Очистка и концентрирование вирусов

ОЧИСТКА И КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ ВИРУСОВ [c.245]

Эта сорбция носит, по-видимому, ионный характер и происходит за счет отрицательно заряженных силанольных групп на поверхности стекла. Здесь трудно ожидать надежной воспроизводимости, поэтому, вероятно для фракционирования сорбцию на стекле применяют редко (заметим, однако, что сорбция на пористом стекле широко применяется для очистки и концентрирования вирусов). Были исследованы эффективность и условия сорбции аминокислот [c.247]

Осветленный и концентрированный вирус еще недостаточно чист для большинства биохимических и биофизических исследований. Дополнительной очистки достигают зональным (скоростным) или равновесным (изопикническим) центрифугированием. Теоретические и практические аспекты центрифугирования детально изложены в другом руководстве [7]. Для вирусов растений можно использовать следующие методы дополнительной очистки. [c.16]

На первой стадии очистки вирус необходимо отделить от клеток и клеточного дебриса, содержащегося в культуральной жидкости. Как правило, для этого используют низкоскоростное центрифугирование при 600 g. На второй стадии вирус, находящийся в осветленном супернатанте, концентрируют и освобождают от большинства низкомолекулярных и высокомолекулярных примесей с помощью любого из известных методов концентрирования вирусов при низкой температуре (4—10°С), pH 6,8—8,0 и средних значениях ионной силы. Ниже рассматриваются два метода осаждение вируса высокоскоростным центрифугированием и преципитация ацетатом цинка, сульфатом аммония или полиэтиленгликолем. Преципитация удобна для получения вирусов как в малых, так и в больших количествах и обладает тем преимуществом, что обеспечивает отделение вируса от большей части посторонних белков. [c.124]

В основе этого исключительно простого и быстрого метода концентрирования вируса гриппа лежит его способность связываться с поверхностью эритроцитов (см. разд. 3.1), что можно использовать как одностадийный метод очистки вируса (см. разд. 4.3.4). [c.184]

Можно указать на некоторые другие применения ультрафильтрации в промышленности и фармакологии очистка антибиотиков, концентрирование и диафильтрация альбумина, процесс непрерывного сбора продуктов ферментации, очистка кристаллизационных растворов и кондиционирование поверхности кристаллов, очистка сывороток диафильтрацией при получении диагностических реактивов концентрирование и очистка ферментов, фракционирование макромолекул, концентрирование гормональных препаратов, стерилизация растворов для внутривенного введения, удаление пирогенных веш,еств, концентрирование вирусов, регенерация масляно-эмульсионных смесей, очистка стоков и регенерация растворов гальванических производств. [c.366]

Самый распространенный метод очистки и концентрирования вирусов — ультрацентрифугирование. Со времени создания в 1925 г Сведбергом первой ультрацентрифуги теория и методы ультра-центрифугирования непрерывно развивались. Сейчас в распоряжении исследователей есть превосходные аналитические и препаративные ультрацентрифуги, развивающие ускорение до 420 ООО g. [c.43]

В заключение следует подчеркнуть что для концентрирования и очистки вирусов животных применяются только многоступенчатые методы, включающие в себя как простые, так и сложные методы очистки и фракционирования. В связи с разнообразием физико-химических и биологических свойств вирусов животных универсального метода, пригодного для концентрирования и очистки всех вирусов, иет. [c.45]

Очистка и концентрирование вируса Сендай [48, 49] [c.150]

Подбором структуры нор и химии поверхности адсорбента, а также оптимальных условий элюирования можно осуществить концентрирование и очистку биополимеров методами адсорбционной и (или) ситовой хроматографии. В последнем случае крайне важно устранить сильную адсорбцию белков и вирусов на внешней поверхности макропористых зерен. [c.343]

Зонный способ применяют также при разделении солевых смесей, очистке парафина, бензола, нафталина, антрацена и многих других препаратов, для концентрирования разведенных растворов ферментов, вирусов, суспензий бактерий и т. д. [c.462]

Баромембранные процессы используются во мн. отраслях народного хозяйства и в лаб. практике для опреснения соленых и очистки сточных вод, напр, разделения азеотропных и термолабильных смесей, концентрирования р-ров и т.п. (обратный осмос) для очистки сточных вод от высокомол. соединений, концентрирования тонких суспензий, напр, латексов, выделения и очистки биологически активных в-в, вакцин, вирусов, очистки крови, концентрирования молока, фруктовых и овощных соков и др. (ультрафильтра-цюг) для очистки технол. р-ров и воды от тонкодисперсных в-в, разделения эмульсий, предварительной подготовки жидкостей, напр, морской и солоноватых вод перед опреснением, и т.д. (микрофильтрация). [c.25]

Мембранные фильтры используют для анализа воды и очистки ее от микроорганизмов, выделения и концентрирования специфической микрофлоры, в том числе и вирусов, медицинских и клинических анализов, анализа воздуха и др. Исследования последних лет [369] показали, что метод ультрафильтрования непригоден для концентрирования бактерий из воды с целью последующего изучения их физиологических и биохимических свойств, так как последние изменяются в процессе фильтрования. Кроме того, значительное количество микроорганизмов связывается с мембранами. Следовательно, после концентрирования с помощью ультрафильтрования микроорганизмы ни количественно, ни функционально не эквивалентны тем, которые обитают в воде. Мембранные фильтры применяются также в промышленности, где существует острая необходимость бактериально чистой воды, главным образом в медицинской и пищевой [365, [c.197]

Анализ литературных и патентных данных, посвященных флокуляции объектов биологической природы, показывает неуклонную тенденцию роста научного и практического интереса в этой области знаний. Так, если в 50-60-е годы они были связаны исключительно с концентрированием суспензий микроорганизмов и вирусов, то к настоящему времени область практического применения флокулянтов существенно расширилась. Основные отрасли, в которых метод флокуляции находит практическое применение, это — микробиологическая, медицинская, пищевая промьппленность и водоочистка. Важнейшие направления исследований и практического применения флокулянтов концентрирование биомассы, очистка культуральных жидкостей и питательных сред от клеточного материала и других примесей, очистка и концентрирование растворов ферментов, антибиотиков, других продуктов микробного синтеза, иммобилизация клеток и ферментов, очистка сточных вод (см. схему на рис. 6.1). [c.117]

Выбранную культуру клеток можно выращивать на поверхности культурального флакона в стационарных условиях или в роллерной установке (в последнем случае используют бутылки и пробирки), а также в суспензии при осторожном перемешивании. Клетки наращивают до монослоя или высевают с нужной плотностью из трипсинизированной культуры за сутки до использования (хотя следует помнить о чувствительности рецепторов пикорнавирусов к протеазам [12]). В нашей лаборатории оказалось наиболее удобным использовать для получения небольших количеств (до 100 мкг) полиовируса вращающиеся пробирки, поскольку в них значительное количество клеток (Ю клеток на площади 66 см ) покрывается небольшим объемом среды (1 мл), что обеспечивает экономный расход радиоактивных соединений и позволяет получить препарат вируса, не требующий концентрирования перед очисткой. Культивирование полиовируса в роллерных установках обычно дает такой же выход и удельную радиоактивность, как и выращивание в монослое на флаконах при одинаковых концентрациях клеток, вируса и радиоактивного предшественника. Риновирусы, однако, предпочтительнее выращивать в роллерных культурах, поскольку для их репродукции нужны хорошая аэрация и слабокислый pH, хотя сами вирионы в кислой среде лабильны. [c.48]

Препараты пикорнавирусов, полученные из культур тканей, контаминированы клеточными компонентами, в том числе мембранами, и если вирус предполагается использовать для антигенного или биохимического анализа, его необходимо очистить. При этом, как правило, используют тот или иной метод центрифугирования в градиенте плотности. Если работа ведется со значительными количествами вируса, очистке обычно предшествует концентрирование, например осаждение вируса сульфатом [c.57]

Первый этап, необходимый для очистки вирусов, во всяком случае при их выделении из культуральной жидкости, — это концентрирование. Поскольку вирусные частицы имеют несколько большие размеры по сравнению с другими компонентами культуральной жидкости, концентрирование приводит и к очистке вируса от низкомолекулярных контаминантов, например от любых соединений, используемых в качестве радиоактивной метки. [c.97]

Ниже приведено несколько методов очистки вируса после концентрирования. Выбор метода определяется наличием соответствующего оборудования и необходимой степенью конечной очистки. [c.184]

Исключительно важное значение химия поверхности адсорбентов и носителей имеет в газовой и жидкостной хроматографии для анализа сложных смесей, препаративного выделения чистых веществ и управления технологическими процессами. Химия поверхности играет важную роль и в процессах, протекающих в биологических системах. К ним относится, в частности, взаимодействие биологически активных веществ, в том числе лекарственных препаратов, с рецепторами — местами их фиксации в организме. Изучение модифицирования поверхности необходимо для решения вопросов совместимости искусственных материалов с биологическими. Химическое модифицирование адсорбентов применяется при разработке эффективных методов вывода из крови разного рода токсинов (гемосорбция). Прививка к поверхности крупнопористых адсорбентов и носителей соединений с определенными химическими свойствами необходима для иммобилизации ферментов, их хроматографического выделения и очистки, а также для иммобилизации клеток. Иммобилизованные ферменты и клетки эффективно используются в промышленном биокатализе, обеспечивая высокую избирательность сложных реакций в мягких условиях. Очистка и концентрирование вирусов гриппа, ящура, клещевого энцефалита и других для получения эффективных вакцин требует применения крупнопористых адсорбентов с химически модифицированной поверхностью. [c.6]

Получаемые путем культивирования вируссодержащие жидкости представляют сложную смесь, в которой кроме вирусных частиц содержатся осколки животных или растительных клеток, белки, нуклеиновые кислоты, полисахара и др. По этой причине очистка и концентрирование вирусов является сложной многоплановой задачей. [c.122]

Вирусологическими, бактериологическими и санитарно-химическими исследованиями процесса очистки бытовых сточных вод на лабораторных моделях сооружений подземной фильтрации и в естественных условиях ими установлено, что бытовые стоки хорошо освобождаются от вирусов. В качестве тест-организмов использовались вирусы Коксаки А5, А14 и бактериофаг кишечной палочки № 163. Хотя после искусственного инфицирования сточная жидкость содержала Ю ИДбо вируса мл, в 0,1— 1,0 жл фильтрата сточной жидкости, полученного после сооружений, обнаружить вирусы не всегда удавалось. Поэтому исследователи для концентрирования вирусов использовали ионообменники, в частности ЭДЭ-10П. Однако выделить вирусы из фильтрата позже 20 дня со времени внесения не удавалось. В то же время случаи выделения в упомянутый срок составляли не более сотых долей процента (0,042% и близкие к этому цифры). [c.83]

Поскольку вирус гриппа обычно содержится в большом объеме аллантоисной жидкости или культуральной среды, перед очисткой его необходимо сконцентрировать. Существуют различные методы концентрирования вирусов, и выбор одного из них определяется оснащенностью лаборатории. [c.183]

Галловей и Шлезингер [355] в 1937 т использовали ультрафильтрацию для очистки и концентрирования вируса ящура, а В, И. Товарнйцкйй и Г. П, Глухарев [118] — для очистки и концентрирования вируса гриппа, В последнее время метод ультрафильтрации был значительно усовершенствован и получил более широкое распространение как в исследовании вирусных частиц, так и для очистки и концентрирования вирусов. [c.43]

Так, В. Р. Обухова и Л. Б, Меклер [69] разработали в 1964 г. простой и эффективный метод очистки и концентрирования вирусов при помощи ультрафильтра, импрегниро ванного агаром. В 1967 г для этих целей Уоллис и Мельник [827] применили мембранные миллипоровые фильтры. Этот метод успешно применяется для концентрирования и выделения ряда вирусов из очень разбавленных растворов (сточные воды) с целью индикации вирусов в объектах внешней среды. [c.43]

В 1935 г. Стенли [759], применяя это вещество, впервые получил препарат вируса табатаой мозаики в кристаллическом состоянии. Впоследствии этим методом успешно подучали высокоочищенные препараты многих вирусов растений [528, 643, 784], Но для концентрирования и очистки вирусов животных он может быть применен только в качестве предварительной обработки. Дальнейшая очистка препарата, концентрированного сульфатом аммония, достигается более сложными методами. Этот метод успешно применяли для предварительного концентрирования вируса ящура, энтерита норок, Коксаки А9 и А10, полиомиелита, реовирусов, гриппа, болезни Ньюкасла, саркомы Рауса, лейкемии Раушера, везикулярного стоматита и лимфоцитарного хорио менингита [79, 230, 254, 295, 373, 452, 544, 571, 582, 629, 689, 833]. [c.46]

Осаждение вируса в изоэлектрической точке — наиболее простая и доступная операция из всех применяемых методов концентрирования ж очистки вирусов. Концентрирование вируса проводится при температуре 4 Медленно добавляя 1 н. раствор НС1 и помешивая, доводят pH смеси до изоэлектрической точки данного вируса (если она не известна, то ее определяют в предварительном опыте). Смесь выдерживают на холоде 12 часов. Преципитат отделяют центрифугированием при 3000 g в течение 10— 30 минут и растворяют в слабоп елочном буфере pH 7,5. [c.48]

Этот метод также применяли для частичной очистки и концентрирования вируса Синдбис, который агрегируется полностью из вируссодержащей суспензии при ионной силе 0,03 М. Иванникова 1438] предложила простой метод частичной очистки вируса псевдобешенства диализом виру ссо держащей суспензии против 0 001 М фосфатного буфера при pH 5,5. При этой процедуре выход вируса составлял 96% при его 20-кратной очистке. [c.49]

В. Р Обухова и Л. Б. Меклер [69] описали простой и оригинальный метод копцепт-рирования и очистки вируса клещевого энцефалита при помощи ультрафильтра, им-прегнир свайного агаром. Фильтр Шамберлана № 13 погружают в 0,2%-ный раствор агара, в дистиллированной воде, нагретый до 90—95 , до полного насыщения фильтра агаром. Обычно для этой процедуры требуется 20 30 секунд. Затем фильтр сушат при 37 в течение 18 часов. Схема прибора изображена на рисунке 11. Вируссодержащую культуральную жидкость вводят в сосуд а, из него в результате разности давления она поступает в сосуд в пробирку которого вмонтирован агаровый ультрафильтр. В качестве сосуда б используют обычный приемник фильтра Зейтца. Вирус задерживается, накапливается на поверхности фильтра в сосуде б, а ультрафильтрат стекает в сосуд в. Степень концентрирования вируса определяют соотношением объема профильтрованной вируссодержащей жидкости к объему пространства, заключенного между фильтром и стенкой сосуда б. После слива вирусного концентрата через кран, [c.82]

В качестве примера можно привести очистку и концентрирование вируса ЕСНО-7, выращенного в культуре ткани почек обезьян (табл. 8), К 5000 мл культуральной вируссодержащей жидкости добавляют 65 г 20%-ного раствора декстрансульфата и 1390 г 30%-ного раствора поли-этиленгликоля, содержащего 69,5 г Na I. Конечная концентрация Na l в системе будет составлять 0,3 М, так как [c.92]

Вышеописанный способ концентрирования и очистки был успешно применен для вируса вакцины, гриппа, паротита, болезни Ньюкасла, ЕСНО-7 и 18, полиовирусов 194 197, 608, 843]. Для концентрирования вируса японского энцефалита оказались применимы двухфазные системы на основе декстрана( мол. вес. 4—50 млн.). Использование декстрансульфата вместо декстрана в двухфазной системе вызывало резкое падение активности вируса [592]. Для концентрирования вируса японского энцефалита авторы применили следующие составы двухфазной системы [c.93]

Электронно-микроскопическое исследование концентрированных препаратов вирусов показало, что подобная процедура не приводит к нарушению структуры вирус-ных частиц Дальнейшая очистка концентрированных препаратов может быть достигнута с помощью ультрацент-рифугироваиия, гельфильтрации, ионообменной хроматографии или экстракцией органическими растворителями, [c.96]

Препаративные центрифуги, В настоящее время имеется большое количество превосходных препаративных ультрацентрифуг, способных развивать ускорение до 420 ООО . Они применяются для выделения, очистки и концентрирования вирусов и субклеточных частиц, фракционирования белков, нуклеиновых кислот, линопро-Т0ИДОВ и других макромолекул. Наиболее популярны следующие ультрацентрифуги Спинко модель Л и Л2 (США) Судер-Спид-40 ж 50 (Англия), ВАК-40 и ВАК-60 (ГДР) и Хитачи 55Р (Япония). В нашей стране выпускаются препаративная ультрацентрифуга типа УЦП. [c.192]

Наконец, отметим возможность быстрой и эффективной очистки гель-фильтрацией целых вирусов и фагов. Например, в недавней работе из 1 л суспензии Е. соИ, зараженных фагом X, после обработки бактериального лизата ДНКазой, РНКазой и концентрирования фагов переосаждением полиэтиленг иколем ПЭГ-6000 за одну операцию гель-фильтрации на колонке биогеля А-5т объемом 125 мл удавалось полностью очистить до 65% инфекционного материала [Sain, Erdei, 1981]. [c.145]

Широкому применению интерфероиов в медицинской практике долгое время препятствовало отсутствие экономичных методов их получения. Первоначально наибольшее распространение получил метод производства лейкоцитарного интерферона на основе донорской крови (К. Кантелл, Финляндия, 1977). При этом лейкоциты подвергаются инкубации с каким-либо вирусом (например, вирус Сендай нли вирус болезни Ньюкасла), в качестве компонента культуральной среды используется сыворотка крови человека илн быка (иногда казеин молока). Последующая очистка с помошью хроматографических приемов дает достаточно концентрированный препарат интерферона. [c.226]

Для оценки эффективности процессов обработки воды для питьевых целей и очистки стоков требуется специфичность методов определения вирусов. Методы должны позволять выделить несколько типов вирусов прн исследовании по крайней мере 100 л воды. Они должны с высокой степенью надежности давать ответ на вопрос, имеются ли вирусы в воде, а если да, то в каком количестве. Методы должны иметь коэффициент концентрирования порядка 1000—100 000 в сочетании с высокой эффективностью обнаружения. В настоящее время существует более 12 различных методов, но пи один из них полностью не удовлетворяет всем перечисленным требованиям. По-видимому, метод адсорбции на твердых веществах, мембранных фильтрах и метод разделения фаз являются наиболее перспективнымп. Перспективным является также использование комбинаций нескольких методов. [c.285]

Книга, посвященная мембранным методам разделения ясидких систем, выходит в нашей стране впервые. В ней излагаются основы теории обратного осмоса, ультрафиль-гсрации в испарения через мембрану. Рассматривается практическое применение этих методов в химической, нефтеперерабатывающей и нефтехимической, пищевой, медицинской, микробиологической и других отраслях промышленности для разделения и концентрирования растворов, очистки промышленных стоков, опреснения морских и солоноватых вод, разделения азеотропных, близкокипящих ж нетермостойких смесей, смещения равновесия в химических реакторах, обезвоживания фруктовых и овощвых соков, молока при производстве и выделении биологически активных веществ, вакцин, вирусов, ферментов и т. д. [c.2]

Зональное центрифугирование лучше всего проводить в бакет-роторах или вертикальных роторах, чтобы избежать нежелательного взаимодействия материала со стенками пробирки. Линейные градиенты сахарозы (5—20%, вес на вес) готовят одним из стандартных методов (см. гл. 1, разд. 2.5.1) и сверху осторожно наслаивают раствор вируса. Поскольку при использовании данного метода отсутствует эффект концентрирования в результате образования зоны с соответствующей плавучей плотностью, объем образца не должен превышать 1/10 объема градиента. Центрифугирование следует проводить при 4°С. Время и скорость центрифугирования во многом зависят от геометрии используемого ротора, поэтому можно дать лишь самые приблизительные указания относительно режима. Первоначально используемый режим центрифугирования обычно приходится модифицировать после первых опытов с учетом полученных результатов. В бакет-роторе, например SW27, центрифугирование в течение 2 ч при 27 ООО об/мин позволяет получить достаточную степень очистки большинства тогавирусов. [c.101]

В продаже имеются разнообразные приспособления для концентрирования, позволяющие быстро уменьшить объем содержащей вирус жидкости с 1—2 л до 50—100 мл. Использование таких приспособлений выгодно, поскольку при этом не возникает проблем, связанных с ресуспендированием вирусного осадка. Однако получаемые при этом конечные объемы все же велики для дальнейшей очистки некоторыми из рассматриваемых ниже методов. [c.184]