ДНФ-производные аминокислот, хроматография па колонках

Разделение каких-либо производных аминокислот методом газо-жидкостной хроматографии при заданных условиях зависит как от различия в их точках кипения, так и от отклонения их растворов в стационарном растворителе от идеальных. В случае неполярных жидких фаз, подобных высокополимерному углеводороду типа апиезона или силиконовых масел, которые не вызывают поляризации анализируемых соединений, последние разделяются главным образом в соответствии с их точками кипения. Поэтому такие соединения, как структурные изомеры лейцина и изолейцина, близкие по температурам кипения, отделяются друг от друга с трудом. С другой стороны, разделение компонентов на полярной жидкой фазе определяется не только давлением их паров, но и специфическим взаимодействием молекул растворителя и разделяемых веществ. С этой точки зрения применение полярных стационарных жидких фаз является более перспективным, так как должно одновременно обеспечивать высокую селективность разделения летучих производных аминокислот различных классов наряду с высокой эффективностью разделения группы аминокислот, принадлежащих к одному гомологическому ряду. Кроме того, использование полярной фазы приводит к подавлению адсорбционных свойств твердого носителя и позволяет хроматографировать высококипящие производные аминокислот на колонках с низким содержанием стационарной жидкой фазы. Последнее связано со снижением температуры колонки и, следовательно, увеличением эффективности хроматографического разделения. [c.257]

Идеальным носителем является носитель, инертный по отношению к разделяемым веществам. Однако получение таких носителей связано с рядом технических трудностей, поэтому область применения распределительной хроматографии на колонках невелика и ограничивается разделением органических кислот, дубильных веществ, динитрофенильных производных аминокислот и др. [2—6]. [c.74]

Для ГХ-анализа, разумеется, прежде всего необходим газовый хроматограф. Ниже дано описание этого прибора, подробное настолько, насколько это необходимо с точки зрения анализа производных аминокислот. Принцип работы прибора иллюстрирует фиг. 65. Прибор состоит из источника газа-носителя и различных измерительных и контрольных приборов, с помош ью которых поддерживается постоянный поток газа. Газ-носитель, прежде чем попасть в колонку, проходит через дозатор, куда вводится 0,05—5,0 мг анализируемого веш ества здесь веш ество испаряется и переносится га-зом-носителем в колонку (или капилляр). В колонке происходит разделение по принципу различного удельного давления паров компонентов и их различной растворимости в разделяюш ей жидкости. Различные скорости миграции компонентов обусловлены так- [c.295]

Идеальным условием для получения четкого разделения смеси в распределительной хроматографии на колонке является инертность носителя к разделяемым веществам. Однако вследствие ряда технических трудностей, связанных с получением инертных носителей, область применения распределительной хроматографии на колонке невелика и ограничивается в настоящее время разделением органических кислот, дубильных веществ, динитро-фенильных производных аминокислот, гексахлоранов и некоторых других веществ . [c.106]

В последнее время наиболее широкое распространение среди различных К-замещенных производных аминокислот получили их К-ацилированные эфиры. Относительно высокая упругость паров, термическая стойкость и сравнительно легкая возможность количественной конверсии аминокислот разных классов определяют интерес к использованию эфиров К-ацилпроизводных для анализа аминокислот методом газо-жидкостной хроматографии. Однако следует отметить, что, как правило, непосредственное сравнение результатов хроматографического разделения К-ацил-производных аминокислот, полученных отдельными авторами, практически невозможно, поскольку это разделение проводилось для разных производных в несопоставимых условиях с использованием различных по эффективности разделительных колонок, применением отличных по строению и характеру стационарных растворителей и твердых носителей, причем количество неподвиж- [c.262]

Важное значение белков и составляющих их аминокислот обусловило большой интерес к определениям аминокислот методом ГХ. Существуют различные методы автоматического анализа с использованием хроматографии на колонке, однако ГХ обеспечивает более быстрый анализ и позволяет уменьшить величину анализируемой пробы, Было предложено большое число различных по типу производных, чтобы осуществить количественное определение двадцати аминокислот, обычно обнаруживаемых в белках. Выбор наилучшего производного осложняется большей частью тем, что эти аминокислоты содержат 12 различных функциональных групп, а желательно получить метод, применимый для анализа все>с [c.137]

В газовой хроматографии на открытых капиллярных ко лонках внутренние стенки колонок перед нанесением непод вижной фазы подвергают щелочной обработке или травлений Так, авторы работы [25] обрабатывали капилляр из мягкоп стекла 2,5 н раствором гидроксида натрия в течение 2 - 8 при 100°С Полученную таким образом колонку использовал) для разделения сильных производных аминокислот Оптималь ные условия предварительной обработки колонок такого тиЛ подробно изучены Исии и сотр [45] [c.66]

Что касается полифункциональных аминокислот, то дипептиды, содержащие Глу, Лиз и Орн, не представляют трудностей ни для получения производных, ни для хроматографии. Дополнительные функциональные группы защищают в ходе обычного получения производных. Однако у дипептидов, содержащих Лиз и Орн, в результате адсорбции наблюдается сильное размывание пиков на колонках, содержащих менее 5% жидкой фазы [122]. Изомерные а- и р-пептиды, содержащие Глу, при ГХ разделяются [114, 121]. В аналогичных исследованиях метиловых эфиров N-ТФА-производ-ных пептидов, содержащих Асп, при нагревании обнаружено образование циклических имидов, зависящее от температуры системы и более заметное для р-пептида [106]. Отделить имиды от соответствующих а-пептидов можно только на капиллярных колонках. Возможно, при прямом внесении образца в колонку подобных реакций удалось бы избежать. Трипептиды, в которые входят указанные выше аминокислоты, до сих пор не исследованы. [c.348]

К счастью, несколько иная методика измерения была разработана рядом хроматографистов, одним из которых был Г. Поллок, работающий в том же самом Научном центре в Эймсе. Основанный на газовой хроматографии, метод Поллока требует всего лишь нескольких микрограммов пробы и может быть применен к сложным смесям атаино-кислот. Первым этапом методики была этерификация аминокислот чистым (только одним энантиомером) 7 -2-бутанолом. Полученный эфир имел два асим метрических центра и мог существовать в виде-двух диастереомеров ЯЯ и где первая буква относится к конфигурации спирта, а вторая — к конфигурации аминокислоты. Затем эфиры были переведены в амиды обработкой трифторуксусным ангидридом для уменьшения полярности амино-группы и повышения летучести производных аминокислот, что позволило проводить успешное их хроматографирование. Используя капиллярные колонки, имеющие характеристики, приведенные на рис. 17-16, Поллок получил хроматограмму смеси диастереомерных производн ых аминокислот. Заметим, что каждая аминокислота дает пару пиков. Эксперименты доказали, что каждый пик отвечает одному из двух диастереомеров и что характеристики удерживания диастереомеров, которые отличаются только конфигурацией при асимметрическом углеродном атоме, как оказалось, были вполне достаточными, чтобы можно было проводить их разделение на газохр оматографической колонке. Таким образом, относительные количества Я- и 5-энантиомеров для некоторых отличающихся между собой аминокислот можно было определить хроматографированием,, сравнивая относительные высоты ЯЯ- и 5-пиков для каждого производного аминокислоты, причем для обнаружения требуется всего несколько нанограммов каждой аминокислоты. [c.585]

При решении задачи разделения аминокислот и их производных Мартин и Синдж [32] ряд лет шли другим пуч ем. Используя распределительную-аппаратуру, они разработали распределительную хроматографию. Для этого они закрепляли одну из фаз (неподвижную фазу) на носителе, например порошкообразном силикагеле, и затем заполняли им колонку. В качестве растворителя , называемого в данном случае подвижной фазой, использовали, например, хлороформ. [c.12]

Важным этапом стало открытие Н. А. Измайловым и М С. Шрайбер метода хроматографии в тонком слое в 1938 г. в Харьковском. химико-фармацевтическом институте. Далее существенным в развитии хроматографии стало открытие Мартином и Сингом в 1940 г. варианта жидкостной распределительной хроматографии на примере разделения ацетильных производных аминокислот на колонке, заполненной силикагелем, насыщенным водой, с использованием хлороформа в качестве растворителя. Тогд же было отмечено, что в качестве подвижной фазы может быть использована не только жидкость, но и газ. Далее эти ученые предложили осуществлять разделение производнцх аминокислот на смоченной водой бумаге с бутанолом в качестве подвижной фазы. Они же осуществили первую двумерную систему разделения. [c.15]

Выше рассмотрены основные закономерности хроматографии на силикагеле в нормально-фазовом режиме. Такой способ использования силикагеля — исторически первый, и с помощью его решено множество практически важных задач. Впоследствии силикагель в значительной степени был вытеснен обращенно-фазовыми сорбентами. Однако данные самого последнего периода свидетельствуют о том, что возможности силикагеля далеко не исчерпываются классической нормальнофазовой Хроматографией. Помимо относительно малополярных элюентов при хроматографии на силикагеле могут использоваться различные нетрадиционные подвижные фазы. При этом возможно получение хороших практических результатов даже для таких сорбатов, которые, как правило, рекомендуют разделять в обращенно-фазовом режиме. Механизм сорбции в таких случаях довольно сложен и изучен еще недостаточно. Обычно принято считать, что поверхность силикагеля слабокислая, и это иногда является причиной затруднений при нормальнофазовой хроматографии оснований. Установлено, однако, что современные марки силикагеля для ВЭЖХ, имеющие сферическую форму частиц, могут быть как кислыми, так и щелочными [128]. Это обстоятельство следует иметь в виду при разработке методик, так как высокое значение pH силикагеля может положительно сказаться на форме пиков оснований и селективности разделений. Аналогичен результат при применении буферированного силикагеля [343, 344]. Для получения этого материала силикагель пропитывали 0,1 М раствором соли или кислоты, после чего высушивали в вакууме и затем заполняли колонку суспензионным способом. В качестве подвижных фаз использовали обычные для нормально-фазовой хроматографии системы например, смеси гексана с диэтиловым эфиром в различных соотношениях. Пропитка силикагеля гидросульфатом натрия либо щавелевой, лимонной, винной кислотами способствовала существенному улучшению формы пиков изомеров гераниевой кислоты. Аналогичного эффекта для сорбатов основного характера — производных антраниловой кислоты — удалось добиться пропиткой фосфатно-цитратным буфером. Последний прием позволил также получить вполне симметричные пики ФТГ-производных аминокислот. [c.157]

Даванков и сотр. [ 79] показали, что для разделения немодифицированных а-аминокислот методом лигандообменной хроматографии очень эффективны хиральные неподвижные фазы на основе производных аминокислот, В ранних работах Даванкова и сотр. [79], а также Лефебура и сотр. [ 80] хиральные лиганды привязывали к хлор-метилированному полистиролу. Хотя для некоторых распространенных а-аминокислот наблюдалась высокая стереоселективность (а > 1,5), эти колонки пригодны только для аналитических целей. Гюбитц и сотр. [81] решили эту задачу, привив ь-пролин на модифицированный силикагель, и получили высокоэффективные колонки. [c.152]

Методом газовой хроматографии удалось также разделить триметилси-лиловые производные аминокислот [43]. Эти производные готовят, обрабатывая соли аминокислот триметилхлорсиланом или воздействуя Ы-триметил-силилдиалкиламинами на свободные аминокислоты. При этом карбоксильные и аминогруппы взаимодействуют, и в результате получаются триметилсили-ловые эфиры Ы-замещенных аминокислот. Производные глицина, аланина, лейцина, изолейцина, валина, глутаминовой кислоты и фенилаланина можно разделить при 165° на колонке (280 см), заполненной силиконовым маслом на стерхамоле (30 70). Производные фенилаланина элюируются через 28—30 мин. Результаты воспроизводятся с точностью до 0,5% при использовании метода измерения площадей под пиками и применении ТК-ячейки в качестве детектора. Авторы указывают, что эту реакцию можно провести почти количественно со всеми доступными аминокислотами, но не приводят данных по хроматографическому анализу высокомолекулярных соединений, таких, как производные триптофана и гистидина. [c.535]

Разделение может быть достигнуто путем образования неустойчивого соединения из устойчивого рацемата и устойчивого оптически активного разделяющего агента [52]. Можно привести следующие примеры разделения этого типа разделение основания Трегера путем хроматографирования па колонке с лактозой [61] разделение миндальной кислоты на колонках с амилозой или крахмалом [62], металлоценов на колонке с ацетилцеллюлозой [63], разделение аминокислот хроматографией на целлюлозе бумаги [64], гликолей путем экстракции хиральными растворителями [65], аминокислот на хиральных ионообменных смолах [66] и трифтор-ацетильных производных аминокислот с помощью газо-жидкостной хроматографии на хира.льпой стационарной фазе [67]. [c.29]

РИС. 14.4. Разделение смеси ДАБТГ-производных аминокислот (5 пмоль каждого) методом ВЭЖХ на колонке Zorbax OD . Условия хроматографии растворитель Л— 35 мМ ацетатный буфер (pH 5,0), растворитель Б — ацетонитрил. Градиент от 45 до 70% буфера В в течение временного интервала О— 10 мин 70% Б 10—12 мин 70—80% Б 12—14 мин 80% Б 14—22 мин 80 — 45% Б 22—25 мин. Температура колонки 22 °С. Скорость ленты самописца 40 см/ч. Детекция при 436 нм, шкала — 0,005 опт. ед. [c.423]

СКОЛЬКИХ лет служила материалом для упаковки колонок, и на ней впервые удалось почти полностью разделить энантиомеры. (В 1944 г. было опубликовано сообщение о том, что основание Тре-гера разделено на колонке с лактозой длиной 0,9 м [2].) Разделяющая способность полисахаридов, в частности целлюлозы, была впервые обнаружена при попытке разделить рацемические аминокислоты методом бумажной хроматографии [3—5]. При этом выяснилось, что эти соединения в некоторых случаях дают два пятна на бумажной хроматограмме. Далглищ развил свою теорию трехточечного взаимодействия в 1952 г. на базе данных о бумажной хроматографии рацемических аминокислот [6]. Известны и другие ранние работы по непосредственному разделению энантиомеров аминокислот посредством бумажной хроматографии [7] и тонкослойной хроматографии на целлюлозе (ТСХ) [8]. Все это способствовало использованию целлюлозы и ее производных, а также крахмала и циклодекстринов в хиральной ЖХ. В настоящее время в качестве потенциальных хиральных сорбентов изучается ряд природных полисахаридов. [c.108]

В связи с быстрым развитием хроматографии аминокислот на сульфокатионитах использование других ионитов носит ограниченный характер. На начальных этапах ионообменной хроматографии для разделения аминокислот пытались использовать амберлит IR -50 [23, 24]. К недостаткам этого катионита относятся трудности уравновешивания колонки, и необходимость соблюдения точных значений pH образца. Сильноосновный анионит дауэкс 2-Х10 находит применение для разделения аспарагиновой и глутаминовой кислот, а также их производных [25]. На анионитах сильнее других аминокислот удерживаются ци-стеиновая кислота, фосфосерин и подобные им вещества, которые, следовательно, можно отделять и получать в чистом виде. Как и в случае сульфокатионитов, степень разделения на анионитах зависит от диаметра частиц, их однородности, степени. сшитости и других факторов. [c.334]

В гидролизатах коллагена и эластина содержатся десмозин и изодесмозин их разделяли в модифицированных условиях по одноколоночной [59, 60], а также по двухколоночной схемам анализа [61, 62]. Множество работ посвящено хроматографии серусодержащих аминокислот. Определены объемы выхода производных цистеина [63] и цистина, полученных после модификации белков и последующего гидролиза [64]. Найдены условия разделения производных лизина, полученных при модификации нативного белка, а также разработаны условия ускоренного анализа этих соединений [65, 66]. Метилгистидин и некоторые редкие аминокислоты разделяли на 15-сантиметровой колонке [67]. При снижении скорости потока в реакторе вдвое было достигнуто 10—20-кратное увеличение чувствительности при определении N-метиламинокислот, которые разделяли в специально разработанных условиях [68]. Триптофан и его производные разделяли на амберлите G-50 [69]. [c.349]

Смотреть страницы где упоминается термин ДНФ-производные аминокислот, хроматография па колонках: [c.63] [c.200] [c.157] [c.330] [c.403] [c.386] [c.179] [c.299] [c.300] [c.164] [c.179] [c.153] [c.257] [c.399] [c.399] [c.410] [c.411] [c.195] [c.197] [c.213] [c.238] [c.271] [c.98] [c.366]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология