Разделение хроматографическое каротиноидов

Всеобщее признание для разделения смеси каротиноидов в количественном анализе завоевала адсорбционная хроматография на колонках с окисью алюминия, окисью магния, смесью окиси магния и силикагеля с диатомовой землей [11]. Четкость хроматографического разделения пигментов на колонке зависит от многих факторов активности адсорбента, размера колонки, количества пигментов, присутствия других компонентов в разделяемой смеси. [c.202]

Хроматографическое разделение пигментов зеленых листьев растений состоит из следующих этапов 1) экстрагирование пигментов из растительного материала 2) образование хроматограмм 3) получение растворов хлорофилла-а, хлорофилла-р и каротиноидов. [c.296]

В хроматографическую колонку вводят 5 мл экстракта. Образуется первичная хроматограмма, которую промывают смесью бензина и бензола (10 1). При промывании колонки происходит разделение зон вверху колонки образуется зеленая зона чистого хлорофилла р, далее — зона хлорофилла а и ниже располагается зона желтого цвета — каротиноиды. При дальнейшем промывании колонки растворителем в фильтрат переводятся сначала желтые пигменты (каротиноиды), затем хлорофилл а и последним хлорофилл р. Каждую фракцию собирают в отдельный приемник. [c.30]

Каротиноиды, которые делятся на каротины и ксантофиллы, содержат систему сопряженных связей С=С и встречаются как в растениях (например, в помидорах, кукурузе, моркови, перце, плодах цитрусовых, шиповнике), так и в животных (например, в омарах, крабах, форели, лососе, в яичном желтке или в перьях некоторых птиц — канареек, фламинго, попугаев и др.). К наиболее известным каротиноидам относятся красные каротины из моркови. Хроматографическим разделением этих углеводородов занимался в начале нашего столетия основоположник хроматографии русский ботаник М. С. Цвет. Известны три изомера каротинов — а, р и 7. В моркови содержится больше всего р-каротина. Из каротинов легко получаются витамины А, поэтому они являются источником этих витаминов для организма человека и называются провитаминами А. [c.234]

Используется для выделения и очистки хлорофилла и каротиноидов, хроматографического разделения порфириновых пигментов и других веще [c.190]

Применяется для хроматографического разделения каротиноидов, производных аминокислот и других веществ. [c.285]

Для разделения хлорофиллов методом жидко-твердофазной хроматографии пытались использовать практически все известные хроматографические сорбенты и большое число растворителей. Тем не менее не удалось разработать универсальную методику, пригодную для всех хлорофиллов и каротиноидов даже из одного вида растений. Вследствие лабильности хлорофиллов их разделяют на сорбентах средней силы, например на порошковой сахарозе, целлюлозе или крахмале. [c.269]

В результате различных обработок — светом, нагреванием, катализаторами (йодом, кислотами) — устойчивые природные транс-формы каротиноидов могут быть частично превращены в неустойчивые г мс-формы. Разделение полученных при этом смесей осуществляется хроматографическим путем. [c.886]

РАЗДЕЛЕНИЕ КАРОТИНОИДОВ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ АДСОРБЦИИ ПО ЦВЕТУ [c.93]

Наиболее широкое распространение получил колориметрический метод определения витамина А по реакции с хлоридом сурьмы [29]. Эта реакция для витамина А не специфична, аналогичное окрашивание с хлоридом сурьмы дают каротиноиды, но хроматографическое разделение этих соединений позволяет устранить их мешающее влияние Существенным недостатком метода является неустойчивость развивающейся окраски, затрудняющая оценку величины оптической плотности растворов. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 620 нм в течение 3—5 с [3, 11]. [c.202]

Рис. 15. Хроматографическое разделение каротиноидов на окиси алюминия

Среди желтых зон особенно отчетливо различаются зоны ксантофилла и каротина. Цвет высказал предположение, что каротин не является индивидуальным веществом, а состоит из нескольких компонентов с близкими свойствами. И действительно, в 1931—1933 гг. ряду исследователей удалось, пользуясь хроматографическим методом, разделить каротин на три изомерных соединения а-каротин с т. пл. 188°, -каротин с т. пл. 184° и f-каротин с т. пл. 178°. Природный каротин содержит около 15% а-каротина, 85% р-каротина и лишь следы (0,1%) f-каротина. Со времени этих исследований хроматографический метод стал систематически применяться для разделения и очистки других каротиноидов, встречающихся в растительных и животных организмах. [c.91]

Каротиноиды в природе встречаются в виде сложных смесей, и их хроматографическое разделение обычно осуществляется не сразу. В лучшем случае смесь пигментов после первого-хроматографирования разделяется на отдельные группы соединений, которые уже затем хроматографируются по отдельности с применением наиболее подходящих для этого адсорбентов и растворителей. [c.92]

Из многочисленных адсорбентов, исследованных при хроматографическом разделении каротиноидов, наибольшее распространение получили окись алюминия, гидроокись кальция, окись магния, карбонат кальция, волокнистый глинозем, активный уголь, сахарный порошок, кремнезем, сульфат натрия и другие вещества. Из растворителей имеют наибольшее применение петролейный эфир, бензин, бензол, смесь бензина с бензолом, хлористый метилен, сероуглерод, дихлорэтан, смесь бензола с петролейным эфиром, хлороформ, эфир, смесь бензина с эфиром и др. [c.93]

Хроматографический метод впервые был применен для разделения смеси органических соединений. Классические работы М. С. Цвета, как известно, были проведены со смесью растительных пигментов—хлорофилла, ксантофилла и каротиноидов. В дальнейшем развитии хроматографического метода большое значение имели работы многих ученых, также изучавших хроматографическое разделение органических веществ. [c.131]

О применении хроматографического метода для разделения цис-транс-изомеров каротиноидов см. стр. 135. [c.184]

Основными компонентами эфирных масел являются терпены, углеводороды и родственные кислородсодержащие терпеноидные производные. Эти соединения состоят из изопреновых звеньев, причем монотерпены состоят из двух звеньев (Сю), а сесквитерпены — из трех (С1б). В настоящей главе мы рассмотрим только монотерпены (обычно называемые просто терпенами) и сесквитерпены, поскольку эфирные масла состоят главным образом из производных этих двух групп соединений. Другие соединения, состоящие иа большего числа изопреновых звеньев, также важны с биохимической точки зрения к ним относятся каротиноиды и стероиды. Хроматографическое разделение этих веществ рассмотрено в другом месте (см. гл. 7). [c.341]

При пропускании раствора смеси пигментов через колонку, наполненную порошкообразным сахаром, большая часть каротинов проходит, почти не задерживаясь адсорбентом, тогда как ксантофиллы, наоборот, адсорбируются. С помощью хроматографического метода Цвета достигается дальнейшее разделение каждой из групп каротиноидов на составляющие их индивидуальные компоненты. [c.116]

Количественные определения каротиноидов производятся различными методами, чаще всего визуальным колориметриро-канием. Для этого разделенные хроматографическим способом пигменты вытесняются подходящим растворителем, переводятся в бензин или в другой растворитель и колориметрируются. Стандартным раствором может служить раствор двухромовокислого калия, так называемый стандарт Лундборга-Русселя (0,036 %-ный раствор К2СГ2О7 соответствует по окраске раствору 2,08 С каротина в 1 мл петролейного эфира). [c.94]

Количество каротиноидов в смеси с хлорофиллами мол<ио определить только иа спектрофотометре. Для более тонкого количественного анализа пигментной системы листьев предварительно осуществляют се разделение хроматографическим методом. Содерлсапие пигментов выражают в миллиграммах иа единицу сырой или сухой массы (на 1 г), в процентах сырой (сухой) массы и на единицу площади листьев (дм ). [c.87]

Принцип извлечения каротиноидов из растительных или животных источников основан на экстракции сухого измельченного сырья органическим растворителем с последующей отгонкой избытка растворителя из экстракта остаток подвергают обработке едкой щелочью с целью омыления липоидных веществ и каротиноиды извлекают петролейным эфиром или гек-саном. Экстракт смешивают с метиловым спиртом и после расслаивания получают два слоя углеводородный, содержащий каротиноидные углеводороды, в том числе а-, - и -каротины, и метанольный, в котором заключаются кислородсодержащие каротиноиды. Дальнейшее разделение каротиноидов производят хроматографически по методу Цвета [Щ] на окиси алюминия [368] или других адсорбентах с последующим избирательным вымыванием смесью бензола и метанола или другими растворителями (см. с. 191). [c.200]

Полярные адсорбенты общего назначения. Используются для хроматографр ческого разделения каротиноидов и других веществ. Ниже приведены марки мг терналов, вырабатываемых специально для хроматографических целей, [c.284]

Многие микроорганизмы продуцируют каротиноиды. Например, культура В1акез1еа Мзрога продуцирует р-каротин в количестве до 20 мг на 1 г сухой биомассы. Растения, синтезирующие каротины в значительных количествах, являются источниками промышленного получения витамина А. Принцип извлечения каротиноидов из растительных тканей основан на экстракции сухого измельченного сырья органическими растворителями с дальнейшим разделением каротиноидов хроматографическими методами. р-Каротин в кристаллическом виде получают из люцерны, моркови и тыквы. [c.97]

Разделение хлорофиллов и каротиноидов было предметом классических хроматографических исследований Цвета [1], который испытывал для этой цели многие сорбенты. В злодифици-рованном виде метод Цвета находит широкое применение [c.267]

Так как в плоских тараис-полиенах осуществляется почти полный резонанс, дможно было бы ожидать, что они окажутся более стабильными, чем 1 ис-изомеры, но как уже указывалось, стабильность системы зависит не только от присутствия цис-двойных связей, но также и от их расположения и общей формы молекулы. Первоначально термическая устойчивость по мере повышения числа двойных связей снижается, причем эффект повышения жесткости и компактности при введении г мс-связей возникает только, когда они уже имеются в высокой пропорции. С другой стороны, при наличии цис-связей заметно возрастает чувствительность к освещению, и соединения с центральной цис-связью очень фоточувствительны из-за общей изогнутой формы молекулы. мс-Каротиноиды со стерическими препятствиями исключительно устойчивы к нагреванию, но, как и можно было ожидать, изомеризуются быстрее, чем соединения с тракс-конфигурацией всех связей и чем незатрудненные 1 мс-изомеры при освещении в присутствии иода. Подобно обсуждавшимся выше а, м-диарилнолиенам, различные изомеры каротиноидов также четко различаются по способности адсорбироваться на хроматографических колонках, что облегчает их разделение и установление строения, которое часто проводится с применением спектроскопических методов. [c.223]

Каротины располагаются в колонке ниже других каротИ ноидов, то их легко собрать при промывании колонки рас творителем и определить количественно колориметрически Способы количественного определения каротина с по мощью хроматографии по М. С. Цвету разработаны Государ ственной контрольной витаминной станцией. Эти способы однако, трудно использовать в студенческом практикуме так как они требуют много времени и реактивов. Мы ограничимся поэтому описанием качественного разделения каротиноидов на хроматографической колонке. Приборы. 1. Ступка с пестиком. [c.94]

Оксид магния чаще всего применяется для разделения соединений типа каротиноидов и порфиринов. Хроматографические свойства оксида алюминия наиболее подробно исследовал Снайдер [68] . Этот автор нашел, что активность дезактивированного водой оксида магния можно быстро повысить, элюируя его сухими органическими растворителями. Однако после такой обработки возможна необратимая адсорбция некоторых органических, главным образом ароматических, соединений. Этого нежелательного явления можно избежать, используя растворители, содержащие воду. По своим свойствам оксид магния в известной степени похож на оксид алюминия. Основное различие заключается в его большем сродстве к двойным углерод-углерод-ным связям, а следовательно, и к ароматическим соединениям. Для хроматографическо1 о анализа можно использовать собственно оксид магния и различные его комбинации с другими адсорбентами. В колоночной хроматографии обычно применяют оксид магния в сочетании с диатомовой землей, чтобы облегчить элюирование. Николаидес [51] определил условия тонкослойного и колоночного хроматографирования таких смесей восков и стеринов, которые трудно разделить другими методами. Он показал, что разделение веществ на оксиде магния происходит в соответствии с плоскостными размерами их молекул. [c.170]

Адсорбенты. Выбор адсорбента до настоящего времени частично производится опытным путем. В то же время накапливается все больше данных о пригодности тех или иных адсорбентов для разделения веществ с определенным химическим строением, приводится несколько примеров применения специфических адсорбентов. В каждом отдельном случае выбирают такой адсорбент, который обладает наибольшей избирательностью по отношению к отдельным компонентам смеси, подлежащей разделению. Выбор адсорбента частично зависит от характера применяемых растворителей. Для анализа веществ с полярными группами в молекуле могут применяться окись алюминия и окислы других металлов. Для разделения кароти-1ЮНД0В обычно используются окись алюминия, гидрат окиси кальция, углекислый цинк и углекислый кальций, адсорбирующая способность которых уменьшается в приведенной последовательности. Стрейн исследовал последовательность адсорбции некоторых каротиноидов на колонках из сахара, целита и окиси магния. Относительная способность к адсорбции в значительной мере определялась избирательным сродством адсорбентов к характерным группам или частям молекул пигментов. Сахар преимущественно притягивает полярные гидроксильные группы ксантофиллов, а окись магния — ненасыщенные части молекул каротинов и ксантофиллов, а также и гидроксильные группы ксантофиллов. Стрейн применил колонки пз окиси магния для исследования ксантофиллов и хлорофиллов и показал, что распределение растворенных веществ в зонах адсорбции зависит от многих условий. Например, пигменты, образующие обычно одну окрашенную зону, могут образовать две зоны, в присутствии некоторых бесцветных примесей. Для разделения карбонильных соединений в виде 2,4-динитрофенилгидразонов был применен порошкообразный сернокислый магний.Брокманн показал, что растворимые в воде соли, например сульфаты меди и цинка, могут служить хорошими адсорбентами для хроматографического разделения производных азобензола. Сернокислый алюминий можно применять для разделения оксиантрахинонов, причем очень прочно адсорбированные вещества удается выделить только после растворения адсорбента в воде. [c.1491]

Винтерштейн и др. [15] анализировали методом ТСХ различные природные продукты на содержание каротинов. Хроматографические слои они получали смешением 5 г силикагеля G и 20 г гидроксида кальция. Как элюирующий растворитель для адсорбционного разделения в большинстве случаев применяли смесь петролейный эфир (80—105°С)—бензол (1 1). При необходимости состав этой смеси варьировали, меняя соотношение компонентов, а также добавляя к смеси 1 % метанола. Таким способом удалось разделить альдегиды на две группы С37, С32, С27 и С40, Сз5, С25. Эти же авторы использовали также распределительную хроматографию на тонкослойных пластинках. В этом случае погружали высушенные пластинки с силикагелем на две минуты в 5 %-ный раствор парафинового масла в петролейном эфире. Затем петролейный эфир удаляли, с этой целью пластинки сушили в горизонтальном положении 10 мин при 120°С. Элюирующим растворителем служил метанол, насыщенный парафиновым маслом. Используя как адсорбент смесь силикагеля и гидроксида кальция, а как растворитель смесь бензол—этилацетат (77 23), Бокс и Бёкенооген [16] разделили каротиноиды и феофитин, находящиеся в соевом, рапсовом и льняном маслах. [c.258]

Уже незначительные структурные изменения, например изменение положения двойной связи в молекуле, нарушающие сопряжение, отражаются на адсорбционных свойствах. Примером этого может служить разделение четырех углеводородов, относящихся к группе растительных пигментов—каротиноидов общей формулы С40Н68, а именно а- и -каротины, содержащие два шестичленных цикла и одиннадцать двойных связей (у -изомера все сопряженные, у а-изомера одна изолированная), 7-каротин— один цикл, двенадцать двойных связей (из них одна изолированная) и ликопин—тринадцать двойных связей (из них две изолированные). Разделение их возможно путем хроматографической адсорбции из петролейного эфира на колонках из окиси алюминия, кальция или магния. После проявления петролейным эфиром получаются четыре четкие зоны, из которых верхняя—ярко-красная зона содержит ликопин, следующая оранжево-красная зона—- -каротин, далее идет оранжевая зона—р-каротин и, наконец, самая нижняя желто-оранжевая—а-каротин. Чувствительность метода настолько велика, что позволяет выделить -каротин, содержащийся в смеси пигментов моркови в количестве 0,1%. Только благодаря хроматографическому методу удалось обнаружить и выделить отдельные цис-транс-изомеры каротиноидов. Так, для -каротина можно ожидать (с учетом влияния пространственных затруднений) существования двадцати изомеров, из них в настоящее время хроматографическим путем выделено двенадцать изомеров. [c.135]

Хайфлосуперцел нашел применение и в тонкослойной хроматографии. Смесь этого сорбента с оксидом магния и сульфатом кальция образует прочные слои, элюирование на которых можно проводить с высокой скоростью. Разделение неполярных каротинов на таких слоях протекает с хорошим разрешением [369]. На таких слоях можно, например, за один прием разделить все каротиноиды моркови. Хроматографический анализ пигментов хлоропластов перца apsi um включает две стадии сначала на пластинках с целлюлозой разделяют хлорофиллы и ксантофиллы, а затем смесь каротинов хроматографируют на тонком слое оксида магния и хайфлосуперцела [370]. На слоях из оксида магния элюирование можно вести легким петролейным эфиром. ТСХ на этом сорбенте в сочетании с УФ-детектиро-ванием составляет основу метода количественного определения а- и р-каротинов в биомассе [371]. Для обнаружения небольших количеств р-каротина предложен метод хроматографии в тонком слое, сформированном из смеси карбоната кальция, оксида магния и гидроксида кальция, в системе ацетон — легкий петролейный эфир — хлороформ (5 5 4) [372]. Проведен сравнительный анализ эффективности разделения главных пигментов на слоях из кукурузного крахмала, целлюлозы и микрокристаллической целлюлозы. В системе гептан — этилацетат — пропанол полное разделение было достигнуто на слоях из крахмала [373]. [c.251]

Количественное разделение фенилаланина, лейцина, изолейцина, метионина, триозина и валина достигается на колонне, наполненной картофельным крахмалом. Для автоматического отбора большого числа фракций разработано особое приспособление. Отдельные фракции весьма малого объема анализируются затем микробиологическим путем [265]. Хроматографическое разделение применено теперь и в большинстве работ по изучению распределения каротиноидов в растительных тканях. Описаны методы определения как одного каротина — пигмента с активностью витамина А [50, 114, 231, 290] в альфа-альфа и тому подобных травах — так и вместе с витамином А — в смешанных кормах [72, 200]. Выбор подходящего растворителя на стадии элюирования позволил добиться отделения р-каротина от некоторых его стереоизомеров [26]. [c.164]