Метионин хроматограммы

После окончания разделения хроматограмму высушивают на воздухе и проявляют раствором нингидрина путем опрыскивания из пульверизатора. З-атем нагревают 15—20 мин при 60° С в термостате или сушильном шкафу. Расположение аминокислот сверху вниз по направлению движения растворителя следующее цистин, лизин, аргинин, гистидин, аспарагиновая кислота, серии (три последние аминокислоты располагаются в виде тесно сближенных пятен) глутаминовая кислота, треонин, аланин, пролин, тирозин, валин, метионин, триптофан, фенилаланин, лейцин, изолейцин (последние три аминокислоты также часто располагаются в виде тесно сближенных пятен). [c.301]

Качественное определение аминокислот методом распределительной хроматографии на бумаге. Цель работы — определить коэффициент движения лизина и метионина для индивидуальных веществ и для их смеси (с целью разделения их на хроматограмме). [c.528]

Рис. 18. Двумерная хроматограмма смеси ФТГ-метионина, фенилаланина, валина, пролина, лейцина (изолейцина) в системах I и IV. Нанесено по 0,5 мкг каждой ФТГ-аминокислоты [24].

Градуировочный график. На стартовую линию пластины Силуфол наносят по 0,1 мл рабочих стандартных растворов, что соответствует содержанию метионина 5,0 10,0 40,0, 80,0 мкг. Пластину помещают в хроматографическую камеру, в которую предварительно внесена система растворителей. На хроматограмме проявляют метионин 0,2%-ным спиртовым раствором нин-гидрина, Rt метионина равна 0,4 0,05. Окрашенное соединение элюируют дистиллированной водой. Измеряют оптическую плотность окрашенных растворов стандартов и по средним результатам из пяти определений строят график зависимости оптической плотности от содержания метионина (мкг/5 мл). [c.198]

На хроматограмме метионин локализуется в виде малиновых пятен с / = 0,4 0,05. Окрашенный сорбент осторожно снимают с хроматограмм и переносят в центрифужную пробирку. В пробирку вносят 5 мл дистиллированной воды, затем центрифугируют (3000 об/мин). Прозрачный окрашенный раствор переносят в кювету и измеряют оптическую плотность растворов при Х = 500 нм. Содержание метионина в пробе находят по градуировочному графику. [c.199]

После окончания разделения хроматограмму высушивают на воздухе и проявляют, для этого ее опрыскивают из пульверизатора 0,2%-ным раствором нингидрина в ацетоне. Затем нагревают 15—20 мин при 60 °С в термостате или сушильном шкафу. Расположение аминокислот сверху вниз по направлению движения растворителя следующее цистин, лизин, аргинин, гистидин, аспарагиновая кислота, серии (три последние аминокислоты располагаются в виде тесно сближенных пятен) глутаминовая кислота, треонин, аланин, пролин, тирозин, валин, метионин, триптофан, фенилаланин, лейцин, изолейцин (последние три аминокислоты также часто располагаются в виде тесно сближенных пятен). Для того чтобы сохранить пятна на хроматограмме, их фиксируют 1%-ным раствором нитрата меди в ацетоне, погружая хроматограмму в этот раствор или опрыскивая ее из пульверизатора. После фиксации пятна приобретают красно-оранжевую окраску. [c.331]

В работе Халленгера [9] описано получение /-2-амино-4-(ме-тилтио-С )-масляной кислоты по этому методу с изотопным выходом 48%. При проявлении бумажной хроматограммы 80%-ным фенолом или смесью бутиловый спирт — уксусная кислота — вода получаются два пятна, окрашиваемых нингидрином. Они соответствуют метионину и его сульфоокиси, которая получается в результате реакции окисления в процессе хроматографирования. Как d-, так и /-формы получаются из соответствующих оптически активных исходных веществ в 1 % -ном водном растворе [а]о +7,75° и —7,6°. Полученные вещества анализировались в виде пикратов. [c.211]

Хроматограмму погружают в раствор 0,002 М платинохлороводородная кислота-1 М KI -2 М НС1 -ацетон (4 0,25 0,4 76). После высушивания при комнатной температуре окраску усиливают путем обработки парами НС1. Цистин, цистеин, метионин, цистатионин, лантионин, дьенколевая кислота, метионинсульфоксид и другие дают бесцветные пятна на розовом фоне. В случае использования в качестве растворителя фенола или коллидина бумагу следует сначала промыть смесью (1 1) ацетон-эфир. [c.393]

Азид-иод. Хроматограмму опрыскивают 0,025 М раствором Ij в 50%-ном этаноле, содержащем 1,5% NaNj. На светло-коричневом фоне моментально проявляются белые пятна цистеина, затем (через 15 мин) цистина, далее (через 60 мин) метионина. Пятна лучше видны в УФ-свете. Этот реагент позволяет обнаруживать также тиамин. [c.393]

Из табл. 1 видно, что некоторые пары или даже системы из трех аминокислот можно разделить на одномерной хроматограмме, выбирая соответствующий растворитель. Так, в первом растворителе легко разделить, например, смесь лизина, метионинсуль-фона и лейцина между тем во втором растворителе эта смесь будет плохо разделяться. Наоборот, смесь лизина и гистидина нельзя разделить первым растворителем, но можно разделить при длительном хроматографировании со вторым растворителем. Наконец, некоторые трехкомпонентные смеси нельзя разделить, пользуясь только одномерной хроматограммой. Так, нельзя разделить указанными растворителями смесь тирозина, метионина и лейцина. В первом растворителе будут подниматься вместе тирозин и метионин, а во втором растворителе — метионин и лейцин. Названную смесь трех компонентов можно разделить при двухмерной хроматограмме. Можно также применять и другие растворители. [c.66]

Рпс. 28. Двухмерная хроматограмма смеси аминокислот, полученной при гидролизе шерсти. 1 — осаждение гидролизата 2 — цистин 3 — аспарагиновая кислота 4 — глутаминовая кислота в — серип 6 — глицин 7 — треонин 8 — аланин Я — тирозин 10—валин 11—лизин 12—фенилаланин —аргинин 14—пролин 15—лейцин 16—изолейцин 17— метионин. [c.420]

Впоследствии Вейганд [7] сообщил об анализе последовательности метионинсодержащего циклического нонапептида, который был обнаружен как примесь в вышеупомянутом циклопептиде. Перед частичным гидролизом пептид сначала десульфировали на никеле Ренея, так как в условиях частичного метанолиза соляной кислотой в метаноле метионин разлагается, и по этой причине метионинсодержащие пептиды отсутствуют на хроматограмме. После перевода в соответствующие производные с помощью ГЖХ можно было разделить 16 пептидов, как показано на рис. 7, и идентифицировать их масс-спектрометрически [c.169]

Несслера аммиак, образующийся при реакции оксиаминокислот с перйодатом (стр. 21), дает с реактивом Несслера желтую окраску. Аргинин выявляется на хроматограмме в виде красных пятен, если обработать ее щелочным раствором 1-нафтола и затем опрыскать раствором гипохлорита (реакция Сакагути). Нитропруссидную реакцию можно с успехом использовать для обнаружения цистеина и цистина эти аминокислоты (после обработки цианидом) при опрыскивании хроматограммы раствором нитропруссида образуют красные пятна. Цистеин, метионин и некоторые другие восстанавливающие вещества могут быть идентифицированы в виде белых пятен на розовом фоне при обработке хроматограммы реактивом с йодистой платиной. Триптофан дает с реактивом Эрлиха пурпурную окраску, если хроматограмму прогреть при 100° в течение нескольких минут. Эти и другие методы обнаружения аминокислот на хроматограммах подробно описаны в книге Блока и др. [157]. [c.44]

При изучении продуктов пиролитического разложения 16 аминокислот [122] обнаружено сравнительно больжое количество метана, двуокиси углерода, окиси углерода, пропана, водорода. При пиролизе аминокислот, содержащих серу (метионин, цистин, цистеин, таурин), найдены сероводород и сероуглерод. Состав легких продуктов пиролиза с числом углеродных атомов от одного до шести зависит от структуры исследовавшейся аминокислоты. Хроматограммы продуктов пиролиза близких по строению аминокислот отличаются друг от друга количественным соотношением компонентов. [c.43]

Метиловые эфиры этих оксикислот были разделены при изотермическом режиме в интервале температур от 100 до 160° С на том же сорбенте [106]. При температуре анализа выше 130° С метиловый эфир а-окси-у-тиометилмасляной кислоты, полученный из метионина, дает на хроматограмме два пика. Появление второго пика обусловлено наличием продуктов термического разложения эфира, так как ниже 130° С метиловый эфир а-окси-7-тиометилмас-ляпой кислоты образует один симметричный пик. Осуществлено полное разделение метиловых эфиров оксикислот производных глицина, аланина, валина, лейцина и изолейцина методом капиллярной ГЖХ на апиезоне L [55]. [c.62]

Новая аминокислота тирозин триптофан I фенилаланин [ метионин лейцин I изолейцин валин 1 новая аминокислота пролин треонин гистидин I аланин новая аминокислота I серинI глицин аргинин лизин I глутаминовая кислота ] аспарагиновая кислота. Идентификация и определение (порядок — в первой, коллидиновой, хроматограмме) [c.271]

Соединения, содержащие группу С =5 или С—5Н, катализируют реакцию 2ЫаЫз+ J.2=2NaJ —ЗЫ,. Для опрыскивания хроматограмм используют раствор, содержащий 1,5% азида натрия в 0,01 М растворе иода в этаноле. Тиоловые соединения, подобные цистеину, вызывают быстрое выделение азота с одновременным обесцвечиванием коричневого фона. Цистин реагирует приблизительно за 15 мин, метионин — за 60 мин цистеиновая кислота реакций не дает. [c.29]

С / /0,04. Остальную часть хроматограммы опрыскивали нингидрином, и после 5-минутного нагревания при 80°С появлялось темно-красное пятно метионина, которому соответствует 7 /0,26 дальнейшее нагревание при 140°С приводило к появлению пятна пантенола с У /0,56. Второй слой силикагеля элюировали смесью ацетон—уксусная кислота—бензол—метанол (1 1 14 4). При облучении УФ-светом становились видимыми пятна рибофлавина (i /0,32) и никотинамида (J /0,64). Область с Rf>0,50 обрабатывали реактивом Т-61, при этом биотин обнаруживался в виде темно-синего пятна с Rf 0,78. Оставшуюся часть хроматограммы обрабатывали реактивом Т-84 пиридоксин под действием этого реактива дает синее пятно с У /0,13. (При обработке пластинки последними двумя реактивами оставшуюся часть хроматограммы закрывали простой стеклянной пластинкой, чтобы предохранить эту часть от воздействия аммиака и хлора.) Слой целлюлозы элюировали смесью 10 %-ный аммиак—метанол (3 7). Витамин Bi (. /0,45) обнаруживали сначала при облучении УФ-светом далее после облучения обрабатывали в течение 30 мин реактивом Т-174, чтобы обнаружить фолиевую кислоту, которой соответствует Rf 0,30. В работе [ 88] указан порог чувствительности определения ряда соединений тартрат холина 3 мкг метионин 0,3 мкг пантенол 1 мкг биотин 0,3 мкг пиридоксин 0,1 мкг рибофлавин 0,2 мкг никотинамид 3 мкг и фолиевая кислота 0,2 мкг. Сравнивая полученные пятна с пятнами известных количеств витаминов, можно оценить полуколичественное содержание витаминов в пробе. [c.419]

Дженкинсон и Тинслей [19] идентифицировали с помощью хроматографии на бумаге состав аминокислот, гидролизат которых был получен в ходе изучения аминокислот растительного происхождения, выделенных из компоста. Десять мл гидролизата, содержавшего приблизительно 1 мг связанного азота, запаривали досуха при пониженном давлении, растворяли в 5 мл воды и снова упаривали досуха. Остаток растворяли в 1,5 мл воды и центрифугировали. Осветвленную жидкость в количестве 0,04 мл наносили на бумагу Ватман № 1. Разделение проводили элюентом, предложенным Вольфом [20]. Хроматограмму проявляли, окуная лист в 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Были идентифицированы следующие аминокислоты цистеиновая, аспарагиновая, глутаминовая, лизин, аргинин, глицин, гистидин, серии, аланин, тирозин, пролин, валин, треонин, изолейцин, лейцин и фенилаланин. Метионин не поддавался определению, поскольку его трудно было отделить от глицина в описанных системах растворителей. Метио-нин-5-оксид тоже не отделялся от валина. Хроматограммы опускали в 0,1%-ный раствор изатина в ацетоне для обнаружения про-лина и подтверждения отсутствия оксипролина. Детектирование и определение содержания пептида с остатком лизина в середине цепи проводили с помощью 2,4-динитрофторбензола [21]. Эта реакция протекает, поскольку е-аминогруппа, в отличие от а-амино-группы лизина, свободна и может вступать в реакцию. [c.306]

Из хроматограмм пептиды вымывают водой пли водой, насыщенной хлороформом, чтобы предотвратить случайное влияние бактерий. С этой же целью сосуд, в котором осуществляют процесс элюции, помещают склянки, содержащие фенол (см. рис. 92). При вымывании пептидов из хроматограмм всегда имеют место потери, которые для бумаги ватман 1 составляют около 20%. Известно, что при гидролизе метиониновых и тиро-зиновых элюатов в значительной стенени разрушаются выделенные метионин и тирозин (Ашэ и сотрудники [3]). Этих потерь отчасти можно избежать, если бумагу перед хроматографированием промыть разбавленной муравьиной кислотой и водой (Уайт и Лапдман [2]). [c.464]

Гидролизат, содержащий метионин и цистин, предварительно окисляют надмуравьиной кислотой. На линию старта одномерной хроматограммы наносят 80—100 цг смеси в виде поперечной линии длиной 13 мм, на остальные места наносят стандартную смесь аминокислот, аналогичную по своему составу испытуемой смеси кроме того, наносят каплю тропеолина 00. Первое хроматографирование в системе / -бутанол — уксусная кислота — вода (4 1 5) проводят с перетеканием до тех пор, пока пятно тропеолина достигнет нижнего края бумаги. После сушки хроматограмму хроматографируют в той же системе, повторяя эту операцию 5—8 раз, причем каждый раз до достижения растворителем нижнего края бумаги. Проявление проводят погружением хроматограммы в 0,7%-ный раствор нингидрина в безводном ацетоне, после чего хроматограмму выдерживают в течение 8—10 час при комнатной темнературе в полутьме, нричем в атмосфере не должно содержаться аммиака. Затем хроматограмму освещают минимум двумя источниками света с определенного расстояния и фотографируют на фотопленку. Отношение величины площадей пиков анализируемых образцов, полученных измерением на микрофотометре, сравнивают с площадями стандартных образцов и результаты выражают в виде части от общего содержания аминокислот. Метионинсульфон (располагающийся на хроматограммах вместе с гликоколом и серином), тирозин и триптофан этим способом пе определяются, изолейцин и лейцин определяются совместно. [c.776]

За первым сообщением об изучении триметилсилильных производных аминокислот, появившимся в 1960 г. [188], последовало их систематическое исследование [189, 190]. Трудности, с которыми приходится сталкиваться при получении этих производных, обусловлены в основном низкой реакционной способностью аминогрупп и нестабильностью образующихся триметил-силазанов, которые весьма чувствительны к следовым количествам воды. Согласно данным Герке и сотр. [191, 192], воду лучше всего удалять в несколько приемов путем ее азеотропной отгонки с дихлорметаном. Сложность превращения аминогрупп в силильные производные, в результате которого образуется набор продуктов, стимулировала изучение действия разнообразных силилирующих агентов в различных условиях. Установлено, что в зависимости от условий реакции некоторые аминокислоты, а именно глицин, со-аминокислоты, аргинин, гистидин и триптофан, дают на хроматограммах двойные пики [189, 190, 192]. Глутаминовая кислота может образовать 2-пирролидон-5-карбо-новую кислоту. Хранение триметилсилильных производных аминокислот в присутствии силилирующих агентов в плотно закрытой посуде должно было бы обеспечить их устойчивость по меньшей мере в течение недели [191, 192], однако известно, что концентрация производных гистидина существенно уменьшается уже через 2 ч [194], а аргинин, у-аминомасляную кислоту, цитруллин, глутамин, гистидин, сульфоксид метионина и таурин вообще невозможно превратить в стабильные производные [183]. Поэтому, как показывает наш опыт, триметилсилильные соединения следует хроматографировать непосредственно после охлаждения реакционной смеси. [c.70]

При работе с микроколичествами существует естественная тенденция избегать выделения чистых веществ [И] и опускать приготовление производных в соответствии с этим идентификация часто основана на цветных или других специфических химических реакциях. Такая идентификация, по мнению автора, не является адекватной. Заключения, основанные на хроматографических данных, страдают тем же недостатком. Например, если на двух хроматограммах на бумаге неизвестного твердого вещества нингидри-новая и йодоплатиновая реакции положительны, то естественно предположить присутствие среди других аминокислот метионина. Если неизвестная смесь представляет собой белковый гидролизат и получены воспроизводимые хроматограммы смеси со значениями совпадающими с известного образца метионина, и если неизвестная смесь дает положительную пробу при выращивании специфических микроорганизмов, то наличие метионина в этом гидролизате можно считать твердо установленным. [c.352]

Подбор подходящего растворителя очень важен при хроматографии на бумаге. Для разделения на бумаге растворитель должен до некоторой степени смешиваться с водой, поскольку фронт образуется при адсорбции воды бумагой в процессе продвижения растворителя. Однако использование большого количества воды нежелательно, а применение чрезмерно насыщенных водой органических растворителей может привести к получению плохих хроматограмм. Как правило, растворитель не должен содержать более 10—20 вес.% воды. С другой стороны, имеются растворители, смешивающиеся с водой в любых отношениях, в которых процентное содержание воды может быть выше например, были использованы изопропаноловые смеси, содержащие до 40—50% воды. Растворители с низким давлением пара неудовлетворительны, потому что могут мешать окраске хроматограммы или способствовать распространению растворенных веществ на большую площадь, что приводит к образованию плохих хроматограмм. Коллидин, например, нельзя употреблять с йодоплатиновым индикатором для метионина, потому что, даже если прогреть хроматограмму в течение 1 часа при 120°, следы коллидина, остающиеся на бумаге, обесцвечивают индикатор. Растворители с высоким давлением пара следует употреблять с осторожностью, так как они чувствительны к колебаниям температуры и имеют тенденцию к испарению с бумаги или к конденсации на бумаге, что вызывает фазовые нарушения, если температура тщательно не регулируется. Растворитель не должен быть обязательно однородным веществом. Например, при хроматографии различных сахаров хорошими растворителями являются смесь бутанола с уксусной кислотой и смесь этилацетата с пиридином, насыщенная водой. В табл. 25 приведены некоторые растворители и индикаторы, использующиеся для некоторых типов органических соединений. Более подробную сводку можно найти в литературе [39]. [c.362]

Система ani.L натрия — иод. Опрыскивают сухую хроматограмму раствором 0,05 М иода в 507о-ном этаноле, содержанием 1,5% азида натрия. Пятна лучше видны в УФ-свете. Чувствительность определения 0,5 мкг метионина. [c.270]

М хлорида платины, 0,25 мл 1 иодида калия, 0,4 мл 2 М НС1 и 76 мл ацетона. Пог])ужают в этот раствор или обильно им опрыскивают хроматограмму. Цистеин, циспш, метионин и восстанавливающие агенты дают белые пятна на красно-фиолетовом фоне. Фенолы и лутидины, использованные в системе растворителей, должны быть удалены промывкой хроматограммы эфи1юм, ацетоном и т. д. [c.270]

Смотреть страницы где упоминается термин Метионин хроматограммы: [c.29] [c.166] [c.395] [c.398] [c.95] [c.172] [c.219] [c.47] [c.108] [c.124] [c.147] [c.43] [c.44] [c.113] [c.134] [c.415] [c.432] [c.49] [c.74] [c.359] [c.124] [c.210]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология