Аргинин, модификация

Наиболее распространенным и определенным по своим результатам является гидролиз трипсином, приводящий к разрыву полп-пептидной цепи по карбоксильным группам аргинина п лизина. При желании разрыв по Lys можно блокировать модификацией этой аминокислоты по ее е-аминогруппе действием ангидрида янтарной кислоты. [c.297]

Абсолютной специфичностью действия называют способность фермента катализировать превращение только единственного субстрата. Любые изменения (модификации) в структуре субстрата делают его недоступным для действия фермента. Примерами таких ферментов могут служить аргиназа, расщепляющая в естественных условиях (в организме) аргинин, уреаза, катализирующая распад мочевины, и др. [c.142]

Модификация остатков аргинина [c.145]

Модификация остатков аргинина 1,2-циклогександионом. Белок растворяют в 0,2 М -Ыа-боратном буфере (pH 9,0 10 мг/мл) и инкубируют с 0,15 М 1,2-циклогександионом при 35 °С в течение 2 ч. Подкисляют реакционную среду равным объемом 30%-ной уксусной кислоты, избыток реагента удаляют с помощью диализа против разбавленного раствора уксусной кислоты, диализат высушивают лиофильно. Согласно другому варианту методики, по завершении инкубации реакционную смесь диализуют против 0,1 М Ыа-боратного буфера (pH 8,0). В этом случае получают препарат, пригодный для ферментативного гидролиза. [c.146]

В этом разделе приведены сведения о ферментах, обладающих довольно узкой специфичностью, т. е. расщепляющих ограниченное число пептидных связей. Свойства этих ферментов представлены в табл. 3.1. Из ферментов этого типа наиболее важное значение имеет трипсин. Область применения трипсина может быть существенно расширена с помощью реакций модификации, рассмотренных в предыдущем разделе. Благодаря таким модификациям можно вести гидролиз либо по остаткам лизина, либо по остаткам аргинина. В настоящее время все более широкое [c.146]

Специфическое расщепление по остаткам лизина. При необходимости провести гидролиз белка только по остаткам лизина используют обратимую модификацию по остаткам аргинина [75] (разд. 3.4.4). Полученные пептиды фракционируют при низких pH, а затем снимают защитные группировки. При использовании этого метода получают воспроизводимые результаты [5, 122], однако в отдельных случаях после модификации наблюдается снижение растворимости белка, в особенности после лиофильного высушивания. [c.149]

Среди гистохимических методов выявления аргинина своей простотой и надежностью вьщеляется модификация Бейкера. Стабильность реакции окрашивания удается по- [c.76]

Модификации реакции Сакагучи для гистохимического выявления аргинина всегда связаны с определенными недостатками. Их можно суммировать следующим образом [c.89]

РЕАКЦИЯ САКАГУЧИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АРГИНИНА МОДИФИКАЦИЯ БЕЙКЕРА (ВАКЕЯ, 1947) [c.88]

Перенос метильных групп на двойные связи ненасыщ. жирных к-т микроорганизмов приводит к образованию к-т с разветвленной цепью или содержащих циклопропановые кольца. В результате метилирования нек-рых биологически активных соед. (напр., гистамина, никотинамида) образуются продукты, выводимые из организма. В белках метилированию могут подвергаться аминогруппы остатков лизина и аргинина. Метилирование пуриновых и пиримидиновых оснований, а также рибозных колец-самая распространенная модификация нуклеиновых к-т, особенно транспортных РНК. В полисахаридах А. может, напр., метилировать атом [c.32]

Тиализильная пептидная связь, получающаяся в результате восстановления дисульфидных связей и 5-аминоэтилирования образовавшегося остатка цистеина, также расщепляется трипсином (см. разд. 23.3.3), так как ее боковая группа является изостериче-ской боковой группе Lys. Природа R имеет второстепенное значение, хотя связи Arg-Pro и Lys-Pro не разрываются. Известны и многие другие протеиназы, которые по своей специфичности напоминают трипсин. Например, известно, что тромбин разрывает участки Arg-Gly и Arg-Ser в фибриногене — одном из своих природных субстратов, однако для эффективного катализа необходима еще и связь фермента со вторым участком молекулы субстрата. Поэтому тромбин находит лишь ограниченное применение при расщеплении пептидных связей с целью изучения последовательности, хотя в случае секретина он разрывает связь Arg-Asp, в то время как три связи Arg-Leu остаются незатронутыми. Действие трипсина можно ограничить так, чтобы он разрывал либо по остаткам аргинина, либо по остаткам лизина. Модификация белка малеиновым ангидридом приводит к защищенным е-амино-группам лизиновых остатков схема (27) . [c.275]

Такая модификация ограничивает действие трипсина расщеплением по остаткам аргинина, что приводит к большим фрагментам, чем те, которые образуются после действия фермента на не-модифицированный белок. Малеильную группировку можно удалить при pH 2—3 при комнатной температуре для того, чтобы выделенные в результате первого расщепления фрагменты можно было гидролизовать на более мелкие с помощью того же фермента. Такая процедура помогает при определении порядка связи пептидов в исходном белке. Альтернативно, е-аминогруппу лизиновых остатков можно модифицировать S-этилтрифторацетатом, что приводит к Л -трифторацетильным производным схема (28) . После расщепления по остаткам аргинина Л -трифторацетильную группу можно удалить обработкой водным пиперидином при 0°С. [c.275]

Введение заместителей в боковые цели лизина или аргинина препятствует гидролизу трипсином по остаткам модифицированных аминокислот и позволяет расщеплять белки избирательно только по остаткам аргинина или лизина соответственно. Особенно часто используется модификация остатков лизина с последующим гидролизом белка по остаткам аргинина. В качестве модифицирующих агентов применяются ангидриды дикарбоновых кислот. В результате реакции ацилирования происходит замена положительного заряда остатка лизина на отрицательный заряд полу амида дикарбоио-вой кислоты [c.43]

Методы модификации остатков аргинина в белках основаны на конденсации гуанидиновой группы с различными дикетонамн и диальдегидами. Наибольшее применение среди них находит реакция с 1,2-циклогександиоиом, предложенная в 1975 г. Л. Патти и Э. Смитом. Модификация протекает в мягких условиях (pH 8,0 — 9,0 25 — 40 ""С) в натрий-боратном буфере с образованием стабильного комплекса производного аргинина с боратом. [c.44]

Аргинин. Для модификации гуанидиногруппы остатков аргинина используются гидразинолиз до производных орнитина (см. с. 65) и конденсация с 1,2-дикетонами (например, 1,2-циклогександио- [c.161]

До разработки метода перметилирования было показано, что пептиды, содержащие несколько трифункциональных аминокислот, могут быть подвергнуты масс-спектрометрическому анализу при условии, что дикарбоновые аминокислоты (Asp, Glu) этери-фицированы по их свободным карбоксильным группам, тирозин представлен в виде 0-метилового эфира, а лизин — е-ацилирован производные цистина и гистидина дают масс-спектры без модификации боковых цепей [25]. Только аргинин вызывает наибольшие затруднения. Шемякин и сотр. [26] показали, что арги-ниновые пептиды могут быть сконденсированы с Р-дикетонами (например, ацетилацетоном) с образованием пиримидиновых производных, которые дают хорошие масс-спектры (см. также Веттер-Дихтел и сотр. [27]). Шемякин и сотр. [26] далее показали, что обработка аргининовых пептидов гидразином приводит к образованию соответствующих орнитиновых производных. [c.217]

Каждый из этих ферментов атакует вполне определенные пептидные связи. Трипсин катализирует гидролиз пептидных связей, карбонильная группа которых принадлежит одной из основных аминокислот, обычно аргинину или лизину. Пепсин и химотрипсин предпочтительно катализируют гидролиз тех пептидных связей, в образовании которых участвуют ароматические аминокислоты, в частности триптофан, тирозин и фенилаланин. Среди протеолитических ферментов наиболее высокой специфичностью обладает трипсин поэтому именно он наиболее подходит для такого рода анализа. Ясно, однако, что при помощи только одного, пусть даже абсолютно специфичного, фермента невозможно определить полную последовательность аминокислот в полипептиде. Если, например, триптическое расщепление полипептида дало пять фрагментов (пептидов), в сумме соответствующих всей цепи, и если даже для каждого из них удалось установить аминокислотную последовательность, то это еще не все требуется узнать, в каком порядке эти пептиды располагались в нативном полипептиде. Чтобы узнать это, необходимо получить другие пептиды, которые перекрывались бы с первыми. Главное преимущество ферментативного гидролиза — специфичность реакции расщепления в отношении природы расщепляемых пептидных связей накладывает в то же время строгое ограничение на применимость этого метода. В идеале желательно было бы, например, иметь возможность расщеплять иногда те пептидные связи, которые в норме трипсином не атакуются, или, наоборот, предохранять от расщепления связи заведомо чувствительные. Недавно были предложены некоторые модификации методики, которые позволяют в какой-то мере решить эту задачу. Так, например, реакция е-аминогруппы лизина с этилтрифтортиоацетатом в слабо щелочном растворе дает блокированный по аминогруппе остаток, пептидная связь которого не атакуется трипсином [c.90]

Обнаружение взаимодействий субстрата с остатками Glu-270 и Arg-145 в кристаллическом комплексе стимулировало попытки модифицировать эти остатки [117]. Реакция примерно трех остатков аргинина в КПА с бутандионом приводит к значительному (85%) уменьшению пептидазной активности [118]. При удалении модифицирующей группы с одного остатка аргинина активность восстанавливается. Так же как при реакциях с тирозином, эстеразная активность уменьшается не пропорционально пептидазной. Место модификации и то, каким образом измеряется кат и Кж для гидролиза пептидов, не определены. Модификация карбоксильной группы Ы-этил-б-фенилизоксазолип-З -сульфонатом (К-реагент Вудвор- [c.539]

Обессоливапие чаще всего проводят электродиализом в приборе Конс-деиа и сотрудников [4]. Выше (см. стр. 93) описана модификация этого прибора и упомянуты некоторые нежелательные химические реакции, которые могут иметь место при обессоливании. Для анализа аминокислот наиболее важной нежелательной реакцией является расщепление аргинина количество орнитина и мочевины, возникающее при обессоливании, значительно меньше, чем это соответствует убыли аргинина (Смит [2]). При охлаждении потери снижаются, однако это зависит от количества и химического характера удаляемых ионов (Стейн и Мур [2]). [c.404]

Колонка стеклянная капиллярная, 20 мХ0,28 мм неподвижная фаза хирасил-]/а1 газ-носитель водород, избыточное давление 38 кПа программирование температуры начальная температура 35 °С, быстрое увеличение до 82 °С. изотермический режим в течение 4 мин, подъем температуры до 195 °С со скоростью 4 °С1мин и геотермический режим в течение 20 мин температура инжектора и детектора 250 °С. Идентифицированы следующие соединения 1 — аланин 2 — валин 3 — треонин 4 — а-изолейцин 5 — глицин 6 — изолейцин 7 — пролин 8 — лейцин 9 — серии 10 — аспарагиновая кислота 11 —цистеин 12 — метионин 13 — фенилаланин 14 — глутаминовая кислота 15 — тирозин 16 — орнитин 17 — лизин 18 — М-этоксикарбонилгистидин (модификация по атому азота имидазольного кольца) 19 — аргинин 20 — триптофан. [c.80]

Посттрансляционная модификация белка включает следующие процессы химическую модификацию белка (часто отсутствует) — метилирование по аминогруппе лизина и аргинина, фосфорилирование по ОН-группе серина, окисление лизина, пролина и др. связывание простетической группы связывание между собой субъединиц олигомерного белка частичный протеолиз. Например, ттосттрансляционная модификация при биосинтезе гликопротеинов происходит следующим образом. Полисомы связаны с внешней поверхностью мембраны эндоплазматического ретикулума клеток через большую субъединицу рибосомы. Синтезированные полипеп- [c.317]

Соединения серебра, ртути и кадмия. Осаждение соединениями серебра применялось уже в ранних работах, которые привели к открытию основных аминокислот [380]. Это применение серебра составило важную часть системы анализа оснований, которая была разработана детально и со многими модификациями [315, 333, 335, 336, 352, 381—394]. В этой связи основное значение имеют работы Викери и сотрудников, которые установили очень точные данные по аргинину, гистидину и лизину для ряда белков. [c.93]

Модификацию остатков лизина и аргинина используют с це.чью ог])аничения действия трипсина. Интерес представляют обратимые методы модификации, которые позволяют регенерировать исходные аминокислотные остатки после проведения ферментатив1юго гидролиза. [c.142]

Для модификации остатков аргинина в белках предложен ряд реагентов, например малоновый ангидрид [53], циклогексан-дион [105], 2,3-бутадиоп [121] нитромалоновый альдегид [95]. Сведения о некоторых способах модификации можно найти в работе [120]. К сожалению, в большинстве случаев реакцию проводят в жестких условиях (при экстремальных pH), что приводит к необратимой модификации остатков аргинина и сопровождается побочными реакциями. Далее приводится методика с использованием 1,2-циклогександиона [75]. Полученные производные аргинина устойчивы при кислотных pH, образуют комплекс с борат-ионом, устойчивый при pH 8. Методика описана в работе [98]. [c.145]

Специфическое расщепление по остаткам аргинина. Специфичность трипсина можно ограничить благодаря обратимому блокированию остатков лизина (разд. 3.4.3). В этом случае гидролиз проходит только по остаткам аргинина. Наиболее распространена модификация цитраконилированием если продолжительность гидролиза трипсином слишком велика, используют малеилирование. Деблокирование малеильных или цитра-конильных групп проводят подкислением реакционной смеси до рН< 3,5, а затем осуществляют разделение полученных пептидов. При подкислении фермент инактивируется, однако для предотвращения его активации при последующем повышении [c.148]

ЦИИ завершается в течение первой минуты от начала заражения при этом ADP-рибозилированию подвергается не более 50% а-субъединиц. Следует отметить также, что ADP-рибозилирование -, - и а-субъединиц обратимо (через несколько минут после заражения эти субъединицы оказываются интактными). Значение реакции альтерации остается неясным,-тай как мутанты фага, лишенные ADP-рибозилтрансферазы, сохраняют способность репродуцироваться в клетках [51]. Реакция модификации влияет на синтез белка в зараженной клетке она осуществляется через несколько минут после реакции альтерации. В результате реакции модификации происходит количественное ADP-рибозилирование определенного остатка аргинина в а-субъединице [52] вероятно, именно поэтому полимераза перестает транскрибировать геном Е. oli, но сохраняет при этом способность к транскрипции генов фага Т4. Можно полагать, что а-субъединицам принадлежит важная роль во взаимодействии полимеразы с промоторными участками генома Е. соН [53]. Реакции альтерации и модификации катализируются различными ферментами, так как мутации, затрагивающие эти функции, локализуются в различных участках генома фага [54]. [c.131]

Смотреть страницы где упоминается термин Аргинин, модификация: [c.248] [c.68] [c.136] [c.97] [c.250] [c.321] [c.328] [c.544] [c.544] [c.43] [c.136] [c.86] [c.364] [c.177] [c.257] [c.460] [c.104] [c.423] [c.86] [c.149] [c.152] [c.344] [c.35]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология