Получение чистых бактериальных

Практически все виды бактерий синтезируют но одному или по несколько типов специфических к определенной нуклеотидной последовательности эндонуклеаз, которые делают разрезы в двухцепочечной ДНК. Эти эндонуклеазы называются рестрицирующими ферментами (или рестриктаза-ми), поскольку их основная функция состоит, но-видимому, в ограничении присутствия инородной ДНК в бактериальной клетке (рестрикция буквально означает ограничение). ДНК клеток, синтезирующих ферменты рестрикции, защищена от их действия, потому что клетки синтезируют также модифицирующие ферменты, видоизменяющие структуру сайтов ДНК, узнаваемых ферментом рестрикции. Если клетка с действующей системой рестрикции и модификации инфицируется фагом с заранее не модифицированной ДНК, то вероятность того, что ДНК такого фага инициирует инфекцию, на несколько порядков меньше, чем для фага с модифицированной ДНК. Немодифицированная ДНК фрагментируется, число фрагментов зависит от числа сайтов узнавания в соответствующей молекуле ДНК, а затем фрагменты расщепляются экзонуклеазами. Изредка ферменты клетки-хозяина модифицируют фаговую ДНК до того как ее атакуют рестриктазы. В этом случае фаговая инфекция приводит к лизису клетки. Все потомки такого фага содержат тоже модифицированную ДНК и способны с высокой эффективностью заражать другие бактериальные клетки (с такой же системой рестрикции и модификации). Изучение закономерностей фаговой инфекции и привело к открытию систем рестрикции и модификации ДНК и разработке методов получения чистых препаратов соответствующих ферментов. [c.266]

Как только я начинаю что-либо понимать, Вы тут же все усложняете. Вы сказали, что цель бактериальной металлургии — получение чистых металлов из их соединений. Поскольку большинство металлов в природных условиях находится в соединении с кислородом, то есть окислено, следовательно, требуется обратный процесс — восстановление. [c.186]

Для получения чистой линии фага (свободной от примеси других фагов) проводят последовательные пассажи морфологически однотипных негативных колоний на газоне одного и того же бактериального штамма. [c.64]

Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху). Три пробирки, содержащие по 15 мл мясо-пептонного агара, ставят в водяную баню для расплавления агара. Расплавленную среду остужают до температуры 43— 45 °С. В пробирку вносят одну бактериальную петлю исследуемого материала. Для лучшего перемешивания материала со средой засеянную пробирку вращают несколько раз, зажав, между ладонями. После этого прокаленной и остуженной петлей содержимое 1-й пробирки переносят во 2-ю и таким же образом из 2-й в 3-ю. Приготовленные разведения микробов выливают из пробирок в стерильные чашки Петри, обозначенные номерами, соответствующими номерам пробирок. [c.53]

Антибиотик эффективно подавляет бактериальное заражение в любом организме, лишь бы бактерия не несла гены устойчивости к нему. Интерферон обладает высокой видовой специфичностью — в организме человека подавлять вирусную инфекцию может только человеческий интерферон. И хотя борьба с вирусами (против которых антибиотики бессильны и, вообще, кроме вакцин, нет эффективных средств борьбы) — это проблема номер один, наладить получение достаточно дешевого и чистого интерферона не удавалось. О том, насколько плохо обстояло дело, можно судить по тому, что не удавалось даже определить его аминокислотную последовательность. Генная инженерия в ко- [c.123]

ШТАММ. Чистая культура микроорганизмов, вирусов, выделенная из одного источника (почвы, воды, растительного или животного организма). Термин Ш. применяется к тем культурам микроорганизмов и вирусов, которые относятся к одному и тому же виду. Выделенные Ш. отличаются своей вирулентностью. Так, при производстве ветеринарных бактериологических препаратов используют уже известные Ш. в целях получения сывороток и вакцин соответствующей активности. Понятие Ш. имеет важное значение при производстве бактериальных удобрений. [c.360]

Приготовьте мазок бактерий на предметном стекле. Для этого прокалите проволочную петлю в пламени горелки и охладите ее. Капните 1—2 капли воды в центр чистого стекла. Слегка коснитесь проволочной петлей выбранной вами бактериальной колонии, полученной в предьщущем эксперименте чашку приоткрывайте как можно меньше, чтобы не загрязнить культуру. Перенесите клетки на предметное стекло и осторожно перемешайте петлей. Размажьте клетки по предметному стеклу в виде тонкой пленки, чтобы получилось пятно плошадью 3 X 1 см. Снова прокалите петлю. Очень важно добиться нужной толщины мазка. Он должен чуть-чуть опалесцировать и чаще получается слишком толстым, а не слишком тонким. Толщина мазка должна быть одинакова по всей поверхности. Дайте мазку полностью высохнуть на воздухе (несколько минут). [c.59]

Хотя опыты с пересевом значительно проще, чем флуктуационный тест, но и в этом случае полученные результаты нуждаются в статистической обработке. В 1952 г. Джошуа и Эстер Ледерберги смогли наконец показать спонтанную природу бактериальных мутаций с помощью метода, не требующего никакой статистической обработки. Ледерберги провели очень простой, но очень удобный по технологии эксперимент. Они установили, что можно делать отпечаток бактериальных колоний, выросших на чашке с агаром (фиг. 64). Для этого на поверхность агара исходной первичной чашки, содержащей колонии бактерий, накладывают кусок бархата, натянутый на круглую деревянную болванку диаметром, равным диаметру чашки Петри. Затем этим бархатом касаются чистой поверхности агара новой чашки Петри. После инкубации этой второй чашки получается реплика, отпечаток исходной чашки в каждой точке, где была колония на исходной чашке, вырастает колония и на чашке-реплике. [c.143]

Количество живых клеток в бактериальной культуре можно приблизительно подсчитать, если развести определенным образом культуру и фиксированный объем суспензии высеять в чашку Петри на поверхность твердой питательной среды (с агар-агаром) (рис. 4.1). Если культура разведена достаточно для того, чтобы отдельные клетки оказались на значительном расстоянии друг от друга, то при инкубации чашки Петри в подходящих условиях каждая бактерия начинает быстро делиться и формирует на поверхности агара различимую невооруженным глазом колонию. Количество таких колоний можно подсчитать и, умножив полученную величину на коэффициент разведения, определить число клеток в исходной культуре (см. рис. 4.1). Этот способ дает возможность изучать потомство любой отдельной клетки. Например, можно получить чистую культуру любой мутантной бактерии, присутствовавшей в исходной суспензии клеток путем ее разведения и посева в чашке Петри. Этот простой метод лежит в основе всех исследований по генетике бактерий и использовался во всех обсуждаемых ниже экспериментах. [c.91]

Получаются ли при использовании препарата повторяющиеся результаты Обнаруживают ли молекулы идентичные свойства при работе с разными препаратами Изменения в состоянии живых организмов, из которых молекулы были выделены, или неизбежные небольшие вариации при работе с особо чувствительными системами могут приводить к получению измененных структур. Хорошим контролем постоянства препаратов являются функциональные тесты. Имеется и ряд щадящих физических измерений, достаточно чувствительных для того, чтобы служить контролем качества препаратов. Если известна причина неидентичности препаратов, иногда ее удается устранить. Например, повреждение РНК за счет ферментативного расщепления может быть сведено к минимуму путем выделения ее из мутантных бактериальных штаммов, обладающих дефектными или неактивными расщепляющими РНК ферментами присущая живым организмам вариабельность может быть резко уменьшена за счет использования животных клеток, растущих в культуре в стандартных условиях. Генетические вариации могут быть устранены путем использования клонированных клеток, происходящих от одного генетически чистого предшественника. [c.24]

Роберт Кох, начав с доказательства бактериальной этиологии сибирской язвы, затем выделил возбудителей многих болезней в чистой культуре (среди них My oba terium tuber ulosis, или палочка Коха ). Р. Кох окончательно сформулировал триаду, получившую его имя, для доказательства микробной этиологии заболевания 1) микроорганизм должен присутствовать в материале больного 2) выделенный в чистой культуре, он должен вызывать ту же болезнь 3) возбудитель при экспериментально вызванном повторном заболевании должен снова быть выделен в чистую культуру, и две эти чистые культуры должны быть идентичными. В лаборатории Р. Коха введены в практику эксперимента методы получения чистых культур, а также использование в микробиологических исследованиях твердых сред на основе сначала желатины, а затем и агара. Знаменитая чашка Петри и бактериальные фарфоровые фильтры Шамберлана также были введены в практику сотрудниками института Р. Коха. [c.8]

Процессы изомеризации D-капролактама в L-изомер и превращение L-капролактама в лизин можно проводить одновременно. Для этого в водный раствор D, L-капролактама вводится необходимое количество дрожжевых и бактериальных клеток, задаются оптимальные режимы температуры, pH, аэрации. На выходе из реактора образуется преимущественно один продукт — L-лизин, который выделяют из смеси и далее очищают и сушат. Кроме изложенной выше технологии получения чистых препаратов лизина разрабатываются и другие методы, сочетающие в себе использование химического синтеза для получения предшественни-280 [c.280]

Включение фрагментов генома хозяина в геном фага можно также продемонстрировать с помощью физико-химических методов, так как плотность фага Xdg отличается от плотности нормального фага. Это, по-видимому, объясняется следующими причинами. Замена области h в геноме фага на область gal бактериальной хромосомы может, вероятно, привести к тому, что длина фрагмента ДНК, отделяющегося в виде кольца от бактериальной хромосомы, будет отличаться от длины того фагового генома, который ранее включился в эту хромосому. В результате могут получаться дефектные трансдуцирующие фаги, содержащие либо больше, либо меньше ДНК, чем геном нормального фага Я. Ввиду того что количество белка в частице фага Я, очевидно, постоянно, а плотность его меньше, чем плотность фаговой ДНК, соотношение плотностей дефектного и нормального, инфекционного фага определяется соотношением количества входящей в их состав ДНК (фиг. 176). Благодаря такому различию в плотности удается осуществить физическое разделение смеси дефектных и нормальных частиц, а следовательно, и получение чистых препаратов фага Яс , освобвжденных от инфекционного фага-помощника. [c.351]

После начального приготовления чистой культуры бактерий, как былЬ описано выше, получение ее продолжают, систематически повторяя процесс. Для этого в бактериальный чанок с оставленной в нем свежей культурой бактерий добавляют заранее подготовленную мезгу. Одновременно, каждый раз дополнительно, вносят 1 л разводки бактерий, приготовленных в лаборатории. В остальном при проведении сбраживания мезги и откачке полученной чистой культуры бактерий соблюдают те же условия, что и при начальном процессе. [c.130]

Чтобы избежать получения неоднозначных результатов, чрезвычайно важно уметь надежно сохранять и вести селекцию специальных бактериальных штаммов (приложение 1 [ПА]). Ниже описаны основные бактериологические методики конструирования рекомбинантных векторов для трансформации растений. Большинство бактер)иальных штаммов несет опециф ичные селективные маркеры, часто внехромосомные сохранность маркеров следует регулярно тестировать, чтобы избежать возможной контаминации, мутации или утраты специфичных плазмид. Многие штаммы будут использоваться часто, тогда как другие от случая к случаю таким образом, необходимы методы как быстрого размножения генетически чистых бактериальных колоний, используемых в качестве инокулята для засева культур больших объемов, так и длительного хранения важных штаммов. В приложении 1 [ИВ] приведены среды для селекции часто используемых бактериальных штаммов. [c.39]

Отсутствие заметной гомологии между ДНК многих микоплазм было отмечено еще в работах конца 60-х годов [58—60]. По более точным количественным данным перекрестной гибридизации ДНК разных микоплазм в растворах было установлено, что гомология по ДНК у большинства видов не превышает 2 %, и только у нескольких пар сравниваемых микоплазм гомология составила от 4 до 21 % [61—63]. В нашей работе [64] по перекрестной блот-гибридизации ДНК ряда микоплазм показано, что при низком уровне гомологии ДНК исследованных видов эта гомология касается отдельных протя- женных фрагментов генома, а не коротких участков, распределенных по всей его длине. Более того, у некоторых микоплазм единственными гомологичными участками ДНК оказываются рибосомные гены., На основании этих результатов мы начали использовать в качестве гибридизационных зондов для обнаружения и идентификации микоплазм тотальные препараты ДНК, полученные из микоплазм, выращенных на специальных средах. Такие зонды оказались высокоэффективными и достаточно специфичными, но их нельзя рекомендовать к широкому применению, так как получение чистых культур микоплазм и их выращивание в препаративных количествах связаны со значительными техническими трудностями. В связи с этим мы предприняли клонирование случайных рестриктазных фрагментов ДНК микоплазм в бактериальной плазмиде pBR322 и проверку рекомбинантных Ь лазмиЯ на специфичность в опытах по блот- и дот-гибридизации с ДНК различных микоплазм и ДНК клеток эукариот. Был составлен комплект плазмид-зондов, содержащих фрагменты ДНК, видоспецифичные для каждой из взятых микоплазм. В дальнейшем этот комплект должен быть расширен. [c.118]

Масляная кислота получается из крахмала, сахара, глицерина и молочнокислых солей при различных бактериальных процессах брожения. Эти процессы используются также для получения масляной кислоты в промышленных масштабах. Прн этом целесообразно, насколько это возможно, работать с чистыми культурами маслянокислых бактерий (Вас. butyli us, Granuloba ter и др.), чтобы исключить побочные процессы брожения, приводящие к образованию других продуктов. Прибавлением карбоната кальция создают условия непрерывной нейтрализации образующейся масляной кислоты. С аналогичными процессами связано присутствие масляной кислоты в некоторых продуктах питания (лимбургский сыр, кислая капуста и др.). [c.251]

В следующей стадии естественно чистой культуры (ЕЧК) получают посевной материал на 7—8%-ной мелассной среде в условиях непрерывн(1й, на первых стадиях менее интенсивной аэрации, а в конце на единицу объема жидкости за 1 мин вводят уже единицу объема воздуха. На последних стадиях дрожжи сепарируют и прессуют. Полученный посевной материал, который называют технической чистой культурой, хранят при 4°С и используют в качестве посевного материала при производстве товарных дрожжей. С целью улучшения качества товарных дрожжей, уменьшения количества сопутствующей бактериальной микрофлоры желательно ЕЧК перед засевом подвергнуть кислотной обработке. Для этого прессованную ЕЧК суспендируют в воде (1 1) и добавляют 100%-ную молочную кислоту в коли- [c.104]

Во всех опытных вариантах отмечено снижение концентрации ДДС. Убыль большей части ДДС в культуральной жидкости СЫ. pyrenoidosa происходит за 8 суток. После этого в среде еще определяются остаточные количества вещества, которое не разрушается при дальнейшем культивировании водорослей. Полное исчезновение ПАВ наблюдается лишь в одном случае — при наличии в среде 50 мг/л вещества и глюкозы. Контроль загрязнения показал, что на протяжении всех опытов культуры водорослей были бактериально чистыми. Таким образом, полученные данные позволяют сделать вывод [c.163]

Основным препятствием для получения бактериально чистых культур синезеленых водорослей является образование слизи, плотным чехлом окружающей их клетки и защищающей от различных неблагоприятных воздействий. Применение разнообразных методов (стерилизация химическими веществами ультрафиолетовое облучение, частые пересевы, фильтрование через плотные фильтры для отделения слизи и др.) показало, что большииство приемов очистки дает возможность получить бактериально чистые культуры отдельных представителей" гормогониееых синезеленых водорослей. Однако это практически пока не приносит пользы при работе с представителями протококковых, синезеленых водорослей, вызывающих цветение воды. Полная очистка этих видов от бактерий с сохранением жизнеспособности водорослей пока не удается (Gorham, 1964). [c.198]

Пенициллин — антибиотик, выделяемый различными плесневыми грибками вида Peni illium. Впервые в очищенном виде в растворе он был получен Флемингом и оказялся необычайно эффективным при различных бактериальных инфекциях. Выделение и очистка пенициллина были крайне затруднены незначительным содержанием этого вещества в смеси продуктов жизнедеятельности грибков и нестойкостью самого пенициллина. Лишь в 1940 г. Флори выделил пенициллин в чистом виде. В дальнейшем были найдены способы получения пенициллина в широком производственном масштабе. [c.414]

Многие ферменты стабилизируются коферментами, субстратами и специфическими неорганическими ионами. Например1, де-гидраза фосфоглицеринового альдегида, полученная из мышцы кролика, становится гораздо менее стабильной после удаления ее кофер мента — дифосфопиридиннуклеотида (ДФН) [103]. Было найдено, что гексокиназа дрожжей стабилизируется при очистке добавлением 1% субстрата — глюкозы [184]. Имеются указания на то, что ионы кальция предохраняют бактериальную протеиназу от термической денатурации они в то же время существенно важны для проявления максимальной ферментативной активности протеиназы [185]. Инвертаза, полученная недавно Фишером и его сотрудниками [171] в чистом виде из дрожжей, связана с полисахаридом. Удаление последнего адсорбцией на бентоните понижает стабильность этого фермента. [c.40]

Если на первом этапе клонирования использовался метод дробовика , то бактерии, включившие донорную ДНК, совсем не обязательно будут нести фрагмент ДНК с нужным геном. Донорная ДНК представляет собой смесь очень большого числа рестрикционных фрагментов (в случае ДНК человека — до миллиона). Даже в том случае, когда все эти фрагменты клонируются, нужный ген или участок ДНК будет содержать только один из них или несколько. Смесь клонов, полученных таким путем, называется библиотекой. Библиотеку можно также получить, если на первом этапе использовать обратную транскриптазу и смесь мРНК. Иногда это приходится делать, если нужную мРНК нельзя выделить в чистом виде. Таким образом, в тех случаях, когда клонировался не одиночный ген (синтезированный или считанный с мРНК одного типа), после четвертого этапа получают бактериальные культуры в виде библиотек. [c.224]

Систему для белкового синтеза можно получить в виде бесклеточного экстракта (см. гл. 6). Исходная процедура состояла в следующем клетки бактерии Е. соИ разрушали, из полученного экстракта методом центрифугирования удаляли фрагменты оболочек и мембран. ДНК разрушали добавлением ДНКазы (а бактериальная мРНК слишком нестабильна и не могла служить эндогенной матрицей). Полученная в результате надосадочная фракция активно транслирует любую добавленную мРНК, поскольку в этой фракции содержатся необходимые предшественники и источник энергии. Позднее были разработаны другие системы, содержащие более чистые компоненты. Такие системы были созданы из многих типов как прокариотических, так и эукариотических клеток. [c.59]

Имеются два общих подхода к осуществлению внутриклеточной экспрессии клонированных генов. Соответствующий ген может быть клонирован в одной рамке считывания с синтетическими или бактериальными кодирующими последовательностями и экспрессироваться с образованием гибридного белка. Другой способ — непосредственная экспрессия встроенного гена. Потребность в экспрессии эукариотических полипептидов в составе гибридных белков возникла, когда было обнаружено, что уровень экспрессии эукариотических белков в клетках Е. oli ограничивается по той причине, что они распознаются клеткой как чужеродные и разрушаются [9]. Это особенно наглядно проявилось в случае полипептидов небольшого размера. При сшивании эукариотического гена с бактериальным синтезировались гибридные продукты, которые накапливались в клетке в значительно больших количествах [10, 11]. Однако, если требуется получить эукариотический полипептид в чистом виде, возникает необходимость в методе, позволяющем правильно расщепить гибридный белок. С другой стороны, непосредственная экспрессия одного эукариотического гена дает возможность получить нужный белковый продукт. Однако первичные продукты трансляции несут на своем Ы-конце остаток метионина. В клетках Е. соН имеются ферменты, осуществляющие при необходимости эффективное отщепление метионина от природных белков однако в случае рекомбинантных белков эти ферменты работают не столь эффективно [1]. Таким образом, белки, полученные в результате прямой экспрессии эукариотического гена, могут содержать несвойственный природному белку N-концевой метионин. [c.98]

Использование антител для отбора клонов в экспрессирующих клонотеках. Получение клонотеки генов или кДНК с использованием экспрессирующих векторов дает ряд преимуществ в их последующем отборе. В этом случае, если 5-концевая часть клонируемого гена находится близко от промотора вектора или его кодирующая часть соединена в одной рамке считывания с инициирующим ATG-кодоном через последовательность, кодирующую часть другого белка, например, 3-галактозидазы, то в бактериальных клетках или фаговых лизатах можно обнаружить появление специфического белкового продукта или ферментативной активности. Если же рекомбинантный белок неактивен и представляет собой лишь часть полипептидной цепи нативного фермента, его обнаруживают иммунохимическими методами. Отбор нужных клонов может проводиться и с помощью чисто генетических методов с использованием специально сконструированных векторных плазмид. [c.166]

Считается, что ферменты максимально адаптированы к функционированию в условиях, оптимальных для роста организ-ма-хозяина. Классическим путем получения бактериальных экстремозимов для биотехнологических целей является выделение микроорганизма в виде чистой культуры с последующей очисткой фермента из биомассы, которую обычно выращивают в фер- [c.397]

Смотреть страницы где упоминается термин Получение чистых бактериальных: [c.107] [c.51] [c.111] [c.148] [c.36] [c.128] [c.161] [c.197] [c.349] [c.349] [c.310] [c.160] [c.251] [c.437] [c.332] [c.177] [c.227] [c.36] [c.201] [c.90] [c.201] [c.29] [c.124] [c.398]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология