Ферменты значение реакции среды

Влияние кислотности среды. Второй важнейший фактор, от которого зависит активность ферментов, — реакция среды. Каждый фермент наиболее активен в определенном интервале pH, известном под названием оптимума pH. Оптимумы pH отдельных ферментов резко различаются. Например, максимальная активность пепсина, катализирующего расщепление белка, наблюдается при pH 1,5—2,0, а аргиназы, которая вызывает расщепление аминокислоты аргинина, — при pH 9,5—9,9. С удалением от оптимального значения pH в кислую или щелочную сторону активность фермента ослабляется вначале медленно, а затем очень быстро, и часто такое инактивирование вскоре приобретает необратимый характер. На рисунке И схематически показано влияние pH среды на активность фермента амилазы, которая катализирует расщепление крахмала. [c.46]

Четыре особенности отличают ферменты от всех прочих катализаторов. Во-первых, эти биокатализаторы исключительно эффективны. Нри оптимальных условиях большинство ферментативных реакций протекает в 10 —10 раз быстрее, чем те же реакции в отсутствие ферментов. Число оборотов (т. е. число молекул субстрата, превращаемых за одну минуту, на одну молекулу фермента) для большинства ферментов равно приблизительно 1000, а в некоторых случаях может превышать 10 . Следует при этом иметь в виду, что скорость отдельных стадий ферментативных реакций лимитируется диффузией реагирующих веществ или, во всяком случае, зависит от нее. Таким образом, многие химические реакции, которые обычно протекают только при высоких температурах или только в сильно кислой или сильно щелочной среде, в присутствии соответствующих ферментов могут идти быстро и количественно при комнатной температуре и при значениях pH, близких к нейтральному. Во-вторых, для большинства ферментативных реакций характерна высокая специфичность как в отношении природы катализируемой реакции, так и в отношении структуры используемого субстрата. В-третьих, круг реакций, катализируемых ферментами, необычайно широк. Ферменты катализируют реакции гидролиза, поликонденсации, окисления — восстановления, дегидрирования, альдольно11 конденсации, реакции переноса различных групп, а также ряд других реакций. Мы можем, таким образом, сказать, что белки — катализаторы с исключительно широким спектром действия. Наконец, в-четвертых, активность самих ферментов в клетке строго регулируется. Скорость синтеза ферментов, а также их конечная концентрация находятся под генетическим контролем и регулируются с помощью малых молекул эти малые молекулы часто являются субстратами или продуктами реакций, катализируемых теми н е ферментами. Кроме того, ферменты могут существовать как в активной, так и в неактивной форме, причем скорость и степень их превращения в каждом конкретном случае зависит от свойств окружающей среды. Почти все биоло- [c.189]

Активность ферментов зависит от pH среды, концентрации фермента, температуры. Каждый фермент проявляет максимум активности при определенном значении pH. С увеличением концентрации фермента скорость реакции увеличивается (см. уравнение (6.45)). Обычно наблюдается линейная зависимость. Повышение температуры приводит к увеличению активности фермента, однако при 40—50°С достигается ее максимум. При., . л. . дальнейшем увеличении темпе- [c.252]

Простейшим подходом является определение зависимости кон станты скорости данной реакции от pH. Скорости всех фермента тивных реакций зависят от pH среды и для большинства харак терны колоколообразные зависимости с четко выраженным оптимумом pH (рис. 24.1.9). Факт, что определенная ионная форма фермента должна быть наиболее активной, не является удивительным, и так как белок содержит множество ионизуемых групп, естественно, что активность должна падать при более высоких или более низких значениях pH. Тем не менее активность в общем определяется состоя- [c.477]

Одна из наиболее характерных особенностей действия ферментов состоит в чрезвычайно сильной зависимости ферментативной активности от pH среды, в которой происходит реакция. Ферменты активны лишь в узком интервале значений pH, и для них характерно наличие в этом интервале определенной максимальной активности, резко уменьшающейся по обе стороны от оптимального значения pH. [c.151]

Зависимость активности ферментов от pH среды. Ферменты обычно наиболее активны в пределах узкой зоны концентрации водородных ионов, соответствующей для животных тканей в основном выработанным в процессе эволюции физиологическим значениям pH среды 6,0—8,0. При графическом изображении на кривой колоколообразной формы имеется определенная точка, в которой фермент проявляет максимальную активность эту точку называют оптимумом pH среды для действия данного фермента (рис. 4.17). При определении зависимости активности фермента от концентрации водородных ионов реакцию проводят при разных значениях pH среды, обычно при оптимальной температуре и наличии достаточно высоких (насыщающих) концентраций субстрата. В табл. 4.3 приводятся оптимальные значения pH среды для ряда ферментов. [c.141]

Активность разнообразных биологических катализаторов (ферментов), а нередко и специфика происходящих в тканях биохимических процессов связаны с ограниченными зонами значений pH. Так, пепсин желудочного сока активен при pH 1,5—2,0 каталаза крови — при pH 7,0 тканевые катепсины при реакции среды, близкой к нейтральной, катализируют синтез белка, а при кислой реакции его расщепляют. [c.59]

Иммобилизация ферментов создает ряд преимуществ. К ним относятся более высокая стабильность ферментных препаратов, возможность их удаления из реакц. среды и его повторного использования, а также возможность создания непрерывных процессов на ферментных колонках. Важное значение имеет относит, стабильность И. ф. к денатурирующим воздействиям-нагреванию, действию агрессивных сред, автолизу и др. Последнему подвержены протеолитич. ферменты Иммобилизация разобщает молекулы этих ферментов и полностью исключает такой процесс. Благодаря этому удалось изучить механизм образования протеолитич. фермента пепсина из его предшественника пепсиногена (при этом от последнего отщепляется пептид, состоящий из 42 аминокислотных остатков). Было показано, что эта р-ция катализируется самим пепсином. [c.216]

Ферменты, роль которых в организме изложена в главе IV, оказываются активными только при определенном для каждого фермента значении pH. Так, фермент пепсин, участвующий в реакции расщепления жиров в желудке, проявляет максимум активности при pH = 1,5, т. е. в сильно кислой среде содержащийся в слюне птиалин, ускоряющий процесс осахаривания крахмала, наиболее активен при pH — 6,7, т. е. почти в нейтральной среде. При отклонении величины pH от оптимальных значений активность ферментов сильно снижается или даже вовсе прекращается. [c.93]

Роль трансаминаз и реакций трансаминирования в обмене аминокислот. Чрезвычайно широкое распространение трансаминаз в животных тканях, у микроорганизмов и растений, их высокая резистентность к физическим, химическим и биологическим воздействиям, абсолютная стереохимическая специфичность по отношению к Ь-аминокислотам, а также высокая каталитическая активность в процессах трансаминирования послужили предметом детального исследования роли этих ферментов в обмене аминокислот. Ранее было указано, что при физиологических значениях pH среды активность оксидазы Ь-аминокислот резко снижена. Учитывая это обстоятельство, а также высокую скорость протекания реакции трансаминирования, А.Е. Браунштейн выдвинул гипотезу о возможности существования в животных тканях непрямого пути дезаминирования аминокислот через реакции трансаминирования, названного им трансдезаминированием. Основой для вьщвижения этой гипотезы послужили также данные Г. Эйлера о том, что в животных тканях из всех природных аминокислот с высокой скоростью дезаминируется только Е-глутаминовая кислота в реакции, катализируемой высокоактивной и специфической глутамат-дегидрогеназой. [c.437]

Среди большого числа различных функций, выполняемых белками, в первую очередь следует отметить их роль в протекании метаболических процессов. Многочисленные химические превращения в клетке осуществляются в мягких условиях при температурах, близких к 40° С, и значениях pH среды, близких к нейтральным. В этих условиях скорости протекания большинства химических превращений в живых организмах ничтожно малы, поэтому обязательно присутствие специальных биологических катализаторов — ферментов (энзимов). Даже такая простая реакция, как дегидратация угольной кислоты [c.14]

Белки — переносчики всех типов, напоминают связанные с мембранами ферменты, а процесс облегченной диффузии — ферментативную реакцию по ряду свойств 1) транспортные белки обладают высокой специфичностью и имеют участки (сайты) связывания для транспортируемой молекулы (по аналогии — субстрата) 2) когда все участки связывания заняты (т. е. белок насыщен), скорость транспорта достигает максимального значения, обозначаемого (рис. 22.7) 3) белок-переносчик имеет характерную для него константу связывания Ky , равную концентрации транспортируемого вещества, при которой скорость транспорта составляет половину ее максимальной величины (аналогично для системы фермент—субстрат), транспортные белки чувствительны к изменению значения pH среды 4) они ингибируются конкурентными или неконкурентными ингибиторами. Однако в отличие от ферментной реакции молекула транспортируемого вещества не претерпевает ковалентного превращения при взаимодействии с транспортным белком (рис. 22.7), [c.310]

Адсорбционный метод Данилевского основан на способности ферментов адсорбироваться при определенных условиях на поверхности некоторых мелко измельченных веществ (гидроокись железа, глины, животный уголь и др.). После взбалтывания раствора фермента с надлежащим образом подобранным адсорбентом фермент оказывается адсорбированным на частицах твердого тела и увлекается вместе с этим частицами в осадок при отстаивании, фильтровании или центрифугировании взвеси. Большинство примесей при этом остается в растворе. После этого остается только снять адсорбированный фермент с твердых частиц адсорбента. Так как степень адсорбции зависит от состава и реакции среды, то, изменяя условия, можно вызвать элюирование фермента, т. е. обратный переход его из осадка в жидкость. Выделение фермента из адсорбента может быть произведено, например, путем промывания осадка раствором фосфорнокислого натрия или калия (с определенным значением pH), водным раствором аммиака и др. Обычно эти операции — адсорбцию и последующую элюцию— пов- [c.126]

Влияние активной реакции среды. Каждый микроб может жить лишь при определенной реакции среды. Протоплазма клетки находится в коллоидном состоянии при определенных значениях pH. С изменением концентрации водородных ионов может произойти коагуляция коллоидов. Кроме того, изменение pH нарушает каталитическую деятельность ферментов, входящих в состав бактериальной клетки. [c.275]

Активность различных ферментов, а также специфика происходящих в тканях биохимических процессов тесно связаны с определенными довольно узкими интервалами pH. Например, пепсин желудочного сока активен при pH = 1,5— 2.0 содержащийся в слюне птиалин, ускоряющий процесс осахаривания крахмала, наиболее активен при pH = 6. 7, т. е. почти в нейтральной среде. В зависимости от pH среды ферменты могут катализировать совершенно различные реакции. Тяк, тканевые катепсины при реакции среды, близкой к нейтральной, катализируют синтез белка, а при кислой реакции — его расщепление. При отклонении величины pH от оптимальных значений активность ферментов, как показывает опыт, сильно снижается или даже вовсе прекращается, что в конечном итоге приводит организм к гибели. [c.244]

Как следует из приведенных выше данных, вязкость смесей увеличивается с понижением температуры и вблизи температур замерзания может на несколько порядков превышать вязкость воды при нормальных условиях. В первом приближении вязкость растет линейно как функция обратной температуры. Высокие значения вязкости среды могут затруднить нормальную диффузию субстратов, изменить время жизни фермент-субстратных комплексов и тем самым повлиять на скорость реакции. [c.234]

Величина pH — важнейшая характеристика биологических процессов. Физиологические процессы нормально протекают только при определенном pH. Установлено, что для каждого растения наиболее благоприятна определенная оптимальная реакция среды для картофеля pH = 5, для ржи — 5—6 для пшеницы 6—7. Ферменты оказываются активными только при определенном для каждого из них pH. Так, фермент пепсин, участвующий в расщеплении жиров в желудке, максимум активности проявляет при pH = 1,5. Птиалин слюны, ускоряющий осахаривание крахмала, наиболее активен при pH = 6,7. Величина pH почвы оказывает большое влияние на бактериальные процессы, в частности на усвоение атмосферного азота клубеньковыми бактериями на корнях бобовых растений. Эффективность использования вносимых в почву удобрений также в значительной степени зависит от pH среды. Д. Н. Прянишников установил, что нитратный азот (азот аниона НОз") лучше усваивается растениями в слабокислой среде (pH 1= 5,0), и аммиачный азот (азот катиона МН4 ) лучше усваивается в нейтральной среде (pH = 7,0). Велико значение pH для понимания засухоустойчивости и морозостойкости растений. Общеизвестно влияние pH желудочного сока на пищеварение. В здоровом организме pH желудочного сока лежит в пределах 0,9—1,5. [c.154]

Важное свойство ферментов, обеспечивающее их применение в ионометрии, — уникальная специфичность по отношению к ферментативной реакции и к субстрату. Каждый фермент катализирует только один тип реакции каталитическая активность фер мента максимальна для определенных условий среды— оптимальных значений pH, температуры, окислительного потенциала, ее химического состава. Субстратная специфичность ферментов, выделяющая их из всех катализаторов неферментного происхождения, столь четко выражена, что фермент катализирует реакцию только одного стереоизомера или одного члена гомологического ряда, оставаясь инертным по отношению ко всем другим веществам. Таким образом, применение ферментов для создания ионометрических датчиков в первую очередь определяет ся их высокой селективностью. [c.127]

Очень большое влияние на ход энзиматических процессов оказывает активная реакция среды. Каждый фермент имеет оптимальное значение pH, но этот оптимум может несколько изменяться в зависимости от концентрации фермента, природы субстрата и некоторых других условий. [c.28]

Активная реакция среды. Каждый фермент имеет узкий диапазон значений pH, при котором активность его максимальна. Большинство фер- [c.99]

Величина pH среды оказывает также влияние на сродство фермента к субстрату. При определенных для каждого фермента значениях pH катализируемые ими реакции идут с максимальной скоростью. Эти величины pH называют рН-оптимум. [c.231]

В наших опытах (1964) положительное влияние молибдена на образование хлорофилла удалось обнаружить как на фоне нитратного, так и аммиачного азота. Внесение молибдена благоприятно сказывалось на синтезе пигмента независимо от используемого источника азота в том случае, когда pH питательной среды способствовало усвоению данной формы азота. Молибден на фоне аммиачных солей давал эффект лишь при реакции среды с рн 6,5. При более кислых значениях pH (5,3) он действовал на синтез хлорофилла в условиях аммиачного питания слабо и во многих случаях даже отрицательно. То же правило определяло взаимоотношения между молибденом и рядом других показателей обмена растений (формы фосфора, активность окислительных ферментов и др.). В условиях, когда действие молибдена на образование хлорофилла проявлялось отчетливо, оно было заметным также и в отношении влияния на ряд показателей фосфорного обмена. Во всех случаях наблюдалась одна и та же направленность в действии молибдена на синтез хлорофилла и содержание общего органического фосфора. [c.132]

Оптимальное значение pH среды для проявления активности протеолитических ферментов 8-8,2. Кислая реакция (pH 4,5-5,5), а также сильнощелочная (pH около 9) подавляют активность ферментов. [c.228]

Значение pH. Реакция среды оказывает очень сильное влияние на эффективность сорбции фермента на поверхности носителя, особенно, если сорбция осуществляется главным образом за счет электростатических взаимодействий. Причина этого влияния состоит в том, что при изменении pH меняется состояние ионизации ионогенных групп носителя и белка, ответственных за связывание. При использовании носителей, ие являющихся ионообменниками, максимальная адсорбция обычно достигается в изоэлектрической точке белка. Иными словами, рН-за-висимость адсорбции должна иметь вид кривой с одним максимумом, соответствующим значению изоэлектрической точки. Однако известны случаи, когда это правило нарушается. Например, рН-зависимость эффективности адсорбции альбумина на латексе имеет вид Ш-образной кривой, а значение pH, при котором достигается максимальная адсорбция этого белка иа угле, изменяется от 3 до 6 в зависимости от типа последнего. [c.50]

Активная реакция среды. Каждый микроб может жить и развиваться лишь при определенной величине pH. Объясняется это тем, что в оптимальных для каждого микроба границах концентрации водородных ионов его коллоиды находятся в дисперсном состоянии. Но стоит только активной реакции пере-дЕинуться из этих оптимальных границ в кислую или щелочную сторону, как тотчас же наступает коагуляция коллоидов. Кроме того, большое значение имеет и то, что сдвиг величины pH резко нарушает каталитическую деятельность ферментов, входящих в состав бактериальной клетки. [c.26]

Способность живых организмов образовывать магнетит, представляющий собой оксид железа смешаной валентности (РезОд), ставит перед исследователями твердотельных и кристаллических структур несколько непростых и интригующих вопросов. Синтез магнетита в лаборатории возможен только в достаточно жестких условиях, включающих часто высокие температуру и давление, а также высокие значения pH среды. Еще большие экспериментальные трудности при неорганическом синтезе связаны с получением частиц одинаковой формы и размера. В то же время для реакций, идущих в живых организмах, характерна высокая специфичность, которая обеспечивается структурно-функциональными особенностями катализирующих их ферментов. Этим обусловлена способность некоторых живых организмов образовывать кристаллы магнетита при комнатной температуре и нормальном давлении и при значениях pH среды, близких к нейтральным. Более того, благодаря жесткому биологическому контролю процессов активации и регуляции этих твердофазных реакций происходит образование частиц магнетита с вполне определенными размерами и морфологией кристаллов. Особенности, связанные с химической, стерео- и кристаллографической специфичностью реакций, приводящих к образованию кристаллов в живых организмах, весьма важны и нуждаются в изучении и объяснении, поскольку данные об этой новой группе твердофазных реакций могут оказаться полезными при разработке и создании новых промышленных материалов. [c.58]

По-видимому, при функционировании глутаминсинтетазы, как и в случае других ферментов, катализирующих реакции с участием АТР, Mg + и Мп2+ образуют Mg2+ — АТР- и Мп2+ — АТР-комплексы об этом свидетельствует тот факт, что для достижения оптимальной активности требуются равные концентрации Ме + и АТР. Известно, что Е. oli хорошо растет на синтетических средах без добавления Мп2+ и внутриклеточные концентрации Жп + измеряются в мкМ, в то время как концентрации Mg + и АТР имеют порядок мМ следовательно, физиологическое значение имеет только активность Мд +-зависимой формы. Таким образом, превращение Ео в Е12 следует рассматривать как трансформацию активной формы, чувствительной к ингибированию аланииом, глицином и АМР, в неактивную форму фермента. [c.112]

Теперь рассмотрим различные типы экстрактов. При работе с некоторыми животными тканями частицы составляют незначительную часть экстракта и ими можно пренебречь. Они агрегируют, скажем, при первом же фракционировании сульфатом аммония и затем удаляются. С другой стороны, есть животные ткани, содержащие больше жиров и мембранных структур при экстрагировании таких тканей образуются суспензии. Подкисление среды до pH 6,0—5,0 обычно приводит к агрегации материала, который можно затем отцентрифугировать при относительно низкой скорости. Рибосомы и другие нуклеопротеиды обычно удаляются при подкислении, которое можно рассматривать как одну из форм изоэлектрического осаждения (разд. 3.2) фосфатные группы протонируются и нейтрализуют или по крайней мере снижают заряд частиц суспензии. Этот способ дает очень хорошие результаты при условии, что нужный фермент г) не осаждается изоэлектрически при данном значении pH, б) не адсорбируется на образовавшемся осадке или в) остается стабильным при нефизиологических значениях pH. Экстракт охлаждают и снижают pH соответствующей кислотой (например, 1 М уксусной, разд. 6.1). После перемешивания в течение 10—20 мин осадок отделяют центрифугированием, а pH надосадочной жидкости доводят, если необходимо, до нужного значения перед тем, как приступить к первому этапу фракционирования. Растительные ткани отличаются прежде всего тем, что реакция среды в них более кислая и содержащиеся в них частицы, такие, как фрагменты хлоропластов, агрегируют значительно труднее. К тому же растительные экстракты содержат сравнительно мало корпускулярного материала, если не считать грубых частиц типа зерен крахмала, которые легко осаждаются после приготовления экстракта. [c.49]

Биологические катализаторы (ферменты) по ряду признаков резко отличаются от неорганических катализаторов, хотя те и другие лишь ускоряют достижение равновесия в химических процессах, которые протекают сами по себе, но с очень малыми скоростями. Как и катализаторы неорганической природы, биокатализаторы не вызывают каких-либо химических реакций, а лишь ускоряют существующие. Первое различие состоит в том, что по сравнению с катализаторами неорганической природы ферменты работают в очень мягких условиях (низкая температура, нормальное давление, невысокие значения pH среды и т. п.) и очень интенсивно. Так, например, гидролитический распад белка до аминокислот в присутствии неорганических катализаторов (крепких кислот или щелочей) осуществляется при температуре 100° С и выше за несколько десятков часов. Этот же процесс при каталитическом участии специфических ферментов протекает за десятки минут при температуре 30—40° С. Для гидролиза крахмала, как указывал еще Й. Берцелиус (1836), при нагревании в растворе кислоты нужно несколько часов, а при участии соответствующего фермента этот процесс идет при комнатной температуре всего несколько минут. Ионы Ре каталитически ускоряют разложение Н2О2 на Н2О и О2. Однако атомы того же Ре, но в составе фермента каталазы действуют в 10 млрд. раз энергичнее, и всего 1 мг Ре в ферменте способен заменить в этой реакции Ют неорганического Ре. Таким образом, [c.95]

Фосфотрансферазы. Сюда относятся ферменты, ускоряющие реакцию переноса остатка фосфорной кислоты. Эта реакция имеет исключительно важное значение для жизнедеятельности организма, обеспечивая превращение ряда органических соединений в фосфорные эфиры, обладающие повышенной химической активностью и более легко вступающие в последующие реакции. Перенос фосфатных групп идет на спиртовые, карбоксильные, азотсодержащие, фосфорсодержащие и другие группы тех или иных органических соединений. В соответствии с этим среди фосфортрансфераз различают несколько подподклассов. [c.123]

Возможно, для понимания функций ферментов наиболее подходит модель бифункционального катализа в водной среде. Одной из первых реакций, для которых было показано значительное увеличение скорости в воде, был гидролиз иминолактонов. Это исследование выполнено Каннингхемом и Шмиром [73], которые обнаружили, что фосфатный буфер но крайней мере в 200 раз эффективнее имидазольного буфера (хотя оба буфера имеют примерно одинаковое значение рА а) при каталитическом отщеплении анилина. [c.217]

Из сказанного можно сделать вывод, что при гидрофобном фермент-субстратном взаимодействии типа Е-Н (схема 2,10) величина Д 5,ВНУ1Р (уравнение 2.19) принимает существенные значения даже при не слишком больших гидрофобных фрагментах Н. Так, для весьма распространенной в живой природе бензильной группы (встречающейся в молекулах производных фенилаланина) понижение свободной энергии активации, обусловленное погружением ее (переносом из воды) в гидрофобную среду активного центра (при образовании переходного состояния химической реакции), может составить величину вплоть до —7 ккал/моль (—29,4 кДж/моль) в зависимости от значения а с 2, которое реализуется в данной энзиматической системе. Это соответствует ускорениям реакции вплоть до 10 раз. [c.45]

Химические реакции, связанные с биологическими процессами, часто крайне чувствительны к концентрации ионов водорода среды. На химических предприятиях, например использующих ферменты, чрезвычайно важен контроль значений pH перерабатываемых материалов. И не удивительно, что символ pH был введен датским биохимиком С. П. Л. Сё-ренсеном в период его работы над проблемами, связанными с производством пива. [c.334]

Так как величины Кт я V могут по-разному зависеть от pH, исследование, проводимое при ненасыщающих концентрациях субстрата, дает информацию, которую трудно интерпретировать. Поэтому необходима постановка экспериментов по определению влияния pH на Кт. и V. Следует помнить, что концентрация субстрата, являющаяся насыщающей при одном значении pH, при другом может йе быть ею. Выбирая буфер, нужно учитывать, чтобы его рК был по возможности близок к оптимуму pH реакции, а также иметь в виду, что при одном и том же pH в разных буферах каталитическая активность может различаться. Отдельные ионы могут оказывать активирующее или ингибирующее влияние на фермент. Поливалентные анионы (фосфат, сульфат, цитрат) могут конкурировать с отрицательно заряженным субстратом, вызывая ингибирование реакции. Отдельные компоненты буфера, например ЭДТА, гистидин, цитрат, могут связывать ионы металлов, важные для активности некоторых ферментов. Следует иметь в виду, что ионная сила раствора оказывает влияние на активность фермента. Поэтому, изменяя состав реакционной среды, необходимо обеспечивать постоянство ионной силы. [c.211]

Проводят сравнительное исследование зависимости скорости реакции от концентрации глюкозы для связанной с липосомами и сво- бодйой форм фермента в диапазоне концентраций субстрата 3-10 — S-IO М. Различными графическими методами оценивают значения Кт по глюкозе. Препарат связанной гексокиназы получают в присутствии в среде для иммобилизации 15 мМ Mg b и 5 инт. ед. гексокиназы. [c.377]

М, pH 8,9. Реакционная среда содержит 5 мМ ЭДТА, 5 мМ арсенат Na, 3 мМ НАД, 1,5 мМ фосфоглицериновый альдегид и 0,1—0,2 мл суспензии иммобилизованного фермента. Реакцию начинают добавлением субстрата. Проводят сравнение удельной активности, значений Кт и Vmax для иммобилизованных форм фермента И рвстворимого фермента. [c.385]

Измерение активности цитохромоксидазы. Активность фермента измеряют полярографическим методом (с. 480) по поглощению кислорода из среды измерения. В кювету полярографа помещают 2 мл ,05 М фосфатного буфера (pH 7,4), содержащего 1%-ный твин-80. Добавляют 0,04 мл 1 М, аскорбиновой кислоты и 0,08 мл 2 мМ цитохрома с. Кювету устанавливают в штатив полярографа, дожидаются, пока значение тока выйдет на постоянный уровень, и реакцию начинают добавлением препарата цитохромоксидазы (10—100 мкг). Из по-лярограммы находят величину каталитической активности фермента и рассчитывают число его оборотов. [c.434]