Флуоресцентная эмиссия

Изучают влияние НАД, пирувата и АДФ на флуоресценцию аурамина О, связанного с ЛДГ. Для этого вначале снимают спектр флуоресценции раствора, содержащего 0,04 мМ апо-ЛДГ и 0,15 мМ аурамина О в 0,1 М К-фосфатном буфере (pH 7,0), содержащем 5 мМ ЭДТА, а затем добавляют к пробе лиганды в следующих конечных концентрациях 6 мМ НАД, 6 мМ пируват, 9 мМ АДФ. Регистрируют увеличение флуоресценции комплекса аурамина О с ЛДГ под действием использованных соединений. Ставят контроль, в котором учитывают влияние добавок на флуоресценцию зонда в отсутствие белка. Рост интенсивности эмиссии связанного с белком аурамина О может быть обусловлен либо увеличением его количества, либо изменением флуоресцентных характеристик зонда. В любом случае увеличение флуоресценции зонда при связывании лигандов в активном центре свидетельствует о конформационной перестройке участков моле- [c.343]

Рис.. VII. 14. Возбуждение флуоресцентных спектров Л—возбуждение В—уменьшение колебательно-вращательной энергии из-за ударов С —флуоресцентная эмиссия.

Высокая характеристичность флуоресцентных спектров, проявляемая индолами, служит основой нескольких методов их идентификации и анализа [13]. Эти методы особенно пригодны для биологически важных молекул, так как они обладают большей чувствительностью, чем УФ-спектральная техника, и часто позволяют обнаруживать субмикрограммовые количества веществ. В водном растворе сам индол имеет максимум флуоресцентного возбуждения при 287 нм и максимум эмиссии прп 355 н, с квантовой эффективностью 46% [14]. Хотя первый максимум относительно мало чувствителен к природе растворителя, второй максимум заметно изменяется при уменьшении полярности, изменяясь до 297 нм в циклогексане. Заместители в молекуле индола также оказывают значительное влияние на положение максимумов, что используется для корреляции в структурных исследованиях. Например, изменение в ионизации а-аминокислотной функции триптофана с изменением pH отражается в изменении спектра [c.493]

Схема, приведенная на рис. 7, осуществляет детектирование изменений поглошения. На рис. 9 показано, каким образом с помощью флуоресценции можно следить за релаксацией. Хотя коническая линза дает световые пучки с лучшей геометрией, на рис. 9 показана простая линза, служащая для оптимизации геометрии двух различных потоков возбуждающего флуоресценцию и появляющегося в е-зультате флуоресцентной эмиссии. Как следует из рис. 9, геометрия возбуждающего и эмиссионного пучков принципиально различна. [c.385]

Выбор наиболее подходящей длины волны источника возбуждения определяется несколькими соображениями. Излучение должно испускаться источником с достаточной интенсивностью и сильно поглощаться образцом. Его требуется также легко отделять (например, с помощью фильтров) от флуоресцентной эмиссии. В большинстве флуоресцирующих растворов содержатся коллоидные частички, которые вызывают рассеяние падающего света, поэтому длина волны возбуждающего излучения должна быть короче, чем длина волны вторичного излучения по крайней мере на 50 нм. [c.107]

Флуоресцентная эмиссия рентгеновских лучей дает аналитику одно из наиболее мощных средств обнаружения и количественного определения тяжелых элементов почти в любой матрице [c.239]

До сих пор мало внимания уделялось разработке анализаторов неорганических загрязняющих веществ в воздухе, основанных на измерении атомной или молекулярной флуоресцентной эмиссии. Известны различные реакции между органическими и неорганическими веществами, которые могли быть исследованы с точки зрения их применения для анализа следовых количеств загрязняющих веществ в воздухе методом молекулярной флуоресценции. Однако многие из этих реакций чувствительны к процессам гашения, особенно в водном растворе [64]. [c.604]

Фотоэлектрическое поглощение рентгеновского излучения мертвым слоем кремния приводит к эмиссии 5 /С-рентгеновско-го излучения из этого слоя в активный объем детектора. Это рентгеновское излучение кремния, которое не идет от образца, появляется в спектре в виде небольшого пика кремния, так называемого пика внутренней флуоресценции кремн Ия. Пример такого эффекта показан на спектре чистого углерода (рис. 5.26), в котором имеется также заметный край поглощения кремния. Для различных случаев количественного анализа интенсивность этого флуоресцентного типа соответствует кажущейся концентрации в 0,2 вес. % или меньше 51 в образце. [c.223]

Флавонолы представляют собой соединения несимметричного строения, спектры поглощения которых можно с удовлетворительной точностью рассчитать методами квантовой механики. Флуоресцентные свойства соединения спрогнозировать значительно сложнее, особенно в случае длинноволнового диапазона эмиссии. Здесь известно лишь, что для повышения квантового выхода следует уменьшить количество степеней свободы молекулы [7]. Увеличение дипольного момента хромофора [c.387]

Если 1/Ь пренебрежимо мало по сравнению с 1/а, то k = aV и Fa —V/a. Таким образом, в данном случае Fa составляет 10 В/см. Эта очень высокая напряженность поля эквивалентна 10 В/А. Ее достаточно для того, чтобы вытянуть электроны из металла и затем направить их с ускорением по радиальным линиям к флуоресцентному экрану. Центрами эмиссии здесь служат отдельные атомы. Различные грани кристалла сильно отличаются по эмиссионной способности, так как она зависит от плотности упаковки и работы выхода. Поскольку коэффициент усиления Ь/а очень велик (порядка 10 ), то, казалось бы, на экране можно увидеть отдельные атомы. На практике, однако, разрешение ограничивается кинетической энергией движения электронов в металле под прямыми углами к направлению эмиссии и достигаемое разрешение составляет около 30—50 А. Тем не менее в электронном микроскопе видны удивительные картины различные кристаллические плоскости, [c.231]

Методы получения свободных атомов для элементного анализа при использовании ультрафиолетового и видимого излучения весьма разнообразны, но во всех случаях среда, в которой образуются атомы, должна обладать большой энергией, чтобы высвобождающиеся атомы в заметной степени возбуждались. Поэтому устройства для получения атомов служат не только как атомизаторы, но иногда и как источники возбуждения. Обычно электрические атомизирующие устройства (дуга или искра) более высокотемпературные, чем термические атомизирующие устройства (пламя), поэтому в первых число возбужденных атомов больше. Вследствие этого дугу или искру почти всегда используют в качестве атомизатора и источника возбуждения для измерения атомной эмиссии. Пламена используют в основном в качестве атомизаторов для эмиссионной, абсорбционной и флуоресцентной спектрометрии. [c.678]

Атомно-флуоресцентным методом определяется значительно меньшее число элементов, чем методами атомной абсорбции и обычной эмиссии в пламени. Это объясняется большей специфичностью механизма атомной флуоресценции. Кроме того, этот метод, в отличие от метода атомной абсорбции, применим для [c.213]

В качестве источника света используются 4-ваттные ртутные лампы низкого давления некоторые из них, с флуоресцентным покрытием, позволяют выделять первичный свет в диапазоне длин волн от 254 до 560 нм. Обычно для всех флуоресцентных измерений используют только эмиссию, при 366 нм, а для метода гашения — линию при 254 нм. [c.109]

Спектральные помехи. По причинам, которые будут объяснены ниже, спектральные помехи более характерны для пламенно-эмиссионной спектрометрии, чем для атомно-абсорбционной и атомно-флуоресцентной пламенной спектрометрии. С одной из спектральных помех сталкиваются при пламенно-эмиссионном определении бария в присутствии больших количеств кальция. Наиболее чувствительная эмисси- [c.686]

Для флуоресценции состояние, из которого происходит эмиссия, также является синглетным, как и основное. В благоприятных случаях можно подобрать такой интервал волновых чисел возбуждаемого света, для которого все участвующие переходы будут иметь одинаковое направление моментов т. Аналогично возможно найти такой интервал волновых чисел флуоресцентного излучения, когда все участвующие переходы опять будут иметь одинаково направленные моменты т, которые могут отличаться от га. При сделанных допущениях, зная анизотропию флуорес- [c.309]

Для изучения влияния света на образование фенолов пригодно большинство источников световой энергии. Ветров и Ветров [12] подробно описали принципы и соответствующие приемы использования световой энергии при решении биологических проблем. Обычная флуоресцирующая лампа дневного света имеет два преимущества при изучении биосинтеза фенолов. Спектральная эмиссия флуоресцентной лампы в области более 700 ммк очень низка, поэтому она очень удобна в качестве источника волн длиной от 400 до 675 ммк. Доступны теперь и сильно излучающие флуоресцентные лампы, использование которых позволяет проводить исследования при излучении, равном около 3—полной интенсивности света. Спектральная эмиссия нити лампы накаливания максимальна в красной и ближней инфракрасной области спектра. Сильное тепловое излучение лампы накаливания можно уменьшить, используя фильтры из сернокислой меди или воды. Если необходимо очень сильное освещение, можно проводить исследования на открытом солнечном свету. [c.341]

Атомно-флуоресцентная спектрометрия, атомно-флуоресцентный анализ — определение концентрации примесных атомов в исследуемом растворе. Пробу переводят в атомное состояние (пламя). Излучение от внешнего источника поглощается, атомы возбуждаются. Часть возбужденных атомов флуоресцирует. Измеряют интенсивность флуоресценции. Область возбуждения и излучаемый спектр флуоресценции находятся в оптической части спектра. Если возбуждение и эмиссия флуоресценции охватывают рентгеновскую область, то это метод рентгенофлуоресцентного анализа [14, 62]. [c.17]

Во многих случаях возбужденная молекула может передать свою энергию окружающей среде в виде эмиссии света (стр. 426). Флуоресцентное излучение вследствие частичной потери энергии возбужденными молекулами расположено в более длинноволновой области по сравнению со спектром поглощения. Флуоресценция характерна для органических молекул с жесткой структурой, полициклических ароматических или гетероциклических молекул, но едва ли здесь можно говорить о каком-то строгом правиле [822]. Однако можно утверждать, что если хелат флуоресцирует, то в большей или меньшей степени это справедливо и для хелатообразующего реагента. [c.153]

Метод отличается исключительно высокой чувствительностью— порядка 10- —10 7 моль/л и чаще всего используется для определения низких концентраций ионов металлов, связанных в форме, подходящих флуоресцирующих комплексов, а также для определения некоторых органически веществ типа рибофлавина, витаминов группы В, алкалоидов и др. Так, комплексы 8-оксихинолина с рядом таких ионов металлов, как А1 , Оа +, Мд +, используются для ояределения этих ионов при концентрациях, достигающих 0,01 мкг/мл. Алюминий определяется при помощи флуоресцентных методов с 8-оксихинолином, морином или понтахромом сине-черным Р при содержании от Ы0- до 1% в различных сплавах и минералах. Флуоресцентный метод можно использовать не только для анализа растворов, но и для анализа веществ в твердой фазе. Так, уран в абсолютных количествах порядка Г-10- г можно определить при помощи-сплавления исследуемого вещества с бо-раксом или фторидом натрия до маленьких бусинок, облучения бусинок ультрафиолетовым светом и измерения вторичной эмиссии в видимой области спектра. . [c.399]

РИС. 8.13. Измерение флуоресценции в стационарных условиях. А. Схематическое изображение флуоресцентного спектрометра. М — монохроматор возбуждения, — монохроматор эмиссии, Ь — источник света, РМ — фотоумножитель, 8 — образец. Б. Изображение кюветного отделения в увеличенном виде, иллюстрирующее эффект внутреннего фильтра. [c.90]

Чтобы присутствующие в пробе эндогенные флуоресцентные гасители не мешали определению, их длины волн возбуждения и эмиссии должны отличаться от длин волн флуоресцентной метки. Кроме того, для снижения влияния рассеяния света метка должна иметь большой стоксов сдвиг (табл. 10.2). [c.142]

При исследовании пленок на поверхностях твердых тел довольно широко используется инфракрасная спектроскопия (см. разд. XIII-4A). Однако к монослоя М на жидких подложках этот метод применить очень трудно. В то же время на растянутых монослоях можно измерять флуоресцентную эмиссию. Соответствующая аппаратура описана в работах Твита и др. [69] и Троснера и др. [70], изучавших методом флуорес- [c.107]

Рис. 2, Химическая релаксация системы малатдегидрогеназа + восстановленный дифосфопиридиннук-леотид, измеренная с помощью флуоресцентной эмиссии [1Ш.

Атомно-флуоресцентная спектроскопия (АФС) То же, плюс специальное оптическое и электронное устррйство , высокоинтенсивные ЛПК или безэлек-тродные разрядные лампы с возбуждением в микроволновой области недисперсионные системы, использующие в качестве детекторов ФЭУ с солнечными экранами. 35000 (АФ-спектрофотометр + компьютер иНЗ МУ) Элементы с флуоресцентной эмиссией в области 1,8— 3,5-10 м с меньшими пределами обнаружения для Ае, Аз, Аи, В, В1, Се, d, Со, Си, Ре, Ое, Мп, Мо, N1, РЬ, 5Ь, 5с, 8е, Те, Т1, Ш, 2п (всего 22 элемента) [c.594]

Гетерог. фон связан с генерированием аналит. сигнала (напр., вследствие рассеяния электронов, флуоресцентного возбуждения) в соседней с анализируемой фазе. Величина сигнала - ф-ция расстояния от границы между фазами. Наиб высокие систематич. погрешности могут возникать, если концентрация определяемого элемента в соседней фазе существенно больше, чем в анализируемой Фазовая интенсивность обусловлена резким измененнем аналит. сигнала в соседних фазах (слоях), к-рое возникает вследствие различия в специфич. эмиссионных характеристиках этих фаз (как, напр., в случае реакц. эмиссии вторичных ионов) и не зависит от содержания определяемого элемента в них. Систематич погрешности при этом устраняют расчетными или эксперим. приемами. [c.610]

Качественный анализ с помощью РФС в принципе очень прост и основан на точном измерении энергии или длины волны наблюдаемых флуоресцентных линий. Так как спектрометры РФСВД работают последовательно, необходимо проводить сканирование 20. Идентификация следов элементов может осложняться наличием отражений более высокого порядка или сателлитных линий основных элементов. В РФС с энергетической дисперсией полный рентгеновский спектр может быть получен одновременно. Идентификация пиков, однако, затруднена из-за более низкого разрешения спектрометра с ЭД. Программное обеспечение для качественного анализа помогает спектроскописту, показьшая маркеры KLM на спектре. Маркеры KLM показывают теоретическое положение К-, L- и М-линий элемента как вертикальные линии. Когда эти линии совпадают с наблюдаемыми максимумами пиков в спектре, элемент идентифицируют положительно (как это принято в атомной эмиссии). [c.83]

Флуоресцентный a aлиз основан на вторичной эмиссии с меньшей частотой (большей длиной волны), которая наблюдается в некоторых случаях при возбуждении молекул данного вещества фотонами с определенной длиной волны, чаще в ультрафиолетовой области спектра (см. гл. VII). Интенсивность вторичной эмиссии при других пЪстоянных условиях зависит от концентрации возбужденного вещества, но связь между этими величинами является линейной только в сравнительно узкой области низких. концентраций. Это заставляет обычно работать при [c.398]

Как уже отмечалось, атомно-флуоресцентная пламенная спектрометрия является чрезвычайно чувствительным аналитическим методом. Некоторые пределы обнаружения элементов, приведенные в табл. 20-2, показывают, что этот метод для количественного определения многих элементов более чувствителен, чем атомно-абсорбционная и пламенно-эмиссионная спектрометрия (см. рис. 20-15, с. 700). Такая высокая ч в-ствительность является результатом совмещения в этом методе преимуществ, присущих атомно-абсорбционной и пламенно-эмиссионной спектрометрии. Атомная флуоресценция, подобно атомной эмиссии, обнаруживается путем измерения искомого излучения относительно низкого фонового излучения. Однако подобно атомной абсорбции, атомная флоуресценция основывается не только на энергии пламени для возбуждения атомов, а использует более мощный дополнительный источник возбуждения. [c.703]

Любой атом или молекула, поглотивщие лучистую энергию, теоретически способны к флуоресценции, т. е. к эмиссии излучения. Но большинство веществ заметно не флуоресцирует пp.i освещении. Если вещество поглотило лучистую энергию и не испустило ее обратно в виде флуоресцентного излучения, это означает, что фотохимическая энергия рассеяна каким-либо другим путем. Активированный атом может потерять энергию только при двух процессах а) путем флуоресценции и б) путем передачи энергии другой частице, с которой он сталкивается (а) Л- -> А + Л - (б) А - -гХ А-гХ-. [c.122]

В начале главы I была показана связь между атомной эмиссией, абсорбцией и флуоресценцией. Явление атомной флуоресценции было исследовано Вудом еще в начале нашего века, а Вайнфорднер [125] первым использовал его для химического анализа. Свет от интенсивного источника резонансного излучения исследуемого элемента фокусируется в пламени. Пучок флуоресцентного излучения наблюдают под углом 90° к направлению пучка света от источника и пропускают через монохроматор к фотоприемнику. Теоретически этот сигнал пропорционален концентрации атомов элемента в пламени. Чтобы отличить сигнал флуоресценции от излучения той же длины волны, вызванного термическим возбуждением атомов в пламени, свет источника модулируется, и электронная схема детектора настраивается на частоту модуляции. Необходимо также отличать сигнал флуоресценции от света, который рассеивается пламенем. В некоторых случаях это осуществляется путем освещения пламени светом такой длины волны, которая возбуждает атомы до более высокого энергетического уровня, и наблюдением флуоресценции на другой длине волны, излучаемой возбужденными атомами при переходе на метастабильные уровни. [c.51]

Техника ядерной резонансной флуоресценции начинает разрешать вопрос о том, как замедляются атомы в жидких и твердых телах. Предположим, что ядро испускает у луч, энергия которого равна разности ядерных уровней минус энергия отдачи ядра. Эта потеря энергии на отдачу смеш,ает у Луч до энергии, слишком низкой для осуш,ествления ядерной резонансной флуоресценции при взаимодействии у-луча с поглотителем — идентичным ядром. Однако, если ядро, испускающее у-луч, движется по направлению к поглотителю благодаря предыдущей или у Эмиссии, допплеровское смещение может компенсировать потерю на отдачу, и происходит флуоресценция. Такие измерения флуоресцентного выхода для излучателей в различной окружающей обстановке в соединении со знанием времени жизни возбужденного состояния нри у-раснаде могут дать информацию о протекании процесса замедления [91]. [c.123]

Чувствительным и специфичным способом элементного качественного анализа является рентгеновская спектроскопия, которую точнее следует называть рентгеновским флуоресцентным анализом. Она основана на возбуждении электронов внутренних оболочек атомов и последующей эмиссии характеристического рентгеновского излучения вследствие электронных переходов между указанными оболочками эта эмиссия и является собственно рентгеновской флуоренценцией. [c.198]

По первому направлению в последние годы интенсивно ведутся работы в области атомно-флуоресцентных методов, обеспечивающих пбвышение чувствительности на 1—2 порядка (с использованием перестраиваемых лазеров), развивается метод внутрирезона-торной лазерной спектроскопии, некоторые варианты СА в эмиссии и поглощении с использованием лазеров. Интересны варианты атомной резонансной флуоресценции без спектрального разложения. [c.10]

Рассмотренные выше флуктуации в пламени также имеют большое влияние на пределы обнаруженпя метода пламенной эмиссии, и поэтому естественно, что эти два метода пмеют сравнимые пределы обнаружения. Ркпользование менее шумящих атомизаторов, таких, как печи и распылительные камеры, значительно улучшает пределы обнаружения атомно-флуоресцентного анализа с возбуждение.м непрерывным лазеро.м. [c.576]

Освещают гель в течение 20 мин в блоке флуоресцентной лампой 160 Вт, модель Т-12 (фирма Aristo Grid Produ ts) с интенсивностью эмиссии, эквивалентной эмиссии вольфрамового источника света мощностью 500 Вт. [c.306]

Большие молекулы и при эмиссии частично сохраняют ту же молекулярную о жентацию, которую они имели при поглощении света, поэтому их флуоресценция поляризована. Если такие молекулы ассоциированы в молекулярный комплекс, то степень поляризации флуоресценции возрастает. Так как в поляризации флуоресценции важную роль играют размер и форма молекул, то это явление особенно полезно при контроле реакций антиген-антитело. Как показано на рис. 10.1, когда маленькая молекула антигена, меченного флуоресцентной меткой, образует комплекс с большой молекулой антитела, то вращение флуоресцентной метки замедляется и поляризация флуоресценции возрастает. [c.141]

Это принципиально новый тип иммуноанализа. Чувствительность большинства описанных методов флуоресцентного иммуноанализа не позволяет определять вещества в концентрациях менее 1 нг/мл. Чувствительность флуоресцентных методов иммуноанализа можно повысить, если использовать в качестве меток комплексы хелатов некоторых лантанидов (например, европия или тербия), время затухания флуоресценции которых на шесть порядков превышает врёмя затухания флуоресценции обычных меток [5, 6 ]. Следовательно, с помоп ью уориметра с временным разрешением эмиссию комплексов европия можно измерять независимо от фоновой флуоресценции, обладающей небольшим временем затухания [7-10]. [c.154]