Тесты на активность фермента

Известно, что одним из основных процессов приготовления хлеба является брожение теста. Сахара, содержащиеся в муке, сбраживаются дрожжами с образованием диоксида углерода. Содержание собственных сахаров в муке очень невелико и они не обеспечивают интенсивного газообразования. Но в муке есть ферменты — амилазы, которые могут расщеплять крахмал. В процессе брожения теста они поддерживают необходимую концентрацию моно- и дисахаридов. В некоторых случаях мука содержит ферменты с пониженной активностью, поэтому при замесе теста рекомендуется добавлять в него или солод — источник амилолитических ферментов, или [c.112]

При остром панкреатите, когда трипсин и другие ферменты из пораженной поджелудочной железы вымываются в кровь, уровень их в крови соответствует размерам некротического участка. В этом случае определение активности трипсина в сыворотке крови является надежным ферментным тестом при диагностике острого панкреатита. Следует отметить, что субстратная специфичность трипсина ограничена разрывом только тех пептидных связей, в образовании которых участвуют карбоксильные группы лизина и аргинина. [c.421]

Метод определения активности фермента должен быть по возможности точным, чувствительным, непрерывным, удобным и специфическим для изучаемой реакции. Однако чаще всего выполняются далеко не все эти требования. Поэтому, прежде чем признать метод пригодным для использования, необходимо провести многочисленные контрольные и стандартные тесты. Ниже приведено краткое описание этих тестов. [c.386]

Наряду с этими показателями хлебопекарных дрожжей, особое значение для приготовления теста в хлебопекарной промышленности имеет активность ферментов, сбраживающих сахара, а также инвертазы и мальтазы, гидролизующих соответствующие дисахариды. [c.366]

Размер повреждения миокарда при возникновении ишемии, снижение активности ферментов в сердечной мышце и возрастание активности соответствующих ферментов в сыворотке крови (например, креатинкиназы) в значительной мере коррелируют друг с другом. Следует признать, что в диагностике инфаркта миокарда определение активности креатинкиназы, АсАТ и ЛДГ в сыворотке крови —наиболее чувствительные тесты. Повышение активности указанных ферментов, особенно креатинкиназы, является постоянным и наиболее высоким. Важно также исследование в сыворотке крови изоферментных спектров креатинкиназы (повышение активности изофермента МВ) и ЛДГ (увеличение активности изоферментов ЛДГ и ЛДГ,). В последние годы четко показано, что определение в сыворотке крови миокардиально специфичных белков (миоглобин, тропонин Т и др.) —весьма чувствительный ранний тест повреждения миокарда. [c.660]

По своей сущности к экспозиционным тестам близок метод, по которому в организме определяют не само вещество или продукты его метаболизма, а специфическую реакцию, вызванную ими (чаще — угнетение ферментов). Примером такой реакции может служить угнетение активности холинэстеразы крови при воздействии большинства ФОС. Хотя было доказано, что между степенью токсичности ФОС, их физиологической активностью и антихолинэстеразными свойствами не всегда существует прямая количественная зависимость, для практических целей оказалось оправданным принять в качестве критерия опасности определенный уровень угнетения активности фермента. [c.170]

Благодаря своей специфической активности ферменты представляют особый интерес для исследователей, занимающихся химией белка. В настоящее время непрерывно открывают новые метаболические реакции, очищают и выделяют катализирующие их ферменты (гл. V). Методом гель-хроматографии можно определить молекулярный вес фермента, полученного в виде неочищенного препарата (или в очень небольших количествах), если имеется возможность определить объем выхода с помощью специфического теста. Таким путем легко подобрать необходимые условия для дальнейших этапов очистки. [c.174]

НЫХ средств и всё чаще и чаще страдают от побочных эффектов, лекарственных аллергий, от нежелательных последствий, вызванных взаимодействием препаратов, принимаемых пациентами одновременно. Поэтому исследование метаболизма лекарственных средств и их взаимодействия между собой является весьма актуальной задачей. Изотопный тест дыхания может быть использован как неинвазивный и быстрый способ определения концентраций и активности ферментов, отвечающих за метаболизм некоторых конкретных лекарственных препаратов. [c.475]

Перед тем как приступить к выделению и очистке того или иного фермента, необходимо выбрать удовлетворительный тест для его идентификации и количественного определения. Прямые методы существуют лишь для очень ограниченного круга ферментов, поэтому используют способность ферментов катализировать специфическую реакцию. Чтобы иметь возможность контролировать степень очистки фермента, его активность относят на 1 мг общего белка (так называемая удельная активность ). [c.198]

Под силой муки понимают ее способность образовывать тесто с определенными физическими свойствами. Она связана главным образом с содержанием и качеством клейковины и активностью протеолитических ферментов, т. е. с белково-протеи-назным комплексом муки. Тесто с определенными физическими свойствами хорошо удерживает диоксид углерода и он не улету чивается, в результате образуется пористый хлеб большой объема. [c.106]

Например, изменение сопротивляемости инфекции по тесту смертности или по тесту кожной воспалительной реакции при проекции в реальные условия жизни окажутся отвечающими критерию вредности. Такие показатели, как титр антител или фагоцитарная активность и т. п., по мнению О. Г. Алексеевой, для трактовки степени вредности требуют дополнительных функциональных нагрузок. Точно так же достоверное и значительное изменение потребления кислорода целым животным во многих случаях может трактоваться как явление вредное, ибо оно отражает состояние энергетических процессов в организме вообще. Вместе с тем изменение активности отдельных ферментов (без одновременного изучения субстрата, нагрузок), которое все чаще многими кладется в основу суждения о вредности воздействия, хотя и имеет широкую перспективу, однако требует специальных приемов исследования [c.22]

Исследуя изменения ферментов количественно, удалось , изучить механизм процессов, лежащих в основе хлебопечения, и рационализировать это производство. Было выяснено, что хлебопекарные качества муки определяются не столько свойствами входящих в ее состав веществ, сколько поведением этих веществ в процессе тестоведения и выпечки, т. е. в конечном счете свойствами и активностью ферментов. В зависимости от изменений, которые претерпевают крахмал и белки муки, меняются упругость, вязкость, эластичность, влагоудерлшвающая способность, т. е. физико-химические свойства теста. Процессы же изменения [c.6]

В 1960 г. американские исследователи показали, что нитрогена-за сохраняет свою активность в бесклеточных экстрактах lostridium pasteurianum. Это послужило толчком для начала активных исследований биохимии азотфиксации, структуры и механизма действия нитрогеназы. К 1981 г. нитрогеназа была выделена из 36 видов микроорганизмов. Она считается одним из наиболее сложных ферментов, использующих простые субстраты. Кроме азота нитрогеназа может восстанавливать ацетилен, цианистый водород, закись азота и некоторые другие соединения. Восстановление ацетилена в этилен позволило разработать надежный тест для обнаружения азотфиксирующей активности. Непременное условие работы нитрогеназы — ее защита от кислорода, который ингибирует не только активность нитрогеназы, но и ее биосинтез. [c.151]

При работах по уточнению тестов на активность фермента в качестве субстрата применяют различные материалы порошок необработанной целлюлозы, фильтровальную бумагу, волокна хлопка, набухший целлюлозный порошок (гидроцеллюлозу), Na-карбоксиметилцеллюлозу. По расщеплению отдельных субстратов судят об активностях компонентов целлюлолитического комплекса, об их относительных количествах. Так, по расщеплению хлопка определяют наличие Срфермента, гидролиз нерастворимых, но частично модифицированных, материалов позволяет су- [c.266]

Биохимические тесты (главным образом иа рыбах) включают такие показатели, как содержание сахара в крови, соотношение фракций альбуминов и глобулинов в крови, накопление гликогена, активность холинэстеразы в крови и в мозгу, активность ферментов — дегидрогеназ, тиаминазы и др. Любой надежно измеримый биохимический показатель может иметь индикаторное значение, если его количественное значение закономерно изменяется при воздействии токсических агентов. [c.30]

Несколько слов о той роли, которую сыграла энзимология в хлебопекарной промышленности. Как мы видели выше, покоящееся зерно всегда содержит в себе некоторое количество активных ферментов. При помоле зерна эти ферменты переходят в муку и при ее смешивании с водой обусловливают ряд химических превращений, совершающихся в тесте при стоянии. В зависимости от тех изменений, которым подвергаются белки и крахмал муки, меняются и коллоидные свойства теста — его упругость, вязкость, эластичность, водоудержнвающая способность и т. д. [c.669]

Оксидазный тест предназначается для дифференциации бактерий семейства Еп1егоЬас1епасеае от грамотрицательных бактерий семейства Рзеиёотопаёасеае и других водных сапрофитных бактерий, которые обладают активным ферментом оксидазой и окисляют фени-лендиаминовые соединения до индофенола ярко-синего цвета. [c.189]

Второй критерий, определяющий ценность отдельной мутации —это степень инактивации гена, в котором произошла мутация. Частичное сохранение функции часто встречается в случае мутации с заменой оснований и значительно реже при сдвигах рамки или делециях. Степень полноты мутации легко оценить по скорости роста или другим проявлениям свойств, высевая клетки мутанта с низкой плотностью на селективную или непермис-сивную среду. Неполнота мутации может стать проблемой в работе с мутантами, которые должны использоваться в других физиологических экспериментах, связанных, например, с исследованием активности ферментов, или в сопряженных с другими мутантами тест-системах. [c.42]

С помощью описанного выше теста на треониндегид-ратазу измеряют удельную активность фермента в клетках, выращенных в течение ночи в трех описанных выше средах. В культуре 2 должна выявляться более низкая ферментативная активность, чем в культуре L Культура 3 будет подвергаться дерепрессии относительно культуры 2 из-за постепенного снижения внутриклеточной концентрации L-изолейцина (содержание L-изолейцина в культуре 3 понижено с самого начала, и, кроме того, его поглощение ингибируется двумя другими аминокислотами). [c.417]

Все эти свойства в совокупности являются тестом на выяв-ние аффинной метки, модифицирующей в активном центре группу, ионизация которой контролирует активность фермента. Наличие кинетики с насыщением (п. г) показывает, что метка образует комплекс с ферментом, хотя это можно и не обнаружить, если /С] лежит в области концентраций, при которых ингибитор не растворяется. Конкурентное ингибирование субстратом (п. а) подтверждает, что связывание происходит в активном центре. Стехиометрическое соотношение 1 1 означает, что эта модификация является избирательной. Ценные данные позволяет получить анализ рН-зависимости различных параметров. Как отме- [c.246]

Определение обратимых ингибиторов холинэстераз менее распространено Тем не менее в настоящее время разработано множество тестов на основе холинэстераз для определения ионов тяжелых металлов и хлорорганических пестицидов [89,90], являющихся обратимыми ингибиторами Интерес представляет способ оценки общей токсичности водопроводной воды, основанный на суммарном эффекте снижения фермета-тивной активности холинэстеразы при введении в систему субстрат-фермент анализируемой пробы. Пределы обнаружения обратимых ингибиторов существенно зависят от природы ингибитора и субстрата. [c.291]

Иммуномодулирующие свойства азолидов сульфокислот оценивали с использованием энзиматического теста с моноцитами периферической крови на выявление активности гликолитических ферментов а-глицерофосфатдегидрогеназы и сукцинатдегидрогеназы. [c.74]

Другой тест на чистоту вытекает из диаграммы растворимости в случае гомогенного белка вплоть до достижения точки насыщения количество добавленного и количество растворившегося белка связань линейной зависимостью. Критериями чистоты также служат аминокислотный состав, изоэлектрическая точка, а также в некоторой степеии кристаллизуемость. В случае биологически активных белков, например. ферментов, вывод о чистоте может быть сделан из критериев активности (субстратная специфичность, оптимальные pH и температура, кинетические эксперименты). [c.354]

При замешивании теста от одной до двух третей липидов щеки связываются с белками [86, 87]. Эта связь предопределяет реологические свойства теста, которое без липидов не годилось бы для выпечки. К тому же замешивание теста вызывает значительное повышение активности липоксигеназ [73] за счет воды, которая благоприятствует проявлению ферментативной активности за счет окисления среды. Этот эффект усиливается благодаря присутствию муки конских бобов, богатой ферментом липокси-геназой, которую добавляют в пшеничную муку для улучшения хлебопекарных качеств. Гидроперекиси линолевой кислоты, про- [c.286]

Как бы то ни было, согласно функциональным тестам, большинство аминоацил-тРНК-синтетаз (но не аргининовая ) обладают двойным набором субстратсвязывающих мест, т. е. они димеры также и в функциональном смысле. Активные центры, однако, не полностью независимы, а оказывают заметное влияние друг на друга в полном димерном (или двухдоменном) ферменте, проявляя известную кооперативность. [c.40]

Трудно сейчас представить, что не только Р. Вильщтеттер еще в 1926 г. отрицал принадлежность ферментов к белкам или к какому-либо известному классу органических веществ, но и совсем недавно высказывались сомнения на этот счет. Поводом для сомнений являлись опыты, в которых хотя и были получены ферментативно активные растворы, но белок не мог быть обнаружен при помощи качественных цветных реакций. Объясняется это тем, что концентрация фермента даже при высокой удельной активности оказывалась ниже пороговой чувствительности химического теста на белок. [c.118]

В настоящее время зарубежные фирмы выпускают наборы реактивов для определения ряда гормонов и других лекарств имму-ноферментным методом, так называемые контрольно-измеритель-ные тесты (КИТы). Эти КИТы содержат стандартный раствор тестируемого лиганда, моноклональные антитела, фермент и необходимые реактивы для определения ферментативной активности. [c.317]

Классификация по природе процессов, используемых для получения аналитического сигнала. Тест-методы могут быть разделены на физические, химические, биохимические и биологические. Физических методов немного, и они не играют большой роли в практике химического анализа. Биохимические методы обычно основаны на использовании ферментов и иммуносистем. Выделенные природные ферменты, особенно иммобилизованные, в известной мере приобретают свойства химических реагентов, поэтому, несмотря на специфику ферментов как химических соединений (особенности происхождения, условия хранения, время сохранения активности), ферментные методы можно отнести к химическим. Иммунометоды больше тяготеют к биологическим методам. Биологические методы, базирующиеся на использовании микроорганизмов, органов, тканей и даже высокоорганизованных организмов и целых популяций, упомянуты только в разделе, посвященном определению суммарных показателей (биотесты). [c.211]

Таблетки из ППУ — новый носитель для иммобилизации пероксидазы (из корней хрена) — используют для разработки тест-методики определения 0,008-1000 мкМ ртутьорганических соединений (метил-, этил-, фенил-ртути). Определение этих токсичных веществ основано на их либеративном действии на фермент, ингибированный фенилтиомочевиной, в реакции окисления о-дианизидина или их влиянии на продолжительность индукционного периода в реакции окисления 3,3, 5,5-тетраметилбензидина в присутствии диэтилдитиокар-бамината натрия. Препарат пероксидазы, иммобилизованный на ППУ, сохраняет каталитическую активность в течение 1,5 лет, а в случае использования хроматографической бумаги — только 6 месяцев. [c.223]

Специфичность ферментативных тестов можно значительно повысить, проводя анализ не общей ферментативной активности, а отдельных молекулярных форм или изоэнзимов. Для этого применяют такие методики, как электрофорез, ионообменную или гель-распределительную хроматографию, изоэлектри-ческое фокусирование. Еще одним методом анализа изоферментов может служить использование специфических к изоферменту антител. Этот метод обладает высокой чувствительностью и может быть легко автоматизирован. В последние годы получила распространение диагностика наследственных заболеваний при помощи рекомбинантньос ДНК и метода полимеразной цепной реакции. В этой технологии большую роль играют ферменты рестриктазы. [c.87]

В качестве тестов для выявления ранних сдвигов в организме работающих в контакте с химическими веществами предлагаются психофизиологические тесты (тесты на внимание, запоминание и др.), измерение мышечной силы и выносливости к статическому усилию, измерение артериального давления, электрокардиография, исследование скорости зрительно-моторной реакции, адаптометрия, ольфактометрия, термометрия, исследование белковых фракций сыворотки крови, тимоловая проба, проба Квика некоторые специальные пробы (определение карбоксигемоглобина, метгемоглобина в крови, активности различных ферментов, например, ацетилхолинэстеразы и т. д.). Неспецифическое действие химических веществ может быть выявлено с помощью исследования иммунобиологической [c.296]

Трансаминирование является очень важным процессом превращения аминокислот в организме. В этой реакции происходит обратимый перенос а-аминогруппы аминокислоты на кетокислоту без промежуточного отщепления аммиака. Реакция протекает наиболее активно, когда один из субстратов представлен дикарбоновой амино-или кетокислотой. Процесс трансаминирования катализируется ферментами — аминотрансферазами, коферментом которых является пиридоксальфосфат. Процесс активно протекает в печени, сердечной мышце, скелетных мышцах, почках, семенниках и других органах. В сыворотке крови активность аминотрансфераз очень низка. При нарушении целостности клеточных мембран аминотрансферазы проникают из тканей в кровь. Поэтому определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови является важным тестом для диагностики таких заболеваний, как инфаркт миокарда, вирусный гепатит, цирроз печени и др. [c.167]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология