Аммиака определение с нингидрином

Нингидрин. Реакция нингидрина (трикетогидринденгидрата) с аминокислотами используется для обнаружения и количественного определения аминокислот. Нингидрин, являющийся сильным окислителем, вызывает окислительное дезаминирование аминокислоты, приводящее к образованию аммиака, двуокиси углерода, соответствующего альдегида и восстановленной формы нингидрина [c.48]

Нингидринная реакция. В качестве реактива для качественного и количественного определения аминокислот широко применяется нингидрин (трикетогидринденгидрат). При нагревании с аминокислотой нингидрин восстанавливается до ди-кетооксигидриндена, а аминокислота окисляется и распадается иа альдегид, двуокись углерода и аммиак [c.784]

Образование продуктов, обладающих флуоресценцией (сами реагенты не флуоресцируют), позволило значительно увеличить чувствительность метода. С флуорескамином открывается 10 —10 " молей аминокислот. В отличие от нингидрина реакции не мешает присутствие аммиака. Реакция протекает при комнатной температуре при pH 7,0— 9,0. Поскольку флуорескамин в водной среде разрушается (в течение нескольких секунд), для приготовления раствора используют безводные жидкости (ацетон, ацетонитрил, диметилсульфоксид и др.). Продукт реакции стабилен в течение нескольких часов. Пептиды и белки, проявленные флуорескамином, могут использоваться для определения аминокислотного состава и аминокислотной последовательности. [c.130]

При окислении альфа-аминокислот нингидрином при pH 1 образуется аммиак, двуокись углерода, восстановленный нингидрин и другие продукты. При pH выше 3 аммиак, восстановленный нингидрин и невосстановленный нингидрин образуют окрашенное в синий цвет соединение. Оно гидролизуется при pH 11 с выделением азота в виде аммиака, который затем, после аэрации, определяют реактивом Несслера. Метод применяют для определения альфа-аминного азота, хотя он дает некоторую ошибку вследствие того, что оксипролин, пролин и триптофан взаимодействуют с нингидрином при pH 1 не количественно. Из 23 исследованных альфа-аминосоединений для 14 точность результатов количественных определений находилась в пределах 5%, а для 16 соединений — в пределах +10%. [c.115]

Первичные а-аминокислоты реагируют с нингидрином , давая интенсивное фиолетовое окрашивание. Реакция осуществляется в две стадии. Первоначально аминокислота окисляется до низшего альдегида или кетона с выделением аммиака и диоксида углерода. Затем аммиак взаимодействует с продуктом восстановления нингидрина и с непрореагировавшей молекулой нингидрина, образуя фиолетовое соединение. Количественное образование вещества наряду с интенсивностью его окраски делает эту реакцию очень ценной. Она широко используется как для качественного определения аминокислот (например, как опрыскиватель при хроматографии), так и для количественной оценки с помощью спектрофотоыетрических методов. Метод обладает большой чувствительностью благодаря высокой [c.295]

Важной реакцией, использующейся при количественном и качественном определениях аминокислот, является реакция с нингидрином, или трикетогидринденом. При нагревании большинства аминокислот с нингидрином они окисляются и распадаются на соответствующий альдегид, углекислоту и аммиак [c.190]

Образовавшиеся аммиак, угольный ангидрид и альдегид доступны количественному определению. Кроме того, можно определить интенсивность сине-фиолетовой окраски пурпура Руэ-манна (енолят индандион-2-К-2 -инданона), образующегося при реакции аммиака с нингидрином и продуктом восстановления нингидрина (инданон-ендиолом) [124—126] формула пурпура Руэманна имеет вид [c.34]

Указанные недостатки удалось преодолеть благодаря щелочному гидролизу [4]. Эта методика основана на полном гидролизе всех пептидных связей и последующем определении концентрации свободных аминокислот по реакции с нингидрином. Кроме того, при нагревании полностью удаляется аммиак, присутствующий в образце, что очень сильно снижает фон. Щелочной гидролиз позволяет детектировать пептиды, дающие слабое [c.391]

Смешивают 1 мл раствора, содержащего 0,02—0,4 мг а-аминокислоты [127], с 0,5 мл буферного раствора (рН = 5,3— 5,4) и 0,5 мл 3%-ного раствора нингидрина в метилцеллозольве. Нагревают 15 мин при 100 С, после чего добавляют 5 мл 50%-ного изопропилового спирта и взбалтывают. После охлаждения до комнатной температуры измеряют оптическую плотность красного раствора при 570 нм. Таким способом определяют аланин, аспарагиновую кислоту, аспарагин, валин, глицин, глутамин, глутаминовую кислоту, гистидин, изолейцин, лизин, метионин, орнитин, серии, таурин, тирозин, треонин, фенилаланин, этаноламин, а также аммиак. При определении пролина и оксипролина получают раствор, оптическую плотность которого измеряют при 440 нм. [c.169]

Аммиачная соль енольной формы этого соединения окрашена в интенсивный красно-фиолетовый или пурпурно-синий цвет. Оказалось, что в определенных пределах интенсивность окраски пропорциональна количеству аммиака, участвующему в реакции, и, следовательно, исходному количеству аминокислоты. Эта реакция широко используется для качественного и количественного определения аминокислот, особенно методом хроматографии на бумаге, и очень чувствительная позволяет устанавливать содержание тысячных долей миллиграмма аминокислот. Нингидрин может быть заменен изатином, имеющим близкое строение [c.191]

Определение аммиака при помощи нингидрина [22] Реактивы [c.272]

Реакция с нингидрином. При взаимодействии с нингидри-ном аминокислоты разрушаются с выделением аммиака, углекислоты и образованием альдегидов. Два остатка нингидрина, связанных друг с другом азотом аммиака, освободившегося при распаде аминокислоты, образуют сложное соединение, обладающее сине-фиолетовой окраской. Интенсивность окраски пропорциональна количеству имеющейся в растворе аминокислоты. Реакция эта очень чувствительна и широко используется в настоящее время для количественного определения аминокислот хроматографическим методом (с этим методом учащемуся предстоит знакомиться в курсе биологической химии). [c.242]

Для анализа моноэтаноламина обычно применяют колориметрический метод с использованием нингидрина в среде пиридина. Определению мешает аммиак при содержании до [c.43]

При дезаминировании 2-аминосахаров в щелочной среде образуется аммиак [234], что было положено в основу количественного определения этих сахаров [230]. Необходимо вводить поправку на содержание в гликопротеине амидного азота (см. гл. 6). В этом случае также возможны ошибки, если реакцию проводить в присутствии нейтральных сахаров и основных аминокислот [230]. Определение 2-аминосахаров с нингидрином включает их дезаминирование с образованием соответствующих пентоз оно было обсуждено ранее (см. стр. 213). [c.216]

Опубликованы данные [107] по хроматографическому качественному анализу найлонов 66, 6 и 11. Образец гидролизовали серной кислотой с образованием твердой фракции, состоявшей из адипиновой кислоты и сульфата аминоундекановой кислоты, и жидкой фракции, состоявшей из сульфатов гексаметилендиамина и аминокапроновой кислоты. Твердую фракцию растворяли в 98%-ной муравьиной кислоте и хроматографировали на бумаге ватман № 1. Жидкую фракцию пропускали через анионообменную смолу и проявляли смесью пропилового спирта, концентрированного водного раствора аммиака и воды (6 3 1). Бумажные хроматограммы сушили на воздухе, прогревали 15 мин при 105° и обрызгивали нингидрином для проявления аминов и смесью анилина и ксилола для определения кислых продуктов. [c.336]

Определяя так или иначе количество образовавшихся углекислоты, аммиака или альдегида, можно рассчитать содержание аминокислоты, участвующей в реакции. Однако возможен и другой путь определения содержания аминокислот. В некоторых условиях выделяющийся аммиак конденсируется со второй молекулой нингидрина и с продуктом его восстановления — ди-кетооксигидринденом [c.190]

Петрович и Петрович [72] разделяли 22 аминокислоты на слоях рисового крахмала, содержавших в качестве связующего гипс. В первом направлении разделение проводили смесью н-бутанол—ацетон—диэтиламин—вода (10 10 2 5), а в другом направлении — смесями фенол—вода (3 1) в присутствии паров аммиака, изопропанол—вода—муравьиная кислота (20 5 1), изопропанол—вода—уксусная кислота—пиридин (25 20 5 2) и н-бутанол—уксусная кислота—вода—пиридин (20 5 25 1). Разделение на смешанных слоях проходило медленнее, чем на целлюлозе или силикагеле, но все же быстрее, чем на бумаге. Чувствительность определения с нингидрином— лутидином была хорошей при величине пробы порядка 0,1 мкг (0,5 мкг для аспарагина) при двумерном разделении рекомендуется наносить не менеее 0,5 мкг каждой из кислот. Кукурузный крахмал оказался непригодным. [c.491]

С / /0,04. Остальную часть хроматограммы опрыскивали нингидрином, и после 5-минутного нагревания при 80°С появлялось темно-красное пятно метионина, которому соответствует 7 /0,26 дальнейшее нагревание при 140°С приводило к появлению пятна пантенола с У /0,56. Второй слой силикагеля элюировали смесью ацетон—уксусная кислота—бензол—метанол (1 1 14 4). При облучении УФ-светом становились видимыми пятна рибофлавина (i /0,32) и никотинамида (J /0,64). Область с Rf>0,50 обрабатывали реактивом Т-61, при этом биотин обнаруживался в виде темно-синего пятна с Rf 0,78. Оставшуюся часть хроматограммы обрабатывали реактивом Т-84 пиридоксин под действием этого реактива дает синее пятно с У /0,13. (При обработке пластинки последними двумя реактивами оставшуюся часть хроматограммы закрывали простой стеклянной пластинкой, чтобы предохранить эту часть от воздействия аммиака и хлора.) Слой целлюлозы элюировали смесью 10 %-ный аммиак—метанол (3 7). Витамин Bi (. /0,45) обнаруживали сначала при облучении УФ-светом далее после облучения обрабатывали в течение 30 мин реактивом Т-174, чтобы обнаружить фолиевую кислоту, которой соответствует Rf 0,30. В работе [ 88] указан порог чувствительности определения ряда соединений тартрат холина 3 мкг метионин 0,3 мкг пантенол 1 мкг биотин 0,3 мкг пиридоксин 0,1 мкг рибофлавин 0,2 мкг никотинамид 3 мкг и фолиевая кислота 0,2 мкг. Сравнивая полученные пятна с пятнами известных количеств витаминов, можно оценить полуколичественное содержание витаминов в пробе. [c.419]

Гидролизат, содержащий метионин и цистин, предварительно окисляют надмуравьиной кислотой. На линию старта одномерной хроматограммы наносят 80—100 цг смеси в виде поперечной линии длиной 13 мм, на остальные места наносят стандартную смесь аминокислот, аналогичную по своему составу испытуемой смеси кроме того, наносят каплю тропеолина 00. Первое хроматографирование в системе / -бутанол — уксусная кислота — вода (4 1 5) проводят с перетеканием до тех пор, пока пятно тропеолина достигнет нижнего края бумаги. После сушки хроматограмму хроматографируют в той же системе, повторяя эту операцию 5—8 раз, причем каждый раз до достижения растворителем нижнего края бумаги. Проявление проводят погружением хроматограммы в 0,7%-ный раствор нингидрина в безводном ацетоне, после чего хроматограмму выдерживают в течение 8—10 час при комнатной темнературе в полутьме, нричем в атмосфере не должно содержаться аммиака. Затем хроматограмму освещают минимум двумя источниками света с определенного расстояния и фотографируют на фотопленку. Отношение величины площадей пиков анализируемых образцов, полученных измерением на микрофотометре, сравнивают с площадями стандартных образцов и результаты выражают в виде части от общего содержания аминокислот. Метионинсульфон (располагающийся на хроматограммах вместе с гликоколом и серином), тирозин и триптофан этим способом пе определяются, изолейцин и лейцин определяются совместно. [c.776]

Нингидриновая реакция характерна для а-аминогрупп. Растворы белка, а-аминокислот и пептвдов при нагревании с нингидрином дают синее или фиолетовое окрашивание. В этой реакции а-амино-кислоты и пептиды окисляются нингидрином и подвергаются окислительному дезаминированию и декарбоксилированию с образованием аммиака, альдегида и СО2. Нингидрин восстанавливается и связывается со второй молекулой нингидрина посредством молекулы аммиака, образуя продукты конденсации, окрашенные в синий цвет (комплекс Руэмана). Нингидриновая реакция используется для количественного определения а-аминокислот в аминокислотных анализаторах. [c.25]

Реакция с нингидрином. Эта реакция имеет большое значение для обнаружения аминокислот на хроматограммах и их количественного определения. Больщинство аминокислот реагирует с нингидрпном с образованием соответствующего альдегида, двуокиси углерода и аммиака, которые доступны количественному определению. При этом раствор окрашивается в интенсивный сине-фиолетовый цвет. Механизм этой реакции еще но выяснен окончательно. [c.42]

С нингидрином реагируют не только а-, но и р- и у-аминокислоты, а также аминосахара, пептиды, белки, амины, аммиак, мочевина, креатин и другие ампносоединення. Кроме того, разные аминокислоты дают окрашивание различной интенсивности. Поэтому колориметрический нин-гидринный метод применим для количественного определения только индивидуальных аминокислот и не пригоден для суммарного определения смеси аминокислот, а также в случае сложных биологических смесей, где могут присутствовать аммиак и другие аминосоединештя. В помет,епии, где проводится определение, не должно быть следов аммиака. [c.44]

Применение одной из количественных модификаций нингидринового метода (см. стр. 144) к общему гидролизату представляет собой чувствительный метод определения белка, более строго обоснованный, чем вышеописанные методики. В применении к гликопротеинам нингидриновый метод нуждается в существенных поправках на аммиак (образующийся при расщеплении амидных групп, сиаловых кислот и гексозаминов) и гексозамины, которые тоже реагируют. Гидролизаты разных белков не дают с нингидрином идентичных интенсивностей окраски на единицу веса белка отчасти за счет различного веса остатков (и образования окраски) различных аминокислот, а также, что более существенно, за счет различного содержания в них имипокислот, практически не дающих окрашивания при длине волны 570 ммк, при которой производятся измерения (см. стр. 149). [c.151]

Аминокислоты взаимодействуют с нингидрином (гидратом трикетогидрин-дена) с образованием СОг, аммиака и альдегида, содержащего на один атом углерода меньше, чем соответствующая аминокислота. В результате реакции возникает голубое или фиолетовое окрашивание, что позволяет осуществить колориметрическое количественное определение аминокислот. Однако эта цветная реакция ие является специфической для аминокислот, поскольку окрашенный продукт с нингидрином дает и NH3, и многие другие соединения, содержащие аминогруппу (в том числе пептиды и белки), с тем лишь отличием, что при этом ие выделяется СО2. Поэтому образование СО2 при реакции с нингидрином — характерный признак присутствия свободной карбоксильной группы, расположенной рядом с аминогруппой, т. е. специфично для а-аминокарбоно-вых кислот. Пролин и оксипролии при реакции с нингидрином образуют производное, окрашенное в желтый цвет. [c.118]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология