Альбумин сывороточный, кристаллический

Рис. 59. Зависимость высот отдельных ступеней белковой волны в аммиачном растворе кристаллического сывороточного альбумина (186 м 1л) в присутствии ионов Со(1П) от периода капания

Рис. 5.23. Электрофоретическое разделение сложной смесн белков плазмы крови человека (а), одиночный пик кристаллической карбоксипептидазы (б) и гомогенный пик кристаллического бычьего сывороточного альбумина (в). Вертикаль — стартовая граница белкового раствора. Пик в начальном положении обусловлен присутствием солей буферного раствора.

Сыворотку, оставшуюся после удаления казеина (см. стр. 234), кипятят в фарфоровой чашке до коагулирования сывороточного альбумина. Его отфильтровывают через полотно. Раствор снова выпаривают до тех пор, пока из него не начнет выделяться лактоза. Выпавший после охлаждения сырой кристаллический продукт отсасывают на воронке Бюхнера и сушат. Упаривая дальше маточный раствор на водяной бане, получают вторую порцию лактозы. [c.73]

Иммунологи неточны и в другом они обозначают термином антиген очищенные, молекулярно гомогенные препараты (например, кристаллический бычий сывороточный альбумин), которые, будучи инъецированными, вызывают образование антител к этому веществу, и по традиции также препараты, которые представляют собой сложные смеси (например, суспензии убитых микробов) и применяются на практике для иммунизации. [c.47]

В последние годы для определения гомогенности белков пользуются электрофорезом при различных значениях pH (см. гл. V). При помощи электрофореза было показано, что кристаллический яичный альбумин, бычий сывороточный глобулин, Р-лактоглобулин и все остальные исследованные по этому методу белковые препараты представляют собой смесь нескольких белков [25]. Вполне возможно, что совершенно однородных белковых молекул вообще не существует и так называемые чистые белки представляют собой в действительности смесь очень [c.15]

Электрометрическое титрование и определение электропроводности белковых растворов в присутствии хлористых солей щелочных металлов показало, что небольшие количества этих одновалентных ионов также связываются с белками [27, 55, 56]. В сыворотке крови это количество, однако, настолько мало, что оно не может быть определено ни компенсационным диализом [39], ни электрофоретическим измерением чисел переноса [57]. Данные же электрометрического титрования и определений электропроводности показали, что около 10 функциональных групп молекулы сывороточного альбумина довольно прочно соединяются с анионами хлористых или роданистых солей и что, кроме того, значительное количество этих анионов связано с белком более слабыми связями [27]. Максимальное число ионов, связанных белком, хорошо совпадает с числом групп противоположного знака, находящихся в белковой молекуле. Так, например, было установлено, что яичный альбумин соединяется с метафосфорной кислотой, образуя кристаллическое соединение, в котором содержится приблизительно по одной молекуле метафосфорной кислоты на каждую положительно заряженную группу белка [58]. [c.88]

Расщепление типа все или ничего наблюдалось также при действии кристаллического трипсина на кристаллический сывороточный альбумин или глобулин или при гидролизе пепсином сывороточного альбумина или фибрина [18]. [c.366]

Краткий обзор исследований фосфоресценции белков дал Рид ([18], стр. 107) . Большинство имеющихся сообщений относится к наблюдению при комнатной температуре долгоживущего излучения, исходящего от таких плотных, почти кристаллических веществ, как сухожилие и хрящ. Рид считает, что это позволяет предполагать, что излучение часто может происходить от ловушек различной природы в зависимости от природы вещества. Если бы этот эффект имел чисто молекулярную природу, то от таких материалов можно было бы ожидать меньшего излучения вследствие усиленного концентрационного тушения. В действительности же менее плотные материалы (глобулины и т. д.) не дают никакой фосфоресценции при комнатной температуре. По мнению автора настоящей работы, такие системы можно было бы с успехом сравнивать с пластиками, сшитыми поперечными связями. В случае белковых систем излучение могло возникать либо от специфических хромофорных групп, расположенных по цепи ДНК, либо от свободных молекул, физически адсорбированных на веществе. Значительно более обычна фосфоресценция белковых систем при низкой температуре (77° К). Сывороточный и яичный альбумин, желатин, кератин и некоторые другие белки дают характерную голубую фосфоресценцию. Кроме того, большинство белков легче захватывают кислород, находясь под облучением светом, и Рид предполагает, что в этой реакции могут участвовать триплетные состояния. [c.131]

Альбумины — белки, хорошо растворимые в воде. Из растворов их не удается осадить поваренной солью (как многие другие белки). При прибавлении к раствору альбумина сернокислого аммония альбумин осаждается лишь тогда, когда концентрация (МН4)2304 достигнет 65% той концентрации, которая необходима для полного насыщения раствора Ряд альбуминов был получен в кристаллическом состоянии. Альбумины содержатся в белке яйца (яичный альбумин), молоке (молочный альбумин), сыворотке крови (сывороточный альбумин). [c.341]

Стандартный раствор белка. Пригодны любые имеющиеся в продаже препараты белков или стандартные растворы. Кристаллический бычий сывороточный альбумин или растворы бычьего сывороточного альбумина, приобретенные у фирм, дают вполне приемлемые калибровочные кривые. Основной стандартный раствор должен содержать 0,5 мг белка на 1 мл дистиллированной воды. С различными белками получают различные калибровочные кривые. При опубликовании результатов следует указывать, какой стандарт белка использовался в работе. [c.357]

Гель-электрофорез, Электрофорез в полиакриламидном меряют колориметрически с реагентом Фолина [22] для построения градуировочного графика используют растворы, приготовленные из кристаллического бычьего сывороточного альбумина. Если белковый образец содержит тритон Х-100 к анализируемой пробе добавляют додецилсульфат натрия [23. [c.152]

При помощи электрофоретического исследования было обнаружено, что сывороточный глобулин, который рассматривался как однородный белок, является смесью, по меньшей мере, трех глобулинов, названных а-, р- и Y-глoбyлинaми [76]. Таким же путем было установлено, что кристаллический р-лактоглобулин [77, 78], кристаллический сывороточный альбумин [79] и кристаллический яичный альбумин [80, 81] являются смесями более чем двух белковых компонентов, которые могут быть разделены электрофоретически в их изоэлектрической точке или при других значениях pH [82]. [c.95]

Пример 15-3. Присутствие в сывороточном альбумине быка (САБ) связанных жирных кислот. Если приготовить различные образцы САБ и добавить АНС, наблюдается флуоресценция АНС, но величины Q и Хмакс меняются от образца к образцу. Изменение Q ввиду его значительной величины не мол<ет быть обусловлено изменением полярности места связывания, и, следовательно, оно происходит благодаря варьированию числа мест связывания, т. е. меньшее количество АНС связано в тех образцах, которые имеют слабую флуоресценцию. Если образцы САБ обработать липофильным растворителем, квантовые выходы и спектральные сдвиги становятся одинаковыми для всех образцов. Очевидно, в результате экстракции липофильным растворителем некоторые неполярные участки становятся недоступными АНС. Однако при анализе содержимого растворителя было показано, что из образцов с сильной флуоресценцией экстрагируются жирные кислоты. Следовательно, так называемые чистые образцы кристаллического САБ могут содержать связанные жирные кислоты. Ясно, что по флуоресценции АНС можно оценивать чистоту образцов САБ и изучать связывание жирных кислот с САБ -например, определять константы связывания. [c.430]

Суспендируют 5 г альбумина в 500 мл метилового спирта и добавляют 4,2 мл 12 н. HGL (Безводный метиловый спирт получают кипячением его с обратным водяным холодильником в присутствии прокаленного медного купороса.) Для метилирования обычно используют кристаллический сывороточный альбумин. [c.183]

Рентгенографическими методами изучались и многие другие кристаллический белки рибонуклеаза, инсулин, р-лакто1глобулин, сывороточный альбумин и др. [c.546]

С помощью гель-хроматографии уже давно уда лось установить наличие ассоциатов в некоторых белковых препаратах. Педерсен [96] на сефадексе G-150 выделил и охарактеризовал чистый димер из старых препаратов сывороточного альбумина. Компоненты, выходящие с колонки еще раньше, представляли собой тример и тетрамер сывороточного альбумина (см. [163]). После того как чистую рибонуклеазу А в 50%-ной уксусной кислоте лиофилизировали, а затем фракционировали на сефадексе G-75, в элюате было обнаружено несколько активных фракций. Главный пик соответствует исходному мономеру белка, тогда как остальные компоненты, судя по объемам выхода, являются ассоциатами [97]. Очевидно, аналогичное явление образования димера и других полимеров обна> ружили Зигель и Монти [98] при исследовании уре-азы. Хроматографией на сефадексе G-200 им удалось из кристаллического фермента (Sigma, тип С 1) выделить несколько более быстро движущихся фракций. На основании объемов выхода для них с помощью уравнения Эккерса [59] был вычислен радиус по Стоксу это дало возможность определить молекулярный вес. Таким образом был установлен чрезвычайно интересный факт из препарата, помимо уреазы (мол. вес 483 000), удалось выделить ее димер и тример. По-видимому, в свободном объеме элюировались также продукты еще более высокой степени агрегации. [c.175]

Рис. 122. Электрофорез кристаллического бычьего сывороточного альбумина в диэтилбарбитуратном буферном растворе при ионной силе 0,10 и рН=8,6. Молекулярный заряд при таком рН —25

Для опытов использовался хлористый аммоний особой чистоты А-Г, растворы готовились на свежеперегнанном тридистилляте. Исследование проведено с кристаллическим бычьим сывороточным альбумином фирмы Ko h-Light Laboratories, Ltd. и отчасти с кристаллическим препаратом альдолазы, выделенным из мышц кролика по методу, описанному в работе [6]. Гомогенность белковых препаратов проверялась с помощью гель-фильтрации на сефадексе G-100 и электрофореза в полиакриламидном геле. [c.229]

Изоэлектрическое осаждение. Во многих методах очистки так или иначе используется снижение растворимости белков при pH, близком к значению изоэлектрической точки. Так, например, завершающий этап метода очистки по Штраубу одного из мышечных белков — актина — состоит в доведении pH водного экстракта до 4,7, т. е. до значения изоэлектрической точки актина. Этого оказывается достаточно для полного выпадения в осадок актина, практически свободного от примесей. Ряд белков в кристаллическом состоянии, в том числе сывороточный и яичный альбумин, получают, постепенно повышая концентрацию солей в белковых растворах, приведенных к изоточке. [c.18]

В качестве примера ниже приведена методика карбоксиметилирования сывороточного альбумина быка [81]. Раствор, содержа-ш,ий 500 мг кристаллического белка, 6 ммоль бромацетата и избыток окиси магния, осторожно встряхивают при 35°. За ходом реакции следят, отбирая пробы смеси для анализа различными метода-ьш. Полезными критериями для наблюдения за ходом реакции могут служить убыль аминного азота и отрицательный результат диазосочетания имидазольных и фенольных остатков. В случае бычьего сывороточного альбумина по мере протекания карбокснметилиро-вания дисульфидные связи становятся более доступными восстановлению это можно обнаружить, обрабатывая препарат сначала сульфитом, а затем раствором фосфомолибденовой кислоты по Фолину 82]. Спустя 27—72 час смесь центрифугируют и прозрачную надосадочную жидкость подкисляют до pH 2 соляной кислотой. Практически количественный выход карбоксиметилированного белка. [c.179]

Выше было уже упомянуто об образовании слабо растворимых солей (например, хлоридов и сульфатов) белковых катионов з кислой по отношению к изоэлектрической точке области [195, 202] и об использовании этого явления, например, для выделёнйя кристаллического сульфата альбумина плазмы [106]. Было получено также несколько кристаллических солей лизоцима [204]. Белковые соли, содержащие тяжелые комплексные анионы, например воль-фрамат-, фосфовольфрамат-, трихлорацетат- или метафосфатионы, а также соли, содержащие катионы тяжелых металлов — цинка, меди или ртути, — известны уже давно и применялись для освобождения раствора от белков перед некоторыми анализами [10, 78]. Предполагалось, что эти реагенты при их применений действуют на белки сильно денатурирующим образом. Вслед з-а кристаллизацией цинковой соли инсулина [205, 206] и метафос-фата яичного альбумина [207] недавно последовало приготовление серии кристаллических производных инсулина [208] и сывороточных альбуминов человека [209, 210]. Последние были получены в присутствии ионов, концентрация которых была недостаточна для высаливания (если не добавлять в количестве 5—30% органического растворителя и во избежание денатурации не вести процесс при низких температурах). В этих условиях многие из указанных солей менее растворимы, чем свободный белок или соли с такими катионами, как натрий или калий, и, следовательно, могут найти применение при выделении белков [51] (4). Были получены также кристаллические додецилсульфатпроизводные Р-лактоглобулина [211]. [c.51]

Подобным же образом, здесь не будут обсуждаться солепо-добные производные белков, которые образуются при электростатическом взаимодействии кислых или основных групп белка с катионами или ан-нонами. Отдельные аспекты этой проблемы были затронуты в статьях, посвященных выделению белков и их взаимодействию. Следует, однако, отметить возможность получения разнообразных стехиометрических белковых комплексов в кристаллическом виде. К таким комплексам относятся, например, метафосфат яичного альбумина [13], додецилсульфат лактоглобу-лина [14] и, что наиболее важно, ряд кристаллических производных сывороточного альбумина и меркаптальбумина, полученных Левиным [15]. [c.271]

При стоянии часть молекул димера диссоциирует с образованием мономера, причем эта реакция ускоряется при добавлении стехиометрического количества двухлористой ртути. Меркапталь-бумин можно регенерировать с помощью диализа или осаждения этиловым спиртом в присутствии цистеина. Хотя кристаллические ртутные соли ферментов были известны и ранее, эта работа положила начало другим интересным исследованиям. За нею последовали работы, в которых было показано, что ионы меди, цинка и прочих металлов избирательно реагируют с сульфгидрильной группой сывороточного альбумина, образуя меркаптиды, и только после этого взаимодействуют с другими функциональными группами [726]. [c.293]

Реакцию иприта [ди-(2-хлорэтил) сульфида] с очищенными растворимыми белками исследовали многие авторы, особенно Херриотт, Ансон и Нортроп [88, 89], а также Дэвис и Росс [90]. Первые из названных авторов нашли, что тринадцать исследованных ими различных белков, включая шесть кристаллических ферментов, быстро реагируют с жидким ипритом при рН б—8 и 25°. Скорость инактивирования этих ферментов изучалась кинетическими методами, и -было найдено, что она изменяется характерным образом. Все исследованные ферменты подвергались инактивированию, что противоречит выводу Диксона, Ван-Хейнингена и Нидгама [88], согласно которому иприт и его производные не влияют на активность некоторых ферментов. При рН б этерифвкации подвергалась значительная часть карбоксильных групп об этом свидетельствовало то обстоятельство, что убыль свободных карбоксильных групп была равна количеству связанных остатков иприта, лабильных в щелочной среде. Если кристаллический оксигемоглобин и сывороточный альбумин лошади обработать ипритом, одновременно контролируя величину рН, то оказывается, что максимальная убыль числа титрующихся групп происходит в интервале рН от 2 до 5,5, т. е. в той области, в которой обычно оттитровываются карбоксильные группы. Это свидетельствует об этерификации свободных карбоксильных групп [90]. Однако при рН 5,5 — 8,5 наблюдается [c.300]

Кристаллический гуанидированный альбумин сыворотки крови человека, по данным ультрацентрифугирования, является столь же гомогенным, как и исходный неизмененный белок оба они содержат приблизительно по 5% несколько быстрее оседающего компонента. Ни один из препаратов не обнаруживал заметных изменений в скорости перемещения границы. Таким образом, гуанидированный сывороточный альбумин представляет собой, повидимому, наиболее гомогенное из до сих пор полученных производных белка, за исключением, быть может, некоторых производных пепсина во всяком случае, это соединение было подвергнуто наиболее строгим испытаниям на гомогенность. Сывороточный альбумин, этерифицирован-ный производными ди-азоуксусной кислоты, также не обнаруживает никаких изменений в величине и форме мо- [c.342]

Альбумины — группа весьма распространенных белков, встречающихся в тканях животных и растений, а также в жидкостях организмов (в сыворотке крови, спинномозговой жидкости и др.). к альбуминам относятся белки, растворимые в воде и нерастворимые в насыщенных растворах сернокислого аммония. Альбумины содержатся в яичном белке (овальбу-мины), в сыворотке крови (сывороточные альбумины), в сыворотке молока (лактальбумины), в зеленых частях растений, в зернах злаков (в зародышах), в семенах бобовых растений и т. д. Многие альбумины получены в кристаллическом виде. Различные альбумины могут отличаться друг от друга по способности высаливаться при различных концентрациях нейтральной соли (сернокислого аммония). [c.39]

По сравнению с другими белками сывороточные альбумины изучены довольно хорошо. По своему строению молекула нативного белка близка к эллипсоиду вращения и может быть охарактеризована как молекулярный кристалл со строгой конформационной структурой полипептидной спирали — цепи, свернутой определенным образом и поддерживаемой внутримолекулярными дисульфидными цисти-новыми мостиками, ионными и водородными связями между содержащимися в молекуле ионогенными группами, а также гидрофобными взаимодействиями между углеводородными фрагментами аминокислот. Следует отметить, что в структуре кристаллического белка существенную роль играют молекулы воды. Известно, например, что даже после тщательной низкотемпературной сушки вода составляет около трети массы кристаллического белка. В то же время факт отсутствия молекул воды внутри молекул глобулярных белков был доказан методом дифракции рентгеновских лучей [38, с. 176]. Это косвенно подтверждается и экспериментами по измерению скорости водородно-дейтериевого обмена, из которых следует, что лишь часть атомов водорода в группах —ОН, —NH2 и =КН обменивается практически мгновенно, в то время как на обмен остальных атомов требуется несколько часов. В связи с этим Ф. Гауровиц [38] и некоторые другие исследователи высказывают сомнения в пригодности этого метода для изучения конформации белков и вообще в существенной роли водородных связей, равно как и солевых мостиков, в поддержании нативной конфигурации цепи. [c.548]

За единицу активности фермента принимают его количество, катализнрукзщее образование 1 нмоля аммиака за 1 мин при вышеуказанных условиях определения. Содержание белка. определяют по методу Лоури (Л. М. Гинодман, 1964). Для построения калибровочных кривых используют растворы кристаллического бычьего сывороточного альбумина, содержащие неионный детергент ОП-10 в концентрациях, соответствующих [c.22]

Основополагающая роль упорядоченных кристаллических структур воды в белках подтверждена многочисленными исследованиями кристаллофизических свойств белков с помощью электронного мик-роскопирования, рентгеноструктурного анализа и методами ядерного магнитного резонанса (ЯМР) [14,15]. Получаемые структуры белка подобны структурам аллотропных форм льдов. Так, достаточно внешнего сравнительного анализа микрофотографий кристаллических структур ряда белков (например, эдестина, эксцельзина, карбоксигемогло-бина лошади, оксигемоглобина лошади, сывороточного альбумина, кристаллической а-амилазы плесневого гриба, кристаллического пепсина, кристаллического реннина, кристаллического трипсина и др. [ 16]) с кристаллическими структурами аллотропных форм льда, получаемых из переохлажденных водных аэрозолей [17], чтобы убедиться в их идентичности. [c.145]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология