ДНК для электрофореза, приготовление

Приготовленными растворами заполняют электрофоретические трубки (в первой используют золь 1 и раствор 5, во второй — золь 2 и раствор бит. д.). Электрофорез проводят в течение 40 мин. Определяют знак заряда коллоидных частиц и рассчитывают -потенциал по формулам (П1.40) и (П1.41). Результаты записывают в таблицу (см. табл. 1И.7). Объясняют полученные результаты. [c.97]

Цель работы — приготовление дисперсных систем, которые в дальнейшем могут быть использованы для исследования их электрокинетических свойств определение знака заряда коллоидных частиц с помощью электрофореза (см. работу 16) и определение знака заряда на границе раздела твердое тело — жидкость с помощью электроосмоса (см. работу 14). [c.80]

В качестве боковой жидкости часто применяют ультрафильтрат золя или дисперсионную среду, полученную коагуляцией коллоидной системы путем замораживания. Однако если исследуют относительно концентрированные коллоидные растворы с небольшим содержанием электролитов, приготовленная таким способом боковая жидкость обладает все же несколько иной электропроводностью по сравнению с золем. В этом случае при вычислении скорости электрофореза необходимо вводить поправки на распределение напряженности в электрическом поле, что подчас бывает трудно. [c.208]

При движении коллоидных частиц в электрическом поле (электрофорез) они теряют на электроде заряд и слипаются (коагулируют). При использовании золя Ре(ОН)з, приготовленного по предложенной выше методике, на катоде образуется осадок Ре(ОН)з. Каков заряд частицы золя [c.426]

Приготовление агаровых пластинок и проведение электрофореза. [c.93]

Для приготовления агаровых пластинок используют предметные стекла. Предварительно их обезжиривают, тщательно промывают водой и высушивают. Стекла нумеруют, укладывают на строго горизонтальную поверхность и на каждое осторожно наливают пипеткой с широким концом 4 мл агара. Пузырьки воздуха в агаре необходимо вывести пипеткой на края стекла. Когда агар застынет и образуется твердый гель, в нем посередине вырезают лунку (щель) для нанесения исследуемого раствора. Приготовленные пластинки укладывают в электрофоретическую камеру. Агаровое плато соединяют с буферным раствором бумажными мостиками из фильтровальной бумаги. В щель каждой пластинки вводят сыворотку крови, предварительно разведенную буферным раствором. На электрофореграмму наносят около 100—300 мкг белка в объеме 0,01 мл. Прибор подключают к источнику тока. Медленно повышая напряжение, доводят силу тока до 20—25 мА (напряжение 200—300 В). Электрофорез проводят в течение 3—4 ч. [c.93]

Приготовление геля. Взвешивают агарозу (250 мг) и добавляют к ней 25 мл электродного буфера. Суспензию нагревают на кипящей водяной бане до получения прозрачного раствора, не содержащего пузырьков воздуха. Охлаждают агарозу до 40°С и осторожно заливают в предварительно прогретую кассету прибора для электрофореза (с. 97). Оставляют при комнатной температуре на 1—2 ч для полимеризации. [c.175]

Некоторые методические сложности препятствуют широкому распространению электрофореза в крахмальном геле, несмотря на его весьма большую разрешающую способность. По сравнению с электрофорезом на бумаге электрофорез в крахмальном геле включает дополнительные операции, связанные с приготовлением и гидролизом крахмала, сборкой прибора, окрашиванием и количественным определением полученных фракций. Однако присущий крахмальному гелю эффект молекулярного сита увеличивает разрешающую способность данного метода по сравнению с электрофорезом на бумаге, и поэтому его используют для более тонкого анализа. [c.12]

Однако приготовление агарового геля является более трудоемкой процедурой, чем соответствующие операции с бумагой, о несомненно ограничивает широкое использование электрофореза в агаре. Другое затруднение связано с необходимостью подбора подходящего типа агара, так как качество агара влияет на электро- [c.13]

Сравнительно новой разновидностью зонального электрофореза является электрофорез на ацетат-целлюлозной мембране [6]. Ацетат-целлюлозная мембрана, по-видимому,— очень хорошая поддерживающая среда, уже нашедшая благодаря ряду достоинств широкое применение. Выше мы отмечали, что приготовление крахмального и агарового гелей—довольно трудоемкая операция, осложняющая метод. В то же время способы предварительной обработки ацетат-целлюлозной мембраны почти так же просты, как и в случае с фильтровальной бумагой. При этом разделение белков происходит лучше и быстрее, а для анализа достаточно 5—1000 мкг белка, растворенного в объеме 0,1—10 мкл. Как белки, так и гликопротеиды очень хорошо окрашиваются на ацетат-целлюлозной мембране, поэтому она является прекрасной поддерживающей средой с точки зрения количественной оценки этих соединений. Электрофорез на ацетат-целлюлозной мембране позволяет получить больше белковых фракций сыворотки крови, чем электрофорез на бумаге, но меньше, чем электрофорез в крахмальном геле. С помощью электрофореза на ацетат-целлюлозной мембране можно определять весьма малые количества индивидуальных белков, благодаря чему он очень подходит для анализа гомогенности выделенного нативного белка. Ацетат-целлюлозные мембраны могут быть использованы также в опытах по иммунодиффузии, что является еще одним достоинством этого метода электрофореза. [c.14]

Если для приготовления геля использовать частицы крахмала определенного размера, то электрофорез в таком геле может дать лучшее разделение белков, чем на бумаге. [c.81]

Методика. Закончив электрофорез, крахмальный блок горизонтально разрезают на две половины. Одну половину окрашивают обычным образом, другую переносят на стеклянную пластинку и располагают колонки крахмала так, как показано на фиг. 9. Затем вокруг них наливают горячий раствор агара (приготовление см. на стр. 127), при застывании которого образуется слой толщиной [c.82]

Приготовление геля. В вакуумной колбе смешивают 7 мл раствора Б, 3,5 мл раствора В и 17 мл раствора А и с помощью вакуумного насоса удаляют из смеси воздух. Затем добавляют 0,7 мл раствора Г и, смешав, заполняют полученным раствором стеклянные трубки прибора для диск-электрофореза, как рекомендуется [c.92]

Приготовление геля агарозы, содержащего иммунную сыворотку, и вторая стадия анализа электрофорез фракций, полученных на первой стадии). Специфическую иммунную сыворотку в соответствующем разведении смешивают с 1%-ной агарозой и наслаивают на стеклянную пластинку размером 10 хЮ см слой толщинои 1,5 мм. [c.155]

Порошковые материалы представляют интерес и при нанесении стеклоэмалевых и других неорганических покрытий. Различают нанесение порошковых материалов припудриванием, электрофорезом и накаткой. Припудривание осуществляют с помощью вибросито-вого дозатора. Поверхность подложки должна быть нагрета выше температуры размягчения фритты. После нанесения порошок оплавляют для получения сплошного слоя. Такой способ позволяет обойтись без органического связующего и приготовления пасты. [c.177]

Большое распространение получил электрофорез в тонких слоях для разделения высокомолекулярных веществ на различных носителях, особенно на агаровом, крахмальном и полиакриламидном гелях. Благодаря замечательной разделительной способности этот метод нашел применение прежде всего в клинической биохимии. Напомним, что в подавляющем большинстве случаев разделение с помощью этого метода осуществляется на носителях, приготовленных в форме геля. Опыт, накопленный в области хроматографии в тонких слоях, показал, однако, что для разделения некоторых групп веществ, в первую очередь низкомолекулярных, можно с успехом применять и суспензии некоторых сорбентов. [c.160]

Схема камеры для электрофореза на бумаге приведена на рис. 18. Для подготовки прибора к работе его устанавливают горизонтально и в электродные кюветы наливают заранее приготовленный буферный раствор при pH 8,6. На полоске бумаги длиной 27 см и щириной [c.125]

Подобно крахмальному и акриламидному агаровый гель является очень мягким носителем в отличие от электрофореза на бумаге при нем не происходит инактивации белков, что позволяет определять активность отдельных фракций бeлкОДJieпo peд твeннo в геле после проведения электрофореза. Приготовление агарового геля значительно проще, чем крахмального или полиакриламидного, продолжительность электрофореза составляет I—4 ч. [c.92]

Измерение скорости электрофореза выполняли в специально сконструированной кювете, схема которой дана на рис. 12.1. Рабочую стеклянную кювету 1 в виде прямоугольного парал-лепипеда с открытыми торцами длиной 20 мм и поперечным сечением 20x0,8 мм помещали между двумя сосудами 2 также прямоугольного сечения, изготовленными из оргстекда. Толщина стенок измерительной ячейки составляла 0,2 мм, что обеспечивало надежную визуализацию микрообъектов при работе с темнопольным микроскопом. Боковые емкости 2 в месте их сочленения с кюветой имели ряд отверстий диаметром 0,5 мм эти емкости прочно закреплялись на основании 3, в котором было высверлено отверстие для вхождения темнопольного объектива 4. Б нижнюю часть емкостей 2 помещали гель агар-агара 5, приготовленный на 1 н. растворе КС1 сверху заливали 0,1 и. раствор USO4 (б) и помещали медные электроды 7. Такая установка удобна в обращении в ней обеспечена герметичность сочленения боковых емкостей с измерительной камерой и возможность тщательной очистки последней после проведения исследований. На основании данных о подвижности частиц дисперсной фазы вычисляли -потенциал по формуле Гельмгольца — Смолуховского без учета поправки на поверхностную проводимость [59]. [c.202]

В колбы /—4, соответствующие номерам электрофоретических трубок, наливают по 40 мл латекса. В колбу 2 вводят 1 мл раствора Na I, в колбу 3 — 2 мл,в колбу 4 — 4 мл и доводят общий объем раствора водой во всех колбах до 50 мл. В колбу / электролит пе вводят (определяют исходное значение -потенциала чатекса). Заполняют приготовленными растворами электрофоретические трубки и проводят электрофорез, как описано выше, в течение 60 мин. [c.95]

С помощью прибора рН-340 измеряют pH приготовленных растворов. В других четырех колбах емкостью 100 мл готовят контактные жидкости, добавляя указанное выше количество щелочи к 50 мл воды. Приготовленными растворами заполняют электрофоретические трубки (см. порядок выполнения работы 14) и проводят электрофорез в течение 30 мин. Результаты измерений и расчетов записывают в таблицу (см. табл. П1.7 в работе 14). По полученным данным строят график зависимости -потенцнала от pH и определяют рН эт. [c.101]

Приготовление геля. Для полимеризации 30 мл разделяющего геля (12,5%) смешивают 12,5 мл раствора акриламида, 7,5 мл буфера разделяющего геля и 10 мл воды. После деаэрирования (5—10 мин на водоструйном насосе) к смеси добавляют 16 мг персульфата аммония и 18 мкл ТЕМЕД. Полученный раствор заливают либо в гелевую ячейку для вертикального электрофореза в пластине (с. 97), либо в трубки (с. 95). На поверхность раствора наслаивают воду. После полимеризации удаляют воду шприцом или фитилем из фильтровальной бумаги. Готовят смесь для концентрирующего геля. Смешивают 4 мл раствора № 1 с 5 мл буфера концентрирующего геля и добавляют [c.122]

А. используют при приготовлении плотных бактериальных сред, применяемых для культивирования и диагностики бактерий, а также как желнрующее в-во в пищевой (особенно в кондитерской) пром-сти. Агароза-носитель в гель-хроматографии, аффинной хроматографии, гелевом электрофорезе, иммунодиффузии и иммуноэлектрофорезе. [c.28]

Частачно гидролизованные, т.н. клинические, Д. с мол. м. 30-80 тыс. (содержат не менее 95% 1 - 6-связей) используют для приготовления плазмозаменителей противошокового и гемодинамич. действия. Д., сшитые поперечными связями эпихлоргидрином (т.н. сефадексы), и их производные-сорбенты в гель-хроматографии, ионообменной и гидрофобной хроматографии и электрофорезе. [c.20]

Была сделана попытка [18] выяснить характер связи лигнина и углеводов в этой фракции путем электрофореза на стеклянной бумаге. Для этой цели фракция была растворена в 0,4%-ном водном растворе едкого натра, а также в нейтральном растворе с фосфатным буфером и подвергнута электрофорезу. При этом растворенное вещество удалось разделить на углеводы и вещества, содержащие лигнин и углеводы. Полученные данные позволили автору работы сделать вывод о существовании в древесине химически связанного лигнингемицеллюлозного комплекса. Этот вывод можно считать достаточно обоснованным, если приготовленные для электрофореза растворы были истинными, т. е. не содержали коллоидных частиц тонко измельченной древесины. К сожалению, эта сторона эксперимента осталась невыясненной. [c.294]

На полооки на расстоянии 8 см от их конца наносят растворы, приготовленные, как указано в статье, и в указанных объемах, затем проводят электрофорез, как описано в методике электрофореза на бумаге. Полосы окрашивают, промывают и, чтобы они стали прозрачными, обрабатывают методом, указанным в статье, где также описан метод оценки электрофореграмм. [c.118]

ЛЮД0КС-Н5, из которогой первый был приготовлен. Матиевич и соавторы показали, что в области pH 4—6, где частицы кремнезема несут на поверхности очень небольшой заряд, модифицированные частицы, по данным электрофореза, сохраняли значительный по величине заряд. К тому же многозарядный катион Ьа + вызывает коагуляцию только модифицированного золя. [c.562]

Приготовление слоя силикагеля согласно работе [145]. Стеклянную пластинку (200X80 мм) тщательно промывают этанолом. На края пластинки приклеивают полоски фильтровальной бумаги (например, ватман № 1) размером 80X65 мм, которые для улучшения притока буферного раствора имеют продольные разрезы. Клей наносят только в отдельные точки, чтобы буфер мог равномерно проходить через полоски бумаги. Из 4,5 г силикагеля G и 8 мл 3%-ного раствора борной кислоты готовят суспензию, наливают ее на пластинку и разравнивают, причем слой силикагеля должен покрыть и участки бумажных полосок, приклеенных к краям пластинки. Слой высушивают 25 мин при комнатной температуре. Толщина слоя составляет около 0,4 мм. После фиксирования на пластинке места старта и нанесения образца последующие операции производят согласно обычным методикам, применяемым в электрофорезе. По окончании разделения полоски бумаги отрезают, слой высушивают и проводят обнаружение. Та же методика используется и при работе со слоями из кизельгура. [c.161]

В настоящее время многие фирмы производят готовые пластинки на фольге для электрофоретического разделения. При использовании таких пластинок отпадает необходимость довольно трудоемкого приготовления слоев сорбентов. В ЧССР такие пластинки производит предприятие Kavalier, завод в Вотице, под названием силуфол для электрофореза. Эти пластинки представляют собой слои силикагеля силпирл, нанесенные на фольгу из электроизоляционного материала (на бумагу, пропитанную полиэтиленом). [c.162]

Примесь калиевых срлей 2-нафтол-3,6-дисульфокислоты и 2-нафтол-6-сульфокислоты (соль Шеффера) в технической Г-соли определяют хроматографически или электрофорезом на бумаге. С этой целью 1 г Г-соли растворяют в 10 мл б о-ного раствора соды и сочетают, размешивая, с 25 мл 0,1 н. раствора п-диазотолуола (приготовление см. стр. 298). Полученный краситель хроматографируют в 2—3%-ном растворе аммиака. Первая, наиболее удаленная полоса дает желтое пятно красителя Г-соли дальше следует розовый краситель Р-соли. Ближе всего расположено оранжевое пятно соли Шеффера. [c.14]

Если электролит в достаточном количестве прибавить к суспен-зоиду, подвижность частиц в электрическом поле уменьшается, и прп некотором предельном содержании электролита наступает выпадение осадка, -потенциал, вычисленный из подвижности в этой точке, называется критическим потенциалом . Критический потенциал в большинстве случаев отличен от пуля и имеет разные значения для различных веществ . Для данного суспеп-зоида это является характеристикой точки, в которой возникает неустойчивость. В табл, 6 приведены результаты, полученные Лебом для водной дисперсии коллоида, приготовленной по методу, описанному на стр. 189. -потенциалы определялись измерениями электрофореза и были воспроизводимы с точностью до -t 2 милливольта. Ясно, что критический потенциал здесь приблизительно [c.212]

Коагуляция включает в себя также и электрокоагуляцию — интересный и перспективный метод очистки воды с помощью гидроокисей алюминия, железа и др., образующихся при электрохимическом растворении изготовленного из этих металлов анода [160]. Естественно, во время электрокоагуляции происходят также окисление, флотация, электрофорез и т. п. При электрохимической коагуляции отпадает необходимость транспортировки и хранения коагулянта, приготовления его растворов, дозирования, смешивания с водой и т. д., но процесс фильтрования осадка при этом остается. При осаждении скоа-гулированных взвешенных частиц на электродах происходит увеличение сопротивления и расхода электроэнергии, а также возникают трудности, связанные с периодической чисткой электродов. [c.188]

Чему равна ИЭТ фермента рибонуклеазы, если при электрофорезе в аммонийном буферном растворе, приготовленном из 63,3 мл ОЛ NH4 I и 100 жл 0,1 М NH4OH (Д осн= 1,8 10 ), белок не передвигается ни к одному из полюсов [c.37]

Электрофорез проводится на стеклянных пластинках с нанесенным тонким слоем агарового геля, приготовленного на буферном растворе при pH 8,6. В геле ближе к одному краю пластинки по одной линии высекают гнездо и очень аккуратно вносят в него 0,1 мл раствора исследуемой смеси белков. После нанесения исследуемого раствора на оба края пластинки параллельно стартовой линии кладут фильтровальные бумажки, покрытые агаром. Эти бумажки служат соединительными мостиками, соединяющими агар на пластинке с буфе- [c.126]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология