Гликопротеины разделение

Для получения в индивидуальном состоянии смешанных биополимеров наиболее эффективными методами разделения являются хроматография (ионообменная хроматография и гель-фильтрация для гликопротеинов, адсорбционная хроматография для гликолипидов) и электрофорез во многих случаях успешно применяются методы фракционированного осаждения. [c.566]

Методы хроматографического разделения гликопротеинов фактически не отличаются от методов, используемых в химии белков и пептидов. Также имеется ряд белков, которые в обычном смысле не считаются гликопротеинами, хотя они содержат один или несколько гликозидных остатков. Конечно, существует множество методов, с помощью которых могут разделяться различные гликопротеины. С точки зрения хроматографиста, здесь не следует детально их описывать. С другой стороны есть хроматографический метод, специфичный для структурных анализов гликопротеинов и гликопептидов. Специфичность основана на вы-боре подходящей системы детектирования, а не собственно метода разделения. Здесь будет кратко рассмотрен метод, описанный в работе [221- [c.145]

Для разделения гликопротеинов используется также метод электрофореза. Электрофорез в растворах, так называемый свободный электрофорез, проводится в ячейке Тизелиуса. Признаком гомогенности служит наличие одиночного пика при двух или трех достаточно дале-тх значениях pH. На подвижность вещества при электрофорезе влияют два независимых фактора заряд вещества и гидродинамическое сопротивление. При взаимной компенсации этих факторов два различных вещества могут иметь одинаковую подвижность, но это не может повторяться при различных pH. [c.74]

Нейтральные сахара, образующиеся нри гидролизе гликопротеинов минеральными кислотами, можно разделить на бумаге, используя большое число растворителей. Партридж [110, 111] применил этот метод для разделения восстанавливающих сахаров, сравнивая подвижность исследуемого сахара с подвижностью глюкозы. Несмотря на то что индивидуальные значения Rp значительно изменяются при небольших колебаниях температуры, отношение величин Rp остается довольно постоянным. Использование свидетеля часто необходимо, поскольку для получения максимального разделения растворителю обычно дают возможность стекать с бумаги. [c.207]

Существенный недостаток методов химического синтеза аминокислот состоит в получении целевых препаратов в виде рацемической смеси D- и L-стереоизомерных форм. Подавляющее большинство природных аминокислот относится к L-ряду. D-a-ами-, нокислоты обнаружены лишь в составе гликопротеинов клеточных стенок бактерий, антибиотиков и некоторых токсинов. Проницаемость L-аминокислот в клетке в 500 раз превышает таковую ее антипода. Стереоспецифичны также транспорт и метаболизм аминокислот. Исключением в этом отношении является лишь метионин, метаболизм которого нестереоизбирателен, благодаря чему данная аминокислота получается преимущественно путем химического синтеза. Разделение рацематов других аминокислот — дорогая и чрезвьиайно трудоемкая процедура. [c.42]

При разделении,гликопротеинов плазмы электрофорезом получают активную фракцию этих белков, состоящую из 5 компонентов с М 11 ООО + 32 000. Все компоненты содержат только аланин и треонин, структура углеводной части соответствует дисахариду о-галактозил-о-К-ацетилгалактозамину. [c.429]

Эта фракция является предметом многочисленных разногласий, по существу, из-за различий в методах экстракции и разделения на гликопротеин II, вицилин и глобулин I. Фактически все они перекрываются общим названием фазеолин [24]. При электрофоретических исследованиях многочисленных сортов выявлены три типа этого белка, причем каждый из этих типов содержит несколько полипептидов. [c.58]

Целлобиогидролазы целлюлазных комплексов выделены к настоящему времени из существенно меньшего количества источников, что связано во многом с отсутствием до последнего времени селективных методов их определения в смеси с эндоглюканазами. Как и эндоглюканазы, целлобиогидролазы являются в большинстве случаев гликопротеинами с молекулярной массой 55-65 кЛа, однако, известны ферменты и с меньшими значениями молекулярной массы (см. табл. 5.1). Изоэлектрические точки наиболее изученных множественных форм фермента из T.reesei имеют значения несколько ниже (3,8-4,2) и выше (5,5-6,5) р1 для эндоглюканаз. Как и эндоглюканазы, ферменты различаются по сродству к целлюлозе. В целом, биохимические характеристики целлобиогидролаз и эндоглюканаз весьма близки, что создает серьезные трудности при их разделении. [c.121]

При анализе структуры углеводных цепей гликопротеинов важным этапом является определение моносахаридного состава. Здесь используются обычные методы структурного анализа углеводов, а именно кислотный гидролиз или метанолиз с последующим хроматографическим разделением продуктов. По моносахаридному составу, как правило, можно судить и о типе углевод-белковых связей, в частности наличие N-aцeтилгaлaктoзaм>lнa говорит о присутствии О-гликозидных цепей. [c.475]

Поскольку н Т-, н В-лимфоциты встречаются во всех периферических лимфоидных тканях, нужно было найти удобные методы, которые позволяли бы различать н разделять эти два типа клеток,-только после этого можно было изучать их индивидуальные свойства. К счастью, различительными маркерами могут служить многочисленные белки плазматической мембраны, характерные только для Т- нли только для В-клеток. Один нз наиболее часто используемых шркеров-гликопротеин Thy-], который у мышей имеется на Т-, но не на В-лимфоцитах поэтому антитела к Thy-1 можно использовать для удаления нли очистки Т-клеток из смешанной популящ1н лимфоцитов мыши. Использование антигенных маркеров клеточной поверхности для различения и разделения Т- и В-клеток революционизировало клеточную иммунологию и сыграло важную роль в быстром прогрессе этой области знания в последние годы. У экспериментальных животных и у человека находят все больше и больше новых маркеров, характерных для функционально различных субпопуляций Т- и В-лимфоцитов. [c.11]

С того времени как Дуррум [18] предложил электрофорез белков на бумаге, описано большое число примеров разделения сывороточных белков, ферментов и других растворимых белков. В настоящее время бумага в качестве электрофоретического носителя для разделения белков вытеснена, например ацетатом целлюлозы. Тем не менее бумага все еще используется, поскольку это дешевый, удобный в обращении материал, который легко хранить. Недостатком бумаги является ее сродство к белкам, например к сывороточному альбумину и гликопротеинам, сорбция которых в процессе разделения приводит к образованию удлиненных пятен. [c.341]

Однако некоторые макромолекулы в процессе гель-хроматографирования ведут себя аномально и не подчиняются указанному соотношению. Такие отклонения наблюдались, в частности, при разделении на сефадексе белков с сильно асимметричными молекулами и некоторых гликопротеинов. Как показал Девидсон [10], эти аномалии можно существенно уменьшить или даже избежать их, если вести хроматографирование в диссоциирующей среде 6М раствора гуанидингидрохлорида на сефарозе 6В. [c.390]

ГЖХ ацетатов альдитов представляет собой эффективный и точный метод определения содержания альдоз в биологических материалах. Разделение ацетатов альдитов, начиная с триацетата глицерина и кончая октаацетатами октитов, методом ГЖХ было впервые описано в 1961 г. [1, 2]. Несмотря на то что пригодность метода для количественного анализа была доказана, он не находил широкого применения из-за сложности подготовки колонки кроме того, не удавалось разделить D-глюцит и галактит. В последующие четыре года существенного прогресса не наблюдалось. В 1965 г. была предложена новая жидкая фаза EGNSS-M— сополимер сукцината этиленгликоля и цианоэтил-кремния, — которая оказалась пригодной для разделения всех простых альдитов вплоть до гекситов [3]. С этого времени метод ГЖХ с успехом применяется для определения содержания нейтральных альдоз в гемицеллюлозах древесины [4], полисахаридах клеточных стенок растений [5], гликопротеинах [6—8] и почвенных гидролизатах [9], а также для определения альдоновых кислот в целлюлозе древесины 10], частично метилированных альдоз [11] и продуктов периодатного окисления олигосахаридов [12]. [c.22]

СЭХ гликозаминогликанов и гликопротеинов представляет особую трудность из-за варьирования форм и размеров молекул в зависимости от pH и ионной силы элюента [174—176]. Однако при использовании растворов Na I удовлетворительные результаты можно получить даже при разделении гексозаминогли-канов [177—179], хотя при хроматографии как гексозаминогли-канов, так и гликопротеинов обычно рекомендуется дополнительное буферирование элюентов [145, 180, 181]. [c.33]

С/мин. Оказалось, что в таких условиях одновременно можно разделить в форме трифторацетатов О-метилгликозиды большинства встречающихся в природе пентоз, гексоз, аминодезокси- ацетамидодезоксигексоз, а также сложные метиловые эфиры метилгликозидов D-глюкуроновой и D-галактуроновой кислот. Обсуждаемый метод обеспечивает лучшее разделение этих метилгликозидов, чем при использовании соответствующих триметилсилильных производных, и поэтому получает все более широкое применение при изучении метанолизатов гликопротеинов. Используя детектор электронного захвата [352, 353] и капиллярные колонки с OV-210 [352], можно анализировать субмикро-граммовые количества углеводсодержащего материала. [c.58]

В отличие от нейтральных сахаров аминодезоксисахара чрезвычайно сильно адсорбируются силикагелем, пропитанным боратами или фосфатами, однако их разделение, а также анализ соответствующих М-ацетилированных производных можно провести на пластинках с силикагелем, пропитанных сульфатом меди [444]. В этом случае следует учитывать, что для данного разделения необходимы системы, содержащие водный аммиак, который аминирует нейтральные сахара, препятствуя тем самым проведению одновременного определения нейтральных и аминодезоксисахаров. Таким образом, для исследования гидролизатов гликопротеинов и гликолипидов, которые могут содержать [c.69]

Метод окрашивания полисахаридов перед электрофорезом [478] использовали Павленко и Оводов [479] для анализа ряда нейтральных и кислых полисахаридов с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. Для разделения различных компонентов полидисперсных декстранов и амилопектинов с помощью диск-электрофореза ими использованы буферы, содержащие тетраборат натрия (или борную кислоту), трис(гидроксиметил)-аминометан и натриевую соль ЕВТА при pH 9,2—9,3. Электрофорез в полиакриламидном геле используют также для анализа пектиновых веществ [480] и сульфатированных полисахаридов из морских водорослей [481], однако основной областью применения данного метода в химии углеводов является исследование гликопротеинов [482] и гликозаминогликанов (483, 484]. В по- [c.75]

Разделение путем гель-фильтрации на колонках с агаром или сефадек-сом [47] дает наилучпше результаты, если величина пор геля выбрана так, что гликопротеин движется со скоростью, средней между скоростью материала, совершенно не проникающего в гель, и скоростью материала, легко диффундирующего в гель. Ионообменная целлюлоза дает наилучшее разделение при медленно изменяющемся градиенте pH и (или) ионной силы [48, 49]. В обоих случаях важно удостовериться, что практически весь нанесенный на колонку материал вышел с элюатом. Нужно тщательно подобрать условия, чтобы быть уверенным, что pH, ионная сила и размеры колонки являются нодходящилш, В лаборатории автора для анализа образцов, содержащих 0,5—50 мг материала, используют колонки размером 75 X 2,5 см, элюат из которых собирают фракциями объемом 3 мл. [c.50]

В последнем десятилетии XIX века было обнаружено, что в крови имеются вещества, содержащие углеводный остаток, химически связанный с белком. Первые попытки исследования химической структуры этих веществ связаны с именами Бьерри, Хьюитта, Римингтона и др. После второй мировой войны интерес к изучению этой проблемы резко возрос. Это было обусловлено в основном успехами в разработке методов фракционирования и идентификации белков. Усовершенствование методов очистки белков заставило химиков многократно повторять уже проведенные опыты со все более и более чистыми препаратами. Некоторые гликопротеины, исследованные в период 1920—1940 гг., например серомукоид, имели степень очистки, по современным представлениям составляющую 60—70%. Однако многие соединения, которые рассматривались в то время как одно или два вещества, впоследствии были разделены на большое число хорошо изученных гликопротеинов. Вещество, описываемое в этой главе, — а -кислый гликопротеин плазмы человека, рассматривается нами как индивидуальный белок. Однако недавно были получены сообщения о возможности дальнейшего разделения его на несколько компонентов, причем нельзя с уверенностью сказать, что каждый из этих компонентов является гомогенным по химической структуре. Следовательно, изучение физических и химических свойств вещества, которое доступно нам в настоящее время, дает возможность получить представление только о некоторой модельной молекуле с усредненной структурой. [c.67]

Поведение (-кислого гликопротеипа на ионообменной смоле и отделение его от альбумина и 2-гликопротеина было изучено Шмидом [38]. Из надосадочной жидкости фракции V , полученной фракционированием спиртом при низкой температуре, авторы выделили электрофоретически гомогенный (-кислый гликопротеин с выходом 95%. Исходная смесь белков содержала 35% (-кислого гликопротеипа, 50% альбумина, 12% г-глико-протеипа и 3% -глобулина. Выход (-кислого гликопротеипа был ниже (75%), когда для разделения использовали фракцию VI , но при этом от (-кислого гликопротеина лучше отделялись небольшие примеси, выявлявшиеся при иммунохимическом анализе. [c.71]

Для того чтобы получить правильную картину химической структуры углеводной части гликоиротеина, необходимо знать точное соотношение углеводной и белковой частей. Рассматривались три возможные схемы строения. Согласно первой схеме, существует одна полисахаридная цепь,, имеющая одну или множество точек присоединения к белковой части. Согласно второй схеме, несколько поли- или олигосахаридных цепей присоединены одной точкой каждая к белковой части. И наконец, согласно третьей схеме, глико-протеин представляет собой цепь, состоящую из чередующихся белковых и углеводных фрагментов. В настоящее время наиболее приемлемой считается вторая гипотеза, однако необходимо установить идентичность большинства углеводных цепей. Разделение фрагментов, содержащих индивидуальные цепи с идентичной структурой, еще не завершено (см. раздел г, 2), и, следовательно, данные, приведенные в следующем параграфе, относятся ко всей сумме цепей. Поэтому применение классических методов углеводной химии может дать только частичный ответ на вопрос о структуре гликопротеина. [c.82]

При изучении гликопротеинов метод метилирования применяется сравнительно редко. Было показано, что этот метод может дать ценную информацию о структуре гликопротеинов, устойчивых в щелочной среде, таких, как -кислый гликопротеин. Метод метилирования использовался для изучения нативного -кислого гликопротеипа, а также для гликопротеина, не содержащего сиаловой кислоты. После четырех обработок диметилсульфа-том в присутствии едкого натра при 5° содержание введенных метоксильных групп достигало постоянной величины 17—18%. В результате метанолиза обоих препаратов и последующей хроматографии на силикагеле был выделен кристаллический метил-2-ацетамидо-2-дезокси-3,6-ди-О-метил-а-п-глюко-пиранозид [90, 120]. После гидролиза метилированного производного гликопротеина, не содержащего сиаловой кислоты, и последующего разделения продуктов на колонке с ионообменной смолой была получена 2-амино- [c.89]

Внеклеточный матрике содержит несколько адгезивных 1ликонротеинов, которые связываются и с клетками, и с другими макромолекулами матрикса, способствуя прикреплению клеток к матриксу. Из них лучше всего охарактеризован фибронектин - крупный, образуюш,ий фибриллы гликопротеин, встречаюш,ийся во всем животном царстве. Это димер, состояш,ий из двух одинаковых субъединиц (каждая почти из 2500 аминокислотных остатков) субъединицы соединены парой дисульфидных связей вблизи от карбоксильных концов и свернуты в серию глобулярных доменов, разделенных участками гибкой полипептидной цепи (рис. 14-46). Как показывает секвенирование, молекула фибронектина состоит в основном из трех коротких много раз повторяюш,ихся последовательностей аминокислот, и это позволяет предполагать, что ген, кодируюший фибронектин, образовался в результате многократной дупликации трех малых геиов. [c.504]

Какие из многочисленных гипов межклеточных соединений, описанных в начале этой главы, могли бы осуществляться при миграции клеток и их взаимном узнавании при формировании тканей и органов Чтобы выяснргть это, можно использовать электронную микроскопию при изучении контактов между соседними клетками во время их передвижения в развивающемся зародыше или в зрелых тканях при репарации повреждений. Такие исследования показывают, что эти контакты, как правило, не приводят к формированию организованных межклеточных соединений. Тем не менее контактирующие мембраны часто тесно прижимаются друг к другу и располагаются параллельно, разделенные щелью в 10-20 нм. Именно на такое расстояние (около 13 нм) выступает из плазматической мембраны гемагглютинин вируса гриппа - первый гликопротеин плазматической мембраны, у которого была установлена трехмерная структура (разд. 8.6.12). Глико протеины двух соседних плазматических мембран могут взаимодействовать друг с другом через щель в 10-20 нм, осуществляя адгезию. Такой тип временного контакта может быть оптимальным для клеточной локомоции-достаточно тес- [c.524]

Наиболее часто типичные гликопротеины млекопитающих содержат следующие моносахариды ь-фукозу (6-дезокси-ь-га-лактоза), о-маннозу, о-галактозу, Ы-ацетил-о-глюкозамин (2-ацетамид-2-дезокси-о-глюкоза) и сиаловые кислоты (различные производные нейраминовой кислоты). В состав некоторых гликопротеинов входят о-глюкоза или Ы-ацетил-о-галактозамин (2-ацетамид-2-дезокси-о-галактоза). Наилучшие результаты для разделения, идентификации и количественного определения этих семи моносахаридов достигаются с помощью газожидкостной хроматографии. Существует два основных метода модификации сахаров для последующего анализа газожидкостной хроматографией альдит-ацетатный и метил гл икозид-триметил сил ильный. Первый включает водный кислый гидролиз с последующим восстановлением образующихся альдоз до соответствующих аль-дитов и их ацетилирование второй основан на применении метанолиза, приводящего к образованию метилгликозидов и метиловых эфиров сиаловых кислот, которые затем превращаются в триметилсилильные производные. [c.318]

Интактные гликопротеины метилируют, гидролизуют, восстанавливают и аце-тилируют. После разделения колоночной хроматографией полученные производные сахаров анализируют методом масс-спектрометрии. См. обзор [250] по применению ГХ, ВЭЖХ и масс-спектрометрии в анализе углеводных комплексов. [c.321]

Ркпользование адекватных методов разделения мембран саркоплазматического ретикулума и / -системы, однако, показало, что эти ферменты принадлежат различным мембранам. Кроме того, они различаются по ряду свойств. Mg-ATФaзa — гликопротеин в отличие от Са-АТФазы она связывает конка-навалин А и агглютинин и значительно активируется ими имеет изоэлектрическую точку в более кислой области и иные pH [c.58]

Эпоксикремнеземы оказались удобными матрицами для прививки оптически активных гликопротеинов, дающих сорбенты для разделения оптических изомеров сахаров, а также для связывания хиральных аминокислот в синтезе сорбентов для лигандообменной хроматографии рацематов аминокислот [64] [c.109]

Множественные водородные связи и к — 1г-взаимодействия, часто выраженный аффинный характер разделения Белки, гликопротеины, включая оросомукоид, овомукоид, альбумины, трипсин и др. Особенно эффективен для разделения различных лекарственных соединений Невысокая антимикробная устойчивость [c.367]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология