Колонки в гель-хроматографии

Гель-хроматография (или гель-проникающая хроматография) является одним из вариантов жидкостной хроматографии, в котором растворенное вещество распределяется между свободным растворителем, окружающим гранулы геля, и растворителем, находящимся внутри гранул геля. Так как гель представляет собой набухшую структурированную систему, имеющую различные по размерам поры, то разделение в данном виде хроматографии зависит от соотношения размеров молекул разделяемых веществ и размеров пор геля. Помимо размеров молекул, которые можно принять пропорциональными молекулярным массам, существенную роль для гель-хроматографии играет форма молекул. Особенно большое значение этот фактор имеет для растворов полимеров, в которых при одной и той же молекулярной массе молекулы могут принимать различную форму (сферическую или другую произвольную) в соответствии с их конформацией и вследствие этого по-разному вести себя в колонке. Дальнейшие рассуждения справедливы для молекул, имеющих сферическую форму. [c.237]

По данным гель-хроматографии строят график зависимости = рассчитывают Уо, зная массу сухого сефадекса в колонке, и, воспользовавшись данными табл. 3.2, приведенной выше, рассчитывают число теоретических тарелок N. ВЭТТ и Кау ДЛЯ щавелевой кислоты по уравнениям (3.2) — (3.4), (3.22). [c.243]

Хроматографическое разделение смеси веществ в рамках ее жидкостно-жидкостного варианта можно проводить не только на основе распределения компонентов анализируемой смеси между двумя несмешивающимися жидкостями, но и гель-хроматографией. В отличие от распределительной в гель-хроматографии подвижной и неподвижной фазами служит одна и та же жидкость — растворитель. При этом та часть жидкости, которая протекает вдоль слоя твердого носителя — зерен геля, выполняет функцию подвижной фазы и переносит компоненты разделяемой смеси вдоль колонки. Другая часть той же жидкости проникает в лоры зерен геля и выполняет функцию неподвижной фазы. [c.225]

Однако разделение смеси веществ методом гель-хроматографии возможно и в том случае, когда молекулы компонентов разделяемой смеси обладают небольшим различием в размерах и, следовательно, в молекулярных массах. Тогда следует подбирать гель с такими размерами пор, чтобы они были доступны для всех молекул веществ смеси. Очевидно, что при прочих равных условиях разделение в этом случае становится более полным при достаточно больших длинах колонок. Можно использовать гели, поры которых не доступны молекулам лишь одного вещества, а для остальных веществ они проницаемы, но в разной степени. [c.226]

В гель-хроматографии особое значение имеет заполнение колонки гелем. Метод заполнения зависит от типа применяемого геля. Если используются мягкие гели, то гель предварительно набухает в растворителе, применяемом для разделения. Набухший гель помещают в колонку, частично заполненную растворителем. Гель оседает в колонке до тех пор, пока не образуется слой требуемой длины. Затем избыток растворителя медленно сливают, открыв нижний кран на колонке. Если высота слоя геля недостаточна, а колонка не вмещает следующие порции геля, то растворитель сливают через кран и в колонку вносят следующую порцию геля. Так повторяют до достижения требуемой высоты слоя геля. [c.232]

В отличие от адсорбционной и распределительной хроматографии в гель-хроматографии применяют колонки диаметром не меньше 8—10 мм. Увеличение диаметра колонки до 50 мм вызывает увеличение эффективности колонки, а не уменьшение, как это наблюдается в адсорбционной и распределительной хроматографии. [c.233]

Теоретическое пояснение. Разделение веществ методом гель-хроматографии проводят в колонках, заполненных гелем (рис. [c.235]

Рис. 253. Колонка для гель-хроматографии

Рис. 10.8. Схема гель-хроматографии 1 — на колонку с гелем (сферические светлые частицы) нанесен исследуемый раствор 2 — после промывания колонки растворителем.

Разделяющий эффект гель-хроматографии обусловлен тем, что молекулы малых диаметров способны проникать в гель глубже и удерживаться там дольше, поэтому при элюировании они выходят из колонки после более крупных молекул. Происходит как бы просеивание молекул. Слой геля в хроматографической колонке характеризуют высотой к и диаметром с1. При больших диаметрах скорость потока и разделения больше, чем при малых диаметрах. Однако разделение сложных смесей производят на узких и длинных колонках. [c.361]

Принцип метода. Метод молекулярно-ситовой хроматографии (гель-хроматографии, гель-проникающей хроматографии или эксклюзионной хроматографии) —это вид твердо-жидкостной хроматографии, основанный на различной способности молекул веществ, отличающихся своими размерами, проникать внутрь заполненных растворителем пор неподвижной фазы и задерживаться там на различное время. Молекулы, имеющие большой размер, не проникают совсем или проникают только в часть пор носителя и вымываются из колонки раньше, чем маленькие молекулы, вследствие чего обеспечивается разделение по размеру молекул в растворе. [c.69]

Подготовка исследуемого материала. Раствор белка, наносимый на колонку, должен иметь тот же состав и те же значения pH и ионной силы, что и исходный буферный раствор, которым уравновешен ионообменник. Образец переводят в исходный буферный раствор, подвергая его предварительно диализу или гель-хроматографии. Если объем пробы, предназначенный для ионообменной хроматографии, невелик, образец можно развести исходным буферным раствором. Нерастворимые компоненты удаляют центрифугированием или фильтрованием. Если [c.110]

МЕТОД ГЕЛЬ-ХРОМАТОГРАФИИ НА КОЛОНКАХ [c.116]

РНКаза поджелудочной железы гидролизует фосфодиэфирные связи внутри молекулы одноцепочечной высокополимерной РНК. В результате образуется смесь олиго-, ди- и мононуклеотидов, которые могут быть отделены от фермента и субстрата — высокополимерной РНК — гель-хроматографией на колонке. Разделение рибонуклеотидов, различающихся по числу нуклеотидных звеньев, может быть проведено методом ионообменной хроматографии. [c.176]

ГЕЛЬ-ХРОМАТОГРАФИЯ НА КОЛОНКЕ С СЕФАДЕКСОМ [c.176]

Указанные размеры колонок при гель-хроматографии и при ионообменной хроматографии рассчитаны на получение фермента из 500 г мышечной массы. [c.245]

Отличительной особенностью гель-хроматографии является то, что в сшитых макромолекулах (стр. 300) гелей имеются заполненные растворителем молекулярного размера поры определенных габаритов, в которые входят меньшие из разделяемых молекул и не входят большие. Поэтому, в отличие от адсорбционной хроматографии, в гель-хроматографии первыми проходят сквозь колонку (и первыми элюируются растворителем) молекулы [c.45]

Проникающая гель-хроматография. Этот метод довольно трудоемок при измерении размеров пор, если кремнезем применяется в качестве материала для набивки хроматографической колонки. Метод основан на определении глубины проникновения в кремнезем молекул или полимеров различных размеров, которое происходит до тех пор, пока не начнут препятствовать такому проникновению эффекты поглощения порами [184]. [c.691]

Ранее уже отмечалось, что применение гель-хроматографии в тонком слое до сих пор ограничивалось разделением белков в водных буферных растворах. Исключение составляют отдельные эксперименты с пептидами [86, 87] и мукополисахаридами 93], а также попытки предварительной очистки рибонуклеоти-дов [94]. Однако есть все основания считать, что наряду с разделением на хроматографических колонках гель-хроматография в тонком слое найдет широкое применение в качестве микрометода и в этих областях. Количества образца, требующиеся для тонкослойной хроматографии, сравнительно малы, оборудование несложно. Метод позволяет за сравнительно короткий срок провести одновременно большое число опытов. Поэтому гель-хроматография в тонком слое особенно эффективна для определения молекулярного веса белков (см. стр. 153). Несколько меньшую (по сравнению с анализом на колонках) точность этого метода можно компенсировать статистической обра- [c.90]

По окончании испытаний анализируют продукты реакции определяют количество бензина в катализате, концентрацию легких углеводородов С1—Ср, и водорода в газе и содержания кокса на катализаторе. Для анализа катализата используют фрактометр 8 с длиной колонки 183 см. Неподвижной фазой служит силиконовая смазка, нанесенная иа хромосорб Ш, а газом-носителем — гелий. Углеводородные газы анализируют в двух хроматографах 9 и 10. В хроматографе 9 определяют содержание водорода и метана. Колонка этого хроматографа заполнена молекулярными ситами, газом-носителем служит азот. В приборе хроматографе 10 определяют углеводороды Сг—Се, используя в качестве неподвижной фазы бутилмалеат, а в качестве газа-носителя — гелий. Анализ катализата проводят на специальном анализаторе углерода. [c.163]

Предварительное фракционирование по молекулярным массам дает большой эффект при последующем фракционировании на хроматографических колонках. Так, если смесь должна быть фракционирована в широком диапазоне молекулярно-массового распределения, то применение гель-хроматографии малоэффективно, так как раствор должен быть пропущен через ряд колонок, чтобы достичь нужной степени разделения индивидуальных компонентов. Но если исходную смесь предварительно разделить с помощью ультрафильтрации на несколько фракций, то дальнейшее фракционирование на хроматографических колонках не представляет труда. При этом разделение будет пр01ведено не только быстрее, но и качественней. Более того, ультрафильтрацией рас- [c.284]

Гель-хроматография является еще одним вариантом жидкостной хроматографии, в котором разделение компонентов осуществляется в соответствии с размером их молекул. Во всех хроматографических методах разделения вещества, особенно относящиеся к одному гомологическому эяду, элюируют в порядке возрастания молекулярной массы. При гель-хроматографии порядок выхода обратный небольшие молекулы попадают в сетку ге-.ля и удерживаются в ней, в то время как большие молекулы не могут проникнуть в полимерную сетку и вымываются из колонки первыми. [c.91]

В гель-хроматографии применяются наполнители различных марок, отличающиеся размером пор. При использовании в качестве наполнителя, например, сефадекса марки 0-50 для разделения фракций поли-21Тиленгликоля Н(-СНОН—СНг—),,0Н первыми будут выходить из колонки фракции с относительной молекулярной массой больше 10 000 (/< =0). Последними будут выходить фракции полимера с молекулярной массой, меньше 500, и в их числе часто присутствующие минеральные соли (ЫаС1 и др.), для которых К = Таким образом, с помощью се( )адекса 0-50 могут быть разделены фракции полиэтилеигликоля с молекулярной массой в области 500—10 000. [c.59]

Схема установки для проведения гель-хроматографии привед< на на рис. 18. Анализируемый раствор вносится в верхнюю часть колонки 5 и проходит по колонке с растворителем (водой), подаваемым из сосуда 2. Выходящий из колонки раствор для регистрации фракций полимера (полиэтилеигликоля) смешивается с реагентом (0,01 М раствор иода), который поступает из емкости /. При смещивании образуется окрашенное комплексное соединение. Смесь проходит через проточную кювету 13 фотоэлектроколориметра КР, с помощью котор ого измеряют светопоглощение раствора. Сигнал от фотоколорнметра через щит подается на самопишущий потенциометр 10 (КСП-4). [c.60]

Примером может служить применение гель-хроматографии для диагностики заболеваний щитовидной железы. В этом случае используется избирательное сродство трииодтирозина к сефадексу. Предварительно сыворотку инкубируют в стандартных условиях с гормоном, меченным радиоактивным иодом, затем хроматографируют на колонке с сефадексом. Растворителем служит вода. В результате получают три ника пик связанного с белком гормона, пик свободного гормона и между ними пик радиоактивного иода, образовавшегося при фотохимическом разложении гормона. Диагноз устанавливают по количеству иода, т, е. по величине пика. [c.233]

За последние годы широкое применение для разделения высокомолекулярных веществ и определения их молекулярной массы нашел предложенный Л. Поратом и П. Флодином метод гель-фильтрации (гель-хроматографии). Гель-хроматография состоит в фильтровании исследуемого раствора через колонки, заполненные зернами набухающего трехмерного полимера (сефадекса). Набухшие зерна сефадекса представляют собой своеобразные клетки , внутрь которых могут проникнуть путем диффузии только молекулы (ионы) подходящего размера. Более крупные молекулы проходят с фильтрационным потоком мимо зерен сефадекса (рис, 10.8). Набор различных марок сефадексов с возрастающим размером клеток позволяет отделять низкомолекулярньк вещества от высокомолекулярных, разделять макромолекулы, изучать образование ассоциатов в макромолекулярныхрастворах. [c.299]

Процессы разделения компонентов смесн в гель-хроматографии проводят либо в хроматографгпеских колонках, заполненных сорбеиго. 1 [c.285]

К наиболее распространенным физико-химическим методам определения молекулярной массы белков наряду с седиментационными относятся гель-хроматография (на колонках и в тонком слое), а также электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсуль-фата натрия. Использование этих методов не требует сложной аппаратуры и большого количества исследуемого материала. Получаемые результаты хорошо воспроизводятся и, как правило, коррелируют с данными, полученными другими методами. [c.116]

Гель-хроматография. Полученный раствор наносят на колонку с сефадексом G=100 (2,5x100 см). Уравновешивание колонки и элюцию осуществляют тем же буфером. Фракцию фермента разливают на порции и хранят при —70° С. [c.231]

Гель-хроматография. Раствор фосфофруктокиназы наносят на колонку (4x50 см), заполненную биогелем А—1,5т, предварительно уравновешенную буфером Б. Этим же буфером проводят элюцию белка с колонки. Во фракциях измеряют концентрацию белка и ферментативную активность. Фракции белка, содержащие наибольшую активность, объединяют. К объединенному раствору добавляют сульфат аммония до 557п-ного насыщения. Продолжают перемешивание в тече- [c.244]

Повторная гель-хроматография. Раствор фосфофруктокиназы наносят на колонку (2,2x60 см), заполненную биогелем А—1,5т, уравновешенную буфером А. Фермент элюируют тем же буфером. Фракции с наибольшей удельной активностью объединяют. [c.245]

Более убедительными были работы, посвященные очистке выделенных соединенрй методами хроматографии, гельфильтрации и электрофореза. Наибольший интерес в этом отношении представляет исследование лигнинуглеводных комплексов из черного щелока, полученного при сульфатной варке древесины березы [19]. Фракционным осаждением, электрофорезом в колонках с гелем хроматографией на геле удалось показать, что основная масса растворённого лигнина не содержала связанных углеводов. Однако часть лигнина выделялась вместе с гемицеллюлозами. Попытки разделить их методами электрофореза и гельфильтрации не дали положительных результатов. В процессе разделения указанными методами углеводы перемещались с лигнином примерно в одной пропорции. Отсюда был сделан вывод о существовании лигнингемицеллюлозного комплекса в черном щелоке. [c.295]

Бернс и Чилтон [163] получили патент на способ, основанный на гель-хроматографии. Декстрановый гель с размером пор 40—120 мкм использовался для заполнения колонок. Кремнезем со средней молекулярной массой 6 млн. (т. е. со средним размером частиц 20 нм) разделялся по размерам во всей области молекулярных масс. Другие авторы [164] использовали шарики из пористого стекла для заполнения колонок с целью их применения в эксклюзионной хроматографии коллоидов. Применительно к условиям разделения коллоидного кремнезема толщина двойного слоя на поверхности частиц при pH 9,5 составляла 6 нм. Поэтому эффективный диаметр частиц оказался на 12 нм больше, чем истинный, а эффективный диа- [c.475]

Айлер и Мак-Квестон [668], используя процесс коацервации, приготовили другой тип микросферических пористых частиц для применения в хроматографии. В этом случае для получения од нородных пор желаемого размера применяли коллоидные частицы одинакового размера. Способ наполнения хроматографических колонок такого типа был запатентован Кирклендом [669]. Однородные по размеру глобулы диаметром 5—10 мкм приготовлялись из однородных плотных, более мелких кремнеземных частиц [670]. Описаны их хроматографические характеристики [671, 672]. Киселев и др. [673, 674] изучили влияние размеров пор на хроматографическое разделение. Микросферы с поверхностной пористостью могут быть изготовлены путем осаждения слоев, состоящих из частиц коллоидного кремнезема, на поверхности стеклянных шариков, на которых наращивается однородное пористое покрытие, способное удержать неподвижную фазу, играющую роль адсорбента. Киркленд и соавторы [675— 678] описали xapaктepи тикIf подобных систем. Микросфериче-ские частицы с широкими порами используются в эксклюзивной или гель-хроматографии. Приготовление таких кремнеземных материалов и их использование для разделения растворимых полимеров по молекулярным массам описано в ряде статей [679— 683]. Диаметры пор в таких частицах составляли 200—1500 А. Соотношение, связывающее диаметр пор и удельную поверх-27 [c.835]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология