Динитрофторбензол определение

Для определения числа полипептидных цепей в белковой молекуле разработаны специальные химические методы. Эти методы основаны на использовании особого реагента (динитрофторбензола), который соединяется со свободной аминогруппой аминокислотного остатка на конце полипептидной цепи с образованием окращенного комплекса такой комплекс можно выделить и идентифицировать после того, как бе- [c.392]

Сенгера метод - метод определения К-концевой аминокислоты в полипептидной цепи. Действующим реагентом в методе является 2,4-динитрофторбензол. [c.530]

Первоначально радиохимические методы интенсивно применялись для количественного определения микро- и полумикроколичеств аминокислот путем получения производных по соответствующим аминогруппам. При ЭТОМ в качестве реагента использовался г-иодбензолсульфо- Ч-хлорид. С тех пор появилось много других реагентов и радиохимических методов анализа первичных и вторичных аминов путем превращения их в производные. Были определены даже третичные амины, которые не столь легко превратить в производные. Из радиореагентов наиболее широко применяют хлориды сульфо- и карбоновых кислот, уксусный ангидрид и динитрофторбензол. В настоящее время имеется несколько мак-роколичественных, а также различные микро- и полумикроколиче-ственные методы определения соединений, а также смесей меченых производных. [c.307]

Определение первичных и вторичных аминов по реакции с 2,4 ДИнитрофторбензолом [c.269]

Аналогичные превращения протекают в реакциях свободных аминогрупп концевых аминокислот в пептидах и белках, например, с 2,4-динитрофторбензолом при гидролизе пептидных связей 8] образующиеся динитрофениловые кислоты можно идентифицировать. О методах определения концевых групп см. раздел 2.3.2.2. [c.239]

Еще более реакционноспособен 2,4-динитрофторбензол, используемый в виде реагента Зангера в химии пептидов для определения последовательности аминокислотных остатков. [c.294]

Ранее для определения М-концевой аминокислоты широко использовали 2,4-динитрофторбензол. Незащищенные аминогруппы на концах цепей дают 2,4-динитрофенильные производные, по которым после кислотного гидролиза белка легко установить, какие именно аминокислоты были концевыми. [c.509]

Определение первичных и вторичных аминов [135]. Эти амины нагревают с избытком 2,4-динитрофторбензола при 60 °С в течение 1,5 ч.- [c.140]

Применение. В гистохимии для блокирования SH-групп при определении аминогрупп в тканевых срезах и мазках с помощью динитрофторбензола или [c.240]

Важное значение имеют 2,4-дииитрофенильпые производные аминокислот, которые применяются для характеристики аминокислот и при разделении их смесей, а также для определения строения пептидов и белков. Динигро-фенильные производные получаются при действии на аминокислоты в щелочной среде 2,4-динитрохлорбензолом или 2,4-динитрофторбензолом, например [c.672]

Для определения размеров полипептидных цепей белковой молекулы разработаны специальные химические методы. Эти методы основаны на использовании особого реагента (динитрофторбензола), который соединяется со свободной аминогруппой аминокислотного остатка на конце полипептидной цепи с образованием окрашенного комплекса этот комплекс можно выделить и идентифицировать после того, как белок подвергнется гидролизу и распадется на составляющие его аминокислоты (в том числе и на концевую аминокислоту с присоединенной к ней окрашенной группой). Так, было показано, что один из типов молекул гемоглобина, обнаруженный в красных кровяных тельцах большинства взрослых людей (называемый гемоглобином А), содержит четыре полипептидные [c.680]

Первичная структура белков устанавливается методами химической деструкции. Очень важную роль в определении первичной структуры белков сыграл метод определения концевых групп. Он состоит в обработке белка 2,4-динитрофторбензолом. Незащищенные аминогруппы на концах цепи дают 2,4-динитрофенильные производные, по которым после кислотного гидролиза белка легко установить, какие именно аминокислоты были концевыми [c.359]

N-Koнцe вoй лизин дает а,е- бис-динитрофенильиое производное лизин, расположенный в середине цепи или на С-конце, дает е-моноди-нитрофенильное производное. Фенольная группа тирозина и имино-группа гистидина также реагируют с динитрофторбензолом, но образующиеся производные расщепляются в условиях кислотного гидролиза пептидной связи. Для определения последовательности аминокислот белок подвергают частичному гидролизу и определяют строение образовавшихся ди- и трипептидов анализом концевых групп. Если в гидролизате охарактеризованы все возможные дипептиды, то последовательность аминокислот в белке может быть однозначно определена без дальнейшего анализа концевых групп. [c.690]

Инсулин сильно агрегирован в 0,9%-ном растворе лрн pH = 7, но в очень разбавленных растворах при pH =2—3 он полностью диссоциирован. Молекулярный вес инсулина, определенный различнымифизически ми методами, равен 1,2 000, однако определение, проведенное химическим методом, показало ошибочность этой цифры. Харфенист и Крейг фракционировали инсулин методом противоточного распределения и показали, что кривая распределения соответствует идеальной для однородного вещества. В дальнейшем (1952) они подобрали условия частичной реакции белка с динитрофторбензолом, разделили продукты реакции распределительной хроматографией и, исходя из коэффициента экстинкции при 350 ммк (для монодинитрофенильного производного) и из кривой распределения, нашли значение молекулярного веса, равное 6500. [c.698]

Из химических методов определения С-концевой аминокислоты наибольшее значение имеет метод Акабори [99]. При кипячении с безводным гидразином (100 °С, 5 ч) все аминокислоты, за исключением С-концевой, превращаются в гидразиды. Отделение значительного избытка гидразидов аминокислот осуществляется реакцией с изовалериановым (или другим) альдегидом. Можно также смесь, полученную непосредственно после гидразинолиза, обработать динитрофторбензолом и после подкисления выделить ДНФ-аминокислоту. [c.368]

Взаимодействие 2,4-динитрофтор- и 2,4-динитрохлорбензола с аминами, спиртами и меркаптанами может быть применено для идентификации этих соединений. Особенно большое значение это имеет для определения концевых аминокислот в пептидах. Для этого аминогруппу пептида арили-руют 2,4-динитрофторбензолом и гидролизуют. Концевая аминокислота в виде 2,4-динитрофенильного производного (ДНФ-производное) может быть легко отделена от других аминокислот и идентифицирована [c.326]

В случае применения безводных органических растворителей, содержащих кислоту, возможна миграция ацильных групп, находящихся у определенных остатков оксиаминокислот. Так, при определении концевых групп по методу Эдмана (см. стр. 237—245), согласно которому производное пептида обрабатывают нитрометаном и НС1 [87], уксусной кислотой й НС1 [88] или диоксаном и НС1 [186] для циклизации Ы-Конце-вого остатка, установлено [2, 314], что на последующих стадиях отщепления обнаруживаются небольшие Количества Ы-концевь1Х остатков серина или треонина. В одном случае это привело к неправильному выводу о последовательности аминокислотных остатков [2, 186]. Обычно исследуемое соединение обрабатывают СвНаЫСЗ или динитрофторбензолом при pH 8,5. Если же белок находится в среде с такой величиной pH до добавления реагента, то свободные аминогруппы, появляющиеся в результате миграции ацильной группы от N к О, вновь образуют пептидные связи. Предварительную [c.222]

Ф. Сенгер разработал остроумный метод определения порядка чередования аминокислотных остатков в полипептидных цепочках инсулина. Действием на белок динитрофторбензола он динитрофенилировал аминогруппы аминокислот. Затем путем гидролитического расщепления белка ему удалось отделить Ы-концевую (содержащую свободную аминогруппу) динитрофе-ниламинокислоту и идентифицировать ее. Таким же путем он отделял следующие в полипептидной цепочке аминокислоты друг за другом и тем амым установил их порядок расположения. Оказалось, что одна из цепочек молекулы инсулина (Л) состоит [c.262]

Одни из первых методов определения N-концевых аминокислотных остатков был предложен Ф. Сенгером в 1945 г. При реакции а-аминогруппы пептида или белка с 2, 4-динитрофторбензолом получается динитрофенильное (ДНФ) производное, окрашенное в желтый цвет. Последующий кислотный гидролиз (5,7 н. H l) приводит к разрыву пептидных связей и образованию ДНФ-производ-ного N-кониевой аминокислоты. ДНФ-Аминокислота экстрагируется эфиром и идентифицируется методом тонкослойной хроматографии в присутствии стандартов. [c.37]

Для суммарного определения алкиламинов описан простой фотометрический метод, основанный на изменении первоначальной окраски индикаторного раствора о-нитрофенола. В качестве группового реагента для обнаружения и количественного определения алифатических и ароматических аминов предложен 2,4-динитрохлорбензол и некоторые другие полинитрогалогенпроизводные, в частности 2,4-динитрофторбензол. Сравнительная оценка методов определения аминов обоими реагентами показала, что динитро-фторбензол не имеет преимуществ. [c.88]

Динитрофторбензол был известен как реактив для спектрофотометрического определения некоторых жирных аминов и аминокислот, причем продукт динитрофепилирования после экстракции спектрофотометрировали в ультрафиолетовой области. Нами же было показано, что если продукты реакции динитрофенилиро-вания перевести в окрашенное соединение но реакции Яновского и проводить спектрофотометрирование в видимой области, то чувствительность реакции увеличивается. [c.224]

При определении меркаптанов проводили их динитрофенилирование при помощи 2,4-динитрофторбензола. Полученный алкил- и арилдинитрофенилсульфид после взаимодействия с ацетоном и щелочью давал соединение голубого или розового цвета, Спектрофотометрирование проводили при = 560-ь640 нм (для различных меркаптанов). [c.347]

Молекулярная масса. Для П. со степенью полимеризации 150—200 и меньше мол. масса м. б. определена анализом концевых групп. Этот метод применим лишь при отсутствии циклич. пептидов и низкомолекулярных примесей, содержащих функциональные группы, аналогичные концевым группам линейного П. Концевые аминогруппы м. б. определены титрованием хлорной к-той (в неводной среде в присутствии кристаллич. фиолетового) или методом потенциометрич. титрования. Определение концевых аминогрупп по Ван-Слайку (измерением объема азота, выделяющегося при обработке пептида азотистой к-той) возможно даже в случае нерастворимых в воде полимеров. Иногда П. обрабатывают 2,4-динитрофторбензолом и определяют количество модифицированных концевых групп спектрофотометрически. Концевые карбоксильные группы м. б. оттитрованы метилатом натрия в органич. растворителе-в присутствии тимолового синего. С-Концевая аминокислота П., полученного полимеризацией карбоксиан-гидридов а-аминокислот (см. ниже), может нести специфич. эфирную или амидную группировку катализатора полимеризации, которая м. б. подвергнута количественному анализу. [c.14]

Смешивают 4 мл водного раствора, содержащего 5—100 мкг амина, с 0,05 мл 1,2%-ного раствора 2,4-динитрофторбензола в этиловом спирте и 0,1 мл 0,1 Ai раствора NaH Os. Нагревают 20 мин при 60 °С, затем добавляют 0,4 мл 0,2 н. раствора NaOH в диоксане и нагревают еще 1 ч для удаления избытка реактива, который превращается в 2,4-динитрофенол. Разбавляют водой до объема 10 мл и продукт реакции с амином экстрагируют 10 мл циклогексана или тетрахлорэтана. Органический слой отделяют и оптическую плотность измеряют при 325—360 нм. Этот способ применяют для определения анилина, бензиламина, н-гексилами-на. и пропиламина, этаноламина и других первичных аминов [57,58]. [c.129]

Определение тиолов [135]. Метод основан на реакции тиоспир-тов и тиофенолов с избытком 2,4-динитрофторбензола при 50— 60 °С в диоксановой среде [c.142]

Продукт обработки инсулина 2,4-динитрофторбензолом и последующего кислотного гидролиза (ф) 2,4-Динитроанилин 1 N-2,4-динитрофенилаланин 1 М-2,4-динитро-фенилглицин. Выделение и определение 1) Распределительная 3)5102+ - - вода 4) Хлороформ 5) Визуальный 200 [c.273]

Разработаны химические методы определения величины полинептидных цепей белковой молекулы. Эти методы основаны на использовании особого реагента (динитрофторбензола), который соединяется со свободной а-амино-грунной аминокислотного остатка, стоящего на конце нолипептидной цепи, с образованием окрашенного комплекса этот комплекс можно выделить и идентифицировать после того, как белок подвергнется гидролизу на составляющие его аминокислоты (в том числе и на конечную аминокислоту с присоединенной к ней окрашенной группой). Так, лизоцим, белок, содержащийся в слезах и яичном белке и обладающий свойством уничтожать бактерии, имеет, как было установлено ири помощи ультрацентрифуги, молекулярный вес около 14 ООО и состоит примерно из 125 аминокислотных остатков. Применение описанного метода позволило показать, что имеется лишь одна свободная а-аминогруппа, и на этом основании был сделан вывод, что данная молекула состоит из одной нолипептидной цепи. Если эта полипептид-ная цепь была бы растянута, то ее длина составляла бы около 450 А. Однако, как установлено при помощи ультрацентрифуги, дифракцией рентгеновских лучей и другими методами исследования, молекула лизоцима по форме близка к шару с диаметром около 25 А. Отсюда следует, что нолипептидная цепь не может быть вытянутой, а должна быть скрученной, ибо только тогда молекула приобретет сферическую форму. [c.487]

Методы определения концевых групп полиамидов и полипептидов описаны различными авторами [1149, 1200—1208, 1928]. Интересный метод определения концевых аминогрупп в найлоне предложен Йосида с сотрудниками Г1202]. Авторы обрабатывают полимер динитрофторбензолом, образующим с конечными ННа-группами ярко-желтый продукт, количество которого определяется колориметрически. [c.162]

Относительно легко удается установить, каким аминокислотам принадлежит свободная аминогруппа (Н-концевые аминокислоты) и каким — свободная карбоксильная группа (С-концевые аминокислоты). К-концевая аминокислота в белке, взаимодействуя при определенных условиях с динитрофторбензолом, дает довольно прочное соединение, которое не разрушается при гидролизе белка и выделяется в виде динитрофе-нилпроизводного этой аминокислоты, в то время как остальные аминокислоты выделяются при гидролизе в свободном виде (Сангер). Если при обработке динитрофторбензолом образуются динитрофеннлпроизводные нескольких аминокислот, то отсюда следует, что в данном белке имеется несколько различных полипептидных цепей, содержащих различные концевые аминокислоты. [c.40]

Для колориметрического определения ряда карбонильных соединений рекомендуют 2,4-динитрофенилгидразин или 2-(4-фенилазо)-фенилгидразинсульфокислоту , применяя в последнем случае экстракцию хлороформом. Гексаметилдиизоцианат определяют, омыляя его в гексаметилендиамин, обнаруживаемый далее по реакции с динитрофторбензолом . Первичные арилами-ны определяют по желтой окраске, образующейся при реакции с ванилином. Алифатические и вторичные ароматические амины в этом случае определению не мешают . [c.796]

Из химически активных групп белков 5Н-группы в известном отношении обладают самой широкой реактивностью. За некоторым исключением, реактивы, применяемые для идентификации или определения аминогрупп, алифатических и ароматических гидроксильных групп, имидазольного и гуанидинового остатков реагируют, часто более энергично, и с имеющимися 8Н-группами. В качестве примера можно назвать динитрофторбензол, йодаце-тат, азотистую кислоту, фенилизоцианат, иприт и его аналоги. Эта высокая реактивность 8Н-групп не всегда удобна для их определения. С одной стороны, очевидно, что для приблизительной оценки 5Н-групп может быть применено множество реагентов с другой стороны, известно, что в нашем распоряжении имеется очень мало реагентов, обладающих той специфичностью, которая необходима для количественного определения этих групп. Такими реагентами могут быть некоторые окислители, ряд соединений ртути и мышьяка и такие алкилирующие агенты, как йодацетат и йодацетамид. [c.64]

С-концевых аминокислот в этих соединениях Продукты реакции восстановления в среде Л/ -этилморфолина гидролизуются кислотой и полученные аминокислоты, а также аминоспирты, образовавшиеся из С-концевых аминокислот, разделяются с помощью бумажной хроматографии [1093, 1094]. Определение аминоспиртов методом бумажной хроматографии с помощью нингидрина как проявителя в смеси со значительно большими количествами различных аминокислот представляет значительные трудности. Однако можно провести разделение обоих компонентов, если продукты гидролиза обработать динитрофторбензолом согласно методу Зангера. При этом образуются Л/ -динитрофенильные производные аминокислот и аминоспиртов. Л/ -динитрофенильные производные аминоспиртов извлекаются из водных растворов щелочей диэтиловым эфиром, тогда как соответствующие производные аминокислот остаются в водной среде [1206, 1611]. [c.454]

Работами Коршака и сотрудников было показано, что между числом концевых амино- и карбоксильных групп и молекулярным весом полимера существует простая зависимость. В этих же работах были приведены методы определения концевых групп в полиамидах и принципы расчета молекулярного веса. В последнее время появились более точные методы определения молекулярного веса по концевым группам . Эти методы основаны на связывании соляной кислоты или динитрофторбензола концевой аминогруппой и на последующем потенциометрическом титровании в некоторых работах использовано хроматографическое титро-вание . Большое внимание было уделено также механизму связывания кислот п оснований концевыми группами полиамидов. Эти работы имеют прямое отношенне к теории крашения полиамидных волокон и позволяют улучшить условия крашения на практике. Еще Элёд и сотрудники показали, что концевые группы полиамидных волокон связывают кислоты и основания, при этом образуются соли. При увеличении концентрации кислот [c.428]

Цан и Расгебер [18] показали, что динитрофенильное производное концевых аминогрупп, образующееся при обработке полиамидов динитрофторбензолом, может быть использовано для колориметрического определения концевых аминогрупп в полиамидах 6 и 6-6. Для калибрования можно применять динитрофенильное производное мономера, поскольку молярное поглощение этого соединения имеет ту же величину, что и молярное поглощение динитрофенильного производного полимера. Этот метод пригоден для исследования волокон. [c.292]

Правда, метод обладает ограниченной специфичностью, так как динитрофторбензол реагирует не только с а-аминогруппами М-концевых аминокислот, но и с е-аминогруппами лизина, 5Н-группами цистина, ОН-группами тирозина и имидазольными группами гистидина. Рднако е-ДНФ-лизин легко отличить с помощью соответствующего свидетеля, а все остальные производные бесцветны и не мешают определению. [c.68]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология