Электрофорез Метод электрофореза на бумаге

В последнее время для разделения смесей аминокислот широко используют метод электрофореза на бумаге, при котором на полосы фильтровальной бумаги наносят смесь аминокислот, бумагу смачивают буферным раствором с определенным значением pH и пропускают через нее электрический ток. Через несколько часов вследствие различия ИЭТ аминокислот и, следовательно, разных скоростей и направлений их движения в электрическом поле смесь аминокислот разделяется на бумаге на индивидуальные аминокислоты, количество которых может быть определено тем или иным методом. В настоящее время электрофорез используется для разделения не только аминокислот, но и белков, нуклеиновых кислот, органических кислот и ряда других соединений. Благодаря тому что аминокислоты являются амфотерными электролитами, они могут давать соли одновременно как с кислотами, так и с основаниями [c.188]

При электрофорезе с последующим хроматографированием на бумагу, пропитанную раствором электролита, наносят каплю анализируемого раствора и проводят электрофорез, подключая концы листа бумаги через электроды к источнику постоянного тока. После окончания электрофореза бумагу вынимают из прибора, сушат и переносят в камеру для хроматографирования по способу восходящей или нисходящей хроматографии. После окончания хроматографирования бумагу проявляют и проводят качественные и количественные определения. Метод раздельного электрофореза и хроматографирования позволяет проводить эти две операции при различных значениях pH, что улучшает возможности разделения. [c.220]

Знак заряда коллоидных частиц золей можно определить методом электрофореза (см. работу 57), а для окрашенных золей — методом капиллярного анализа. В основе такого определения лежит зависимость адсорбируемого золя от знака заряда поверхности адсорбента, например фильтровальной бумаги. При смачивании последней водой под действием сил поверхностного натяжения вода поднимается по капиллярам бумаги. При этом стенки капилляров заряжаются отрицательно, а граничащая с ними вода — положительно. Если вместо воды взять гидрозоль, то его заряженные коллоидные частицы смогут передвигаться вверх по полоске мокрой бумаги только в том случае, когда они заряжены отрицательно (одноименно со стенками капилляров). Положительно заряженные частицы будут притягиваться отрицательным зарядом стенок капилляров и оседать на них. [c.189]

Работа 64. Разделение смеси алкалоидов методом электрофореза на бумаге [c.231]

Электрофорез на бумаге. Прибор Тизелиуса очень сложен. В последнее время широкое распространение для исследования белков получил другой метод, предложенный также Тизелиусом, но осуществляемый проще. Это метод электрофореза на бумаге. [c.210]

Методом электрофореза на бумаге можно не только исследовать состав смесей высокомолекулярных веществ, но и выделить отдельные компоненты. С этой целью полоску бумаги, не прогревая, разрезают на части и из них экстрагируют отдельные, уже разделенные компоненты. Теория этого метода, при котором существенную роль играют поверхностные и адсорбционные явления, еще мало разработана. [c.210]

Электрокинетические явления находят практическое применение. Так, с помощью электрофореза проводят формование различных изделий из тонких взвесей с последующим их спеканием. Метод электрофореза щироко применяют для разделения, выделения и исследования биоколлоидов, особенно белков. Простой его вариант, называемый электрофорезом на бумаге, состоит в том, что нанесенное на полоску бумаги пятно исследуемой смеси белков разделяется на компоненты по величине их заряда, а следовательно, и скорости движения в поле постоянного электрического тока. Этим методом исследуют качественный и количественный состав белков крови и других биологических жидкостей. [c.308]

Метод электрофореза на носителе во многом подобен методу хроматографии. Камера для электрофореза состоит из трех частей, двух электродных сосудов и расположенной выше подставки для носителя, например бумаги. Камеры должны быть плотно закрыты для предотвращения испарения растворителя. Носитель укладывают горизонтально, уровень растворителей в обеих электродных камерах должен быть одинаковым. Электроды, платиновый или графитовый, встроены в диафрагму. Вещество наносят на носитель в виде точек или полос. Место нанесения пробы зависит от предполагаемого направления движения. При движении разделяемых, веществ к аноду пробу наносят на катодную сторону, и наоборот. Для количественной и качественной оценки процесса разделения (проявление вещества и т. д.) применяют методы, используемые в бумажной хроматографии. [c.387]

Для разделения катионов методом электрофореза на бумаге необходимо, чтобы неорганические ионы имели различную подвижность в электрическом поле. Бумагу пропитывают электролитом НС1 и в центр ее помещают каплю анализируемого раствора. Бумагу закрепляют между двумя стеклянными пластинками, а концы ее опускают в кюветы с раствором электролита, в который опущены электроды, подключенные к источнику постоянного тока. Под действием электрического поля происходит перемещение катионов по бумаге с различными скоростями. Катионы, образующие хлоридные комплексные ионы (Сц2+, d +), перемещаются к аноду, а катионы, не образующие таких ионов (Hg2+, Bi +),— к катоду. [c.126]

Работа 8. Разделение растворимых белков саркоплазмы методом электрофореза на бумаге [114] [c.127]

Для определения относительного содержания отдельных белков в саркоплазме используют метод электрофореза на бумаге. Разделение белков основано на различии в подвижности ионов белковых молекул в электрическом поле. Скорость перемещения молекул пропорциональна величине их свободного заряда. Величина заряда молекул различных белков саркоплазмы неодинакова, а поэтому и скорость их перемещения в электрическом поле тоже разная, что дает возможность разделить белки плазмы на несколько фракций. [c.127]

МЕТОДОМ. ЭЛЕКТРОФОРЕЗА НА БУМАГЕ [c.147]

Предполагалось, что дикетопиперазины вкраплены в пептидную цепь и разделяют ее на небольшие отрезки. Переломным и решаюш им явился 1941 г., когда Гордон, Мартин и Синдж предложили применять для разделения продуктов гидролиза белков метод хроматографии на бумаге. Появившиеся вслед затем методы электрофореза, противоточного распределения и метод ионообменных смол позволили исследователям получить необходимый для обоснования теории строения белка экспериментальный материал. [c.521]

Разделение методом электрофореза на бумаге [c.150]

Рис. 50. Разделение Ре(П1) (2), Со(П) (2), Сг(П1) (5) и Мп(П) 4) методом электрофореза на бумаге Ватман ЗММ [799]

Отделение марганца от других элементов методом электрофореза на бумаге [c.151]

Электрофорез с последующим хроматографированием осуществляется следующим образом. Хроматографическую бумагу пропитывают раствором какого-либо летучего электролита, например, уксусной кислотой, наносят каплю анализируемой смеси и проводят электрофорез, подключая бумагу через электроды к источнику постоянного тока. После окончания электрофореза бумагу вынимают из прибора, сушат и переносят в камеру для хроматографирования по методу восходящей или нисходящей хроматографии. Обработка хроматограммы после окончания хроматографирования ничем не отличается от обычной. Метод раздельного электрофореза и хроматографирования позволяет производить эти две операции при различных значениях pH, что существенно увеличивает возможности разделения. [c.258]

Вариант этого метода на бумаге известен под названием вертикального электрофореза. [c.146]

Метод пептидных карт представляет собой сочетание бумажной и тонкослойной хроматографии с высоковольтным электрофорезом. В качестве носителей используют силикагель или порошок целлюлозы. Вначале проводят хроматографию, для чего пробу наносят в точку вблизи одной стороны бумаги или пластинки, а затем под углом 90° проводят высоковольтный электрофорез. Метод применяют для разделения смеси низкомолекулярных соединений. [c.149]

Смесь аминокислот может быть успещно разделена также методом электрофореза на бумаге. При pH 6,0 возможно хорощее разделение кислых и основных аминокислот с нейтральными. В этом случае отрицательно заряженные (кислые) аминокислоты будут двигаться к аноду, а положительно заряженные —к катоду. Нейтральные аминокислоты остаются на линии старта. [c.43]

В сыворотке крови здорового человека при электрофорезе на бумаге можно обнаружить 5 фракций альбумины, О -, а,-, 3-, у-глобулины. Методом электрофореза в агаровом геле в сыворотке крови выделяют 7— 8 фракций, а при электрофорезе в крахмальном или полиакриламидном геле—до 16—17 фракций. Следует помнить, что терминология белковых фракций, получаемых при различных видах электрофореза, еще окончательно не установилась. При изменении условий электрофореза, а также при электрофорезе в различных средах (например, в крахмальном или полиакриламидном геле) скорость миграции и, следовательно, порядок белковых зон могут меняться. [c.569]

Существуют два различных метода электрофореза фронтальный электрофорез, который проводят в свободной незакрепленной среде, и зональный электрофорез — в закрепленной среде (стабилизированная жидкость или носители). Они имеют единую аппаратурную схему источник тока, камеру для электрофореза, два электрода, соединяющих камеру с источником тока, и аппаратуру для сбора и идентификации разделенных веществ. Для электрофореза используют как готовые наборы аппаратуры (универсальный прибор для иммуноэлектрофореза и электрофореза белков на бумаге и крахмале, набор для электрофореза в полиакриламидном геле венгерской фирмы Реанал ), так и наборы, составляемые экспериментатором из отдельных приборов (универсальный источник питания УИП-1, двухлучевой регистрирующий микрофотометр ИФО-451 и др.). [c.144]

Боратный буфер используют и для электрофореза полисахаридов на бумаге , но в этом случае возникают трудности, связанньГе с обнаружением полисахаридов на бумаге и с сильным взаимодействием разделяемых полисахаридов с целлюлозой. Для преодоления этих трудностей в качестве носителя при электрофорезе была предложена бумага из стекло-Еолокна . Электролитом в этом случае служит 2 н. раствор едкого натра, а лля обнаружения полисахаридов могут быть использованы такие реагенты, как реактив Молиша или щелочкой раствор перманганата калия. С помощью этого метода была установлена гетерогенность многих препаратов полисахаридов, например аравийской и трагакантовой камедей, ряда галакто- и глюкоманнанов и пентозанов. Препаративный вариант этого метода — электрофорез на колонке со стеклянным порошком — был успешно использован при выделении сложного гетерополисахарида из одноклеточной зеленой водоросли hlorella pyrenoidosa . [c.487]

Разделение методом электрофореза основано на различии в скоростях передвижения ионов в растворе под действием электрического поля. В большинстве современных способов электрофорез осушествляется в пропитанных растворителем-электролитом наполнителях, в качестве которых используют фильтровальную бумагу (метод электрофореза на бумаге), стеклянное волокно, агар-агар и другие инертные по отношению к электролитам материалы. В зависимости от того в какой химической форме находится изотоп в растворе, он будет под действием поля перемешаться с той или иной скоростью к катоду или к аноду или останется на месте. Применение комплексообразователей позволяет в ряде случаев существенно улучшить возможность разделения, поскольку таким способом можно одновременно изменить и скорость перемещения ионов и направление их движения. Например, методом электрофореза на бумаге в растворах ЭДТУ определенной концентрации удается за 45 сек разделить смесь изотопов Се, Рг и [c.198]

Электрофорез на бумаге как метод разделения фенолов не имеет каких-либо существенных преимуществ по сравнению с бумажной хроматографией, но к нему можно прибегнуть в тех случаях, когда анализируемые соединения не удается разделить с помощью других хроматографических методов. Электрофорез на бумаге позволяет установить, присутствует ли в данном феноле диоксибензольная группировка, и имеет важное значение в анализе бетацианов — единственной группы фенольных соединений, разделение которых предпочтительнее проводить при помощи электрофореза на бумаге, а не бумажной хроматографии. [c.252]

Несмотря на то что применение электрофореза для разделения высокомолекулярных комплексов имеет ряд ограничений как в теоретическом аспекте, так и в отношении возмоишости точного предсказания получаемых в этом случае результатов, суш,ествует несколько электрофоретических методов, очень удобных для разделения вирусов. Классический метод электрофореза с подвижной границей в значительной степени вытеснен зонным электрофорезом. Часто применяют электрофорез на фильтровальной бумаге, смоченной подходяш,им буфером. Однако электрофорез в крахмальном или ацетатно-целлюлозном гелях имеет преимущества перед электрофорезом на бумаге. В настоящее время предпочтение часто отдают электрофорезу в полиакриламидном геле, однако этот метод применим, вероятно, только для мелких вирусов (см. гл. IV, разд. В). [c.43]

Электрокинетические явлеиия находят практическое применение. Так, с помощью электрофореза проводят формование различных изделий из тонких взвесей с последующим их спеканием. Метод электрофореза широко применяют для разделения, выделения и исследования биоколлоидов, особенно белков. Простой его вариант, называемый электрофорезом на бумаге, состоит в том, что нанесенное на полоску бумаги пятно исследуемой смеси белков [c.331]

Широкие возможности макроэлектрофореза привели к появлению еще одного метода — электрофореза на бумаге, который хотя [c.157]

Фракционирование белков сыворотки крови на КМ-целлюлозе осуществляют с помощью ступенчатого элюирования, подавая на колонку последовательно следующие растворы 0,02 М натрий-ацетатный буфер, pH 4,6 ( стартовый буфер), затем 0,05 М натрий-ацетатный буфер, pH 5,2 0,08 М натрий-ацетатный буфер, pH 6,0 0,1 М фосфатный буфер, pH 7,0 и, наконец, 0,1 М фосфатный буфер, содержащий 0,5 М Na l, pH 8,3. Каждый новый раствор подают на колонку только после того, как полностью элюируется пик, вымываемый предыдущим раствором. Скорость тока приблизительно составляет 50 мл/ч. Элюат собирают порциями по 2—3 мл. Обработку результатов см. на с. 108. Идентификацию белков осуществляют методом электрофореза на бумаге или в полиакриламидном геле (с. 112). Регенерацию КМ-целлюлозы проводят вне колонки. [c.113]

Аминокислоты в растворе находятся в виде цвиттерионов. Их заряд, определяемый степенью диссоциации карбоксильных, аминогрупп и боковых радикалов, зависит от pH раствора. Используя метод электрофореза на бумаге, удается провести разделение определенных групп аминокислот. Сложные смеси аминокислот могут быть разделены с помощью электрофорезов, проводимых при разных значениях pH во взаимноперпендикулярных направлениях или комбинацией электрофореза и хроматографии. [c.137]

Цианокобаламин имеет полиамидный характер, что установлено по выделению аммиака (6 молей) при кислом гидролизе [11, 27, 88] и данным инфракрасного спектра. При анализе продуктов гидролиза цианокобаламина в кислых, нейтральных и щелочных растворах эф ктивно применен метод электрофореза и хроматографического разделения. Электрофорез на бумаге при pH 6,5 и 10 позволил разделить продукты расщепления на отдельные соединения по их ионным зарядам. Ступенчатый гидролиз в холодной разбавленной соляной кислоте показывает присутствие трех амидных групп, относящихся, по-видимому, к боковым цепям пропионовых кислот. Получены три одно-, три двух-, одна трех- и одна четырехосновная кислоты, содержащие нуклеотидную часть молекулы витамина эти кислоты были превращены с хлоругольным эфиром в смешанные ангидриды и затем с аммиаком в цианокобаламин [27]. [c.587]

Ледерер [990] исследовал миграцию многих неорганических ионов методом электрофореза на бумаге. При проведении электрофореза в течение 1 часа в 2 %-ном растворе (N114)2003 при напряжении 150 е найдены значения подвижности В/ (в мм) для следующих анионов борат (33), арсенат (61), фосфат (59), нитрат (83), хлорат (26), бромат (67), хлорид (80), иодат (50), роданид (64), сульфат (78), селенит (60), теллурат (38), пертехнетаТ (59), перренат (59). [c.182]

В работах [582, 690] осуществлено отделение рения, от технеция методом электрофореза на бумаге в растворах НС1 и НВг в присутствии Sn l2 и сульфата гидразина. [c.182]