Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Метод Варбурга

    L5. Спектрофотометрические методы. Спектрофотометрические методы определения белков имеют ряд преимуществ по сравнению с другими методами и могут быть рекомендованы во многих случаях. Они просты, быстры и не вызывают структурных разрушений в исследуемом материале. Один из наиболее ранних прочно утвердившийся метод Варбурга и Христиана [388] основан на определении соотношения величин поглощения при 280 и 260 нм и позволяет определять белок в присутствии нуклеиновых кислот. В нескольких методах, предложенных позднее, для измерений используются другие длины волн. [c.292]


    Флавины широко распространены в растениях в виде ФМН и ФАД, прочно связанных с белком. Большинство флавопротеидов можно разделить на апофермент и флавиновый компонент с помощью метода Варбурга и Христиана, путем подкисления в присутствии сернокислого аммония. Данные о том, что ФАД встречается в большем количестве, чем ФМН, возможно, отражают тот факт, 14 Заказ Х 8 8 [c.209]

    Манометрический метод — определение количества газа, выделяющегося в результате ферментативной реакции. Этот метод (метод Варбурга) используется, например, для определения активности оксидаз (по поглощению кислорода) или декарбоксилаз (по выделению углекислого газа), а также ряда других ферментов. [c.198]

    Чувствительность и точность определения изменений в парциальном давлении при пользовании масс-спектрометром зависят от самого парциального давления (в этом одно из отличий данного метода от метода Варбурга). Однако для кислорода приемлемая точность измерения может быть достигнута, даже если содержание кислорода в смеси достигает 10% [43]. Поэтому в отличие от многих других методов определения кислорода здесь нет необходимости добиваться анаэробных условий, которые могут подавлять фотосинтез и которые к тому же вообще пагубно действуют на листья некоторых видов растений. При определении СОг низкие концентрации этого газа, преобладающие в природных условиях, бывают даже выгодны. [c.103]

    Эмерсон во всех своих опытах пользовался одной методикой— манометрическим методом Варбурга. В гл. П1 (разд. В) мы уже упоминали о некоторых недостатках этого метода, проявляющихся при исследовании фотосинтеза. Выше указывалось, что в работах по эффекту Эмерсона, так же как и в других опытах, в которых используются плотные суспензии, важное значение имеет вопрос о действии прерывистого света. Блинке и его сотрудники разработали другую методику, обладавшую своими характерными преимуществами и недостатками. Применяя полярографический метод с платиновым электродом (гл. П1, разд. В), эти авторы смогли независимым способом подтвердить существование эффекта усиления. [c.258]

    Двуокись углерода, выделяющаяся из буферного бикарбо-натного раствора при образовании свободной кислоты во время гидролиза эфира, измеряется по манометрическому методу Варбурга [5]. [c.292]

    Скорости поглощения Нг измерялись в респирометрах Варбурга при Г. После заполнения сосуда водородом и до смешения растворов K N и СоСЬ следы Ог устранялись с помощью кислородного абсорбента, помещаемого в центре каждого сосуда. В проведенных здесь опытах по методу Варбурга не употреблялось какого-либо буферного раствора. [c.361]


    С этой целью может быть использован прием кратковременного прекращения контакта аэрирующего газа и культуральной жидкости при последующем измерении снижения в ней конц.ен,-трации растворенного кислорода, которое в данном случае будет обусловлено только процессом дыхания микроорганизмов. Однако хотя этот способ определения дыхательной активности и используется, он является нежелательным, так как при нем неизбежно нарущаются условия культивирования. Одним из наиболее распространенных способов определения дыхательной активности микробных клеток является манометрический метод Варбурга, описанный в работе [172]. Этот метод основан на измерении давления газа в замкнутой встряхиваемой ячейке, заполненной пробой культуры. При условии полного поглощения газов (например, СОг), выделяемых метаболизирующей. культурой, падение давления газа в замкнутой ячейке характеризует только потребление кислорода в процессе дыхания. Существенным недостатком метода Варбурга, значительно ограничивающим область его применения, является необходимость замены культуральной жидкости буферным раствором. Это неизбежно сопровождается изменением физиологического состояния клеток, поэтому метод Варбурга больще подходит для сравнительного изучения интенсивности дыхания, чем для определения абсолютных значений. [c.255]

    Преимущества электрохимических методов определения потребности растущей культуры в кислороде перед манометрическим методом Варбурга, кроме того, заключаются в возможности быстрого проведения измерения (несколько минут). Это необходимо при исследованиях интенсивно растущих культур микроорганизмов. [c.256]

    По сообщению специалистов из ГДР, для оценки эффективности биологической очистки фенольных сточных вод был успешно применен метод Варбурга. Этот метод дал возможность построить кислородную кривую, по ходу которой можно определить величину биохимической потребности в кислороде. Преимуществом метода является то, что по сравнению с методом разбавления результаты получаются гораздо скорее и в большей степени воспроизводимые. Однако собственного опыта применения этого метода мы до сих пор не имеем. [c.350]

    По сравнению с методом Варбурга метод с использованием кислородного электрода обладает тем преимуществом, что компоненты в реакционную среду можно добавлять в процессе измерений сколько угодно раз, в то время как в реакционный сосудик Варбурга можно сделать только две добавки. В то же время респирометр Варбурга имеет большой кислородный резервуар в системе поглощения, тогда как в электродном методе количество кислорода, присутствующего в среде, ограничено. Чтобы избежать ошибок в измерениях с помощью кислородного электрода, обусловленных диффузией атмосферного кислорода в реакционную среду, необходимо принять соответствующие меры предосторожности. Наиболее существенным преимуществом кислородного электрода является универсальность его применения. Он с одинаковым успехом может быть введен в артерию и использован на борту научного судна для проведения океанографических исследований. [c.304]

    Было доказано, что при применении тщательно приготовленных реактивов можно определять активный водород по методу Рота даже в очень малом количестве исследуемого вещества Этот способ был осуществлен (растворитель — анизол) с использованием манометрического метода Варбурга, причем очень хорошие результаты были получены при навеске вещества в 0,9 мг. В качестве растворителя можно также применять анетол (т. пл. 22° С). [c.316]

    Высокий дыхательный коэффициент наблюдается при дыхании дрожжей, у которых одновременно с кислородным дыханием идет спиртовое брожение. Различные животные ткани н продукты растительного происхождения довольно значительно отличаются друг от друга по интенсивности дыхания. Наиболее интенсивно дышат ткани почек, печени, проростки семян, а слабее— мышцы и сухие семена. Метод Варбурга позволяет исследовать особенности окисления различных добавляемых в питательную среду веществ и участие в нем различных ферментных систем. [c.357]

    При манометрическом исследовании, по методу Варбурга, влияния этих смесей на процессы тканевого дыхания у имаго и личинок комнатных мух и гусениц кольчатого шелкопряда было отмечено, что в большинстве случаев механизм воздействия на эти процессы смесей хлорированных терпенов с ДДТ подобен действию их компонентов (11). [c.35]

    Метод Варбурга и Христиана [388]. Измеряют оптическую плотность белкового раствора при 280 нм и 260 нм. Вычисляют [c.300]

    Как показали и наши, и литературные данные, при изготовлении среза слой поврежденных структур достигает 0.05 мм следовательно, при малой толщине среза он составляет 25 % всей массы ткани. С нашей точки зрения, это обстоятельство является главным аргументом против применения тонких срезов. Кроме того, для большинства биохимических и физиологических процессов токсичность кислорода не проявляется. По-видимому, ее следует принимать во внимание в основном при изучении окислительных ферментов, а в остальных случаях ею можно пренебречь и использовать срезы толщиной до 0.52 мм с инкубацией в атмосфере кислорода. Часто употребляют газовую смесь — 95 % Og и 5 % Oj (карбоген). В средах с чистым бикарбонатным буфером такая смесь улучшает буферную емкость. В тех же случаях, когда среда содержит доминирующий фосфатный буфер (3, 8, табл. 1, 3), ее буферная емкость хорошо сохраняется в атмосфере чистого кислорода. Кроме того, карбоген делает невозможным измерение дыхания методом Варбурга. Поэтому мы рекомендуем в основном среды с фосфатным буфером и инкубацию в атмосфере кислорода во всех случаях, где не показана специально необходимость наличия СО2 в газовой фазе. [c.15]


    Полярографические измерения скорости дыхания. Как указывает М. Н. Кондрашова (1973), полярографический метод имеет ряд преимуществ перед методом Варбурга — в частности, он позволяет работать с меньшими массами ткани, измерять динамику дыхания в короткие промежутки времени, а главное — измерять мгновенный эффект смены состава среды инкубации, так как связанные с подобными сменами незначительные колебания температуры для полярографических изме- [c.63]

    Несмотря на многие преимущества полярографического метода, в большинстве биохимических исследований применяется все же метод Варбурга, так как полярографический эксперимент возможен одновременно только с одним срезом. Кроме того, [c.65]

    Исследование биоразлагаемости первичных алкилсульфонатов натрия в аэротенках и по методу Варбурга проводили во ВНИИПАВ [4]. Испытания в течение 70 дней показали, что синтезированные продукты отличаются высокой степенью биоразлагаемости (98—99,3%) в широком диапазоне концентраций. Остаточная концентрация ПАВ в очищенной воде составляет 0,14—0,6 мг1л. [c.53]

    Хорошо известным и широко распространенным способом измерения дыхания является манометрический метод Варбурга. Однако этот метод имеет ряд недостатков. К числу наиболее существенных относятся длительное время предварительной инкубации, необходимое для выравнивания тмпературы (10—15 мин), трудность автоматической регистрации. В связи с этим область применения манометрического метода ограничена, и для изучения быстрой динамики дыхания аппарата Варбурга оказывается непригодным. [c.480]

    Неизрасходованный феноллигнин возвращали экстракцией этилацетатом, неразрушенный аммонийный лигнин выделяли подкислением фильтрованного раствора концентрированной соляной кислотой. Неразложенный щелочной лигнин определяли, абсорбцией в ультрафиолетовом свете, а количество потребленного кислорода — по методу Варбурга. Результаты исследований приведены в табл. 12. [c.699]

    Поглощение кислорода измеряется при помощи манометрического метода Варбурга. Количество фосфатов определяется по методу Фиске — Суббароу. [c.230]

    Метод Варбурга, применяемый для исследования окислительных процессов в тканях и окислительного фосфорилирования, не пригоден для массового обследования животных, так как он трудоемок, требует затраты большого количества времени. В настоящее время все более широкое распространение получают методы полярографического исследования определение кислорода в гомогенатах и срезах тканей, изучение переноса электронов и энергии в дыхательные цепи, а также исследование напряжения кислорода в тканях методом вживления электродов (И. М. Эпштейн, 1960 М. Н. Кондрашова, 1965 Н. В. Саноцкая, 1961). [c.230]

    Во всех прочих исследованиях растения брали в возрасте 7 дней. Примерно 100 мг отрезанного кончика корешка длиной 10 мм, имевшего примерно одинаковый диаметр, помещали в реакционный сосуде питательным раствором (pH 4,8). Кроме того, отрезок корешка такой же длины анализировали на содержание сухого вещества. Поглощение кислорода определяли прямым методом Варбурга [8]. Реакционный сосуд встряхивали примерно 100 раз (полные встряхивания) в 1 мин. Температуру поддерживали на уровне 25°. После 30 мин встряхивания производили манометрические отсчеты через каждые 10 мин на протяжении 2,5 час. Результаты выражали в микролитрах кислорода, поглощенного 100 мг сырого веса тканей в 1 час, а также в микролитрах ки v opoдa в пересчете на 1 мг сухого веса корня в 1 час (Qo2)  [c.209]

    Вассинк [37] применил манометрический метод Варбурга для измерения фотосинтеза листьев ряда садовых растений (маленькие диски, вырезанные из этих листьев, плавали в буферном растворе в сосуде прибора Варбурга). При низкой и умеренной интенсивности желтого света натриевой лампы выходы практически не зависели от темпера-тзфы (17—25°) и от начальной концентрации углекислого газа (1—9°/о)-Световые кривые были прямолинейными до 20 10 эрг1слА сек. Квантовые выходы были вычислены по скоростям фотосинтеза при [c.530]

    Метод двух сосудов очень чувствителен к малым ошибкам манометрического определения. Так, ошибка в измерении давления на 0,3 мм в одном из сосудов за 10-минутный период может изменить вдвое рассчитанный выход кислорода. Эта разница лежит в пределах ошибки опыта метода Варбурга и Бёрка, тогда как в опытах Эмерсона и Льюиса были сделаны гораздо более точные измерения при помощи дифференциального манометра. [c.544]

    ЧТО кривая фиг. 237 получена по методу Варбурга и Негелейна, рассчитанному на наличие полного поглощения), Эмерсон и Льюис провели измерение с несколькими суспензиями постепенно увеличивающейся плотности и экстраполировали результаты к бесконечной плотности. Полученный результат представлен сплошной линией на фиг. 239. Она показывает, что даже при значительной поправке на неполное поглощение все еще остается резкое падение величины f приблизительно от 0,08 при X = 680 до 0,02 при Х = 730 М . [c.595]

    В 1923 году Варбург и Негелейн [309] установили, что при фотосинтезе у hlorella (измерялся по выделению кислорода) квантовый выход, т. е. число восстановленных молекул СОг на каждый поглощенный квант видимого света, может достигать 0,25. В то время это значение считалось теоретическим максимумом. Позже, в 1939 году, Эмерсон и Льюис [81], применявшие тот же манометрический метод Варбурга (гл. П1, разд. В), но при несколько иных условиях, получили еще более высокие значения кажущегося квантового выхода. Они сочли эти высокие значения артефактом, так как при проведении эксперимента на протяжении коротких периодов света и темноты отношение количества выделенного кислорода к количеству поглощенной за то же время СОг не оставалось постоянным. Проведя измерения через промежутки времени меньше одной минуты, авторы обнаружили резкое увеличение скорости изменения в начале каждого периода освещения и снижение этой скорости в начале каждого темнового периода (фиг. 104). Варбург и Негелейн измеряли давление только в те моменты времени, которые соответствуют на фиг. 104 точкам А и В. Чтобы оценить количество кислорода, выделившегося за 10 мин фотосинтеза, они поступали следующим образом утроенную среднюю величину изменения давления за промежуток времени от точки А до точки В (т. е. изменение давления, соответствующее 15-минутному поглощению кислорода в процессе дыхания) вычитали из величины изменения давления за промежуток времени от В до новой точки А (соответствующий 10 мин фотосинтеза и 15 мин дыхания). Эмерсон и Льюис нашли, что такой метод подсчета дает гораздо более высокие значения кажущегося квантового выхода, чем при оценке фотосинтеза за промежуток времени от С до D и дыхания от Е до F (когда устанавливаются ёолее или менее стационарные состояния). [c.235]

    Црямыми методами определения фотохимической активности пигментов являются крышные испытания или испытания в аппарате искусственной погоды. Имеется ряд косвенных методов определения фотохимической активности, рассмотренных в литературе. Из них наибольшее распространение получили микромано-метрический метод Варбурга и определение фотохимической активности по обесцвечиванию раствора красителя — метиленового голубого [1]. [c.150]

    Измерение поглощения кислорода ферментными системами и тканевыми препаратами может быть произведено методом Варбурга (см. гл. 1, разд. 1.7). Однако с помощью этого метода нельзя измерить давление кислорода непосредственно в живых клетках, морской воде, сточных водах и во многих других объектах, где происходит потребление кислорода [6]. Кислородный электрод был впервые использован Дэвисом и Бринком [7] в опытах на животных тканях, и с той поры постоянно совершенствуемые электроды этого типа успешно применяются как для рутинных измерений, так и в научных исследованиях, поскольку они имеют небольшие размеры и просты в обращении. [c.301]

    Методика смешения растворов внутри водолаза была в дальнейшем усовершенствована Клаффом и Тамисианом [35], что привело к возможности получения результатов, которые могут быть сопоставлены с результатами, полученными методом Варбурга. Сосуд, используемый в качестве водолаза, изготовлен по типу песочных часов, причем одно расширение расположено наверху, а другое внизу, и оба они соединены между собой сравнительно длинной шейкой. Изготовление такого водолаза производят с помощью шаблона, аналогичного описанному выше. В нижнем расширении (камера, в которой происходит увеличение объема) может быть помещена щелочь для поглощения углекислого газа. В верхнее расширение (камера, в которой проводят реакцию) помещают исследуемый объект биологического происхождения, например взвешенные клетки, субстрат фермента или известное количество титрованного раствора бикарбоната (для калибрирования). В шейке, непосредственно над верхним шариком, помещают раствор, предназначенный для того, чтобы оказывать влияние на раствор, находящийся в реакционной камере, т. е. замедлитель дыхания, раствор фермента, или, в случае калибрирования, каплю кислоты для получения углекислого газа. [c.292]

    При изучении химических процессов тканевого и клеточного дыхания (in vitro) используются кусочки тканей (почки, печень, мышцы, семена и т. д.), из.мельченные до кашицы, или тонкие срезы этих органов, которые помещают в манометрические сосуды Варбурга, заполненные питательным раствором и кислородом. Метод Варбурга позволяет изучить интенсивность дыхания того или иного объекта. С его помощью можно определить количество поглощенного кислорода и количество выделившегося углекислого газа на единицу веса ткани. Отношение объемов выделенного углекислого газа и поглоиденного кислорода называется дыхательным коэффициентом (ДК). Например, при добавлении к среде глюкозы последняя окисляется до углекислого газа и воды  [c.356]

    Любопытно рассчитать количество АТФ, которое генерируется в день на единицу массы живой материи. Респирометрия методом Варбурга показывает, что среди сбраживающих бактерий нередко имеет величину 300 (300 мл СОг вы- [c.69]

    Поправку на поглощение нуклеиновых кислот в растворе, содержащем белок, можно сделать по методу Варбурга и Кристиана [105] или методу Калкара [87]. [c.362]

    Кажется необходимым критически отнестись к средам Робинсона и Хэнкса (4, 5, табл. 1). Среда Робинсона не содержит иона Mg и бикарбоната — это едва лк благоприятно для жизнедеятельности срезов. Среда Хэнкса содержит только фосфатный, но не бикарбонатный буфер, и притом в незначительном количестве. По нашему мнению, эти среды не заслуживают широкого применения. Все остальные среды делятся на две основные группы по доминирующему буферу — бикарбонатные и фосфатные. Прототипом всех бикарбонатных сред является Кребс—Рингер—бикарбонат (1, табл. 1). Эти среды успешно применяются нейрофизиологами, но они делают невозможным измерение дыхания методом Варбурга. Полярографическое же измерение дыхания имеет свои ограничения. Это основное возражение против бикарбонатных сред. Для того чтобы сделать возможным измерение дыхания, Кребс применил среду Кребс—Рингер—бикарбонат low (цит. по Manometris he Methoden.. ., 1965 2, табл. 1), при использова- [c.13]

    Вводные пояснения. Для изучения дыхательного и фо-тосиитетического газообмена широко используют манометрический метод Варбурга. Преимущества метода высокая чувствительность, что позволяет работать с малыми навесками опытного материала возможность наблюдать за динамикой газообмена п одновременно учитывать газообмен Ог и СО2, что позволяет установить дыхательный коэффициент. [c.139]

    Метаболиз.ч тканевых срезов, из.кельченных препаратов и препаратов разрушенных клеток. В 1912 г. Варбург начал исследования метаболизма тканевых срезов с использованием манометрической техники. Количественные изменения объема или давления газа регистрировались в приборе, предложенном ранее Холдейном. Метод Варбурга позволил исследовать метаболизм маленьких фрагментов определенной ткани или органа путем манометрического измерения скорости потребления Ог и выделения СОг (дыхательный коэффициент см. разд. 11.1.2). С помощью этого метода можно измерить также скорость утилизации какого-либо питательного вещества пли субстрата, добавленного в среду, в которую помещена ткаиь, и определяют природу и количество метаболитов, образующихся в течение эксперимента. Этот метод получил применение при работе со срезами ткани, гомогенатами ткани, препаратами разрушенных клеток или бесклеточиыми препаратами (см. ниже). [c.388]


Смотреть страницы где упоминается термин Метод Варбурга: [c.20]    [c.160]    [c.85]    [c.5]    [c.171]    [c.42]    [c.97]    [c.20]    [c.62]    [c.251]   
Смотреть главы в:

Определение органических загрязнений питьевых, природных и сточных вод -> Метод Варбурга




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Варбурга



© 2025 chem21.info Реклама на сайте