Модификации гидролизатов

Разделение смеси аминокислот. Для разделения смеси аминокислот, находящихся в гидролизате белка, и качественного обнаружения отдельных аминокислот широко используется метод распределительной хроматографии на бумаге. Этот метод представляет собой одну из модификаций метода хроматографического анализа, предложенного М. С. Цветом в 1903 г. [c.15]

Большой интерес представляет тонкослойная модификация [40] бумажного фингерпринта по Инграму, позволяющая в десять и более раз сократить время получения пептидных карт (фингер-принтов) и существенно уменьшить количество анализируемого триптического гидролизата. Кроме того, для выполнения этого [c.317]

Важную и существенную модификацию этого типа технологии непрерывного гидролиза растительных белков недавно предложили Аду-Аманква с соавторами [2]. Так, гидролиз соевых белков под действием протеазы, выделенной из Peni illum duponti и иммобилизованной на мембране коллагена в рециркуляционном реакторе, позволил получить гидролизат с высокой пенообразующей способностью и нейтральным вкусом, легко поддающийся взбиванию и разбавлению. Было предложено использовать этот продукт для производства напитков и пищевых продуктов, обогащенных белком. [c.609]

В последнее время появилась возможность определять аминокислотный состав белков с помощью автоматических аминокислотных анализаторов. Когда в 1948 г. Мур и Стейн [551 в дополнение к классическим методам органической химии, а также манометрическому и бактериологическому анализу ввели ионообменную хроматографию, наступил поворотный момент в развитии химии аминокислот. В основу работы созданных сотрудниками Рокфеллеровского института современных автоматических аминокислотных анализаторов была положена ионообменная хроматография. Принцип работы этих приборов заключается в следующем. Исследуемый белок гидролизуют, затем гидролизат подвергают хроматографии на смоле типа дауэкс 50 х8 в Na-форме. Элюирование производят с помощью непрерывной подачи буферного раствора. Выходящий из колонки элюат попадает в пластмассовую ячейку особой формы, где он смешивается с раствором нингидрина. Подачу нингидрина осуществляет специальный насос, работающий синхронно с насосом, подающим буферный раствор на колонку. Затем смесь элюата с нингидрином проходит через тефлоновый капилляр, который погружен в кипящую баню. В этих условиях в растворах происходит нингидриновое окрашивание, интенсивность которого измеряется в проточной кювете спектрофотометрически. Поглощение света регистрируется самописцем. Применение сферических смол [80] позволило сократить время исследования одного образца примерно в четыре раза, а использование особых ячеек сделало вполне допустимыми для анализа очень малые количества исследуемого вещества — порядка 0,01—0,05 мкмоля [38]. Введение одноколоночной процедуры значительно упрощает метод [9, 29, 43, 60]. С помощью этой методики в одной и той же пробе можно определить кислые, нейтральные и основные аминокислоты, что не только экономит исследуемый материал, но и повышает точность и сокращает время исследования. Работая на стандартном аминокислотном анализаторе и пользуясь некоторыми модификациями известных методов, можно полностью закончить анализ одного вещества в течение 3 ч [91. [c.32]

Анализ пептидов, содержащих лизин, из ферментативного (но не триптического ) или частичного химического гидролизата является важным этапом расшифровки аминокислотной последовательности белков. Выделение пептидов, содержащих лизин, следует начать с обратимого блокирования е-аминогрупп остатков лизина в исследуемом белке. Такую обратимую модификацию можно получить при трифторацетилировании [5], малеинировании [2] или цитраконилировании [4]. [c.111]

Наиболее широкое распространение для анализа ферментативных гидролизатов лигноцеллюлозных материалов нашел метод разделения глюкозы и целлоолигосахаридов на силикагеле, модифицированном аминогруппами. Это связано с изократичес-ким режимом элюции сахаров смесью ацетонитрил-вода, доступностью и относительно низкой стоимостью колонок, отсутствием необходимости предколоночной модификации образцов, простотой рефрактометрической регистрации продуктов. Метод позволяет определять концентрацию целлоолигосахаридов на уровне 0,5-10 г/л, а применение в качестве детектора интерференционного или лазерного рефрактометрических детекторов позволяет регистрировать сахара с чувствительностью, сопоставимой с ферментативными и химическими методами — на уровне 0,1 г/л и менее. [c.134]

В гидролизатах коллагена и эластина содержатся десмозин и изодесмозин их разделяли в модифицированных условиях по одноколоночной [59, 60], а также по двухколоночной схемам анализа [61, 62]. Множество работ посвящено хроматографии серусодержащих аминокислот. Определены объемы выхода производных цистеина [63] и цистина, полученных после модификации белков и последующего гидролиза [64]. Найдены условия разделения производных лизина, полученных при модификации нативного белка, а также разработаны условия ускоренного анализа этих соединений [65, 66]. Метилгистидин и некоторые редкие аминокислоты разделяли на 15-сантиметровой колонке [67]. При снижении скорости потока в реакторе вдвое было достигнуто 10—20-кратное увеличение чувствительности при определении N-метиламинокислот, которые разделяли в специально разработанных условиях [68]. Триптофан и его производные разделяли на амберлите G-50 [69]. [c.349]

Эти исследования позволяют нам рекомендовать для быстрого и точного определения тестов Шермена плотные среды е добавлением глюкозы на основе стандартного сухого питательного агара из гидролизата рыбы, который содержит необходимые для размножения энтерококков питательные вещества. Целесообразно добавлять также дрожжевые препараты. Предложенные модификации просты в выполнении, результаты четко определяются после [c.218]

Если определяемые аминокислоты расположены в активном центре или на поверхности белковой молекулы, успешно используется химическая модификация белков с последуюашм выделением меченых пептидов. Однако выделение пептидов, содержащих модифицированный остаток, достигается не легко главным образом потому, что модифицирующий реагент часто реагирует с другими остаткалш, давая продукты с различными выходами. По этой причине гидролизат белка содержит несколько модифицированных пептидов, каждый из которых присутствует в количествах, меньших эквимолярных по отношению к белку. Традиционные методы выделения пептидов включают трудоемкие и длительные операции, каждая стадия которых обычно значительно снижает конечный выход пептида. Использование аффинной хроматографии на сорбенте, специфичном к модифицирующему реагенту, позволяет в одну стадию выделить модифицированный пептид. Вилчек [62] различает три категории модификаций белков [c.126]

Электрофорез производился на установке, изображенной на рис. 20. Тонкослойная пластинка помещалась на охлаждаемый столик, который также использовался в качестве подставки при проточной хроматографии. Электрофоретическое разделение производили при напряжении 950—1000 в и силе тока 30 ма. Для по.чучения пептидной карты па пластинку размером 20x20 см наносили 0,5—0,05 мг пептидной смеси. Авторы работы [40] указыва-приготовить 8 пептидных карт. На рис. 21 представлена пептидная карта триптического гидролизата миозина. Детектирование пептидных пятен производилось с помощью нингидринового или хлортолидинового реактивов. Весьма перспективно детектирование пептидов на пластинке с помощью реакции динитрофенилирования в модификации Патаки [41] [c.318]

Щелочной гидролиз и определение триптофана. Триптофан при кислотном гидролизе белка распадается почти полностью и поэтому для его определения, как правило, проводится отдельный анализ с щелочным гидролизом. Ранее для определения триптофана в щелочном гидролизате широко использовались многочисленные модификации колориметрического метода, основанного на реакции триптофана с пора-диметнламинобензальдегидом [7, 17, 42, 68]. Однако этот ме тод применим лишь при определении триптофана в чистых растворах и в какой-то мере в гидролизатах чистых белков, В случае использования его для определения триптофана в гидролизатах пищевых продуктов среда окрашивается в rpflSHOBato-зеленые тона, соверщенно не сопоставимые с ярко-синим стандартом [47]. [c.191]

Предложена модификация метода, которая позволяет сократить время анализа за счет одновременного проведения экстракции и гидролиза с смесью метанола, хлороформа и едкого бария. Холин выделяют из гидролизата адсорбцией на колонке с флоризилом. При пропускании рейнеката аммония через колонку получают рейнекат холина, который проявляется в виде розовой полосы, после того как избыток реактива вымывают. При наличии хлорофилла колонку до пропускания рейнеката аммония промывают метилацетатом. Рейнекат холина с флоризила элюируют ацетоном и измеряют оптическую плотность раствора при 526 нм 13, 42]. [c.205]

Сильнокислотный катионит КУ-1 получают сульфированием фенола и последующей конденсацией его с формальдегидом или методом суспензионной поликонденсации . Он успешно применяется прп подготовке воды, в гидролизной промышленности — в процессах очистки пентозного гидролизата та, в производстве некоторых алкалоидов (морфина, пилокарпина, лобелина и др.), при очистке сточных вод заводов искусственного волокна. Катионит КУ-1 со сферической формой частиц (КУ-1Г) нашел применение в фильтрах смешанного действия, так как по цвету и массе заметно отличается от анионита АВ-17, являющегося его вторым компонентом. Поскольку при получении КУ-1Г образуется большое количество сточных вод, разработана модификация этого катионита — КУ-10, в производстве которого сточные воды почти отсутствуют. [c.119]

При определении нуклеиновых кислот проводился щелочной гидролиз по методу Шмидта и Тангаузера — 18 ч при 37°. В этих условиях РНК отделялась от ДНК и белков. ДНК осаждалась при подкислении гидролизата хлорной кислотой. После центрифугирования ДНК и белки оказывались в осадке, а РНК — в растворе. Разделение нуклеиновых кислот и гидролиз ДНК проводились по Сма ли и Кроткову (8т11Ие, Кго ко , 1959), определение фосфора — по Лоури в модификации Т. В. Венкстерн и А. А. Баева (1957). [c.10]

При некоторой модификации кулонометрически титрованием электрогенерированным хлором можно определять также микроколичества кофеина, теобромина и теофиллина при их совместном присутствии [497]. Этот метод основан на различном поведении перечисленных соединений в условиях щелочного гидролиза (КОН) при различной продолжительности нагревания реакционной смеси. Сначала проводят гидролиз кофеина кипячением пробы (1,0—1,6 мг) в течение 8 мин в 13% растворе КОН и титруют кулонометрически электрогенерированным хлором. Другую навеску анализируемой смеси гидролизуют в 26% растворе КОН в течение 3 мин. При титровании полученного гидролизата определяют суммарное содержание кофеина и теофиллина (электрохимический эквивалент кофеина равен 0,00020124 мг/ма сек), после чего находят содержание теофиллина по разности результатов второго и первого титрований. Содержание теобромина определяют как разницу между весом образца смеси и содержанием в ней кофеина и теофиллина. Найденные таким путем количества последних умножают на поправочные коэффициенты 0,962 и 0,966, соответственно. Относительные ошибки определения указанных количеств кофеина, теофиллина и теобромина [c.61]

На практике, однако,следует учитывать, что в случае подобной модификации органорастворимых пленкообразователей сформированные покрытия, как правило, характеризуются повышенной токсичностью, так как при совмещении полимеров с кремнийорганическими соединениями в систему обычно вводятся органические, часто ароматические, растворители. А это резко ухудшает санитарно-токсикологические свойства покрытий при их эксш1уатации. Поэтому для модификации полимеров предпочтительнее использовать наиболее легко гидролизующийся тетраэтоксисилан. В отличие от самого тетраэтоксисилана, вызывающего в больших дозах поражение центральной нервной системы и раздражающе действующего на глаза и органы дыхания, продукты его гидролитической поликонденсации — кремнезем, полисилок саны, этанол — являются малотоксичными соединениями. Кроме того, в процессе гидролиза тетраэтоксисилана образуются соединения, содержащие реакционноспособные силанольные группы, которые легко подвергаются реакциям конденсации. Таким образом, появляется возможность использования водных составов гидролизатов тетраэтоксисилана для химической модификации реакционноспособных воднодисперсионных пленкообразователей с целью повышения их термостойкости и снижения горючести. Попутно отметим, что гидролизаты тетраэтоксисилана могут быть хорошими модификаторами других водных пленкообразующих систем, например кремнезолей. Такие системы после введения в них неорганических наполнителей рекомендуют (заявка 59—155468 Япония) для получения негорючих нетоксичных покрытий, отверждающихся в течение нескольких минут при 160 ° С. [c.117]

Попытку создать метод количественного определения для характеристики белковых препаратов предпринял В. Гаусман, предложивший характеризовать белки по распределению азота в трех основных группах продуктов их гидролитического расщепления. Он проводил количественное определение азота аммиака, а также азота оснований я неосновного азота гидролизата [243, 244]. Этот метод в модификации Т. Осборна, добавившего определение четвертой фракции — азота меланина, или, по современной терминологии, азота гумина,— стал одним из наиболее распространенных методов аналитической химии белков [348]. Но это был групповой метод и он не мог дать никаких сведений об отдельных компонентах белковой молекулы или отдельных продуктах ее гидролитического распада. Метод разделения основных аминокислот, предложенный А. Косселем и Ф. Кутчером, имел ограниченное значение [282], как это будет видно в дальнейшем. [c.65]

Изучение последовательности аминокислотных остатков в рибонуклеазе практически началось с работ К. Анфинсена и его сотрудников, которые в 1954 г. при помощи метода динитрофенилирования установили, что ее молекула представляет собой одиночную пептидную цепь, на М-конце которой имеется следующая последовательность аминокислотных остатков лиз.глу.-тре.ала. [1]. Немного позже к изучению химической природы рибонуклеазы приступила группа исследователей Рокфеллеровского института в США, во главе которой стояли Мур, Стейн и Хирс. Группа этих ученых провела определение химического состава рибонуклеазы и установила, что составляющая ее полипептидная цепь содержит 124—126 аминокислотных остатков, которые были определены количественно [413]. Следующим этапом изучения химического строения рибонуклеазы явилось окисление ее надмуравьиной кислотой при низкой температуре, что исключало возможность модификации тирозина. При этом происходил разрыв дисульфидных связей с образованием восьми сульфоновых групп и переход четырех остатков метионина в соответствующее сульфоновое производное. После гидролиза трипсином изучали тринадцать наиболее крупных пептидов, содержавших все 124 аминокислотных остатка, входивших в состав рибонуклеазы [255]. Для выяснения порядка соединения этих пептидов друг с другом было проведено параллельное исследование пептидов пептического и химотриптического гидролизатов, что позволило построить неполную формулу окисленной рибонуклеазы, которая была дополнена сведениями о расположении амидных групп глютаминовой и аспарагиновой кислот [39]. [c.136]

Можно надеяться, что прг количествегшом определении амииокислот в белковых гидролизатах будет достигнут тот конечный стандарт точности, какой в настоящее время существует в элементарном анализе. В дальнейшем различные аналитические методы сгруппированы по применяемой технике, а не по аминокислотам, для которых они прпменяются. Мы старались ие приводить незначительных модификаций прежних методов. Последние сводки Блока и Боллинга [За, 177] содержат многие из этих данных. Викери и Чибнел [176, 178] дали обзор современного состояния аминокислотного анализа и тех выводов, которые могут быть сделаны из полученных результатов. [c.63]

Последняя из этих модификаций [48], предназначенная для открытия фенилаланина в количествах до 6 - мл, основана на нитровании фенилаланина, восстановлении до диаминофенил-аланина и на реакции сочетания в слегка подкисленном растворе с 1,2-нафтохинонсульфокислотой с образованием красной окраски. Описан метод определения триптофана, фенилаланина и метионина в одной пробе щелочного гидролизата белка [123]. [c.161]

Применение одной из количественных модификаций нингидринового метода (см. стр. 144) к общему гидролизату представляет собой чувствительный метод определения белка, более строго обоснованный, чем вышеописанные методики. В применении к гликопротеинам нингидриновый метод нуждается в существенных поправках на аммиак (образующийся при расщеплении амидных групп, сиаловых кислот и гексозаминов) и гексозамины, которые тоже реагируют. Гидролизаты разных белков не дают с нингидрином идентичных интенсивностей окраски на единицу веса белка отчасти за счет различного веса остатков (и образования окраски) различных аминокислот, а также, что более существенно, за счет различного содержания в них имипокислот, практически не дающих окрашивания при длине волны 570 ммк, при которой производятся измерения (см. стр. 149). [c.151]

При использовании метода Эльсона — Моргана иногда наблюдается ошибочная положительная реакция на аминосахар, так как смесь амино-КИС.Т10Т, особенно лизина, с нейтральными сахарами дает красное окрашивание [224—227]. Этих искажений можно избежать, применяя предварительное отделение аминосахаров от других компонентов гидролизата или методику, предложенную Шлоссом [210] и развитую Цесси и сотр. [227, 228]. Первая из этих модификаций применяется довольно широко ее разработал Боас [2]. Кислотный гидролизат помещают на колонку с дауэксом-50 (Н+) и нейтральные вещества элюируют водой. Аминосахара вместе с аминокислотами вымывают с колонки соляной кислотой (например, 2 н.), которую удаляют упариванием, как описано выше. [c.215]

Предколоночная модификация. Смешивают 50 мкл гидролизата белка пли мочи с 50 мкл ОФА-реагеита (разд. 8.16.3.2) и энергично перемешивают. Через 2 мин добавляют 100 мкл 0,1 М КН2РО4 в 66%)-ном ацетонитриле. 2—20 мкл приготовленного раствора вносят на колонку. [c.265]

Модификация. Белок гидролизуют в 6 М НС1, лиофилизуют и остаток растворяют в воде. Если для гидролиза использовалась метансульфокислота, гидролизат нейтрализуют 4 М NaOH. Разбавляют, если необходимо, 0,4 М боратньш буфером (pH 9,5) до получения конечной концентрации по каждой аминокислоте <25 нмоль/мл. Перед гидролизом белок может быть окислен пли карбоксиметилирован. [c.281]

Модификация. В небольшой пробирке высушивают досуха гидролизат белка или раствор аминокислот. Растворяют остаток в 100 мкл буфера для конденсации и высушивают досуха на роторном испарителе или высокоскоростном концентраторе (Speed-Va on entrator). Эта предварительная обработка необходима для удаления следов НС1 и дает возможность избежать появления постороннего пика на хроматограмме вблизи гистидина. [c.284]

Изучался вопрос использования отходов переработки картофеля на крахмал путем выращивания белковых кормовых дрожжей в двухфазном потоке (пенной фазе) при повышенной плотности популяции (Способ. .., 1970 Стахеев, 1978). Выращивание может осуществляться по периодической или непрерывной схеме в аппарате конструкции Шоллер—Зайделя или в его модификации. Субстрат, состоящий из смеси равных объемов клеточного сока и гидролизата мезги картофеля, при pH 5,0— [c.41]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология