Яичный альбумин изоэлектрическая точка

Ход работы 1. Определение изоэлектрической точки яичного альбумина или желатины. [c.29]

Лиотропные ряды. При сравнении коагулирующего действия электролитов выяснилось, что различные ионы при одинаковых валентности и концентрации высаливают далеко неодинаково. Найдено, что высаливающая способность соли зависит от природы как катиона, так и аниона. Например, для того чтобы вызвать едва заметное помутнение щелочного золя яичного альбумина (при pH большем, чем при изоэлектрической точке), необходимы следующие, указанные в табл. 53, концентрации натриевых солей различных кислот. [c.368]

В то время как одни белки выпадают из растворов при диализе, другие осаждаются при добавлении нейтральных солей (метод высаливания). Обычная процедура высаливания состоит в предварительном доведении pH раствора до изоэлектрической точки осаждаемого белка, ибо в изоэлектрическом состоянии растворимость белков минимальна. Затем к перемешиваемому белковому раствору добавляют насыщенный раствор соли (или твердую соль) до тех пор, пока не появится легкая опалесценция. После этого раствор оставляют при комнатной температуре или в рефрижераторе. Если концентрация солей очень высока, часто можно работать при комнатной температуре, так как в этих условиях размножение бактерий резко заторможено. Для осаждения белков чаще всего употребляют сернокислый натрий или сернокислый аммоний. Так, например, если доведенные до изоэлектрической точки растворы сывороточного или яичного альбумина обработать сульфатом аммония [9] или сульфатом натрия [10], то происходит медленное образование кристаллов альбумина, которые оседают на дно сосуда. Образование кристаллов обусловлено медленным испарением раствора. При избытке соли образуется аморфный осадок белка. В таких случаях кристаллы белка можно получить путем диализа белкового раствора против насыщенного раствора сернокислого аммония. [c.12]

При определенных значениях pH раствора число положительных и отрицательных зарядов в молекулах белка становится одинаковым и такие молекулы не переносятся ни к аноду, ни к катоду. Значение pH раствора, при котором достигается такое состояние белка, называется изоэлектрической точкой. Последняя не одинакова для различных белков, так как в зависимости от их аминокислотного состава они могут содержать разное количество свободных амино- и карбоксильных групп. Например, для яичного белка (альбумина) изоэлектрическая точка находится при pH = 4,8 (кислая среда), а для белка пшеницы (глиадина) — при pH = 9,8 (щелочная среда). [c.295]

Белки благодаря своему большому молекулярному весу находятся в коллоидальном состоянии. Белковые молекулы содержат некоторое количество свободных карбоксильных и аминных групп, и поэтому белки относятся к амфотерным электролитам. В щелочной среде белок диссоциирует, как кислота, в кислом растворе — как щелочь. Отсюда следует, что в щелочном растворе молекулы белка заряжены отрицательно, а в кислом — положительно. При прохождении постоянного электрического тока через щелочной раствор белка молекулы его движутся к аноду, а через кислый раствор белка — к катоду. При определенной для каждого белка концентрации водородных ионов количество положительных и отрицательных зарядов в молекуле белка становится одинаковым, и белки перестают передвигаться в электрическом поле. Концентрация водородных ионов реакция среды), при которой в молекуле белка устанавливается равенство положительных и отрицательных ионов, носит название изоэлектрической точки данного белка. Изоэлектрическая точка для различных белков оказывается неодинаковой. Так, например, для казеина изоэлектрическая точка находится при pH 4,7, для яичного альбумина — при pH 4,8, сывороточного глобулина — при pH 5,4, для эдестина из семян конопли — при pH 5,5, для зеина кукурузного зерна — при pH 6,2 и т. д. [c.36]

Необратимое свертывание белка яиц при нагревании — явление хорошо известное. Подобное изменение в состоянии указанного белка может быть вызвано и действием ряда других физических и химических агентов сильным встряхиванием, облучением ультрафиолетовыми лучами, действием ультразвуковых волн, кислот, щелочей, органических растворителей, солей тяжелых металлов, мочевины, гуанидина, салицилатов и многих других веществ. При всех этих воздействиях белок теряет свою первоначальную растворимость и в большинстве случаев становится нерастворимым при изоэлектрической точке. В отличие от других белков коллаген при нагревании в воде растворяется. Измененные под влиянием всех указанных воздействий нативные белки получили название денатурированных белков. часто сопровождается потерей биологической активности белков. Так, например, ферменты теряют свою каталитическую активность, гормоны — физиологическую функцию, антитела — способность соединяться с антигеном. Эти изменения не всегда протекают параллельно изменениям физико-химических свойств белков. Денатурация, очевидно, представляет собой комплексное явление. Вряд ли можно думать, что действие столь различных соединений, как мочевина и серная кислота, а также влияние нагревания обусловливают одно и то же изменение белков. Нельзя поэтому просто говорить о денатурации белков, например яичного альбумина необходимо всегда указывать, какой именно агент вызвал денатурацию. [c.147]

Изоэлектрическая точка большинства растворимых в воде белков (сывороточных, яичного альбумина и др.) лежит в слабокислой зоне, т. е. многие белки обладают характером амфотерных соединений, у которых степень диссоциации карбоксильных групп несколько превышает степень диссоциации основных групп. [c.22]

Величина pH раствора, при которой достигается такое состояние белка, называется изоэлектрической точкой. Для яичного белка (альбумина), изоэлектрическая точка в кислой среде соответствует pH 4,8, а для белка пшеницы (глиадина) в щелочной среде — pH 9,8. [c.381]

В случае малых концентраций яичного альбумина по мере удаления от изоэлектрической точки двухмерное давление оказывается не столь велико, чтобы преодолеть электростатические силы отталкивания. Электростатические силы отталкивания начинают преобладать над силами притяжения. Суш ествование электрического барьера приводит к существенному уменьшению как адсорбции, так и возможности образования межмолекулярных связей в слое. Зависимость среднего времени жизни от pH в интервале их значений 2,1—11,5 (однако кроме значения pH, соответствующего изоэлектрической точке) лежит в довольно узком диапазоне времен (60—80 сек). [c.209]

При помощи электрофоретического исследования было обнаружено, что сывороточный глобулин, который рассматривался как однородный белок, является смесью, по меньшей мере, трех глобулинов, названных а-, р- и Y-глoбyлинaми [76]. Таким же путем было установлено, что кристаллический р-лактоглобулин [77, 78], кристаллический сывороточный альбумин [79] и кристаллический яичный альбумин [80, 81] являются смесями более чем двух белковых компонентов, которые могут быть разделены электрофоретически в их изоэлектрической точке или при других значениях pH [82]. [c.95]

В связи с высоким содержанием фосфорной кислоты нуклеиновые кислоты имеют ясно выраженный кислый характер. Подобно многим другим макромолекулярным анионам они реагируют с белками, образуя солеобразные соединения, нерастворимые в зоне pH между изоэлектрическими точками белков и нуклеиновых кислот. Так, например, яичный альбумин и другие белки осаждаются нуклеиновыми кислотами при слегка кислой реакции раствора [282, 283]. Не приходится сомневаться в том, что белки соединяются с нуклеиновыми кислотами при помощи электровалентных связей. Подобно другим соединениям того же типа нуклеопротеиды растворяются в концентрированных растворах нейтральных солей [283]. [c.263]

Простые белки представляют собой бесцветные соединения, не имеющие ни вкуса, ни запаха. Протеозы, пептоны и пептиды могут иметь горький вкус. Хромопротеины окрашены. Растворимость белков была указана при их классификации. Белки при взбалтывании в воде образуют пену. Некоторые белки (пепсин, яичный альбумин) могут быть получены в кристаллическом виде, но большинство белков представляет собой аморфные вещества, не имеющие определенных температур плавления и кипения. В изоэлектрической точке белки обладают минимальной электропроводностью и вязкостью. [c.290]

Ранее уже отмечалось, что белковые молекулы перемешаются в электрическом поле (при любом pH, кроме изоэлектрической точки). Методы, основанные на этом свойстве белковых молекул, широко используются прн изучении смесей белков. По кривой титрования белка можно составить представление о суммарном электрическом заряде молекулы при любом pH. Так как скорость перемещения молекулы в электрическом поле в значительной степени определяется ее суммарным зарядом, электрофоретическая подвижность белка зависит от pH, как, впрочем, и степень ионизации молекулы. На рнс. 5.22 приведены электрофоретическая подвижность и кривая титрования кристаллического яичного альбумина. Хотя форма и размеры молекулы оказывают влияние на абсолютную скорость перемещения в электрическом поле, определяющим фактором является все же суммарный заряд. [c.161]

Исследование солюбилизации бензола в растворах яичного альбумина, пепсина и химотрипсина при разных значениях pH среды показало, что глобулярные белки обладают наибольшей солюбилизирующей способностью по отношению к бензолу вблизи изоэлектрической точки. Эта особенность, очевидно, является общим свойством глобулярных белков. Процесс денатурации, происходящий с глобулярными белками в растворах при pH, далеких от изоточки, приводит к уменьшению растворимости бензолав растворах белков. [c.25]

Исследователей, изучавших поверхностные свойства белков, всегда интересовало поведение молекул белка при различных pH среды. Однако имеющиеся в литературе данные весьма противоречивы. При изучении поверхностного натяжения белковых растворов Булл и Нейрат [142] обнаружили минимальное значение поверхностного натяжения в изоэлектрическом состоянии и существование максимальных значений в кислой и щелочной областях. ГаузериСвирингеп [143], изучая поверхпостпое патяжеппе 0,005%-ного водного раствора яичного альбумина на границе с воздухом, нашли минимальное значение поверхностного натяжения в изоэлектрической точке и увеличение поверхностного натяжения при отклонениях от нее. После старения слоя эти закономерности становятся более четко выраженными. [c.208]

Рассмотрим влияние электрических зарядов на кинетику образования и прочность адсорбционных слоев яичного и сывороточного альбуминов и казеина на границах с воздухом и с маслом. В кислых и щелочных областях от изоэлектрической точки наблюдалось замедление нарастания прочности межфазных адсорбционных слоев. В этом сказывается большое влияние зарядов на процесс адсорбции и на взаимодействие отдельных молекул друг с другом. Нарастание прочности адсорбционных слоев япчпого альбумина на границе с воздухом показано на рис. 33 при разных [c.208]

Яичный альбумин хорошо растекался на этой поверхности скорость растекания оказалась больше, чем на границе вода-воздух, причём плёнка образовывалась за несколько секунд. Площадь растекания достигала минимума в изоэлектрической точке, но по абсолютному значению этот минимум был того же порядка, что и большинство максимумов , измеренных Гортером на границе вода—воздух, где, впрочем, на несколько более кислых растворах увеличение площадей этих максимумов достигало 60%. Большинство соединений с длинными цепями оказалось слишком растворимым в той или иной фазе, но а-аминопальмитиновая кислота и амид кислоты с прямой цепью, содержащей 20 углеродных атомов, дали довольно устойчивые газообразные плёнки. На границе вода — воздух этот амид образует конденсированную плёнку, растягивающуюся, повидимому, в жидко-растянутую (т. е. всё ещё сплошную) плёнку приблизительно при 67°. Совершенно очевидно, что боковая когезия между длинными цепями, когда они погружены в бромбензол, гораздо слабее, чем когда они находятся в воздухе. Эгого и следовало ожидать, так как сродство длинных цепей может быть насыщено благодаря близости молекул бромбензола или любого другого соединения, имеющего в своём составе углеводороды, причём молекулы этого соединения находятся в состоянии непрерывного движения в жидкой фазе и увлекают с собой цепи молекул плёнки при поступательном движении вдоль поверхности. [c.135]

Изоэлектрическое осаждение. Во многих методах очистки так или иначе используется снижение растворимости белков при pH, близком к значению изоэлектрической точки. Так, например, завершающий этап метода очистки по Штраубу одного из мышечных белков — актина — состоит в доведении pH водного экстракта до 4,7, т. е. до значения изоэлектрической точки актина. Этого оказывается достаточно для полного выпадения в осадок актина, практически свободного от примесей. Ряд белков в кристаллическом состоянии, в том числе сывороточный и яичный альбумин, получают, постепенно повышая концентрацию солей в белковых растворах, приведенных к изоточке. [c.18]

Несмотря на то, что яичный альбумин образует прекрасные кристаллы, он не является однородным веществом и состоит, по данным электрофоретического анализа, по крайней мере, из двух фракций [148, 149]. Яичный альбумин составляет примерно 50% общего количества всех белков яичного белка курицы 15% приходится на долю кональбулшна — белка, остающегося в фильтрате после осаждения кристаллов яичного альбумина [150]. Ко-нальбумин можно получить непосредственно из яичного белка путем фракционирования разбавленным этиловым спиртом [151]. Он оказался флавопротеином с молекулярным весом 87 ООО и изоэлектрической точкой, лежащей при pH 6,1 с солями железа кональбумин образует комплекс красного цвета (см. стр. 239). Из яичного белка можно еще выделить глобулин, который получил название яичного глобулина, однако о его свойствах известно мало [152]. [c.194]

Выше было уже упомянуто об образовании слабо растворимых солей (например, хлоридов и сульфатов) белковых катионов з кислой по отношению к изоэлектрической точке области [195, 202] и об использовании этого явления, например, для выделёнйя кристаллического сульфата альбумина плазмы [106]. Было получено также несколько кристаллических солей лизоцима [204]. Белковые соли, содержащие тяжелые комплексные анионы, например воль-фрамат-, фосфовольфрамат-, трихлорацетат- или метафосфатионы, а также соли, содержащие катионы тяжелых металлов — цинка, меди или ртути, — известны уже давно и применялись для освобождения раствора от белков перед некоторыми анализами [10, 78]. Предполагалось, что эти реагенты при их применений действуют на белки сильно денатурирующим образом. Вслед з-а кристаллизацией цинковой соли инсулина [205, 206] и метафос-фата яичного альбумина [207] недавно последовало приготовление серии кристаллических производных инсулина [208] и сывороточных альбуминов человека [209, 210]. Последние были получены в присутствии ионов, концентрация которых была недостаточна для высаливания (если не добавлять в количестве 5—30% органического растворителя и во избежание денатурации не вести процесс при низких температурах). В этих условиях многие из указанных солей менее растворимы, чем свободный белок или соли с такими катионами, как натрий или калий, и, следовательно, могут найти применение при выделении белков [51] (4). Были получены также кристаллические додецилсульфатпроизводные Р-лактоглобулина [211]. [c.51]

Прибор Гутфрейнда показан на рис. 36. После предварительных опытов с яичным альбумином при pH 7 и с гемоглобином при pH 5, в которых наблюдалось явление расслоения, Гутфрейнд исследовал разделение смеси этих двух белков при pH 6,8 (изоэлектрическая точка гемоглобина). Через 6 часов содержимое центрального отделения было разделено на 12 фракций, которые анализировались на яичный альбумин и гемоглобин. Было найдено, что четыре верхние фракции не содержали яичного альбумина, а в нижних фракциях его концентрация росла от 0,2 до 2,5% (начальная концентрация 0,9 %). [c.273]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология