Белки чистота

Удельная активность препарата — выражается в единицах ферментативной активности фермента (МЕ или ЕД) на 1 мг препарата и на 1 мг белка (вторая величина характеризует чистоту препарата). [c.29]

Применение люминесценции для аналитических целей включает широкую область использования ее для идентификации веществ, для обнаружения малых концентраций веществ для контроля изменений, претерпеваемых веществом для определения степени чистоты веществ. Широко применяются измерения люминесценции при изучении кинетики обычных химических реакций. Высокая чувствительность метода позволяет фиксировать малую степень превращения, а иногда по люминесценции промежуточных соединений становится возможным установить механизм химической реакции. Люминесцентные методы используются в биологии, в частности, для исследования структуры белков методом флуоресцентных зондов и меток. [c.49]

Мука диспергируется мешалкой в большом объеме теплой воды (30—40 °С). Такой производственный прием позволяет замедлять гидратацию белков клейковины и отделять путем немедленной декантации из центрифуги крахмальное молоко от сырой нерастворимой клейковины. В то время как сырое крахмальное молоко подвергается традиционному рафинированию (разделение на крахмал А, крахмал Б и растворимые вещества), сырая клейковина определенное время вылеживается (35— 40 мин при температуре 40 °С) для приобретения нужной структуры перед рафинированием (сепарация клейковины, волокон и определенного количества крахмала, входящего в сливаемую часть жидкости, или декантат при первом приеме разделения). Этот технологический процесс представляет особый интерес вследствие высокой чистоты получаемого крахмала А [54], однако имеется мало информации о степени выхода и качество других продуктов. [c.492]

Белые белки (чистота >90 [c.477]

Образец в зависимости от его объема можно либо заранее распределить по всему объему геля, либо внести в виде узкой зоны на любом его участке. Сразу после окончания фокусирования в гель для ограничения диффузии вдавливают разделяющую решетку и определяют градиент pH. Затем извлекают кусочки геля с соответствующими фракциями и небольшими количествами подходящего буфера элюируют содержащиеся в них белки. Чистоту каждой фракции исследуют с помощью аналитического [c.136]

Оптимальные условия накопления биомассы ограничиваются прежде всего определенной температурой, значением pH среды, количеством и скоростью поступления питательных веществ, кислорода воздуха и др. Нормальные алканы используются микроорганизмами в качестве питания. Они вместе с аммиаком и минеральными солями превращаются в продукты обмена, представляющие биомассу, состоящую в основном из протеинов. В промышленном процессе производства белка важной ступенью является выделение продуктов ферментации и заключительная обработка полученных клеток микроорганизмов. Чистота углеводородного сырья оказывает существенное влияние на экономику процесса. [c.206]

Разработанные к настоящему времени методы разделения исключительно эффективны, однако лишь их комбинированное применение приводит к получению белков, удовлетворяющих необходимым критериям чистоты. [c.346]

Методом электрофореза можно разделять белки, нуклеиновые кислоты, антибиотики, смеси лекарственных веществ в лекарственных формах. Электрофорез применяют для определения чистоты лекарственных препаратов. [c.364]

Чистоту препарата определяют по прозрачности 2"о-ного водного рас вора в проходящем свете и опалесцирующего в отраженггом отсутств щелочности при разбавлении данного раствора водой, фенолфталеин должен окрашиваться в розовый цвет, отсутствию продуктов разложен белка (при нагревании раствора протар ола с едким натром не должен обн руживаться аммиак ни по запаху, ни по посинению влажной лакмусовс бумажки), отсутствие посторонних соединений серебра (протаргол извл кают Э5°-ным спиртом фильтрат не должен изменяться от прибавлен соляной кислоты). Потеря в весе при высушивании до посгоянного ве при 80° не должна превышать 3,5%. [c.221]

Применять водородный электрод в качестве рН-индикаторного электрода довольно сложно. Требуется большая чистота водорода, в нем не допускается наличие даже следов кислорода. В растворе не должно быть веществ, обладающих большой адсорбционной способностью и отравляющих поверхность платины, в частности соединений серы и мышьяка, белков, сильных окислителей и восстановителей. Все это ограничивает применимость водородного электрода для потенциометрического определения pH. [c.144]

Современное развитие химических и биологических наук истребовало более глубокого проникновения в существо изучаемых процессов, детального анализа химического состава разнообразных смесей и биологических объектов. Кроме того, для химического и биотехнологического ироизводства, в том числе для промышленности лекарственных средств, характерны постоянное возрастание требований к чистоте выпускаемых продуктов, ужесточение методов контроля, тенденция к использованию количественных критериев ири оценке качества. Поэтому помимо оценки интегральных характеристик, присущих объекту исследования в целом, часто требуется детальное изучение содержания отдельных компонентов, определяющих состояние биологических систем либо качество химических продуктов. Рещение этих задач, как правило, невозможно без применения достаточно эффективных методов разделения сложных смесей. Среди таких методов доминирует хроматография. Бурно развиваясь в последние десятилетия, этот метод открыл возможности разделения смесей, содержащих десятки и сотни компонентов, их качественного и количественного анализа, препаративного выделения индивидуальных веществ. Принципы хроматографии весьма универсальны, благодаря чему она оказалась пригодной для изучения объектов самой различной природы — от нефти и газов атмосферы до белков, нуклеиновых кислот и даже вирусов. Этим объясняется огромный интерес представителей различных научных и технических дисциплин к хроматографическим методам. Только в пяти специализированных международных журналах по хроматографии ежегодно выходит в свет свыше 2000 публикаций ио различным вопросам теории и применения метода, общее же их число в несколько раз больше. [c.5]

Очистка антигена. Цитозольную фракцию из мозга свиньи (с. 379) пропускают через колонку с иммуносорбентом (1x2 см) в фосфатном буфере (pH 7,4) и колонку промывают тем же буфером. Элюцию проводят 2 М глициновым буфером (pH 2,8), фракции нейтрализуют 2 М трис-НС1 буфером, pH 8,6 Определяют концентрацию белка, цАМФ-связывающую активность (с. 331) она не должна быть ниже 12 нмоль/мг. Проверяют чистоту полученного препарата регуляторной субъединицы (м. м.=56 ООО Да) методом электрофореза (с. 119). Таким же способом, имея моноклональные или поликлональные антитела к соответствующим антигенам, можно получить гомогенные препараты этих антигенов. [c.325]

Следует учитывать и другой фактор, присущий исключительно биологическим системам,— оптическую чистоту. Белки состоят из L-аминокислот. Поэтому при химическом синтезе следует исходить из L-аминокислот, а в процессе синтеза рацемизация должна быть сведена к минимуму. В наибольшей степени это относится к синтезу ферментов, каталитическая активность которых зависит от оптической чистоты. Аминокислоты особенно легко подвергаются рацемизации, когда они ацилированы (т. е. когда аминогруппа блокирована ацильной группировкой) через промежуточное образование азлактона. Такое превращение может произойти, например, в процессе введения защитной группы или в процессе образования пептидной связи [c.68]

Когда оптимальные условия растворимости белков определены, выбор конкретного технологического процесса зависит от вида сырья и желаемого продукта. В частности, цель может состоять в максимальном извлечении белков или, наоборот, по возможности в наиболее избирательной их очистке, учитывая другие, более или менее мешающие вещества, присутствующие в сырье. Наряду с кривыми растворимости белков можно строить кривые чистоты экстракта. [c.429]

Первой проблемой при установлении строения полисахаридов, как и при анализе других макромолекулярных соединений, является выделение исследуемого вещества в чистом виде. Понятие чистоты в данном случае не очень четкое из-за наличия микрогетерогенности (минорные изменения внутри одних и тех же частиц вещества). Описаны методы отделения веществ углеводной природы от различных примесей, в том числе от неорганических солей и низкомолекулярных соединений, а также от высокомолекулярных веществ, например белков и лигнинов, однако следует иметь в виду, что каждый полисахарид ведет себя по-своему. [c.216]

Часто думают, что выращивание больших количеств микроорганизмов представляет собой рутинную процедуру. Однако для успешного производства рекомбинантных белков в промышленных масштабах необходимо контролировать множество параметров, от которых зависит рост синтезирующих их микроорганизмов и чистота получаемых продуктов. [c.180]

Необходимая степень очистки белкового продукта зависит от того, где его намереваются использовать. В одних случаях это может быть довольно грубый препарат, в других (например, если речь идет о белках, использующихся в медицине) - препарат высокой степени чистоты. [c.367]

Ионообменные смолы имеют ограниченное применение в хроматографическом анализе белков. При взаимодействии со смолами высокомолекулярные лабильные белки легко подвергаются денатурации и необратимо связываются сними. Более того, емкость смол по отношению к белкам сравнительно низка, а чистота разделенных фракций не вполне удовлетворительна. Поэтому ионообменные смолы используются в белковой химии в основном для очистки глобулярных белков, имеющих относительно низкий молекулярный вес. [c.21]

Аналитическое ультрацентрифугирование широко применяется для оценки чистоты препаратов ДНК, вирусов и белков. Чистота препаратов несомненно очень важна в тех случаях, когда требуется точно определить молекулярный вес молекулы. В большинстве случаев о гомогенности препарата можно судить по характеру границы седиментации, используя метод определения скорости седиментации гомогенный препарат обычно дает одну резкоочерченную границу. Присутствующие в препарате примеси проявляются в виде дополнительного пика или плеча они же обусловливают асимметрию основного пика. [c.63]

Оценка чистоты. — Шведские химики Сведберг и Тизелиус2 внесли большой вклад в развитие химии белка разработкой [c.689]

Для посадки и элюции РНК-полимеразы авторы использовали иной буфер 0,05 М Трис-НС1 (pH 7,9) -Ь 0,1 мМ ЭДТА + 0,1 мМ ДТТ + 5% глицерина. На колонку объемом 130 мл сажали 200 мг фермента 30%-ной чистоты в 100 мл указанного буфера, промывали 0,1 М раствором Na l в этом же буфере, а затем вели элюцию линейным градиентом (1,2 л) 0,1 — 1 М Na l. При промывке выходили посторонние белки. РНК-полимераза, как и в работе Лове и соавторов, фракционировалась начала выходило ядро фермента ( a2), а затем полный фермент, содержащий в своем составе п субъединицу а (рис. 144). [c.426]

Химические, физико-химические свойства белков и их структура определяются аминокислотным составом. Поэтому исследование аминокислотного состава является важным аналитическим методом характеристики этих соединений. Исследование аминокислотного состава белков и пептидов включает расщепление этих соединений до свободных аминокислот, разделение последних, их идентификацию и количественное определение. Изучению аминокислотного состава предшествует, как правило, определение однородности изучаемых препаратов. О чистоте препаратов белка судят на основании данных ульт-рацентрифугирования, электрофореза, в частности диск-электрофореза ) [c.122]

Определение качественного и количественного аминокислотного состава белков и пептидов проводят после их гидролиза кислотой или щелочью. Оба вида гидролиза разрушают некоторые аминокислоты. При щелочном гидролизе частично разрушаются цистеин, серии, треонин и происходит частичная рацемизация некоторых аминокислот. При гидролизе соляной кислотой (5,7 н., 105—110° С), которая обычно используется при кислотном гидролизе пептидных связей, практически полностью разрушается триптофан. В связи с этим содержание триптофана в пробах обычно определяют после щелочного гидролиза или спектрофотометрическим методом Кроме того, наблюдаются значительные потери оксиаминокислот (серина, треонина, тирозина), се-русодержащих аминокислот (цистеина, метионина) и частично пролива. При этом степень разрушения аминокислот зависит от чистоты и концентрации НС1, используемой для гидролиза, а также длительности и температуры гидролиза. Следует отметить, что примеси альдегидов при кислотном гидролизе приводят к значительной потере тирозина, а также цистеина, гистидина, глутаминовой кислоты и лизина, а примеси углеводов в больших концентрациях — к разрушению аргинина. [c.123]

Для определения чистоты (или гомогенности) ферментных препаратов в настоящее время наиболее широко используются ультрацентрифугирование и диск-электрофорез. В основе первого из них лежит различная скорость седиментации в ультрацентрифуге белков с различной молекулярной массой (и различной формой молекул). Одним из ограничений данного метода является то, что разные белки могут иметь одну и ту же величину седиментации и не разделяться при ультрацентрифугировании. С другой стороны, белок в растворе может находиться в виде нескольких форм, различающихся по степени агрегации, а следовательно, и по молекулярной массе. Если эти формы не превращаются одна в другую или превращения осуществляются достаточно медленно, на седиментограмме обнаружится несколько пиков, что, однако, не будет свидетельствовать о наличии примесных белков в исследуемом препарате фермента. Недостатком метода является также его невысокая чувствительность, что не позволяет обнаруживать малые количества примесных белков. [c.205]

Для вьщеления Ц. из митохондрий или субмитоховдриаль-ных частиц используют ПАВ, чаще всего холат или дезокси-холат натрия. Обычно чистоту Ц. выражают через отношение содержания гема а к кол-w белка. Для препаратов фермента, выделенных разл. способ1ами, этот показатель составляет 8-14 нмоль/мг. Определить точное значение этой величины пока невозможно из-за отсутствия надежных данных о числе субъединиц, действительно необходимых для функционирования фермента. [c.390]

Определение аминокислот всегда представляло исключительно важную задачу биохимии ввиду того, что эти соединения играют роль кирпичиков при построении пептидов и белков. Широко применяемый, основанный на ионной хроматографии и теперь уже ставший классическим метод Мура и Штейна [1] не позволяет провести различие между энантиомерами. Между тем в хиральном аминокислотном анализе ощущается явная потребность так, например, в пептидном синтезе решающее значение может иметь оптическая чистота исходного материала, а результаты стереохимического анализа могут искажаться из-за рацемизации. Другой областью применения дгырдльного аминокислотного анализа является определение строения многих микробиологических продуктов, таких как полипептидные антибиотики, в состав которых входят о-аминокислоты, не обнаруженные у млекопитающих [2]. [c.173]

Другой тест на чистоту вытекает из диаграммы растворимости в случае гомогенного белка вплоть до достижения точки насыщения количество добавленного и количество растворившегося белка связань линейной зависимостью. Критериями чистоты также служат аминокислотный состав, изоэлектрическая точка, а также в некоторой степеии кристаллизуемость. В случае биологически активных белков, например. ферментов, вывод о чистоте может быть сделан из критериев активности (субстратная специфичность, оптимальные pH и температура, кинетические эксперименты). [c.354]

Ультрафильтрацию можно выполнять в прерывистом режиме или непрерывно. При первом способе (рис. 9.42) подлежащий обработке продукт поступает в контур (петлю) циркуляции модуля, а задерживаемый фильтром компонент (остаток) рециклирует в чане концентрирования. Вследствие удаления фильтрата уровень продукта в чане понижается, а концентрация белков постепенно растет. Когда достигаются заданные концентрации и степень очистки, операцию прекращают, продукт выгружают, и установка после прочистки вновь готова для обработки очередной порции сырья. Для более полной очистки осадка можно добавлять в него определенное количество свежей воды, чтобы разбавить мелкие молекулы, удержанные пропиточной жидкостью перед окончанием операции эта вода для промывки остающегося продукта удаляется точно таким же образом, как и первоначальный фильтрат. Такая очистка диализом может быть повторена несколько раз для повышения степени чистоты изолята. [c.444]

К- сожалению, химики, изучающие новые реакции пептидов, обычно пользуются только простыми модельными соединениями, в том числе ди- и трипептидами, которые имеются в продаже. Это отчасти объясняется тем, что при переходе к более сложным полипептидам или белкам затрудняется контроль за ходом реакции. Другая причина заключается в малой доступности этих более сложных соединений, которые удается выделить в сравнительно небольших количествах, в связи с чем их строение устанавливалось на очень небольших образцах. Таким образом, жёлатель1ю добиться такого положения, чтобы исследователь мог приобрести образцы полипептидов известного строения и высокой степени чистоты, как это в настоящее время делается с образцами инсулина через Комиссию по белкам Международного союза теоретической и прикладной химии. [c.166]

Высокая чувствительность метода обратного изотопного разбавления с радиореагентом, а также селективность, которую обеспечивает применение индикаторного изотопа, позволяют определять микроколичества смесей первичных и вторичных аминов. Эти методы широко применяли в определениях различных аминокислот в биологических образцах [85—88]. В работе [86], в частности, описано использование этих методов для оценки содержания одиннадцати таких соединений в 1 мг белка. Метод с пипсилхлоридом применялся для анализа гистамина, причем в этом анализе проводилось четыре цикла перекристаллизации соответствующего производного с целью его очистки до получения постоянного значения удельной радиоактивности. После проведения этого анализа было предложено [89] применять данный метод для определения любого амина, который дает кристаллический замещенный д-иод-бензолсульфамид. Этим же методом оценивались микрограммные количества 2,4-диоксипиримидина и его 5-метильного производного [90]. Для разделения пипсильных производных в дополнение к бумажной хроматографии применялись жидкофазная колоночная хроматография [91] и тонкослойная хроматография [92]. Хроматографию на бумаге применяли также для оценки радиохимической чистоты реагента [93]. [c.310]

Белки относятся к числу наиболее сложных и больших молекул, созданных природой кроме того, они остаются в числе наименее устойчивых и трудно поддающихся очистке. Эти свойства преподносили почти непреодолимые технические трудности первым исследователям в данной области и добавляли к этому нежелательное сходство химии белков с коллоидами. Долгое время белки относили к неопределенным коллоидам, молекулы которых трудно выделить и охарактеризовать. Однако по мере того, как совершенствовались критерии чистоты белков, возникал вопрос о молеку лярной концепции в белковой химии в конце концов пришли к тому, что белки представляют собой только большие сложные молекулы, растворы которых не менее молекулярны, чем растворы их компонент — аминокислот. Признанию этой точки зрения в большой мере способствовали работы Сведберга, Серенсена и других. [c.217]

Методы исследования, рассмотренные в предыдущих разделах, непригодны для высокомолекулярных соединений. Понятие чистоты и идентичности таких веществ, как нуклеиновые кислоты и белки, должно включать не только идентичность носледователь-ности субъединиц, но и идентичность в организации и пространственном расположении полимерных цепей. Перечисленные Снрин-голлом [471 критерии чистоты для белков могут служить иллюстрацией обычно применяемых тестов. Они включают 1) однозначность электрофоретической подвижности в диапазоне pH, в котором вещество обладает устойчивостью 2) однозначность скорости седиментации при ультрацентрифугировании 3) концентрационные изменения в системе раствор — растворитель, подчиняющиеся гауссовскому распределению 4) независимость растворимости в инертном растворителе от количества нерастворенного вещества, находящегося в контакте с раствором. [c.31]

Если не принимать решительных мер для поддержания чистоты на таких заводах, продукция их — как масло, так и казеин — окажется никуда не годной особенно это относится к маслу, как продукту пищевому и весьма ценному, часть которого экспортируется за границу. Масло крайне чувствительно к запахам, а белки при разложении образуют дурно пахнущие вещества. Вот почему на маслозаводах так следят за чистотой, и у работников маслозаводов выработалось правило вести процесс аккуратно. Это правило легко можно было бы соблюдать и при всех операциях с казеином, что на самом деле не всегда встречается. Казеиноделы не отдают себе должного отчета в чувствительности казеина к внешним влияниям, к влияниям ферментов, щелочей и кислот, а пренебрежение этими факторами ведет к получению низкосортной продукции. [c.73]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология