Белки степень чистоты

Применение люминесценции для аналитических целей включает широкую область использования ее для идентификации веществ, для обнаружения малых концентраций веществ для контроля изменений, претерпеваемых веществом для определения степени чистоты веществ. Широко применяются измерения люминесценции при изучении кинетики обычных химических реакций. Высокая чувствительность метода позволяет фиксировать малую степень превращения, а иногда по люминесценции промежуточных соединений становится возможным установить механизм химической реакции. Люминесцентные методы используются в биологии, в частности, для исследования структуры белков методом флуоресцентных зондов и меток. [c.49]

Для оценки степени чистоты (гомогенности) выделенного белка одним из наиболее надежных методов является проба на постоянство раствори- [c.15]

В исследованиях, посвященных изучению структуры белков, наблюдается тенденция к молчаливому предположению о том, что белки представляют собой соединения в том смысле, как понимают этот термин в органической химии, то есть что их состав является постоянным и не изменяющимся. Пири [123] рассмотрел критерии, применяющиеся для оценки степени чистоты больших молекул. Он предложил считать препарат фермента чистым тогда, когда все его частицы будут идентичны по размерам и химическому составу и каждая из них будет обладать той же активностью, что и исходный материал. [c.262]

Очистка полипептидной цели белка (степень чистоты >95% ). Удаление кофакторов, липидов,углеводов J [c.345]

Необходимая степень очистки белкового продукта зависит от того, где его намереваются использовать. В одних случаях это может быть довольно грубый препарат, в других (например, если речь идет о белках, использующихся в медицине) - препарат высокой степени чистоты. [c.367]

На кристаллизацию эргостерола большое влияние оказывает степень чистоты (доброкачественность) концентрата. Попадание в него частичек дрожжей или переход в растворенное состояние дрожжевого белка увеличивает вязкость концентрата и придает ему свойства коллоидного раствора, в котором процессы кристаллизации сильно заторможены. Для отделения кристаллов эргостерола от маточного раствора всю массу из кристаллизатора направляют в нутчфильтр или центрифугу, где твердая фаза (кристаллы) действием центробежной силы отбрасывается к стенкам, распределяясь по ним слоем равномерной толщины. Межкристальный раствор продавливается через слой кристаллов и удаляется через отверстия в сите. [c.236]

Неспособность карбоксипептидазы переваривать белок еще не указывает на отсутствие С-концевого остатка. Подобная устойчивость к действию карбоксипептидазы может быть обусловлена структурой белка. В этом случае необходима предварительная денатурация белка [39]. Устойчивыми являются также С-концевые амидные остатки и /)-формы любых аминокислот. Так же, как и в случае лейцинаминопептидазы, для получения однозначных результатов белок должен быть высокой степени чистоты, а карбоксипептидаза свободна от примеси эндопептидаз. Эндопептидазы могут быть инактивированы добавлением диизопропил-фторфосфата, который не влияет на активность карбоксипептидазы [62, 144]. [c.406]

Для оценки степени чистоты (гомогенности) выделенного белка одним нз наиболее надежных методов является проба на постоянство растворимости. Эта проба основана на правиле фаз, согласно которому растворимость чистого вещества при данных условиях опыта зависит только от температуры, но не зависит от количества вещества, находящегося в твердой фазе. При растворении смеси веществ растворимость каждого индивидуального вещества не зависит от других веществ, находящихся в смеси. Состав растворившейся и нерастворившейся частей смешанного белкового препарата будет поэтому различным. Следует также иметь в виду, что кристалличность белкового препарата не может служить критерием гомогенности. [c.16]

Постоянная трудность, возникающая при изучении белков,— это отсутствие надежного критерия, по которому можно было бы судить о степени чистоты очищенных препаратов белка. Долгое время критерием гомогенности считали кристаллическое состояние препарата в очень немногих случаях прибегали к тестам количественной растворимости. Минимальные требования, предъявляемые к белковым препаратам,— это их относительная гомогенность по таким критериям, как данные, полученные методами хроматографии и электрофореза на колонках при различных значениях pH, а также данные седиментационного анализа в ультрацентрифуге. Две главы книги посвящены описанию методов хроматографии и электрофореза белков на колонках. В книгу не включено обсуждение метода ультрацентрифугирования, так как данные по этому вопросу можно найти в специальных руководствах. Ввиду небольшого объема книги не включено также описание некоторых сложных приборов, например аппарата для противоточного распределения. [c.7]

Удельная активность препарата фермента выражается числом единиц на 1 мг белка. Эта величина прямо зависит от степени чистоты препарата. Если известна удельная активность чистого фермента (в единицах на 1 мг), то частное от деления удельной активности исследуемого препарата на данную величину указывает степень чистоты препарата фермента. [c.134]

Действительно, поразительна была простота получения препаратов. Р.Вильштеттер работал в течение многих дней для того, чтобы получить с Помощью чрезвычайно тонких и кропотливых методов препарат хотя и сравнительно высокой степени чистоты, но зато разведенный до чрезвычайности, с ничтожнейшим выходом. Новые методы сводились к элементарному приему, который был известен каждому студенту химику осаждению белка спиртом или ацетоном. [c.155]

В это же время для исследования белковых веществ начали пользоваться методом элементарного анализа. Мы уже упоминали о том, что сведения о первых элементарных анализах белковых веществ появились в книге Ф. Грена в 1809 г. [236]. Первые и достаточно точные анализы белковых веществ провели в 1810 г. Ж. Гей-Люссак и Л. Тенар [230]. Отличия данных, полученных этими экспериментаторами, от более поздних результатов, вероятно, следует объяснить разной степенью чистоты исследуемых белковых препаратов. Гей-Люссак и Тенар установили, что фибрин крови содержит 53,36% углерода, 7,0% водорода и 19,9% азота. Соответствующие величины для яичного белка были равны 52,88 7,5 и 15,7%. [c.27]

Степень очистки данного компонента выражают отношением содержания этого компонента к общему содержанию белка (или к общему весу исходного вещества). Так как свойства чистого компонента редко известны заранее, то указанное отношение обычно выражают в произвольных единицах (например, в единицах на миллиграмм белка) и очистку продолжают до тех пор, пока не прекратится дальнейшее возрастание этой величины. В случае необходимости постоянство указанного отношения принимают в качестве критерия степени чистоты, однако компоненты смеси целесообразно подвергать возможно большему числу контрольных испытаний. С помощью специфических реакций на каждое из предполагаемых в качестве примесей веществ можно показать, в какой степени данный препарат освобожден от этих примесей чем больше сделано таких проб, тем больше вероятность того, что препарат является действительно чистым. [c.21]

Степень чистоты белковой смеси во время тепловой обработки часто также имеет решающее значение. Обычно менее чистые вытяжки или смеси являются более стойкими по отношению к термической денатурации. Повидимому, первая очистка, проведенная с помощью термической денатурации, является более эффективной, чем последующие, причем первыми удаляются, очевидно, наименее устойчивые белки [15, 365]. [c.78]

В зависимости от области применения антител и от их свойств можно использовать самые различные способы очистки. Для диагностических целей часто достаточно имет препараты антител 70-95%-ной степени чистоты. С другой стороны, при применении антител in vivo их чистота должна быть намного выше. В сывороточных средах содержание антител не превышает 10% от общего количества белка. Хотя проведение процесса на бессывороточных средах и облегчает очистку, на практике относительно легко достичь 90%-ной и даже более высокой степени чистоты независимо от содержания сывороточных белков. При очистке антител для их использования ш vivo на последних стадиях очистки приходится решать одни и те же проблемы независимо от природ и питательной среды. Высокоэффективные методы очистки необходимы для удаления следовых количеств не только примесных белков, но и пирогенов и ДНК. Ранее для очистки антител широко применяли фракционирование сульфатом аммония с послед)пющей ионообменной хроматографией. Применение этих методов осложняется тем, что различные моноклональные антитела имеют разные изо-электрические точки [34, 36 J. Кроме того, после ионообменной хроматографии чистота антител не превышает 90%, поэтому для дальнейшей очистки необходимы другие методы, например гель-фильтрация. Однако в тех случаях, когда моноклональные антитела использ)пют для диагностики или иммуноаффинной очистки, ионообменная хроматография или ее сочетание с предварительным осаждением позволяют получить препараты достаточного качества. [c.47]

Помимо того, что аминокислотный анализ существенно важен для изучения пищевых продуктов, определение аминокислотного состава является основным элементарным исследованием при изучении химии белка. У многих авторов имеется тенденция к переоценке значения аналитических данных тем не менее точный анализ может дать сведения о степени чистоты, минимальном молекулярном весе и суммарном распределении полярных и неполярных групп в молекуле белка. [c.211]

Разработаны многочисленные методы очистки вирусов гриппа из аллантоисной жидкости или из культуральной среды. Выбор конкретного метода определяется требуемой степенью чистоты. Чистоту полученного вируса можно установить с помощью электрофореза вирионных белков в полиакриламидном геле (рис. 6.5), но, как и в случае всех оболочечных вирусов, почкующихся через плазматическую мембрану, даже при самой тщательной очистке невозможно избежать контаминации вируса клеточными белками. Кроме того, вирус может быть плео-морфным, что осложняет его очистку центрифугированием в градиентах плотности. Тем не менее при работе с вирусами, дающими высокий титр в культуре клеток или куриных эмбрионах, удается получить препараты, степень контаминации которых клеточными белками незначительна. На первой стадии очистки из содержащей вирус аллантоисной жидкости или культуральной среды удаляют клеточный дебрис с помощью низкоскоростного центрифугирования (10 мин при 2000—10 000 д). Все стадии следует проводить при 0°С, чтобы свести к минимуму потери инфекционности и протеолиз вирионных белков. [c.181]

Определение степени чистоты белка физическими методами обсуждается в статье II т. II. Однако правильным будет утверждение, что никакой белок в действительности нельзя определить как чистое вещество до тех пор, пока не будут с полной несомненностью установлены соответствующие химические критерии. [c.262]

В процессе выделения и очистки белков контролируют степень чистоты полученных препаратов, причем этот контроль приобретает особенно большое значение па последних стадиях очистки. Если белок имеет характерную биологическую активность, то критерием его чистоты может служить тот факт, что при дальнейшей очистке число единиц активности [c.21]

Метод ионообменной хроматографии в сочетании с электрофорезом применяется при разделении максимально очищенных смесей белков и гормонов из частично очищенных препаратов. На последней стадии очистки часто применяют метод кристаллизации. Для этого добавляют к концентрированному раствору фермента насыщенный раствор сернокислого аммония или спирт до заметного помутнения. Затем раствор оставляют стоять без помешивания несколько дней на холоде или при комнатной температуре до выпадения кристаллов. Выпавшие кристаллы отделяют и повторяют перекристаллизацию, каждый раз измеряя удельную активность фермента. Первоначально полагали, что кристаллические ферменты являются чистыми, свободными от примеси соединениями. Но вскоре было установлено, что степень чистоты многих кристаллических ферментов не превышала 50%, [c.128]

Среди различных сывороточных белков с Pi-глобулиновой электрофоретической подвижностью (исключая fii-липопротеин) Мюллер-Эберхард и сотр. [9] получили в высокоочищенном состоянии два углеводсодержащих белка, относящихся к комплексу белков комплемента. Оба белка, обозначенные и р1д-глобулин, обладали одинаковой степенью чистоты но иммунологическим показателям и данным ультрацентрифугирования ( 20,1 = 9,5 8 для Pi -глобулина и 6,9 8 для Pjд-глобулина). Углеводный состав глобулинов приведен в табл. 1. Высокоочищенный Pj -глобулин при 1° превращался в PiA-глобулин в течение 4—6 недель, при 37—в течение 6 дней. [c.263]

Чистота акриламида и БИС играет важную роль в достижении хороших результатов, особенно при сканировании в УФ-свете белков и нуклеиновых кислот (см. ниже). Реактивы высокой степени чистоты имеются в продаже, или их можно приготовить в лаборатории [66]. [c.267]

На рис. 10.2 представлена стратегическая схема анализа структуры белка в одно- и двухстадийном вариантах. Исходный образец белка должен быть очищен до гомогенного состояния (не менее 95% степени чистоты) липиды, углеводы и кофакторы должны быть удалены. [c.344]

Ультрафильтрацию можно выполнять в прерывистом режиме или непрерывно. При первом способе (рис. 9.42) подлежащий обработке продукт поступает в контур (петлю) циркуляции модуля, а задерживаемый фильтром компонент (остаток) рециклирует в чане концентрирования. Вследствие удаления фильтрата уровень продукта в чане понижается, а концентрация белков постепенно растет. Когда достигаются заданные концентрации и степень очистки, операцию прекращают, продукт выгружают, и установка после прочистки вновь готова для обработки очередной порции сырья. Для более полной очистки осадка можно добавлять в него определенное количество свежей воды, чтобы разбавить мелкие молекулы, удержанные пропиточной жидкостью перед окончанием операции эта вода для промывки остающегося продукта удаляется точно таким же образом, как и первоначальный фильтрат. Такая очистка диализом может быть повторена несколько раз для повышения степени чистоты изолята. [c.444]

К- сожалению, химики, изучающие новые реакции пептидов, обычно пользуются только простыми модельными соединениями, в том числе ди- и трипептидами, которые имеются в продаже. Это отчасти объясняется тем, что при переходе к более сложным полипептидам или белкам затрудняется контроль за ходом реакции. Другая причина заключается в малой доступности этих более сложных соединений, которые удается выделить в сравнительно небольших количествах, в связи с чем их строение устанавливалось на очень небольших образцах. Таким образом, жёлатель1ю добиться такого положения, чтобы исследователь мог приобрести образцы полипептидов известного строения и высокой степени чистоты, как это в настоящее время делается с образцами инсулина через Комиссию по белкам Международного союза теоретической и прикладной химии. [c.166]

Примечание. Как мы установили, описанньп выше метод позволяет получать удовлетворительные н сходящиеся результаты с большим числом белков, значительно различающихся по аминокислотному составу н по степени чистоты. Однако следует помнить, что для определения основных аминокислот нельзя установить постоянных правил. Часто оказывается необходимым изменять условия эксперимента вследствие специфических особенностей. Напрпмер, если содержание в белке одной или нескольких основных аминокислот невелико, то для анализа полезно применять больщие количества белка или комбинировать микро-метод Косселя со специфическими колориметрическими методами, вписанными ниже. Разработанное нами видоизменение метода Косселя позволяет двум работникам проводить 2 полных определения аргинина, гистидина и лизина в течение примерно 12 час. При этом единственной аппаратурой, которая встречается не [c.31]

Когда с помощью соответствующих методов удалось выделить РНК ВТМ, ее нанэзли на листья чувствительных к ВТМ растений. Вскоре на этих листьях появились поражения, которые нельзя было отличить от типичных вирусных поражений. Более того, из пораженных участков можно было снова выделить инфекционный вирус. Таким образом было показано, что инфекционность РНК-содер-жащего вируса обусловлена его РНК. Когда для этих исследований был использован очищенный препарат вирусной нуклеиновой кислоты, содержащий при оптимальных условиях очистки менее 1 субъединицы белка на 20 молекул РНК (см. ниже), впервые удалось неопроверн<имо доказать, что инфекционность вируса присуща исключительно его нуклеиновой кислоте. Затем при помощи тех же методов инфекционная РНК была выделена из большей части вирусов растений. Однако степень чистоты этих препаратов РНК обычно устанавливали не так тщательно, как в случае РНК ВТМ. [c.172]

Было обнаружено два компонента низкомолекулярный (4—65) компонент и высокомолекулярный, весьма гомогенный 305-пик (рис. 35). Последний выявлялся не только по радиоактивности. Такой же дискретный гомогенный пик был виден и при определении УФ поглощения. Это открывало пути к выделению 305-частиц в препаративных количествах с высокой степенью чистоты. Далее была проведена первичная характеристика 305-частиц. Они содержали около 20 % РНК и 80 % белка, и их РНК по своему нуклеотидному составу точно сответствовала ДНК, т. е. это была чистая про-мРНК (или гяРНК). Первое сообщение о 305-частицах, содержащих гяРНК, появилось в 1965 г. [c.198]

Вполне вероятно, что в будущем применение высокочувствительных методов анализа аминокислот (на уровне ниже пикомольного) потребует проводить приготовление растворов всех реагентов и буферов и все операции по разделению белков в асептических условиях. Однако требования сегодняшнего дня касаются прежде всего стекла, воды и реагентов, которые должны быть высокой степени чистоты. [c.243]

Лучший метод, позволяющий определить степень чистоты препаратов тогавирусов, — это электрофорез структурных белков в полиакриламидном геле в присутствии ДДС-Na. Исследованные до сих пор альфа- и флавивирусы имеют небольшое число структурных белков характерного размера, образующих при электрофорезе в геле уникальный набор. Вирионы альфавирусов содержат нуклеокапсидный белок с мол. массой 30— 35 кД и 2 более крупных гликопротеина оболочки (в некоторых случаях они не разделяются при электрофорезе) с мол. массами 45—55 кД. Вирионы флавивирусов содержат белок оболочки, обычно гликозилированный, с мол. массой 50—55<кД и 2 более мелких внутренних структурных белка с мол. массами 15 и 7 кД. [c.104]

Полученный вирус уже достаточно очищен (примерно 50 мю белка на 10 ° вирусных частиц), и его можно использовать i различных целях, в частности для выделения вирусной ДНК Из фракции вирус легко осадить обычным центрифугированием Для получения вирусных препаратов высокой степени чистоть может быть использован ряд других методов, включая повтор ное центрифугирование в градиенте сахарозы или s l. Эт1 [c.280]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология