Триптофана поглощение

Заметим, что именно аминокислоты фенилаланин, тирозин и триптофан обусловливают спектры поглощения белков в ультрафиолетовой области спектра. Обычно считают, что максимум поглощения белков соответствует 280 нм. [c.30]

Гидролиз 6 н. H I полностью разрушает триптофан. Можно очень грубо оцепить его содержание по УФ-поглощению белка, вычитая из него вклад поглощения Туг и Phe, содержание которых определяется количественно. Для точного определения содержания Тгр иногда [c.526]

Следует иметь в виду, что тирозин, триптофан и фенилаланин имею также полосы поглощения в высокоэнергетической части УФ-спектра белков. Еще больший вклад в поглощение белков в этой области вна сят амидные группы вклад становится ощутимым при значениях л [c.21]

Спектрофотометрический метод определения белка основан на способности ароматических аминокислот (триптофан, тирозин и в меньшей степени фенилаланин) поглощать ультрафиолетовый свет с максимумом поглощения при 280 нм. [c.33]

В области видимого спектра растворы важнейших аминокислот практически не поглощают, а в УФ-области поглощают растворы только тех аминокислот, которые содержат в молекуле бензоидные фрагменты или гетероциклические ядра ароматического характера - фенилаланин, тирозин, гистидин, триптофан. Относительно интенсивное поглощение при X = 260-290 нм характерно для тирозина и триптофана. Высокая мольная экстинк-ция тирозина при 280 нм используется для определения содержания белка в растворах. [c.455]

Из аминокислот, входящих в состав белков, лишь триптофан, тирозин и в меньшей степени фенилаланин обладают заметным поглощением в ультрафиолетовой области спектра. Оптическая плотность растворов белков, содержащих эти аминокислоты, шри 280 нм прямо [c.22]

Ультрафиолетовые спектры поглощения определяются возбуждением электронных уровней атомов и молекул и обладают максимумами, положение которых характерно для определенных атомных группировок, сопряженных двойных связей и др, В белках ультрафиолетовые спектры поглощения в основном определяются ароматическими аминокислотами — фенилаланином /--макс— 260 м х), тирозином и триптофаном 280 жр-), причем спектры поглощения могут быть даже использованы для аналитического определения этих аминокислот. Нуклеиновые кислоты и нуклеопротеиды обладают настолько резким максимумом поглощения при 260—265 лр., что при помощи фотографирования в ультрафиолетовом микроскопе легко определить их содержание в отдельных клетках (Брумберг). Зависимость ультрафиолетовых спектров поглощения от pH, сос- тава среды, от образования комплексов с другими соединениями позволяет исследовать изменения состояния растворенных веществ так, по смещению максимума поглощения с 280 до 260—265 м а было обнаружено образование комплекса между белками и полисахаридами (Розенфельд). Линейные полимеры обычно не имеют интенсивных полос поглощения в видимой и ближней ультрафиолетовой областях спектра. [c.61]

Небольшое видоизменение механизма, указанного в пункте 5, состоит в том, что сочетаются изменения в термодинамических свойствах иона металла со связыванием субстрата в активном центре. Хорошие примеры дают два фермента, содержащие железопорфирины. Связывание субстрата триптофан-2,3-диоксигеназой увеличивает константу образования комплекса с СМ ионом Ре примерно в 100 раз, а константу образования комплекса с СО ионом Ре примерно в 50 раз образование комплекса Ре Ог удается наблюдать только в присутствии субстрата [101]. Связывание камфоры камфора-5-монооксигеназой сопровождается изменением числа неспаренных электронов от одного до пяти (одновременно меняются спектры поглощения в ультрафиолетовой и видимой областях и спектры ЭПР) и смещением окислительно-восстановительного потенциала от —0,38 до —0,17 В [221]. На этом может быть основан сложный механизм, способствующий образованию чрезвычайно реакционноспособного интермедиата только в присутствии субстрата. Другой пример такого рода дают реакции изомеризации координированных лигандов (разд. 10.2). [c.240]

Разностные ультрафиолетовые спектры. Поглощение света белками в области 250—300 ммк обусловлено в основном наличием в их молекулах ароматических аминокислот трех типов. К ним относятся триптофан и тирозин (последний в ионизованной форме), максимум поглощения которых лежит при 280 ммк, и фенилаланин, для которого наблюдается более слабое поглощение при 260 ммк. Более сильное поглощение белка при 270 ммк, чем при 280 ммк, свидетельствует обычно о том, что большую часть ароматических остатков в белке составляют остатки фенилаланина. [c.298]

Растворы нуклеиновых кислот бесцветны, они не имеют полос поглощения в видимой части спектра, однако в ультрафиолетовой области они имеют характерный максимум поглощения в области 2600 А. В этой же части спектра находится область 2800 А, ультрафиолетовый свет которой поглощается также белками (их циклическими аминокислотами— тирозином и триптофаном). Изучение поглощения в ультрафиолетовой части спектра проводится с помощью спектрофотометра или фотоэлектроколориметра ФЭК-Н, снабженного ультрафиолетовым осветителем. [c.72]

Ультрафиолетовые спектры поглощения определяются возбуждением электронных уровней атомов и молекул и обладают максимумами, положение которых характерно для определенных атомных группировок, сопряженных двойных связей и др. В белках ультрафиолетовые спектры поглощения в основном определяются ароматическими аминокислотами — фенилаланином (А зх=260 ммк), тирозином и триптофаном (А зх=280 ммк), причем спектры поглощения [c.55]

Природа отмеченных изменений исследована в экспериментах с изолированными плазматическими мембранами. Оказалось, что наиболее чувствительным к УФ-облучению компонентом является АТФаза, связанная с трансмембранным ионным транспортом, причем ее фотоинактивация происходит в результате прямого поглощения квантов УФ-света. В пользу этого свидетельствует тот факт, что чувствительность АТФазы к УФ была одинаковой при облучении как мембран, так и раствора очищенного фермента. Па основании снятого спектра действия УФ-инактивации мембранной АТФазы предполагают, что ее хромофором является триптофан. [c.453]

Ультрафиолетовые спектры белков отличаются сильным поглощением, характеристическим для ароматических фрагментов аминокислот, входящих в их состав фенилаланин, тирозин, триптофан. Эти спектры поглощения используют для аналитического определения остатков указанных аминокислот. Резкий максимум поглощения, характерный для нуклеиновых кислот и нуклеопро-теидов, позволяет определить их содержание в отдельных клетках. [c.361]

Белковые АК - твердые вещества, выделяемые в виде белого порошка, обычно хорошо растворимые в воде и в полярных растворителях. Многие аминокислоты поглощают в ультрафиолетовой (УФ) области, но особенно специфическое поглощение при 280 нм имеют ароматические АК (фенилаланин, тирозин и триптофан) и поэтому содержание белка часто определяют именно по характеру спектра поглощения в УФ-об-ласти. [c.8]

В УФ-части спектра зрительного пигмента обычно присутствуют также две полосы. 7-Полоса с Ятах при 280 нм обусловлена ароматическими аминокислотами (тирозином и триптофаном) белка, в то время как имеющая низкую интенсивность р-полоса при 330 нм обычно рассматривается как цис-полоса , обусловленная тем, что ретинальдегидные хромофоры имеют г( с-конфигурацию (ср. цис-ппш- каротиноидов разд. 2.3.3). Имеются доказательства, что фотохимическая активность связана с р-полосой поглощения. [c.309]

Использование флуорометрических методов ограничивается тем, что далеко не все поглощающие ультрафиолетовое излучение вещества являются достаточно эффективными флуорофорами. Тем не менее среди них находятся такие аминокислоты, как триптофан и тирозин, в результате чего флуоресцируют все содержащие их белки. При облучении светом длиной волны 280 нм, т.е. в максимуме поглощения остатков триптофана, наблюдается флуоресценция с максимумом испускания при 348 нм. [c.252]

Давно известно, что облучение водных растворов белков изменяет спектры поглощения в ультрафиолетовом свете. На рис. 39 приведены данные Гузман Баррона [62], полученные при облучении сывороточного альбумина быка рентгеновскими лучами, Максимум поглощения при 2800 А в значительной мере обусловлен тирозином и частично триптофаном максимум [c.225]

Изучение спектров поглощения этой системы, а также комплекса глицеральдегид-З-фосфат-дегидрогеназы с нико-тинамидом позволило сделать вывод о том, что здесь происходит образование комплекса с переносом заряда, в котором триптофан играет роль донора электронов. Развивая эти работы, Шифрин использовал другую модель для изучения переноса заряда в коэнзимах [24]. Он определял электроноакцепторные свойства иона 3-карбамоилпирилиния (1-у -за-мещенный никотинамид), где заместители составили серию -замещенных фенилэтильных производных [c.372]

В опытах с отрезками гороха это подавление не превышало 30%, но более высокие концентрации хлорамфеникола значительно сильнее подавляли рост. Однако при одновременном введении в среду L-триптофана и хлорамфеникола тормозящее действие последнего ослаблялось до 10% для капусты, до 11% для кукурузы и до 5% для гороха по сравнению с контролем (один триптофан). Хлорамфеникол в концентрации IO" г/мл за 20 час. инкубации подавлял поглощение L-3- С-триптофана (удельная активность 22,8 мккюри/ /мМ) отрезками стеблей капусты на 22%, кукурузы на 24% и гороха лишь на 5%. [c.53]

Реакция, катализируемая триптофаназой, представляет еще один пример реакции неокислительного дезаминирования. В этой реакции триптофан распадается без поглощения кислорода на индол, пировиноградную кислоту и аммиак (стр. 408). [c.196]

Другой широко используемьп метод определепия белка — измерение оптической плотности белковых растворов — так/ке не свободен от этого недостатка. Ультрафиолетовые спектры большинства белков имеют максимум вблизи 278 ммк. Из данных, приведенных в табл. 8, следует, что в этой области спектра (250—290 ммк) сильно поглощают только триптофан, тирозин и фенилалапип, причем интенсивность поглощения триптофана и тирозина значительно превышает интенсивность поглощепия феиилаланина (фиг. 10) [c.55]

Даже слабые электростатические силы могут влиять на спектр ультрафиолетового поглощения. Например, триптофан имеет две ионогенные кислотные группы, но они находятся далеко от системы сопряженных двойных связей. Тем не менее, когда эти группы оттитровыва-ют, то в спектре происходят малые, но легко заметные изменения. Эти изменения, вероятно, обусловлены влиянием электростатических зарядов МНз- и СОО -групп на энергетические уровни индольного кольца. [c.110]

Высказано предположение, что в реакцию вступают ароматические части белков, так как оптическая плотность растворов белков обычно проявляет общее возрастание при облучении. Это увеличение было известно почти 30 лет назад [S88—S90] и подтверждалось несколько раз [В28, С16, Р7]. В интерпретации спектров поглощения следует быть осторожным, поскольку образование агрегатов денатурированного белка увеличивает способность раствора рассеивать свет [А18, D75, Р12, Р14], давая тем самым повод к кажущемуся увеличению поглощения в области 240—340 ммк. Однако, по-видимому, светорассеянием нельзя объяснить все спектроскопические изменения. Определенно установлено действие на тирозиновую составляющую белка [В28], напоминающее действие, оказываемое на сам тирозин (стр. 246). В некоторых случаях найдено, что оптическая плотность белков убывает при облучении, особенно вблизи 280 ммк возможно, что это вызвано действием на триптофап-ную составляющую. Для самого триптофана при облучении показано уменьшение оптической плотности в спектре поглощения в этой области [В25]. По-видимому, триптофанная составляющая в присутствии дезоксирибонуклеазы вступает в реакцию даже в том случае, если отношение триптофана к присутствующему тирозину составляет только 0,21 [05]. [c.256]

Для расчета констант нестойкости комплексов был испо,яьзован метод кривых относительного поглощения . Установлено, что все аминокислоты образуют с ионами Ри (Ш) достаточно прочные комплексные соединения. При сравнении комплексообразующей способности аминокислот с Ри (III) следует, что триптофан и гистидин образует более прочные соединения (рл =4,2 и рК=4.5), чем фенилаланин и тирозин (рХ=3.8 и рК=3.3), Различие в поведении этих аминокислот в водных растворах объясняется наличием в их составе разных кольцевых структур. Бензольное кольцо фенилаланина и тирозина в комплексообразовании не участвует. [c.156]

У большинства белков в 0,1 н. растворе NaOH поглощение ослабляется с увеличением длины волны, но еще сохраняется при 330—450 ммк, где тирозин и триптофан не поглощают. В качестве контроля для измерения характеристического поглощения при 294 и 280 ммк можно измерить экстинкцию при 320 и 360 ммк и экстраполировать полученные данные к 294 и 280 ммк. У аминокислот, связанных в белке, где максимум поглощения перемещается по сравнению со спектром свободных аминокислот на 1—3 ммк в длинноволновую область, более совершенными стандартами могут служить чистые пептиды, содержащие тирозин и триптофан. Очень серьезным источником ошибок является легкая мутность раствора если белок в условиях анализа склонен к денатурации, то для получения совершенно прозрачного раствора рекомендуется предварительно обработать белок протеолитическим ферментом. [c.269]

Определение триптофана. Триптофан (XVIII) из его раствора в серной кислоте осаждается сернокислой ртутью. Триптофан можно определить также спектрофотометрически, так как он дает интенсивную полосу поглощения в ультрафиолетовой части спектра [72]. Триптофан дает интенсивные цветные реакции со многими альдегидами, например с формальдегидом, диметил-аминобензальдегидом или с глиоксалевой кислотой эти реакции можно использовать для его колориметрического определения [111]. [c.40]

С. Е. Манойлов [5] подверг смесь нуклеиновой кислоты с аминокислотами (тирозин, триптофан и др.) в боратном буфере при pH 9,3 с панкреатином давлению в 6000 атм. Автор обнаружил в ряде опытов уменьшение аминного азота, определяемого по Ван-Сляйку, смещение максимума поглощения света с 2620 до 2560—2570 А и соответственное уменьшение количества свободной аминокислоты в растворе. Эти наблюдения дали авторам право с большой долей убедительности высказать предположение, что в нуклеопротеидах возможна амидная связь, осуществляемая между аминогруппами пуринов или пиримидинов и карбоксильной группой аминокислот или полипептидов. [c.349]

В разделе I мы отмечали, что взаимодействия, приводящие к переносу заряда в основном состоянии, в большинстве случаев довольно слабы, особенно для молекул, одна из которых может быть включена в биохимическую систему. При сравнении случаев А1 и А2 (рис. 12) очевидно, что вклад формы с перенесенным зарядом, стабилизирующий основное состояние, может оставаться небольшим, даже когда скорость термического переноса электрона так велика, что ее трудно измерить. (К этому кажущемуся противоречию применим принцип Франка — Кондона.) Поэтому во всех случаях попытки объяснить изменения в основном состоянии образованием комплексов с переносом заряда являются бесполезными. Поглощение с переносом заряда может происходить вследствие близкого расположения друг к другу донора и акцептора (триптофан и NAD , см. ниже), несмотря на то что сама ассоциация может быть обусловлена силами водородного или гидрофобного связывания, а не силами переноса заряда. Образование комплекса с переносом заряда может также (но не всегда) обусловливать определенную взаимную ориентацию донора и акцептора, облегчающую образование соответствующего переходного состояния (вероятно, на 1—2 ккал1моль) и приводящую к почти исключительному образованию лишь одного продукта реакции из нескольких возможных (см. раздел 111, А). Взаимодействие с переносом заряда, которое мы назвали л-сольватацией, может быть очень важным в реакциях NAD — NADH (подробное обсуждение см. ниже) (см. раздел III, Б). Образование комплекса с переносом заряда может также предшествовать переносу электрона от донора к акцептору (см. раздел III, В и Г). Необходимо отметить, что перенос заряда играет большую роль только в переходном или возбужденном состоянии. [c.80]

Гексозы, псптозы, 6-дезокс1 гексозы и гексуроновые кислоты при ц реван11и с 1-триптофаном в серной кислоте дают фиолетовую и коричнево-фиолетовую окраску. Если в реакционной смеси присутствуют достаточные количества борной кислоты, все классы, углеводов дают одинаковую фиолетовую окраску с максимумом поглощения между 540 и 560 ммк. [c.22]

Поглощение ультрафиолетового излучения. Большинство белков поглощает ультрафиолетовое излучение с длиной волны около 280 тр. Было показано1 [91—94], что это поглощение обусловлено тирозином, триптофаном и (в меньшей степени) фенилаланином. Таким образом, величина поглощения зависит от содержания этих аминокислот в белке. Измерение оптической плотности белкового раствора при 280 пу служит удобным и точным методом определения концентрации белка [95], если известен коэффициент экстинкции и в растворе нет других веществ, поглощающих свет с этой длиной волны. Рассматриваемый метод можно также применять для приближенного измерения общего содержания белков в смеси в тех случаях, когда допустимо использование среднего коэффициента экстинкции. Метод имеет то преимущество, что на поглощение света не влияют растворенные соли и многие другие вещества и что, следовательно, определение можно производить на образцах белковых фракций без всякой специальной их подготовки, Анализ производится быстро, причем требуются всего лишь доли миллиграмма белка. [c.20]

Триптофан можно идентифицировать по поглощению в ультрафиолетовой области спектра. При реакции триптофана с нитрозными газами или азотистой кислотой возникает сначала желтая, а затем коричневая окраска, а прн действии реактива Миллона (Д 57) возникает желтая окраска. Из реакций с ароматическими альдегидами наибольшее значение имеет реакция с п-диметиламинобензальдегидом фиолетовый оттенок и чувствительность этой реакции напоминают реакцию аминокислоты с нингидрином. Реакцию можно усилить нагреванием, однако при слишком сильном нагревании фон желтеет, а пятно зеленеет. Методика опрыскивания приведена в прописи Д102, а методику обработки хроматограммы погружением в раствор Смита [1] см. в Д 1026. С коричным альдегидом триптофан и родственные соединения дают красновато-коричневую окраску чувствительность на хроматограмму, согласно данным Виланда и Бауэра [2], составляет 5 рз (Д 92). См. также главу, посвященную индолам (стр. 572). [c.416]

Газовое титрование. Титрование люжет быть проведено II в полном отсутствии растворителя. Банкрофт и Барнетт [567] изучали поглощение аммиака и НС1 на больщом числе сухи.х веществ, включая аминокислоты и белки. Чарнецкий и Шмидт [568—569] изучали поглощение NH, , H l, СО2, H9S аминокислотами и белками. Конечная точка химического соединения и начала адсорбции определяется по точке, при которой давление начинает иостепенно возрастать, а не остается постоянным или скачкообразно возрастающи.м до нового постоянного значения при прибавлении малого количества газа. Для наиболее чистых веществ была найдена область постоянного давления, как этого можно было ожидать согласно правилу фаз. Интересно, что триптофан и различные пептиды присоединяют две молекулы НС1 при нескольких миллиметрах давления. Банкрофт [567], не найдя прямолинейного участка на кривой поглощения НС1 зеином, пришел к заключению, что зеин не содержит пептидных связей. [c.108]

Показано, что образование комплекса с переносом заряда протекает быстро, так как на него стерические препятствия оказывают меньшее воздействие, чем на реакцию, в которой у экранированного центра образуется новая связь. Биологическая и биохимическая роль КПЗ до сих пор гипотетична. Результаты исследований [42, 43], проведенных с триптофаном, подкрепляют [58] предположение о том, что новый максимум поглощения, наблюдаемый у комплекса NAD -глицepин-альдегид-З-фосфат — дегидрогеназа, скорее всего обусловлен электронным переходом, свойственным КПЗ. [c.135]

Ароматические аминокислоты — тирозин, фенилаланин и триптофан — обусловливают наличие максимумов в электронных спектрах поглощения белков в УФ-области (Я ах 260 - 280 нм), на чем основан спектрофотометрический метод определения белка в растворах и биологических жидкостях. Цистин — диаминодикарбоновая кислота, образующаяся при окислении цистеина [c.48]

Оптические свойства. Белки способны поглощать УФ-свет в трех диапазонах длин волн. Поглощение в диапазоне 250—280 нм обусловлено присутствием в белке исключительно ароматических аминокислот триптофана, тирозина и фенилаланина. Основной вклад в поглощение в данном диапазоне длин волн дают триптофан (Я ах = 278 нм) и тирозин (Ащах = 275 нм). Поглощение в диапазоне 210 —250 нм имеет более сложную природу и определяется наличием ароматических и других аминокислот, а также внутри- и межмолекулярными водородными связями в белковых молекулах. Поглощение в области = 190 нм обусловлено наличием пептидных связей. [c.77]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология