Флуоресценция кривые флуоресценции

Использование графического метода позволяет предсказать изменение характера кинетических кривых флуоресценции и помо- [c.96]

Конкретный вид кинетических кривых флуоресценции зависит от трех величин показателей экспонент 2 и их относительного вклада 0 [см. уравнения (IV.36), (IV.37)]. Эти три параметра нелинейно зависят от сочетания кинетических констант и концентра-ции тушителя. Общий вид выражений (IV.34) и (IV.35) показывает, что зависимость Oi, в 2 и 0 от концентраций тушителя сложная. Общий анализ нелинейных выражений (IV.34) и (IV.35) труден. Чтобы представить зависимость di, йг и 0 от концентрации тушителя в более наглядном виде, удобно применить графический метод. Для этого введем безразмерные переменные х к у, являющиеся линейными функциями концентрации тушителя [c.93]

Флуоресценция образца ослабляется настолько, что на фотоумножитель попадает в среднем менее одного фотона на одну вспышку источника возбуждения. При этом будет выполняться соотношение (IV.70), т. е. вероятность появления импульса ФЭУ через время после начала возбуждающей вспышки будет пропорциональна интенсивности флуоресценции в данный момент времени (за вычетом времени пролета электронов в ФЭУ). Если регистрировать зависимость числа импульсов ФЭУ от интервала времени между возбуждающим и регистрируемым импульсами при большом числе возбуждающих вспышек, то получается функция распределения, пропорциональная кинетической кривой флуоресценции F t). [c.105]

Часто поглощение промежуточных продуктов наблюдается в той области, где флуоресцирует исходное соединение. При этом при малых временах жизни промежуточных продуктов флуоресценция будет существенно искажать вид осциллограммы. Чтобы получить истинную кинетическую кривую, необходимо записать кривую флуоресценции образца при закрытом спектральном источнике. Поскольку форма флуоресцентного излучения повторяет форму вспышки, ее имеет смысл учитывать только при малых временах. Перестройка осциллографической кривой гибели промежуточного продукта проводится следующим образом. В каждый момент вре- [c.188]

Безызлучательные переходы могут привести к быстрому опустошению уровней и вблизи области пересечения потенциальных кривых такое опустошение уровней — одна из причин того, что резонансная флуоресценция сложных молекул достаточно редка, даже при низких давлениях. Как было отмечено в разд. 3.3, если скорость процессов, связанных с пересечением потенциальных кривых, всего лишь в 10 раз больше скорости радиационных (например, в случае обычной разрешенной флуоресценции скорость процессов, связанных с пересечением, порядка 10 с ), то интенсивность излучения уменьшится приблизительно в 10 раз. Поэтому уменьшение интенсивности излучения является чувствительным тестом процесса предиссоциации. Этот эффект хорошо иллюстрируется на примере флуоресценции N02. Первичный квантовый выход распада N02 резко возрастает, когда длина волны короче той, при которой спектр поглощения становится размытым (Х< 400 нм). Квантовый вы.ход флуоресценции N02 имеет противоположную тенденцию он весьма существен для длин волн больше приблизительно 410 нм и незначителен при Х<390 нм. Сумма квантовых выходов флуоресценции и диссоциации равна единице во всем диапазоне от 360 до 450 нм. Электронно-возбужденные молекулы N02 могут также образовываться химически по реакции [c.92]

Рис. 4.14, Модель кинетической кривой флуоресценции (/), возбуждаемой импульсом конечной длительности (схематично изображен в виде ступенчатой функции — заштриховано) F=E(x )i(t-x,)- E(x ) (1-Х2) Е(х,)К1-ХгУ,

Рис. 7. Спектр поглощения и возбуждения (кривые А) и спектры флуоресценции (кривые Е) для НАД-Н свободного (--) и связанного (----—) с алко-

Если необходимо определить линейную дисперсию при длинах волн, которые отсутствуют в источнике, используют метод, несколько отличающийся от описанного. Для этого необходимо иметь источник с непрерывным спектром и два монохроматора. Этот метод можно использовать для определения линейной дисперсии монохроматора возбуждения спектрофлуориметра. Входная и выходная щели монохроматора М подбираются, как описано в предыдущем параграфе, и вместо кюветы с образцом используют экран из окиси магния, расположенный под углом около 60° (см. рис. 49, 5). Экран затем освещают светом полосы длин волн почти прямоугольного спектрального распределения и шириной ДЯг. (Спектральное распределение света, проходящего через выходную щель, показано на рис. 46, А.) Затем определяют ширину полосы сканированием монохроматора флуоресценции Y с очень узкими щелями. Из полученной таким образом кривой прямоугольного вида определяют полуширину полосы ДЯг, соответствующую известной ширине выходной щели монохроматора возбуждения W2- Делением w-2 ка ДЯг можно получить т для монохроматора возбуждения при определенной длине волны. В некоторых областях спектра интенсивность источника с непрерывным спектром ( S на рис. 49, Б) не очень велика, что не позволяет использовать узкую входную щель монохроматора М и узкие щели монохроматора У. В этом случае значительно большая интенсивность облучения экрана из окиси магния может быть достигнута при больших и одинаковых щелях монохроматора М. Этот случай показан на рис. 46, . При сканировании анализирующего монохроматора с узкими щелями получают кривую треугольного вида, по которой, измеряя спектральный интервал, ограниченный длинами волн с интенсивностями, равными половине максимальной интенсивности, определяют полуширину полосы. [c.140]

В литературе описано много приборов для непосредственной записи спектров возбуждения флуоресценции [153—157]. В некоторых приборах используются счетчики квантов и регистрируется величина Еф/, как описано выше. В других используется термобатарея для регулирования пучка возбуждающего света и регистрируется ефД, величина, менее важная, чем еф/. В ряде приборов применяется фотоумножитель, термобатарея или другое приспособление для регулирования пучка возбуждающего света и используются электронные устройства для исправления изменений квантового выхода регулирующего устройства с длиной волны, так что регистрируется точная кривая еф/. Для химиков, желающих изготовить свой прибор, метод Паркера наиболее прост, так как с его помощью записываются исправленные спектры возбуждения с точностью 10%, что вполне приемлемо для большинства целей. Записанные спектры более точно можно исправить последующим расчетом, определив сигнал счетчика квантов методами, описанными в разделе П1,Д, 5. [c.236]

В большинстве случаев измерение долгоживущей люминесценции с временем жизни меньше 1 мс приходится проводить в условиях, когда быстрая флуоресценция в несколько раз интенсивнее, как, например, при измерениях замедленной флуоресценции в жидких растворах. Тогда интенсивность общего испускания при положении в фазе идентична интенсивности быстрой флуоресценции. Однако есть соединения, для которых быстрая флуоресценция в жидких растворах слаба, а фосфоресценция относительно интенсивна. Как правило, полоса фосфоресценции не перекрывается с полосой флуоресценции и для получения спектральной кривой флуоресценции в измерениях при положении в фазе нет необходимости вводить поправку. На рис. 106 [c.262]

Растворитель —смесь к-октилового и к-додецилового спиртов, О относительный квантовый выход фиолетовой флуоресценции ф то же для синей флуоресценции. Кривые рассчитаны теоретически при =3,4-10" М. [c.332]

Продажный циклогексан высокой чистоты обычно можно использовать без дальнейшей очистки (см. кривую Б на рис., 150). Абсолютный этанол, применяемый в лаборатории, содержит флуоресцирующие примеси в довольно больших концентрациях, но их легко удалить одной перегонкой, как это описано в разделе III, И, 7 (ср. кривые Л и на рис. 151). В своей работе автор встретился с таким фактом, что все порции этанола из одной партии содержали 1—2 ч. антрацена на 10 ч. спирта (см. кривые Л и В на рис. 151), очевидно попавшие при производстве или расфасовке. Такую примесь легко удалить перегонкой, а сам факт приведен здесь для иллюстрации того, какая высокая чувствительность метода может быть достигнута в флуоресцентном анализе при благоприятных условиях. Так как показатель чувствительности флуоресценции антрацена при 250 нм высок, а флуоресценция очищенного этанола незначительна, минимальная обнаружимая концентрация антрацена в спирте составляет меньше 1 ч. на 10 ч. последнего. [c.400]

Что касается определения следов антрацена в фенантрене, то на первый взгляд кажется, что оно не составляет труда. Антрацен поглощает линию ртути 366 нм, которая находится за пределами обычного поглощения фенантрена. Таким образом, фенантрен, казалось бы, совсем не должен давать флуоресценции, если использовать для возбуждения двойной монохроматор, настроенный на 366 нм. Фактически же он обнаруживает слабую флуоресценцию (кривая Е на рис, 153), часть которой расположена в области длин волн более, коротких, чем возбуждающий [c.404]

Возбуждение при 77 К в этаноле линией 313 нм, выделенной двойным монохроматором спектры фосфоресценции (кривые справа) сняты при чувствительности в 410 раз большей, чем спектры флуоресценции (кривые слева) Л —образцы флуорена (3-10 А1), исходный материал — образцы из области на расстоянии 4 см от верха колонки для зонной плавки В —только карбазол (4-10 м). [c.423]

А. Спектр флуоресценции чистого фикоэритрина в сопоставлении со спектром поглощения (НО) /—поглощение //—флуоресценция. Б. Спектр флуоресценции фикоцианина, полученный из спектра цельного водного экстракта из красной водоросли путем вычитания кривой флуоресценции фикоэритрина [ПО] /—водный экстракт из красной водоросли //—фикоцианин ///—фикоэритрин. [c.212]

СВЕТОВЫЕ КРИВЫЕ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ [c.480]

Влияние различных факторов на световые кривые флуоресценции [c.484]

Таким образом, рассчитанные кривые зависимости двух типов субъединиц от концентрации НАД имеют различный характер. С ними сравнивают экспериментально полученную кривую зависимости флуоресценции связанного аурамина О от концентрации добавленного НАД. В случае ее совпадения с ходом кривой, описывающей концентрацию субъединиц, одновременно занятых аурамином О и НАД, можно заключить, что конформационные изменения белка под действием НАД, отражающиеся на свойствах аураминсвязывающих областей молекулы, локализованы внутри одной субъединицы. При несовпадении экспериментальной кривой с зависимостью, полученной для этого типа субъединиц, ее сравнивают с поведением рассчитанной кривой для субъединиц, находящихся в комплексе только с НАД. Корреляциу двух кривых в этом случае указывает на чувствительность аураминсвязывающих зон одной субъединицы к связыванию НАД в активном центре другой. Если между экспериментально полученной кривой и суммой обеих рассчитанных соответствие наилучшее, делают заключение о том, что состояние белкового окружения связанного аурамина [c.350]

Было сделано несколько попыток использовать флуоресценцию полимерных веществ для определения их молекулярных весов. Хейнц [41 ] измерил уменьшение флуоресценции раствора красителя родамина В в зависимости от количества добавленного полимерного вещества. Он построил график зависимости Fo/F — 1 (где Fо — интенсивность флуоресценции исходного раствора родамина, а F — интенсивность флуоресценции раствора, содержащего полимер) от концентрации полимера, выраженной в мг1мл раствора. Для концентраций меньше 2 мг/мл была получена прямая линия. Наклон этой линии оказался пропорциональным корню квадратному из молекулярного веса полимера. Констйнта пропорциональности зависит от химического строения полимера. Например, константа для полистиролов равна 0,163, а для полиизобутиленов 0,214. Таким образом, измеряя уменьщение флуоресценции нескольких растворов родамина В, содержащих небольшие количества полимера, можно получить наклон кривой флуоресценции. Деление этого наклона на константу, характерную-для химического типа, к которому относится полимер, дает корень квадратный из молекулярного веса полимера. Утверждается, что точность метода составляет около 3%. [c.302]

Рассмотрим теперь гипотетическое вещество, у которого переходные моменты поглощения и испускания направлены параллельно друг другу для первой полосы поглощения а (кривая 1 на рис. 19), но перпендикулярно друг другу для второй полосы поглощения Ь. Допустим, что возбуждающий свет поляризован вертикально. Построив зависимость поляризации флуоресценции от длины волны возбуждающего света, мы получим поляризацию спектра возбуждения флуоресценции (кривая 2). Для данного идеального случая при уменьшении длины волны область первой полосы поглощения, где ро постоянна и равна 0,5, сменяется при перекрывании полос быстрым падением степени поляризации, после чего последняя достигает постоянного значения —0,333 в области второй полосы поглощения. Таким образом, по поляризационным спектрам принципиально возможно различить перекрывающиеся полосы, отвечающие разным электронным переходам. Кроме того, используя уравнение (53), можно определить угол р, т. е, установить, как ориентированы переходные моменты различных полос поглощения относительно переходного момента испускания из самого низкого возбужденного состояния (синглетного или триплетного в зависимости от того, что измеряется — флуоресценция или фосфоренценция). [c.62]

В последней работе приведены примеры каждого из трех способов использования флуоресцентных измерений для определения молярного отношения металла в хелате к хелатообра-зующему агенту. Первый из них — это хорошо известный метод непрерывных вариаций [386], основанный на измерении интенсивности флуоресценции ряда растворов, в которых суммарная концентрация (ион металла + реагент) одинакова, а отношение концентраций иона металла к реагенту варьирует. Максимум флуоресценции наблюдается в той точке, где отношение [ион металла]/[реагент] в растворе равно такому же отношению в комплексе. По второму методу [387] измеряется флуоресценция серии растворов, причем все они содержат ион металла в одинаковой концентрации, а концентрация реагента варьирует. В точке, где отношение [ион металла]/[реагент] в растворе равно соответствующему отношению в хелате, наклон полученной кривой изменяется. По мере того как константа диссоциации хелата увеличивается, наклон вновь уменьшается. В третьем методе [388] строят две кривые флуоресценция — концентрация. В первом случае ион металла с постоянной концентрацией с реагирует с меньшими, меняющимися концентрациями реагента, а во втором — реагент с концентрацией с соединяется с меньшими, меняющимися концентрациями иона металла. Обе зависимости линейны, и отношение их наклонов равно молярному отношению иона металла к реагенту в хелате. [c.455]

На фиг. 105 показан вид спектра флуоресценций хлорофилла на панхроматической пластинке, а на фиг. 106 — на пластинке, сенсибилизированной к инфракрасному. На фиг. 107 даны спектрофотр-метрические кривые флуоресценции хлорофиллов а и b в эфире, измеренные Цшейле и Гаррисом [63] при помощи фотоэлектрического спектрофотометра. Максимум первой эмиссионной полосы лежит на этом графике у 664,5 мц для хлорофилла а и у 648,5 — для [c.150]

Ван-Норман, Френч и Макдоуэлл [108] дали фотометрическую кривую флуоресценции экстракта, полученного путем размельчения красных водорослей Iridaea под водой с центрифугированием при больших скоростях. Эта кривая имеет острый пик приблизительно около 580 мц, явно соответствующий первой длинноволновой полосе фикоэритрина у 566. р (см. фиг. 118, А [110]). [c.211]

Вермейлен, Вассинк и Реман [50] дали спектрофотометрические кривые флуоресценции водоросли hlorella (хлорофилл а - Ь) и бак- [c.219]

В общем, повидимому, можно считать установленным, что понижение или лолное прекращение снабжения двуокисью углерода влияет обычно на выход флуоресценции, о, в определенном интервале интенсивности освещения. Подобного эффекта не наблюдается при очень слабом освещении нет влияния, повидимому, и на очень сильном свету, однако последнее обобщение нуждается еще в экспериментальном подтверждении. У пурпурных бактерий удаление двуокиси углерода, вызывающее обычно увеличение о, производит иногда, при повышении интенсивности света, противоположный эффект (см. фиг. 204). Так как до сих пор не было выполнено систематических измерений <р для различных [СОо], то пока невозможно начертить углекислотные кривые флуоресценции f=/[ 02]. Вместо этого имеются световые кривые, показывающие интенсивность флуоресценции как функцию интенсивности света с [ Ogl в качестве параметра (обычно только для двух различных концентраций двуокиси углерода или просто в присутствии двуокиси углерода и без двуокиси углерода). Некоторые из таких кривых будут приведены в главе XXV1I1 (см. фиг. 199, 203 и 204). [c.361]

Изучение опять становится заметно более плодотворным, если в качестве объекта используются пурпурные бактерии. Было найдено, что концентрация восстановителей, таких, как Hg, HgS или H S Og, сильно влияет на выход флуоресценции бактериохлорофилла в этих организмах. Это явление иллюстрируется световыми кривыми флуоресценции, приведенными на фиг. 205, 206 и 207 (фигуры взяты из работы Вассинка, Катца и Доррештейна [132] с hromatium). Кривые на фигурах представляют интенсивность флуоресценции F (не выход <р) как функцию интенсивности падающего света, с концентрацией восстановителя [HR] в качестве параметра. Фиг. 205 дает сравнение эффекта трех различных восстановителей фиг. 206 — серию измерений с тиосульфатом различной концентрации и фиг. 207 — подобную серию при различном давлении водорода. В обоих последних случаях увеличение концентрации восстановителя приводит к удлинению линейной части флуоресцентной кривой (части, которая соответствует выходу флуоресценции, получающемуся при слабом освещении). [c.371]

Еще один случай необычного влияния двуокиси углерода на световые кривые флуоресценции наблюдали на пурпурных бактериях Вассинк, Катц и Доррештейн [158]. Во-первых, эти авторы не обнаружили никакого влияния недостатка двуокиси углерода в отсутствие восстановителя (фиг. 203), т. е. в условиях, которые не могут быть воспроизведены для зеленый растений. В присутствии тиосульфата или водорода недостаток двуокиси углерода сказывался, хотя и незначительно, но вполне заметно. Данные фиг, 204, Л, полученные В присутствии тиосульфата, можно интерпретировать по аналогии [c.485]

Восстановители. Влияние концентрации восстановителей (тиосульфата, водорода и т. п.) на форму кривых флуоресценции hromatium иллюстрируется фиг. 205—207. Сравнивая их с фиг. 204, можно видеть, что влияние восстановителя гораздо сильнее, чем влияние [c.486]

Характерный начальный изгиб кверху у кривых флуоресценции hromaiium целиком не исчезает даже при полном отсутствии восстановителя. Это явление может быть приписано действию внутренних восстановителей, присутствия которых на слабом свету достаточно, чтобы предохранить фотокомплекс от полного превращения в сильно флуоресцирующую форму. И действительно кривую можно выпрямить путем предварительного голодания бактерий, лишающего их метаболитов, которые могут служить внутренними восстановителями. [c.488]

Влияние температуры на световые кривые флуоресценции наблюдали также Вассинк и Керстен [159] при работе с диатомовыми водорослями. [c.489]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология