Лейцин, определение методом

С помощью бумажной распределительной хроматографии легко разделить аминокислоты и определить их в смеси. Этот метод основан на том, что органический растворитель, перемещаясь вдоль полос хроматографической (фильтровальной) бумаги, увлекает за собой растворенные в нем аминокислоты. Каждая аминокислота в своем движении достигает определенного уровня. Этот уровень характеризуется коэ ициентом / /, который является отношением расстояния от середины пятна до места нанесения раствора к состоянию расположения фронта растворителя, например, / / лейцина равен [c.26]

Наиболее общим методом определения концентрации пептидов является колориметрия продуктов реакции с нингидрином [2]. Это один из наиболее чувствительных колориметрических методов. Для обнаружения аминокислот и пептидов разработаны как обычный, так и полностью автоматизированный варианты, причем нингидриновый реагент не вызывает коррозии и его можно подавать обычным микронасосом. Реакция идет по свободным аминогруппам, но в некоторых случаях хромофор образуется с низким выходом. Данные по окрашиванию дипептидов можно найти в работе [3]. У всех дипептидов, содержащих в качестве Ы-концевой аминокислоты аргинин, треонин, серин, глутаминовую кислоту, глицин, фенилаланин, метионин, лейцин и тирозин, интенсивность окраски составляет 1,6-10 у лейцина эта величина составляет 1,7-10 . У дипептидов с М-концевым лизином и аспарагиновой кислотой интенсивность окраски несколько выше (на 20 и 29% соответственно), а дипептиды с Ы-концевым гистидином и триптофаном проявляются несколько слабее (42 и 67% соответственно от средней интенсивности). Дипептиды с М-концевым пролином, валином и изолейцином окрашиваются очень слабо [2,7 6,4 и 8,5% от средней (1,6- 10 ) интенсивности]. [c.391]

В то время как для определения основных, ароматических и серусодержащих аминокислот имеется ряд удовлетворительных методов (см. гл.- I, II, III) и для треонина разработан сравнительно простой и точный способ окисления, для определения лейцинов предложено лишь несколько трудно выполнимых методов, которые оставляют желать много лучшего. [c.275]

Метод. 1) Определение валина в отсутствие лейцина. [c.282]

Определенные объемы смеси дезаминируют и окисляют по обоим методам — под давлением и прямым . Затем, зная коэфициенты окисления из ряда контрольных опытов на валине и лейцине порознь, можно вычислить из содержания ацетона в отгоне количество лейцина н валина в смеси. [c.283]

Принцип метода. Смесь аминокислот дезаминируют азотистой кислотой и определенные объемы полученной смеси оксикислот окисляют хроматом или перманганатом. Содержание лейцина и валина рассчитывают из выходов ацетона после окисления СгОз [c.283]

Точность метода определения лейцина и валина могла бы значительно возрасти, если эти две аминокислоты удалось бы разделить перед окислением одним из приемов, описанных в этой главе. [c.289]

Этот метод обычно используется для количественного определения аминокислот методом жидкостной хроматографии. Вместе с тем полученные из аминокислот альдегиды могут быть определены и методом ГЖХ [110—113]. Однако имеются сведения о том, что глицин окисляется нингидрином до формальдегида, который в условиях газохроматографического анализа полимеризуется 1114], а альдегиды, полученные из фенилаланина и метионина, обладают низкой летучестью [115]. При окислении нингидрином валина, лейцина, изо лейцина, аланина были получены соответственно изомасляный альдегид, 3-метилбутанол, 2-метилбутанол и ацетальдегид [110 . [c.41]

Определение валина, лейцина и изолейцина. При действии нингидрина на эти аминокислоты (И), (П1) и (IV) также образуются летучие альдегиды, которые можно определить, как описано выше [76]. Количество каждой из трех указанных аминокислот можно определить также микробиологическим методом [64, 77]. Лейцин, в связи с его плохой растворимостью, можно определить методом изотопного разведения [61]. [c.36]

Разработаны хроматографические количественные методы определения лейцина, валина, пролина, аланина, лизина в белковых материалах с применением нерасслаивающейся системы растворителя (н-бутиловый спирт -вода—уксусная кислота в отношен 1и 3 2 1). [c.103]

Боннер и сотр. [ 95] сравнили точность и воспроизводимость метода газовой хроматографии для определения энантиомерного состава лейцина. Метод оказался достаточно точным (абсолютная ошибка 0,03 - 0,7%) и воспроизводимым (стандартное отклонение [c.104]

Задача 37.15. Реакция первичных алифатических аминов с азотистой кислотой приводит к количественному выделению азота в виде газа, что является основой метода определения аминного азота по Ван-Слайку. Какой объем азота (при нормальных условиях) выделится при обработке 0,001 моля следующих аминокислот а) лейцина б) лизина в) проли-на [c.1045]

Рис. 8.3. Определение оптической чистоты энантиомеров лейцина (в виде N-ТФА-метиловых эфиров) методом капиллярной ГХ на колонках hirasil-Val с фазами противоположной хиральности (с разрешения B.Koppenhoefer, университет г. Тюбинген, ФРГ).

Уменьшение количеств белков и пептидов, необходимых для анализа их структуры, является одной из центральных проблем, стоящих перед исследователями. С целью ее решения ведется поиск новых методов изучения структуры, в частности более чувствительных способов идентификации производных аминокислот (см. с. 61). Один из перспективных подходов заключается в широком использовании радиоактивных методов анализа. В ряде лабораторий при деградации пептидов в секвенаторе применяется радиоактивный или С-ФИТ1Д. Можно вводить радиоактивную метку непосредственно в анализируемый белок. Для многих белков это достигается добавлением радиоактивно меченных аминокислот непосредственно в питательную среду, на которой выращивается культура, являющаяся источником исследуемого белка. Таким же путем оказывается возможным радиоактивно метить белок избирательно по определенным аминокислотным остаткам. Если белок, радиоактивно меченный, например, по остаткам лейцина, анализировать с помощью секвенатора, то простое измерение радиоактивности экстрактов, содержащих анилинотиазолиноны, позволяет безошибочно определить, в каких положениях полипептидной цепи в N-концевой области белка расположены остатки лейцина (рис. 31). Аналогичным образом можно определить положение и других аминокислотных остатков. Такой прием используется для анализа N-koh-цевой последовательности предшественников белков, доступных лишь в ничтожно малых количествах. Для исследования полной структуры он, однако, не применяется из-за дороговизны и трудоемкости. [c.79]

В методе ХТС толуольная система наряду с образованием тонкой бороды обнаруживает весьма незначительное элюирующее действие величина Rf для ДНФ-лейцина равна 0,25. Если слой дезактивируют, выдерживая пластинку перед нанесением пробы не менее 12 час в парах воды, то величина Rf ДНФ-лейцина увеличивается до 0,66 и на двумерной хроматограмме достигают хорошего разделения, несмотря на отмеченное образование бороды . Растворитель Браунитцера [172] приводит к образованйю длинных пятен, а фосфатный буфер [173] совсем непригоден для метода ХТС. Размытые пятна и значительная диффузия делают разделение невозможным. Забуферивание слоя бесполезно, а добавление небольших количеств ледяной уксусной кислоты в этом случае помогает мало. Кроме усовершенствованной толуол -системы, исследовали и другие, перечисленные в разделах а) и б) растворители. При приготовлении систем следует применять растворители определенного качества. [c.416]

ПЕРВИЧНАЯ СТРУКТУРА белка, последовательность аминокислотных остатков в полипептидной цепи. В П. с., закодированной в соответствующем данному белку структурном гене, заложено все необходимое для ее самоорганизации в глобулу с определенной пространств, структурой. П. с. определяет вторичную и третичную структуры белка. Методы ее установления хорошо разработаны полипептидную цепь специфически расщепляют протеиназами (трин-сином — по остаткам аргинина и лизина, химотрипсином — по остаткам аром, аминокислот и лейцина) или хим. методами (бромцианом по остаткам метионина) в полученном наборе перекрывающихся пептидных фрагментов определяют последовательность аминокислот, используя преим. ступенчатое расщепление по Эдману (процесс автоматизирован), и сопоставляют строение фрагментов. [c.429]

При подборе оптимальных условий определения варьировались условия опыта и системы растворителей. Потенциометрическое титрование проводилось как в водно-формоловой среде, так и в различных смешанных водно-органических средах в присутствии формалина. Применявшаяся трехкомпонентная система растворителей состояла из воды, органического растворителя и формалина в соотношении 40 40 20 объемн. %. В качестве среды для титрования карбоксильных групп были использованы следующие классы органических растворителей спирты (метанол, этанол, пропанол и бутанол), кетоны (ацетон и метилэтилкетон), нитрилы (ацетонитрил), амиды (диметилформамид). Указанным методом были проанализированы следующие аминокислоты аланин, серии, лейцин, валин, а-фенил-Р-аланин, трип- [c.104]

Нами [8] впервые предложен потенциометрический метод количественного раздельного определения аминокислот в смеси в среде смешанного растворителя ацетонитрил — уксусная кислота (5 1). Титрантом служил — 0,1 метилэтилкетоновый раствор хлорной кислоты [9]. Исследовались аминокислоты ОЬ-валил-ВЬ-лейцин, глицил-Ь-тирозин, глицил-Ь-триптофан, л4-ами-нобензойная кислота, -цистеин, солянокислый гистидин. [c.108]

Аминокислотный состав П. определяют после их гидролиза (кипячение в 6 и. НС1 в течение 20 ч) до составляющих аминокислот, к-рыс анализируют хромато-графич. методом на сульфокатионитах с автоматич. фотометрироваиием окрагиенных продуктов их взаимодействия с нингидрином. Для определения содержания триптофана применяют щелочной гидролиз пептидов (кипячение в 5 н. NaOH в течение 20 ч), т. к. кислотный гидролиз приводит к разрушению триптофана, а также частично серина и треонина. Глутаминовая к-та при гидролизе подвергается значительной рацемизации. Полиаминокислоты с объемистыми алкильными боковыми группами (валин, изовалин, изолейцин, лейцин) гидролизуются значительно медленнее остальных. Гидролиз П. до аминокислот моишо проводить п при помощи ферментов (трипсин, эрепсин). [c.15]

Примечание. Метод медных солей Эрлих-Бразье может оказаться полезным как предварительная стадия при определении лейцина, изолейцина и валина при помощи других приемов. [c.278]

Примечание. Есть указания на то, что нафталинсульфонаты изолейцина и валина значительно более растворимы [71], чем производное лейцина. Такое разделение значительно повысило бы точность окислительных методов определения лейцина и валина после гидролиза сульфонатов. [c.279]

Очевидно, с увеличением разницы в выходе ацетона из лейцина по обоим методам окргсления точность определения увеличивается, если одновременно не изменяется выход ацетона из валина. Метод продувания дает приблизительно 50% выхода ацетона от теори11 для валина и 6% для лейцина при хроматном окислении и 50 выхода для валина и 36% для лейцина при [c.288]

Метод определени.ч. 0,2—0,5 мг лейцина в 10 мл раствора кйпятят в течение 15 мин. с 7,5 г сульфата аммония, 0,5 г лимонной кислоты W А мл 1% водного раствора нингидрина. Дестиллят улавливают в 5 мл 1% раствора XaHSOs. После окисления изо-валеральдегид количественно переводят в раствор бисульфита перегонкой с паром в течение 30 мин. Связанный бисульфит определяют обычным способом. [c.289]

Основы метода. При обработке аминокислот белкового гидро-лизата нингидрином летучие альдегиды образуются из валина. лейцина, изолейцина, аланина, фанилаланина и метионина. Для определения иоследних трех аминокислот существуют отдельные метч>ды (см. гл. II, III и VII) следовательно, мо кно определить сумму аминокислот группы лейцина . [c.289]

Несмотря на очевидные трудности окислительного метода Фромажо для определения лейцина и валина, данные, полученные по этому методу различными авторами, хорошо согласуются с данными более точного метода изотопного разведения (ср. анализы гемоглобина). Автору этого труда кажется, что окислительный метод определения валина, лейцина и изолейцина, дающий возможность работать на количествах белка порядка 100 мг, более точен и во много раз проще единственного другого хорошо описанного способа, именно — метода Фишера. Можно также рекомендовать микробиологический метод Лаймана и др. [433В], а также хроматографический метод Гордона, Мартина и Сайндж ([261] и г. д.). [c.302]

Одноколоночный метод анализа, смола иЯ-40. Поддерживая постоянными температуру колонки, концентрацию ионов натрия и цитрат-ионов и скорость течения буфера, варьируют величину pH первого буфера. Понижение pH с 3,545 до 3,515 ухудшает разделение треонина и серина (отношение высоты впадины к высоте пика равно 0,07 определение этого понятия см. в разд. 1.5.1). Цистин элюируется из колонки медленнее, но разделение серина и глутаминовой кислоты улучшается приблизительно до 0,19. Увеличение pH второго буфера с 4,25 до 4,30 при прочих неизменных условиях анализа ухудшает разделение изолейцина и лейцина. При увеличении pH третьего буфера гистидин элюируется быстрее. [c.41]

В указанной работе столкнулись с определенными осложнениями из-за того, что трудно было провести выбор между лейцином и изолейцином. Соответствующие лейциновые и изолейци-новые пептиды не разделялись методом ГЖХ, и даже с помощью масс-спектрометрии не во всех случаях можно было выполнить отнесение изомеров. Окончательный вывод оказался возможен при использовании капиллярной колонки для дальнейшего разделения уловленных соединений. В настоящее время эти трудности, по-видимому, преодолены также и с помощью масс-спектрометрии [30]. [c.169]

Для определения степени рацемизации применяли различные физические методы. Ацетил-Ь-лейцин конденсировали с этиловым эфиром глицина различными способами [35]. Ввиду того что оптически чистый продукт обладает сравнительно высоким вращением, последнее можно использовать в качестве критерия чистоты. Проба, позволяющая обнаружить рацемизацию, прощедшую даже менее чем на 0,5%, заключается в ацилировании этилового эфира глицина карбобензилоксиглицил-Ь-фенилаланином с последующей дробной кристаллизацией продукта реакции [42]. Для того чтобы разделить оптические изомеры, можно применять противоточное распределение [38]. [c.182]

Аминокислоты можно получить из природных материалов или приготовить путем химического синтеза. В первом случае обычно получают Ь-изомеры аминокислот аминокислоты, полученные методами химического синтеза (за исключением глицина, р-аланина и т. п.), представляют собой рацематы. Способы выделения аминокислот многообразны, и этому вопросу посвящена весьма обширная литература. Некоторые белки служат хорошим сырьем для получения определенных аминокислот клейковина (глютен) пшеницы служит основным сырьевым материалом для производства Ь-глутаминовой кислоты глютен кукурузы — хороший источник для выделения Ь-лейцина и Ь-тирозина Ь-ар-гинин можно получить из желатины и из крови. Продажные препараты Ь-аспарагина получают из побегов спаржи (ср. [14]). [c.91]

Нет сомнения в том, что из гидролизатов белков могут быть получены высокоочищенные Ь-аминокислоты. Тем не менее продажные препараты аминокислот зачастую загрязнены аминокислотными примесями, которые могут быть источником экспериментальных ошибок. В связи с этим микробиологи при приготовлении сред для определения аминокислот посредством бактерий нередко предпочитают применять синтетические ВЬ-аминокислоты, а не Ь-изомеры, выделенные из белковых гидролизатов. Можно привести следующие примеры часто встречающихся загрязнений в полученных из белков препаратах лейцина и глутаминовой кислоты часто содержатся метионин, а в препаратах глутамина — аргинин и аспарагин препараты триптофана бывают загрязнены тирозином, а препараты тирозина — цистином. Выделенный из гидролизатов изолейцин обычно содержит лейцин, и наоборот. Развитие современных хроматографических методов в значительной степени упростило задачу выделения аминокислот, и повсеместное применение этих методов, несомненно, улучшит качество продажных препаратов аминокислот. [c.91]

Вследствие относительно высокой упругости паров соединений, содержащих фтор [50], газо-жидкостная хроматография применяется для разделения К-ТФА-эфиров ди-, три- и тетрапептидов, Газо-хроматографический анализ различных летучих производных коротких пептидов проводился рядом автором [51—56]. Бименом и Веттером, например, осуществлено хроматографическое разделение N-aцeтилиpoвaнныx аминоспиртов и полиаминов, полученных из лейцил-аланина, глицил-фенилаланина, фе-нилаланил-глицина, лейцил-аланил-пролина и лейцил-аланил-глицил-лейцина с последующим масс-спектрометрическим определением последовательности аминокислот в пептидных цепях [53]. Однако наибольшего успеха удалось достигнуть при применении, как и в случае разделения аминокислот, К-трифторацетилирован-ных метиловых эфиров (рис. 9). Указанный метод, по-видимому, имеет ограниченное применение при исследовании структуры пептидов [64] и степени рацемизации при их синтезе [55]. [c.267]

Гюильбо и Любрано [549] описали амперометрический метод определения некоторых L-аминокислот (цистеин, лейцин, аланин, тирозин, фенилаланин, триптофан и метионин), основанный на применении электрода с оксидазой L-аминокислоты. Электрод содержит оксидазу L-аминокислоты, которая удерживается на поверхности платинового электрода (Бекман 39273) с помощью целлофановой пленки и резинового кольца. Концентрацию образующейся по реакции типа (15.2) перекиси водорода определяют амперометрически при pH 7,8. [c.191]

Соединения, содержащие менее 50% фтора, образуют в качестве конечных продуктов сгорания только фтористый водород. При сгорании соединений, содержащих большее количество фтора, может также образоваться четырехфтористый углерод. Методы определения энтальпий образования фторорганических соединений, а также анализ продуктов их сгорания описаны в работах Гуда, Скотта и Уаддингтона [514] и Гуда, Доуслина, Скотта, Джорджа, Лейцины, Доусона и Уаддингтона [508]. [c.88]

Новым методом идентификации аминокислот и их количественного определения является также спектрофотометрия в инфракрасном свете. Каждая аминокислота и каждая а-хлорокис-лота (получаемая при действии соляной и азотной кислот на аминокислоты) имеют характерную кривую поглощения в инфракрасном свете [68]. При помощи спектрофотометрии в инфракрасном свете было показано, что определение лейцина и изолейцина микробиологическим методом дает слишком высокие величины [69]. [c.35]

Потребность в отдельных аминокислотах у различных видов животных неодинакова. Так, собака может обходиться без аргинина [35], между тем как крыса нуждается и в гистидине, и в аргинине [32]. Любопытно, что потребность в некоторых аминокислотах у многих бактерий и плесеней более резко выражена, чем у человека и других позвоночных. В гл. П1 уже указывалось, что не только валин, лейцин, изолейцин и лизин, но и такие заменимые для организма высших животных аминокислоты, как глицин, пролин и глутаминовая кислота, могут быть определены микробиологическим методом, так как эти последние аминокислоты не могут быть синтезированы микробами, используемыми для их определения. Необходимо также отметить, что потребность в отдельных аминокислотах у некоторых грибов и плесеней, например у Neurospora rassa, может резко меняться под влиянием облучения или других воздействий [36]. [c.368]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология