 сут. От следов фенола хроматограмму отмывают горячим ацетоном. Для этого сухую хроматограмму сворачивают трубочкой, перевязывают ниткой, помещают в цилиндр, заливают кипящим ацетоном и оставляют на 10—15 мин промывание повторяют 2—3 раза. Высушивают под тягой. [c.193]

При разделении пептидов с помош,ью ГХ возникает ряд проблем, связанных с обилием возможных соединений. Даже разделение природных аминокислот, число которых невелико — довольно трудная задача. Комбинация 18 аминокислот в дипептиды дает 18 =324 различных соединения комбинация в трипептиды приводит уже к 5832 (18 ) разным компонентам. С ростом длины цепи экспоненциально возрастает число соединений. [c.338]

В случае применения подобной методики для анализа последовательности аминокислот необходима идентификация разделенных соединений, однако возможности ГХ в, данном случае довольно ограничены. Кроме того, что необходимы колонки различной избирательности, нужно знать и относительные удерживаемые объемы исследуемых соединений. Идентификация непосредственно зависит также от доступности подходящего стандарта. Если дипептиды можно синтезировать химически, то для более длинных пептидов это очень трудная задача. Применение ГХ только в целях разделения оправдано лишь тогда, когда выделенные пептидные производные можно уверенно идентифицировать и определить их последовательность с помощью других методов. [c.338]

В заключение можно сказать, что с помощью ГХ можно идентифицировать в виде дипептидов большинство природных аминокислот. Возможность детектирования многих аминокислот даже в виде трипептидов, а в исключительных случаях и тетрапептидов, дает в руки исследователя быстрый и относительно несложный метод определения последовательности олигопептидов средней длины. ГХ применяется сейчас в основном как быстрый и эффективный метод разделения. Более полное использование достоинств ГХ до- [c.349]

Большое значение приобрело разделение диастереоизомерных метиловых эфиров N-ТФА-дипептидов [115]. Его проводили коли- [c.351]

Рис. 1. Газохроматографическое разделение синтетической смеси N-ТФА-метиловых эфиров аминокислот и дипептидов.

До сих пор, за исключением нескольких диастереомерных трипептидов [19], разделение диастереомеров существенным образом исследовалось только в классе дипептидов. Для определения [c.171]

Подробное исследование факторов, играющих основную роль при разделении энантиомеров аминокислот на дипептид- [c.64]

На рис. 1 показано разделение синтетической смеси аминокислот и дипептидов в виде М-ТФА-метиловых эфиров на стеклянной капиллярной колонке с программированием температуры. При использовании данной колонки, изготовленной для специальных задач, можно видеть две отличающиеся области аминокислот (от аланина до фенилаланина) и дипептидов (от аланилаланина до фенилаианилфенилаланина). Ясно, что эта специфическая смесь содержит не все возможные аминокислоты и дипептпды. [c.143]

Рис. 4.16. Разделение смеси производных дипептидов [83].

Гистидинсодержащие дипептиды определяют в безбелковом экстракте мышц после разделения их методами хроматографии на бумаге, в тонком слое силикагеля или ионообменной хроматографии на колонке (в автоматическом анализаторе аминокислот). Как и все первичные амины, дипептиды можно обнаружить по реакции с нингидрином, флуорескамином и с о-фталевым диальдегидом. Карнозин, кроме того, может быть определен по цветной реакции Паули с диазотиро-ванной сульфаниловой кислотой. [c.191]

Первая часть поставленной задачи самая трудная. Нужно подобрать такой метод хроматографии на бумаге, который бы обеспечил оптимальное разделение смеси дипептидов. Наибольшие возможности дает двумерная хроматография с обнаружением нингидрином [401, орцином [117] или хлорированием [126]. Для этого проявляют параллельно две хроматограммы одну используют для обнаружения, другую — для выделения пептидов. Элюаты упаривают на пластинке из органического стекла. [c.480]

Аланиновый трипептид. В исходных для минимизации приближениях геометрия каждого остатка аланинового трипептида соответствовала одной из оптимальных форм R, В или L молекулы A -L-Ala-NHMe (табл. 11.19). В табл. 11.20 представлены результаты минимизации всех 27 возможных конформаций. В зависимости от характера формы основной цепи они подразделяются на три группы. О формах пептидной цепи и их классификации подробно будет рассказано в следующей главе. Сейчас лишь отметим, что конформации любого трипептидного участка по форме основной цепи могут быть разделены на свернутые, развернутые и полусвернутые. Группу со свернутой формой составляют конформации, в которых звено Ь сближено с з и 4, а 2 - с (рис. 11.29) они являются комбинациями свернутых форм смежных дипептидов R-R, R-B, B-L и др (табл. П.21). Развернутые формы трипептида образованы из развернутых дипептидных форм В-В, B-R, R-L и др. В группу полусвернутых форм входят конформации, которые являются комбинациями свернутых и развернутых дипептидных форм Целесообразность такого разделения, как будет показано позже, обусловлена наличием у конформаций каждой группы специфических средних взаимодействий. [c.198]

К началу работы Фишера была известна примерно дюжина аминокислот, как продуктов расщепления белков, другие были открыты немного позже. Фишер начал работать по нескольким направлениям синтез аминокислот и расщепление их рацемических форм исследования производных аминокислот для того, чтобы ускорить разделение смесей аминокислот и, что особенно важно, рекомбинация двух или более аминокислот в вещества, которые он назвал полипептидами . Величие фишеровского подхода к проблеме полипептидного синтеза произвело прямое воздействие и было склонно затмить другие пионерские работы в этой области, такие как работы КурЦиуса. В 1901 г. он объявил о синтезе гли-цил-глицина — простейшего дипептида, а в 1907 г. — о 18-ти член-ном полипептиде лейцил-триглицил-лейцил-триглицил-лейцил-окта-глицил-глицина. Даже по современным стандартам это было значительным достижением в синтезе. Синтез глицил-глицил-глицина иллюстрирует общий подход, примененный Фишером схема (1) его стратегия и принципы — замечательный предшественник [c.217]

Чтобы повествование строилось на четко разделенных по материалу разделах, данная группа была подразделена на небольшие линейные пептиды, циклические дипептиды (2,5-диоксопиперази-ны), циклические гомо- и гетеродетные, большие и смешанные пептиды под этими названиями и сгруппированы различные классы родственных соединений. Поскольку рассматриваемая область характеризуется обширным материалом, интересным не только с точки зрения химии, на эту тему за последние годы появился ряд обзоров общего характера, хотя литература обобщена также и в ежегодных обзорах [39]. Кроме того, имеется множество превосходных обзоров, посвященных отдельным аспектам этой общей темы, и ссылки на эти обзоры будут приведены в соответствующих разделах. [c.295]

Как уже отмечалось, поскольку в смеси находится большое число различных соединений, не приходится рассчитывать на полное разделение компонентов, тем более, что разделяющие фазы обладают относительно слабой избирательностью. В связи с этим целесообразно анализировать не слишком длинные пептиды после проведения их частичного гидролиза. Например, при расщеплении декапептида в наиболее благоприятных условиях получается 9 дипептидов, 8 трипептидов и т. д. Если данный пептид состоит из 10 различных аминокислот, которые все детектируются при ГХ, тогда необходимо разделить смесь, состоящую из 27 соединений, не считая тетрапепти-дов, которые, вероятно, тоже могут быть обнаружены. Все возможные короткие фрагменты, разумеется, идентифицировать довольно трудно. Указанная область размеров длины цепи (от аминокислоты до тетрапептида) является, несомненно, предельной для возможностей этого метода. [c.343]

Существует группа ферментов, которые при гидролизе пептидов и белков отщепляют N- или С-концевые дипептидные фрагменты. К ним относятся катепсин С, или дипептидиламинопептидаза I (ДАП 1), и катепсин В. или дипептидилкарбоксипептидаэа. Процесс определения аминокислотной последовательности с помощью этих ферментов состоит из нескольких стадий I) гидролиз исследуемого соединения соответствующей дипептидазой, 2) разделение и идентификация отщепленных пептидов, 3) определение порядка расположения дипептидов в полипептидной цепи исследуемой молекулы. [c.69]

Более детально разработан метод введения второго асимметрического центра в соединения рацемических смесей. В ряде систем наблюдалось, что при разделении ьь, ы>, пь и оп диасте-реомеров на оптически неактивных неподвижных фазах ьь- и оо-соединения элюируются вместе перед ьп- и оь-изомерами, которые также выходят вместе [45, 100, 127]. Это означает, что для однозначного разделения рацемической смеси при введении второго асимметрического центра следует применять чистые энан-тиомеры. В связи с разделением диастереомерных дипептидов на сефадексе [146] было высказано предположение о том, что в оь соединениях предпочтительно образование циклических структур, тогда как в ьь- и оо-формах существует тенденция к сохранению вытянутых цепей. Диастереомеры использовались для разделения оптических изомеров путем кристаллизации еще со [c.97]

Разделение сильно различающихся по составу соединений с программированием температуры не является единственной возможностью применения ГЖХ — можно также осуществить сложное разделение изомеров, преимущественно в изотермических условиях на высокоэффективных капиллярных колонках. На рис. 2 показано разделение на стеклянной капиллярной колонке с пропиленгликолевой жидкой фазой некоторых родственных диастереомерных метиловых эфиров М-ТФА-дипептидов, входящих в состав синтетической смеси. В данной смеси представлены все возможные комбинации диастереомерных дипепти-дов, полученных только из двух вь-аминокислот. [c.143]

Одним из наиболее интересных результатов первоначального приложения ГЖХ к метиловым эфирам N-ТФА-пептидов было успешное разделение диастереомерных метиловых эфиров N-ТФА-дипептидов Вейгандом, Кольбом, Проксом, Тилаком и Томидой [10], разделившими N-ТФА-метиловые эфиры L-Ala-bPhe и ь-А1а-о-РЬе при 200°С всего лишь на 2-метровой силиконовой набивной колонке. [c.171]

Совершенно очевидно, что метиловые эфиры N-ТФА-дипептидов, образующихся при частичном гидролизе высшего пептида,— это не единственно возможные диастереомерные производные, пригодные для определения конфигурации аминокислот методом ГЖХ. Исследуемый пептид можно подвергнуть также полному гидролизу, а получающиеся аминокислоты превратить затем в подходящие производные, вводя для образования разделяемых ГЖХ диастереомеров второй асимметрический центр. Длг этой цели успешно используются метиловые эфиры N-ТФА-аминокислот, если, как сообщалось Гил-Авом [32], применять стеклянный капилляр, покрытый оптически активной жидкой фазой в таких условиях разделение энантиомерных производных l- и о-амино-кислот достигается за счет образования водородносвязанного дцастереомерного ассоциативного комплекса с жидкой фазой. В качестве производного можно взять также эфир с оптически активным спиртом, согласно Чарльзу [37] и Гил-Аву [38, 39], применившими 2-бутиловые или 2-н-октиловые эфиры. Аналогичной методикой пользовались Поллок и сотр. [40—42, 78]. [c.172]

Структурные и динамические свойства воды, находящейся в непосредсшенной близости к дипептиду, в так называемой сольватной оболочке , могут быть охарактеризованы путем разделения молекул воды, участвующих в моделировании, на группы в соответствии с тем, находятся они около полярных групп растворенного вещества (полярные), около неполярных групп (неполярные) или вне первого сольватного слоя (объемные). Это разделение схематически представлено на рис. 2.5. Центральная пустая область, непосредственно окружающая молекулу дипептида, представляет собой область, из которой центры (т. е. атомы кислорода) молекул растворителя исключены растворенным веществом. Внешний квадрат соответствует стенкам ячейки, которая включает все 195 молекул воды. Индивидуальные молекулы воды классифицируются на группы в соответствии со средним расстоянием между их атомом кислорода и каждым из амидных атомов водорода или карбонильным атомом кислорода двух пептидных звеньев и тремя метильными атомами водорода среднее значение берется по всему времени моделирования. Каждая из 195 молекул воды относится к одному из трех типов молекул растворителя полярному — если среднее расстояние по отношению к любому из четырех полярных атомов меньше 4 А, неполярному — если среднее расстояние до полярного атома больше 4А, но меньше 5А до ме- [c.40]

Наиболее подходящими оптически активными НЖФ для разделения энантиомеров аминокислот оказались циклогексиловые эфиры трифторацетилированных дипептидов N-ТФА-Ь-валил-Ь-ва-лина [149, 150] и N-TФA-L-фeнилaпaнил-L-лeйцинa 1151], первый из которых обладал наибольшей эффективностью разделения при 110° С, а последний, имеющий больший молекулярный вес и меньшую летучесть,— при 140° С [151]. [c.63]

Разделить с помощью одной лишь хроматографии эту сложную смесь продуктов частичного расщепления цепи — аминокислот, дипептидов, трипептидов, тетрапептидов и т. д. — было очень трудно. Зангер и Туппи применили другие методы разделения (электрофорез и адсорбцию на угле и на ионообменных смолах), с помощью которых они разделили пептидные обломки на группы. Теперь они подвергали анализу уже эти более простые смеси с помощью хроматографии на бумаге. Им удалось выделить из разрушенной цепи 22 дипептида, 14 трипептидов и 12 более крупных обломков (см. фиг. , А). Хотя эти вещества были получены лишь в микроскопических количествах, тем не менее специальными методами они были идентифицированы и была установлена последовательность расположения образующих их аминокислот. [c.97]

До сих пор не найдено доказательств того, что 3, 4-диокси-фенилаланин является составной частью белков. Это соединение интересно с той точки зрения, что оно является промежуточной ступенью в биосинтезе адреналина и в превращении тирозина в меланин. Несколько пептидов, содержащих С-концевой остаток DL-3, 4-диоксифенилаланина, получены фосфороксихлоридным [1454] и хлорангидридным [1601] методами. Гидролиз синтезированных таким о бразом метиловых эфиров карбобензоксидипептидов раствором едкого натра в атмосфере азота и последующий каталитический гидрогенолиз протекают гладко и не сопровождаются побочными процессами [1454]. Лоссе и сотр. [1453а] получили ряд дипептидов, используя в качестве исходного соединения фталил-оь-3,4-диоксифенилаланин. (О разделении рацемического dl-З, 4-диоксифенилаланина на оптические антиподы см. [2383].) [c.294]

Рис. 4.16 иллюстрирует применение адсорбционной хроматографии для разделения смеси ацетатов трех дипептидов на полностью пористом силикагеле (рис. 4.16, а) и поверхностно-пористом силикагеле (рис. 4.16,6). На рис. 4.17 показана хроматограмма смеси трех производных порфирина, полученная на поверхностно-пористом силикагеле. Два недостаточно разрешенных пика, соответствующих метиловому эфиру феофорби-да-а, по-видимому, принадлежат двум эпимерам, отличающимся по конфигурации относительно единичного асимметрического центра. Уорд и Пелтер [83] разделили также смесь трибензоатов метилгликозидов — производных о-глюкозы, о-галактозы и о-аллозы — и добились четкого разделения а- и р-аномеров 2,3,6-трибензоата о-глюкопиранозида, различающихся по конфигурации относительно единичного асимметрического центра (рис. 4.18). [c.216]

Уиланд и Буку [63а] разработали микрометод для определения конфигурации аминокислоты путем хроматографического разделения полученных из этой кислоты ьь- или ьо-дипептидов. [c.490]

Фельткамп и Пфроммер [157] провели хроматографический анализ диастереомерных дипептидов на слоях целлюлозы и силикагеля. Трипептиды разделяли хроматографически на слоях силикагеля со смесями н-бутанол—уксусная кислота—вода (4 1 1 или 4 1 5) и н-бутанол—муравьиная кислота—вода (5 1 1) [158]. Для разделения пептидов пригодны самые различные комбинации растворителей, в том числе и предназначенные для разделения аминокислот. [c.510]

Исследования селективных синтезов дипептидов с помощью "двсйной асимметрической индукции" [64] требуют предпочтительно определения диастереомерного и энантиомерного соотношения четырех конфигурационных изомеров (т. е. КН /55 и Н5 /5Д ). Для этих исследований может оказаться полезным описанное в работе [ 65] разделение дипептидов на две пары энантиомеров методом газовой хроматографии на хиральной неподвижной фазе. [c.90]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология