Окрашивание для электронной микроскопии

Рядом исследователей проведено изучение модификаций кристаллической структуры триацетата целлюлозы с помощью электронной микроскопии, ИК-спектроскопии, рентгенографии и электронографии [34, 36, 37, 108, 166, 195, 227]. Проводились лабораторные эксперименты по улучшению некоторых свойств ацетатов целлюлозы (способности к окрашиванию, прочности, пластичности) путем получения смешанных эфиров ацетатов с поперечными сшив- [c.391]

В последнее время в практику электронной микроскопии вошли различные методы окрашивания , отличающиеся от метода оттенения тем, что их применение пе приводит к увеличению размеров объектов. Особенно четкое и детальное изображение дает метод негативного контраста [54, 218]. Он состоит в том, что на образец наносят нейтральные растворы, содержащие атомы тяжелых металлов (фосфорновольфрамовую кислоту или ура-нилацетат) в этих условиях атомы тяжелых металлов не соединяются с компонентами вирусов, а создают окрашенный фон, заполняя все отверстия и трещины, [c.38]

Предупреждения относительно использования фиксаторов в равной степени применимы к окрашиванию. В связи с опасностью экстракции содержащихся растворимых веществ и вероятности внесения тяжелых элементов, рентгеновские пики которых могут маскироваться или налагаться на излучение интересуемых элементов, по-видимому, лучше всего избегать окрашивания. Если контраст изображения образца неприемлемо мал, тогда надо идти на некоторый компромисс, объект должен исследоваться либо в просвечивающем растровом электронном микроскопе, который дает наиболее высококонтрастные изображения, либо в режиме вторичной электронной эмиссии, который дает удивительно хорошую информацию с тонких срезов. [c.286]

Фибриллы можно сделать видимыми в электронном микроскопе после окрашивания солями тяжелых металлов или наблюдать с помощью малоуглового рентгеновского рассеяния. Реакцией с фосфорновольфрамовой кислотой, солями уранила или хрома(111) полярные области соседних основных элементов коллагена сшиваются между собой на многих участках. [c.424]

На электронных микрофотографиях на внутренней стороне митохондриальной мембраны видны характерные частицы, со- единенные с ней маленькими жгутиками. После длительных дебатов о возможности появления артефактов при окрашивании препаратов в электронной микроскопии сейчас считают, что эти частицы не что иное, как молекулы АТРазы. Исследователей главным образом занимает вопрос какие молекулы и какие мо--лекулярные механизмы участвуют в ионном транспорте, синтезе и гидролизе АТР, и как все это связано с жгутиковыми частицами [c.180]

Рис. 12.2. Форма и размеры частиц гемоцианинов моллюсков, наблюдаемые через электронный микроскоп после негативного окрашивания, и соответствующие им коэффициенты седиментации.

В сочетании с разнообразными методами приготовления и окрашивания тканей электронная микроскопия позволила выявить много важных деталей в строении мембран. На приведенных ниже фотографиях видны три разных изображения плазматической мембраны эритроцита, полученные при электронной микроскопии препаратов, приготовленных тремя различными методами. [c.343]

В гистохимии для выявления липидов [3] и дегенерирующего миелина [4] и в электронной, микроскопии в качестве фиксатора [5—7] и для дополнитель ного окрашивания с целью контрастирования исследуемых липидных компонентов [8]. В аналитической химии в качестве реактива на адреналин и индикан и как окислитель в органическом синтезе. [c.303]

Применение. В электронной микроскопии для дополнительного окрашивания с целью увеличения контрастности исследуемых объектов [1]. В аналитической химии для количественного определения иода в присутствии хлора и для микрохимического анализа галогенидов и многих металлов, например, Аи, Pt, U, Th. [c.378]

Применение. В микроскопии совместно с гематоксилином для окрашивания соединительной ткани в гистохимии для выявления методом хроматографии на бумаге липидов, содержащих холин [1] в электронной микроскопии в виде [c.424]

Выявление внутриклеточных антигенов [89] в интактных бактериях представляет собой более сложную задачу, чем локализация поверхностных антигенов, так как антитела не способны проходить через интактную клеточную оболочку. Поэтому методы решения задач такого рода опираются прежде всего на приготовление тонких срезов бактерий, переносимых затем на поверхность растворов с мечеными антителами, после чего следует промывка, иногда окрашивание и затем исследование с помощью электронного микроскопа. Главная трудность заключается в выборе среды для заливки, которая должна давать доступ для связывания антителам в водном растворе. В этих целях испробовано много различных веществ (метакрилаты, сшитый альбумин, различные протравленные пластмассы и эпоксидные смолы), но ни одно из них не может считаться удовлетворительным во всех отношениях в этой области необходимы дальнейшие исследования. Интересующиеся могут получить общее представление о методах и проблемах иммуноцитохимии или иммуноэлектронной микроскопии, изучив предлагаемую литературу [87—91]. [c.126]

Применение. В электронной микроскопии в качестве красителя для контрастирования [I—4], в частности для дополнительного окрашивания с целью кон трастирования нуклеиновых кислот в исследуемых препаратах [5]. В аналИ тической химии в качестве реактива на уксусную и Лропионовую кислоты, Технические показатели (по ТУ 6-09-3196—73) [c.202]

Применение электронного микроскопа в биологии позволило увидеть в клетках множество удивительных структур. Но прежде, чем эти открытия были сделаны, ученым пришлось изрядно потрудиться, чтобы разработать новые методы заключения тканей, их резки и окрашивания [c.181]

Способ деления данной бактерии обычно не выявляется при первом поверхностном осмотре препарата для этого требуются продолжительные наблюдения живых клеток в подходящей среде [5, 10]. Методики простого окрашивания не позволяют с достаточной точностью определить, к какому типу относится деление — делению на две или на три клетки, делению почкованием или фрагментацией. Для этой цели может оказаться необходимым окрашивание клеточной стенки или даже электронная микроскопия. [c.65]

Окрашивание жгутиков проводят для исследования с помощью светового (разд. 3.3.10) или электронного микроскопа (разд. 4.1.1 и 4.1.4). Во время окраски сле- [c.20]

Вопрос о структурной организации цитоплазмы уже очень давно вызывает споры среди цитологов. Ранние микроскопические наблюдения над живыми клетками показали, что цитоплазма-это вязкая жидкость, консистенция которой может изменяться от более жидкой до состояния, напоминающего пластичную твердую массу. В период между 1870 и 1885 гг. благодаря развитию методов фиксации и окрашивания клеток широко распространилось мнение, что цитоплазма содержит разветвленную трехмерную сеть белковых нитей. Эту точку зрения энергично оспаривали некоторые гистологи, утверждавшие, что наблюдаемая после фиксации сетчатая структура цитоплазмы есть не что иное, как артефакт-результат коагуляции белков в процессе приготовления препаратов. Сейчас, спустя почти 100 лет, все еще можно слышать подобные возражения, хотя речь идет уже о значительно более тонких нитях, увидеть которые можно только с помощью электронного микроскопа. [c.126]

Традиционным способом решения этой проблемы является окрашивание структур тяжелыми металлами. Поэтому обычно получаемое изображение представляет собой картину распределения окрашивающего вещества в исследуемом образце, на основании которой можно судить об особенностях молекулярной структуры объекта. Разрешение в этих случаях, как правило, не превышает 1,5 нм. Для повышения разрешения вплоть до 0,6 нм сравнительно недавно были разработаны новые методы микроскопирования молекул. В этих методах увеличение отношения величин полезного сигнала и шума достигается, как и в случае рентгеновской дифракции, использованием упорядоченных молекулярных образований — кристаллов. Ниже будут рассмотрены принципы рутинных методов электронной микроскопии, а затем и их новейшие усовершенствования. [c.548]

Фазовоконтрастная микроскопия используется для повышения контрастности изображения. В световой микроскопии высокая контрастность объекта обусловливается окрашиванием отдельных его составных компонентов (поляризационная окраска и окраска, возникающая в результате травления препарата) и оптическим эффектом на границе раздела фаз, В электронном микроскопе повысить контрастность изображения этими способами возможно. Контрастность изображения в электронном микроскопе определяется степенью различия в рассеянии электронов отдельными составными частями (кристаллами и т. п.) препарата. Частй недостаточная контрастность отдельных фаз объекта не позволяет в полной мере использовать разрешаюш,ую способность электронного микроскопа. [c.134]

Гидродинамическое сопротпвлише ваииы и тянущее усилие ведущих механизмов создают в поверхностпом слое пленки наиряжение, которое вызывает некоторую перестройку структуры, и в частности ориентацию полимера. Внутренние слон испытывают такую перестройку нод действием одноосного растяжения п значительно меньшей степени. Эти структурные различия сохраняются 1г в готовой пленке, что может быть обнаружено по различной интенсивности окрашивания или непосредственным наблюдением срезов в электронном микроскопе. [c.309]

В электронной микроскопии в качестве фиксатора щего средства при исследовании клеточных мембран [3] протеидных комплексов в мембранных системах клетки по Люфту [1], почти .рсе компоненты клетки при этой фиксации разрушаются, а клеточные мембр ны выявляются н виде очень тонких темных линий tia бледном фоне гран ы гликогена хорошо сохраняющиеся при этой фиксации [4], могут быть та1 се. выявлены, но после дополнительного окрашивания гидроксидом свинца. Фиксатор по Люфту может быть успешно применен для изучения миелина [5] и эндоплазматической сети в ботаническом материале [б]. [c.169]

Применение. В микроскопии для окрашивания нервных клеток по Боднану в электронной микроскопии, [c.330]

Рис. 2.15. Взаимодействие растительных клеток и агробактерий при совместном культивировании, Л. В присутствии пораиеииых растительных клеток агро-бакт рии образуют большое число целлюлозных фибрилл, которые вызывают соединение клеток, Б. Окрашивание снецифичны.м для целлюлозы красителем — тинопалом — ясно демонстрирует состав фибрилл. Прикрепление агробактерий к поверхности растительной клетки, которое можно наблюдать с помощью фазово-контрастного (Х1300, В) и сканирующего электронного микроскопов

В электронной микроскопии для окрашивания структур, слабо импрегни-рующихся осмиевой кислотой, а также для усиления контрастности исследуемых [c.423]

Применение. В обычной микроскопии для бактериологических, ботанических, гистологических целей для окрашивания ядер в качестве составной части красителя Вейгерта для окрашивания эластичной ткани [1, 2] в виде карбол-фуксина (1 г основного фуксина, 5 г фенола, 10 мл этилового спирта, 100 мл дистиллированной воды) для выявления кислотоустойчивых липофусцинов по Цилю — Нильсену для приготовления цветных питательных сред по Эндо для дифференцирования кислотоустойчивых бактерий в сочетании с индигокармином и пикриновой кислотой для множественной окраски обзорных препаратов. В электронной микроскопии для гистохимического выявления ацетилхолинэстеразы [3]. В аналитической химии в качестве индикатора (переход окраски от желтой к красной в интервале pH 1,0—-ЗД). [c.427]

Тот факт, что в полимерных смесях и блок-сополимерах происходит фазовое расслоение двух компонентов, уже давно был осознан исследователями, так же как и важность этого явления для проявления характерных механических свойств Но изучение структуры механических смесей, кроме самых грубых, стало возможным только после создания электронного микроскопа, хотя и после этого оставалась серьезная проблема достижения контраста между двумя фазами. Эта сложность была преодолена в 1965 г. Като [450, 451], который обнаружил, что тетраоксид осмия избирательно окрашивает макромолекулы, содержащие двойные углерод-углеродные связи, например молекулы полибутадиена и полиизопрена. Кроме того, тетраоксид осмия способствует увеличению жесткости эластомерной фазы, что позволяет получать ультрамикротомированием образцы толщиной вплоть до 500 А. Для окрашивания образец выдерживали в парах тетраоксида осмия в течение недели или в 1%-ном водном растворе ночь. Оба метода позволяют избирательно окрашивать и увеличивать жесткость ненасыщенного каучука до глубины в несколько микрон, достаточной для приг-отовления образцов. [c.60]

По данным электронной микроскопии, актиновые филаменты состоят из двух цепей глобулярных молекул, имеющих диаметр около 4 нм и образующих двойную спираль, на каждый виток которой приходится 13,5 молекулы (рис. 10-7 и 10-8). Эти цепи составляют основу тонких филаментов скелетных мышц, что следует из результатов рентгеноструктурного анализа и окрашивания 1-дисков флуоресцентными антителами к актину. Однако тонкие филаменты мьшщ состоят не только из актина-они содержат также несколько других белков (см. ниже, разд. 10.1.12). [c.79]

Данные МУРРЛ и ШУРРЛ находятся в согласии с ламелярной и микрофибриллярной концепцией волокнистой структуры. Травление кислотой [49] и избирательное окрашивание [50] тонких слоев вытянутого материала свидетельствует в пользу ламелярной модели. Но такая модель не может объяснить анизотропию модуля упругости, значение которого много выше в аксиальном, чем в радиальном направлении, и не согласуется с данными электронной микроскопии, обнаруживающей существование индивидуальных микрофнбрилл. [c.231]

Необычны клеточные стенки метанобразующих бактерий, не содержащие ни мурамовой кислоты, ни D-аминокислот. У этой группы прокариот описаны клеточные стенки трех типов 1) состоящие из пептидогликана особого химического строения, получившего название псевдомуреин 2) построенные из белковых глобул 3) гетерополисаха-ридной природы. В первом и третьем случаях окрашивание по Граму дает в большинстве случаев положительную реакцию. Все метанобразующие бактерии с клеточной стенкой, состоящей из белка, при окрашивании грамотрицательны. В то же время под электронным микроскопом клеточная стенка любого химического состава обнаруживает строение, аналогичное клеточной стенке грамположительного типа. [c.354]

Та типичная клетка, которую мы до сих пор рассматривали и которая изображена схематически на фиг. 4, представляет собой клетку эукариотического типа. Такая клетка является основной единицей не только всех высших, многоклеточных животных и растений, но также и таких низших, одноклеточных организмов, как грибы, простейшие и водоросли. Изобретение в 30-х годах электронного микроскопа, разрешающая способность которого Б сто раз превышает разрешающую способность светового микроскопа, и последующее появление более тонких методов окрашивания и приготовления препаратов дали возможность разглядеть гораздо больше деталей строения эукариотической клетки. На фиг. 20 показана электронная микрофотография ядра и окружающей его цитоплазмы клетки летучей мыши. На этой фотографии хорошо видна двухслойная структура ядерной мембраны, а также отверстия, или поры, в этой мембране, через которые ядро сосбшается с цитоплазмой. Можно видеть, что находящиеся в цитоплазме митохондрии, как и ядро, окружены мембраной. Но самсе важнее, что те цитоплазматические структуры, которые на основании данных световой микроскопии принято было называть вакуолями , оказались на электронных микрофотографиях сетью удлиненных, тонких образованных мембранами структур. Эта сеть, названная ждоплазматической сетью, представляет собой сложную систему впячиваний наружной мембраны. Таким образом, полость вакуоли на самом деле непосредственно связана с внеклеточной средой. Темные точки, которые, как можно видеть, выстилают эндоплазматическую сеть, — это рибосомы, маленькие частипы, состоящие примерно из одинаковых количеств белка и РНК. В рибосомах локализовано около двух третей всей цитоплазматической РНК. [c.44]

Используя для контрастирования оттенение солями тяжелых металлов, можно наблюдать в электронный микроскоп изолированные макромолекулы, например, ДНК или большие белки (см. рис. 4-20), а после негативного контрастирования разрешению поддаются даже мельчайшие детали. При приготовлении образцов для негативного контрастирования исследуемые молекулы наносят на тонкую пленку углерода (практически прозрачную для электронов), затем ее смачивают концентрированным раствором солей тяжелых металлов, например, уранилапетата. После высушивания образца тонкая пленка солей тяжелых металлов равномерно покрывает углеродную подложку, за исключением участков, занятых адсорбированными макромолекулами. Вещество макромолекул более проницаемо для электронов по сравнению с прилежащими участками, покрытыми солями тяжелых металлов за счет этого возникает обращенное или негативное изображение молекулы. Негативное окрашивание используется особенно эффективно для наблюдения больших агрегатов макромолекул (вирусы, рибосомы) либо [c.188]

При необходимости культуры на пластинках можно фиксировать для окрашивания и даже подготовить для электронной микроскопии однако образцы с таким мало погруженным в среду материалом [2, 7], находящимся в одной плоскости, требуют значительного мастерства в обращении и получении срезов. Покровное стекло с приставшей к нему неповрежденной культурой и средой следует удалить с пластинки для фиксации и заливки в пластмассу. Легче всего удалить стекло с помощью полоски ленты Mylar или какой-нибудь липкой этикетки. [c.47]

Минибиологи говорят если вы хотите знать, что происходит в клетке, вам следует заглянуть в нее. Так как средняя клетка имеет объем около 1000 мкм (10 м ), а сухой вес около 10 ° г, то методы исследования, как оптические, так и химические, должны быть очень чувствительными . При этом минибиологи используют электронный микроскоп для изучения молекулярного строения, применяют красители, реагирующие со специфическими компонентами клетки и окрашивающие их (белок, ДНК и др.), причем интенсивность окрашивания может количественно характеризовать эти компоненты используют меченые соединения для изучения их синтеза, применяют микрохимические методы для определения концентрации различных ферментов в клетке. [c.71]

Заливочные пластмассы, необходимые для электронной микроскопии, значительно тверже, чем гликол-метакрилатные пластмассы, используемые для световой микроскопии. Поэтому окрашивание эле-ктронно-микроскопических срезов толщиной 1 мкм связано с трудностями, обусловленными плохим проникновением красителя. Срезы делают на ультрамикротоме, на плаву наносят на предметные стекла, высушивают и обжигают, подогревая стекла в течение приблизительно 30 с на пламени спиртовки. Стекла погружают на 15 мин в горячий красящий раствор, промывают дистиллированной водой, а затем дополнительно окрашивают. Этот процесс иожно повторять многократно, пока не достигается удовлетворительная интенсивность окраски. Обычно для этого достаточно двух окрашиваний. В случае необходимости срезы можно обработать красителем Кернехтрота. В результате на срезе виден голубой осадок. [c.251]

Важно исследовать ряд срезов для того, чтобы убедиться в устойчивости картины окрашивания и в том, что она не связана с загрязнением среза. При подготовке срезов для электронной микроскопии окраска всегда менее интенсивна, чем в других случаях из-за очень тонких срезов и относительной жесткости пластмассы. Тем не менее на срезе можно ясно видеть отложения железа и идентифицировать клетки, содержащие железо. Сориентировав соответствующим образом блок с клетками, можно сделать тонкие срезы для электронной микроскопии. При малом увелр1чении электронного микроскопа сравнивают клетки, имеющие электроноплотньте частицы, с клетками, дающими позитивное окрашивание на железо в световом микроскопе. Это весьма существенно, поскольку не все плотные частицы, видимые в электронный микроскоп, действительно содержат железо. [c.251]

В заключение необходимо отметить ряд предсказаний, вытекающих из гипотезы магниторецепции, основанной на магнетите. Их проверка позволила бы полностью и окончательно подтвердить эту гипотезу. Важнее всего, пожалуй, детальное изучение микроанатомии рецепторов. Хотя большинство содержащих магнетит структур локализовано у позвоночных по соседству с нервной тканью, фактическая объемная плотность кристаллов составляет лишь несколько частей на миллиард. Все это превращает гистологические исследования в утомительные поиски магнитосомы в стоге сена , даже если использовать методики специфичного к магнетиту окрашивания препаратов или просвечивающую электронную микроскопию тонких срезов. Далее необходима идентификация нейронов, передающих информацию от рецепторов в мозг, и регистрация их ответов на магнитные стимулы. И наконец, для выбора между магнетитным и другими возможными механизмами рецепции нужны специфические лабораторные поведенческие тесты. Например, если бы у пчел удалось выработать условный рефлекс на различение магнитного севера и юга, то эксперимент с импульсным перемагничива-нием позволил бы скачком изменить полярность внутреннего компаса, а следовательно, и выработанную поведенческую реакцию. Это уникальный тест на наличие ферромагнитного компаса, и он уже прекрасно зарекомендовал себя в опытах с магниточувствительными бактериями. К сожалению, большинство животных не способны определять полярность магнитного поля, что делает данный тест неинформативным. Однако существуют и другие возможности проверки гипотезы, открывающие широкие перспективы для будущих исследований. [c.6]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология