Гели, солюбилизация

Таким образом, исследование влияния солюбилизации бензола на структурно-механические свойства гелей желатины показало, что процесс гелеобразования желатины после солюбилизации бензола проходит также во времени без изменения степени спиральности макромолекул по сравнению с чистым гелем, но с некоторым понижением прочности в результате уменьшения межмолекулярных связей из-за образования более компактных, менее асимметричных агрегатов. [c.98]

Полимерные частицы геля еще более мелких размеров (наночастицы), могут быть изготовлены путем полимеризации в так называемых микроэмульсиях (рис. 8, в). Здесь используется свойство некоторых ПАВ образовывать в неполярных органических растворителях обращенные мицеллы, способные солюбилизовать (растворять) водные растворы мономера и фермента. В результате солюбилизации формируется микроэмульсия, состоящая из мельчайших капелек водного раствора, стабилизированных ПАВ. Размер этих капелек и, соответственно, размер наночастиц, образующихся в процессе полимеризации, инициируемой облучением ультрафиолетовым светом, изменяется в зависимости от количества добавленной воды в пределах от нескольких единиц до нескольких десятков нанометров. Полученные наночастицы осаждают из органического растворителя ацетоном, отделяют центрифугированием и высушивают. [c.65]

В последние годы изучение структурных компонентов мембран является одним из основных направлений биохимии. Благодаря высокой разрешающей способности электрофорез (в особенности электрофорез в полиакриламидном геле) служит одним из наиболее важных методов исследования этих компонентов. Так как число мембранных белков очень велико и все они обладают низкой растворимостью в воде, возникает ряд проблем, не встречающихся в других областях биохимии. Поэтому вопросы, связанные с солюбилизацией мембранных белков перед электрофорезом, приобретают большое значение и требуют более подробного рассмотрения. [c.315]

III. Неионные детергенты. Они используются для прямой солюбилизации мембранных молекул из целых клеток. Эти детергенты также обладают некоторыми недостатками они солюбилизируют не все мембранные молекулы, большие размеры мицелл снижают эффект гель-фильтрации и, наконец, неионные детергенты невозможно удалить диализом. [c.188]

Приведем некоторые фирменные рекомендации по использованию N S. Для солюбилизации измельченной ткани или ее гомогената (4 1) добавляют шестикратный объем (N S) и выдерживают при 50° до полного растворения. Для обесцвечивания гидролизата на каждый 1 мл N S рекомендуется добавить 0,3 мл перекиси бензоила и подержать еще 30 мин при 50 . Лиофилизированный препарат следует увлажнить и обработать так же. При необходимости просчитать водный раствор радиоактивной неорганической соли во избежание ее выпадания в осадок рекомендуется предварительно добавить в сцинтиллятор четырехкратный по отношению к раствору соли объем N S. Если препарат находится в ПААГ, то для его растворения и элюции из геля срез последнего толщиной 1—2 мм (<50 мг) помещают во флакон, добавляют туда 0,5—1 мл смеси N S —вода (9 1) и, завинтив флакон, выдерживают 2 ч при 50°. [c.211]

Зоны нуклеиновых кислот можно обнаружить в геле различными способами. Радиоактивность обычно измеряют путем разрезания геля, солюбилизации в 0,5 М ЫаОН или Н2О2 и использования сцинтилляционного счетчика. Если вещество имеет высокую молекулярную массу, то разрезание геля затруднено, поскольку в таких случаях используют очень мягкий гель для достижения большого размера пор. Двухцепочечную ДНК легче обнаружить при окрашивании флуоресцентным красителем бромидом этидия (рис. 9-11), который имеет повышенный квантовый выход (гл. 15) при связывании с нативной ДНК. Краситель 51а1п8-А11 обладает интересным свойством давать различные окраски с ДНК, РНК и белками. [c.234]

Практическое использование коллоидных поверхностноактивных веществ связано со следующими свойствами их растворов высокой поверхностной активностью способностью улучшать смачивание различных материалов эмульгирующим действием солюбилизацией способностью образовывать прочные поверхностные слои на жидких и твердых поверхностях склонностью к образованию гелей. Во многих случаях эффективность применения веществ определяется несколькими факторами одновременно. Например, многочисленными работами П. Н. Ребиндера с сотр., Б. Н. Тютюнникова, Дж. Мак-Бэна и других исследователей показано, что моющее действие определяется способностью коллоидных поверхностно-активных веществ смачивать ткани, снижать межфазное натяжение, образовывать прочные адсорбционные слои, солюбилизировать жировые загрязнения. [c.172]

В тех случаях, когда это возможно, первая стадия включает солюбилизацию в водном илн апротонном растворителе, например в этиленгликоле или диметилсульфоксиде эту операцию необходимо проводить с осторожностью, чтобы быть уверенным, что в условиях данного метода и при применении выбранного растворителя макромолекулы не модифицируются и не разрушаются. Лоэтому на данной стадии нельзя применять кислоты, основания или ферменты. Низкомолекулярные примеси легко удаляются диализом (разделение по размеру молекул), ионообменной хроматографией (разделение по заряду молекул) или гель-фильтрацией (разделение по размеру молекул) (см. разд. 26.3.2.6). Последние два метода широко применяются также для отделения макромолекулярных примесей. Макромолекулы выделяют из раствора [c.216]

Влияние солюбилизации бензола на структурно-механические свойства гелей желатины. Влияние солюбилизации — гидрофобного связывания углеводорода на структурно-лгеханические свойства гелей желатины и на конформационные изменения макромолекул в процессе гелеобразования в присутствии углеводорода изучено в нашей работе [212]. Результаты этой работы имеют принципиальное значение для исследования эмульгирующей способности н<елатипы, так как первичный акт взаимодействия белка с углеводородом проявляется в виде солюбилизации. Кроме того, концентрированные эмульсии углеводорода, стабилизированные желатиной, представляют собой твердообразные нетекучие системы, поэтому важно знать влияние углеводородов в широком интервале копцентраций на структурно-механические свойства гелей желатины. [c.97]

Гидрофобные взаимодействия, как уже неоднократно указывалось, играют чрезвычайно важную роль в стабилизации пространственной структуры биополимеров в водных средах. Связывание углеводородов белками можно рассматривать как доказательство существования гидрофобных взаимодействий, приводящих к возникновению в молекулах белка неполярных областей. Эти структурированные гидрофобные областр ответственны за связывание ненолярных веществ, поэтому понятно, что способность связывать углеводороды должна определяться особенностью пространственной структуры макромолекул. Было показано [213, 214], что солюбилизация уменьшается с увеличением концентрации растворов желатины, особенно при образовании трехмерных структур (гелей). Макромолекулы желатины обладают наибольшей солюбилизирующей способностью по отношению к бензолу в состоянии клубка [181]. Растворимость бензола в растворах желатины нри различных концентрациях и температурах представлена в табл. 4. [c.97]

Процесс гелеобразования в желатине в присутствии углеводорода (рис. 22) практически не отличается от структурообразования в чистом геле. Однако прочность геля с тем количеством углеводорода, который способен солюбилизироваться, уменьшается аналогично влиянию солюбилизации углеводородов на реоло- [c.97]

Строение углеводорода (бензол и даже гексан, октан, циклогексан, нитробензол) не влияет на величину солюбилизации для разбавленных растворов желатины приведенная солюбилизация для всех углеводородов была примерно одной и той же (90—150 моль1моль). Было показано [90], что эффект солюбилизации уменьшается с увеличением концентрации растворов желатины даже в изоэлектрическом состоянии при 1 — 20°. Вообще в растворах желатины образование связей может происходить как между различными цепями, так и внутри одной цепи. В разбавленных растворах, по-видимому, образуются внутримолекулярные связи, а в концентрированных — преобладают межмолекулярные взаимодействия, приводящие к образованию трехмерной сетки геля. [c.396]

Высшие спирты были разделены на колонке, наполненной дауэксом 50-Х8 (Н+) (200—400 меш), путем постепенного элюирования уксусной кислотой возрастающей концентрации (1—Зн.) [7] (табл. 18.3). Шерма и сотр. [8] также изучали возможность, разделения высших спиртов на дауэксе 1 (СНзСОО ) при элюировании водноорганическими солевыми растворами. При этих разделениях важное значение имеет как высаливание, так и растворимость, и, следовательно, зависимость логарифма коэффициента распределения выделенного вещества относительно концентрации электролита не всегда линейна. Эти работы показывают, что возможно неполное разделение высших спиртов (к-гексанола, н-гептанола и н-октанола) с использованием в качестве элюента 4 М раствора ЫС1 в метаноле. Однако наблюдалось существенное расширение кривых элюирования. Шерма и Лаури [9] изучили хроматографию на основе солюбилизации на макропористых ионообменных смолах. Разделение гомологического ряда алифатических спиртов с помощью хроматографии на основе солюбилизации на макропористых ионообменных смолах амберлист 15 было проведено не так успешно, как на гелях обычных смол. [c.27]

Для солюбилизации модифицированных агароз предложено несколько методов, позволяющих количественно спектрофотометриро-вать иммобилизованные аффинные лиганды [47]. Гели агарозы могут быть растворены в горячей воде, немодифицированная агароза растворяется при 60 °С. При последующем охлаждении высококонцентрированных водных растворов агарозы получаются непрозрачные растворы, в то время как более разбавленные растворы становятся вязкими, но остаются прозрачными. Эти эффекты не зависят [c.245]

ОТ pH ВО всем диапазоне. Напротив, модифицированные гели не растворяются даже при наг ревании до 75 °С в 8 М мочевине или 6 М гуанидинхлориде. Они могут быть солюбилизированы при нагревании с 0,1 М соляной кислотой или едким натром при 75 °С или, что используется наиболее часто, в 50%-ной уксусной кислоте. После солюбилизации не образуется никакого заметного осадка даже при доведении pH до нейтрального. [c.245]

В разд. 9.2.4 уже упоминалось, что солюбилизация может быть полезна при количественном определении содержащихся в гелях аминогрупп с помощью ТНБС. [c.246]

Крыс обучали менять лапу при доставании пищи и затем изучали влияние этого обучения на выделенных нервных клетках контрольного участка гиппокампа. Не принималось никаких хирургических мер для того, чтобы пробудить животное заменять предпочитаемую лапу другой при доставании пищи, находящейся на дне длинной и узкой стеклянной трубки (рядом с трубкой и параллельно ей ставили стенку). Поскольку животное из-за конструкции трубки не может достать пищу предпочитаемой лапой, оно старается сделать это другой лапой и в конце концов обучается. В день крысе дают два урока. На четвертый— пятый день обучения крысы находятся еще на восходящей ветви кривой обучения. Затем из мозга крыс этого периода обучения выделяют участок гиппокампа САЗ, содержащий парамидные клетки (средние). За полтора часа до этого крысам в оба боковые желудочка мозга вводят Н-лейцин (60 X 2 мкл с радиоактивностью 1 мкКи/мкл). Берут образцы нервных клеток из участков САЗ гиппокампа, гомогенизуют и экстрагируют для солюбилизации белков солевым раствором, содержащим Тритон Х-100, как это было описано в разд 7.1.3. При разделении белков на микрогеле получаются 2 основные белковые фракции в кислой половине геля (рис. 3 Л). [c.294]

Образование таких каркасов, как было показано в нашей лаборатории 3. Н. Маркиной, легко обнаруживается по резкому повышению наибольшей (предельной) вязкости системы, соответствующей практически не разрушенной структуре. Такой раствор мыла, например 0,8 молъ1л олеата натрия, образует гель и его предельная вязкость составляет около 10 сантипуаз, т. е. в миллион раз ( ) превышает вязкость воды при температуре 20°. При солюбилизации в таком растворе 0,22 моля додекана на 1 моль мыла мицеллы из слоистых становятся сфероидальными, пространственная структура образовываться ими не может и гель разжижается — предельная вязкость системы понижается в 200 тыс. раз (до 5 сантипуаз), оставаясь только в 5 раз больше вязкости воды, очевидно, вследствие одного только эйнштейновского эффекта заполнения части объема двигающимися в нем независимо друг от друга мицеллами мыла. [c.16]

Для объяснения мицеллярных эффектов в химических реакциях несколько лет назад нами была предложена общая кинетическая теория, учитъюаю-шая распределение реагентов между объемной и мицеллярной "фазами", одновременное протекание реакции в обеих этих фазах и сдвиг кажудейся константы ионизации одного из реагентов под действием поверхностного заряда мицелл. С помощью этой теории, исходя из кривых зависимости валовой скорости от концентрации ПАВ, можно определить коэффициенты распределения реагентов между объемной и мицеллярной фазами и истинную константу реакции, протекающей в мицеллярной среде. Справедливость кинетических уравнений подтверждается тем, что определенные таким образом коэффициенты распределения согласуются с величинами, полученными с помощью других методов (гель-фильтрации, солюбилизации, спектрофотометрического титрования и т.д.). [c.224]

Солюбилизация приводит к увеличению объема мицелл в несколько раз. Влияние солюбилизации на переход масла в раствор ПАВ и, наоборот, иоверхностно активного вещества в углеводороды детально исследовано П. А. Ребиндером [13, 14, 15]. Эффект солюбилизации широко применяется для изготовления эмульсола, представляющего собой гидрогель с избыточным содержанием масла в растворе ПАВ. Такие гели легко разбавляются водой без нарушения эмульсий. Тем не менее не следует смешивать солюбилизацию с эмульгированием. Водные растворы, содержащие органические соединения в солюбилизированном состоянии, [c.11]

Основной проблемой является быстрая солюбилизация геля. Лучше всего гель солюбилизировать путем разрушения поперечных сшивок, поскольку несшитые линейные полиакриламидные цепи легко растворяются в сцинтилляционной смеси. В качестве поперечно-сши-вающего агента обычно используют Н,Н -диаллилтартар-диамид, который легко расщепляется йодной кислотой [56]. Ряд гелей, содержащих 7% (вес/объем) акрилами-да и 0,27% (вес/объем) поперечно-сшивающего агента, обрабатывают 0,5 мл 27о-ной иодпой кислоты в течение [c.249]

Полиакриламидные гели, сшитые с помощью б с-акрилами-да, с трудом поддаются солюбилизации. Соответствующие методы основаны на деполимеризующем эффекте 30%-ной Н2О2 [c.209]

Берзине и др. [114] методом перекрестного иммуноэлектрофореза изучали антигены из микросом печени крысы, обладающие эстеразной активностью. Солюбилизацию белков осуществляли с помощью детергентов люброла и дезоксихолата. Вначале проводили ИЭФ (pH 3—7), а затем иммуноэлектрофорез в агарозном геле, содержавшем 10% кроличьей антисыворотки к микросомам печени крысы. Эстеразы идентифицировали по ферментативной активности согласно методу Уриэля [1323] (см. гл. II.6). В эстракте, полученном с помощью детергентов, обнаружили по меньшей мере 20 зон неспецифических эстераз, большинство из которых имели ИЭТ в интервале pH 4,5—6,5. При иммуноэлектрофорезе выявлено не менее 5 полос иммунопреципитации, обладающих выраженной микрогетерогенностью. [c.318]

Для растворения и разделения крупных пептидов могут быть использованы 8 М мочевина с последующей ио1юобмен юй хроматографией в этом же растворе [25] или 100%-ная муравьиная кислота с гель-фильтрацией на биогелях в 20—70%-ной муравьиной кислоте [1]. Солюбилизация достигается также модификацией остатков лизина в пептидах цитраконовым ангидридом фракционирование проводится на колонках с биогелем или сефадексом при нейтральных pH. [c.348]

Существует ряд методов солюбилизации модифицированных агарозных гелей, что позволяет проводить количественное спектрофотометрическое определение иммобилизованного лиганда. Модифицированные агарозные гели могут быть солюбилизированы нагреванием при 75 °С в 1) 0,1 М НС1 2) 0,1 М NaOH — 0,1% (масс./об.) NaBH4 или 3) 50%-ной (об./об.) уксусной кислоте. Для различных препаратов условия солюбилизации меняются их устанавливают методом проб и ошибок. [c.100]

Антигены, Антигены, используемые для иммунизации, должны быть очень хорошо очищены, для чего можно использовать метод иммуноаффинной хроматографии или классические методы . Чистая GGT из почек быка может быть выделена солюбилизацией фермента в присутствии дезоксихолата натрия с последующей обработкой -бутанолом, фракционированием сульфатом аммония и хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе [27]. Полученный после разделения на сефарозе 6В препарат GGT подвергается протеолитическому гидролизу бромелаином, и полученная GGT (легкая форма) очищается электрофорезом в полиакриламидном геле [28]. Чистая GGT из почек крысы (фермент П1) может быть получена [29] подобным методом. [c.153]

II. Слабоионные детергенты. В присутствии дезоксихолата, по-видимому, происходит наиболее полная солюбилизация мембран, а относительно высокая критическая концентрация мицеллообразования у этого детергента позволяет удалять его с помощью диализа. Кроме того, благодаря малому размеру мицелл связанный детергент не влияет на поведение солюбилизированных белков во время гель-фильтрации. Мы обычно применяем гель-фильтрацию после очистки на колонке с МКА для того, чтобы освободиться от незначительных примесей. Недостаток дезоксихолата заключается в том, что при pH ниже 8, а также в присутствии солей он превращается в гель. Холат, в этом смысле, причиняет меньше хлопот, но он и менее эффективен для солюбилизации. Однако иногда удобно солюбилизировать препарат в дезоксихолате, а после связывания антигена на колонке заменить его холатом. При работе с лимфоидной тканью, если предусматривается солюбилизация солями желчных кислот, необходимо предварительно удалить клеточные ядра. В противном случае высвобожденная ДНК значительно увеличит вязкость раствора. Если же антигены выделяют из мозговой ткани, в которой количество клеточных ядер на единицу веса гораздо меньше, можно сразу проводить экстракцию дезоксихолатом, поскольку в этом случае вязкость экстракта, очевидно, не будет чрезмерной. [c.187]

Важно иметь в виду, что прогресс в биохимии зависит от разработки новых методов анализа, очистки и определения структуры. Например, в области биохимии липидов произошел настоящий переворот после введения в практику гяэо-жвдкостной и тонкослойной хроматографии. Анализ мембранных и многих других белков был крайне затруднен до тех пор, пока не появился метод электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПЭГ) применение додецилсульфата натрия приводит к солюбилизащш (растворению) ряда белков, которые ранее не удавалось перевести в растворимое состояние. После такой солюбилизации уже можно проводить электрофорез. Разработка методов клонирования и секвенирования (определения последовательности мономеров) ДНК произвела подлинную революцию в изучении нуклеиновых кислот и вообще в биологии. [c.16]

Весьма важным является тот факт, что определяемая молекулярная масса р-рецептора существенно зависит от типа связанного с ним лиганда. В эритроцитах лягушки [37] он увеличивается в том случае, если мембраны перед солюбилизацией обрабатывают агонистом. В присутствии антагониста или в отсутствие лиганда увеличения молекулярной массы р-рецептора не происходит. Индуцированные агонистом изменения рецептора не объясняются образованием комплекса R—[3]. Лимбирд с сотр. показали, что связанный с меченым агонистом рецептор ретикулоцитов крыс при гель-фильтрации элюируется вместе с [ р] ДДФ рибозилированным N-белком аденилатциклазного комплекса [12]. Таким образом, агонист способствует физическому сопряжению р-рецептора с N-белком и комплекс Н—R—N существует более или менее длительное время, достаточное для его обнаружения. Это явление распространяется, по крайней мере, на глюкагоновый рецептор печени крыс [38. 39] и на а-адренергический рецептор тромбоцитов [40]. [c.98]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология