Селективные условия

Селективные условия, условия, в которых могут размножаться не все бактерии, а только те, которые обладают какими-то особыми свойствами. Например, среда, в которую добавлен антибиотик. На такой среде могут размножаться только те бактерии, которые несут ген устойчивости к данному антибиотику. [c.158]

Распространение микроорганизмов. Малые размеры имеют значение и для экологии. Многие растения и животные, ныне широко распространившиеся благодаря человеку, встречались раньше лишь на отдельных континентах. В отличие от этого бактерии (включая цианобактерий) вездесущи их можно найти в арктических областях, в воде и в высоких слоях атмосферы. Видовой состав их во всех местообитаниях в широких пределах сходен с их видовым составом в почве. Благодаря своему малому весу микроорганизмы легко распространяются с воздушными потоками. В естественных условиях ни одно местообитание, ни один субстрат не нуждается в специальном заражении каким-либо микробом. Этим обстоятельством пользуются для получения накопительных культур. Как правило, достаточно одного грамма садовой почвы, чтобы найти вид бактерий, способный расти за счет любого природного вещества. Микроорганизмы существуют повсюду среда определяет лишь то, какие формы будут в данном месте активно размножаться. Создавая в пробирке соответствующие селективные условия, можно из небольшого количества земли или ила, а в особых случаях и из других материалов получать накопительные культуры, а из них и чистые культуры большинства известных микроорганизмов. [c.21]

MOB, растущих при определенных селективных условиях, посев следует производить непосредственно в чашки. На твердых элективных средах штаммы, для которых условия благоприятны, образуют отдельные колонии. При достаточно большом расстоянии между колониями конкуренция за питательные вегцества не может иметь места штаммы, растущие более медленно, не подавляются растущими быстрее, так что те и другие могут быть выделены раздельно. [c.188]

Метод отбора анаэробных фототрофных бактерий основан на том (описанном выше) наблюдении, что пурпурные серные бактерии достигают иногда массового развития и в мелких водоемах, если вся поверхность воды покрыта плотным слоем ряски. С помощью фильтров, поглощающих коротковолновую часть спектра и пропускающих инфракрасные лучи, используемые лишь отдельными группами фототрофных бактерий, можно создать селективные условия для роста как зеленых серобактерий, так и пурпурных бактерий, содержащих бактериохлорофилл а или Ь. [c.382]

Для выявления роли таких факторов, как состав и способ приготовления, химическая и термическая стабильность, характер каталитического действия и других, в определении основных характеристик катализаторов - активности, селективности, условий работы, продолжительности жизни, а также для оценки их преимуществ и недостатков целесообразно рассмотреть все перечисленные катализаторы. [c.7]

Как можно представить себе эволюционное происхождение этих фундаментальных различий Не исключено, что генетическая структура современных эукариот отражает наиболее древнюю структурную организацию, которая послужила также эволюционным предком и сегодняшних прокариотических организмов, например таких, как Е. соИ. Эволюция бактерий могла быть ответом на возникшие селективные условия, благоприятствовавшие быстрому росту и клеточному делению. Эволюционные преимущества в таких условиях могли оказаться достигнутыми благодаря слиянию ядра с цитоплазмой и сопряжению процессов транскрипции и трансляции. Это могло в конце концов привести и к выщеплению интронов, присутствие которых препятствовало бы правильной трансляции первичных транскриптов. [c.60]

Таким образом, даже беглый перечень особенностей большинства мутаций, наблюдаемых у человека, и у других хорошо известных видов, таких, как дрозофила, обнаруживает их неадаптивный характер. Мутации возникают не для того, чтобы обеспечить лучшую приспособленность организмов к условиям их обитания. Этот факт, уже давно очевидный генетикам, изучающим высшие организмы, не признавался бактериологами до конца 40-х годов. Большинство ученых, изучавших мутации бактерий, считали, что мутации происходят в бактериальных популяциях в ответ на возникновение новых селективных условий. Например, когда в чашку Петри со средой, содержащей пенициллин, высевают чувствительные к пенициллину бактерии, на поверхности агара появляется несколько устойчивых к этому антибиотику колоний, причем их устойчивость наследуется. Данный факт объясняли тем, что устойчивость к пенициллину индуцируется самим пенициллином. Методология, применявшаяся бактериологами, когда они использовали селективные среды для вьщеления мутантных штаммов, не позволяла ответить на вопрос, отбираются ли при этом мутанты, уже ранее существовавшие в популяции, или само их возникновение индуцируется фактором отбора. Мало того, некоторые микробиологи вообще подвергали сомнению факт существования генов в бактериях По их мнению, отбираемые колонии могут состоять из бактерий, приобретших новое физиологическое состояние, позволяющее им приспособиться к жизни в новых условиях. Фактически такие взгляды тормозили признание идеи о том, что ДНК представляет собой наследственное вещество, хотя на это однозначно указывала трансформирующая активность ДНК, выделенной из пневмококка (см. гл. 4). [c.24]

Благодаря этой разнице удается подбирать селективные условия гидрирования [c.3]

Использование антибиотиков в стоках культур крайне нежелательно. Невольное ослабление строгости требований асептической техники при использовании антибиотиков приводит к заметному загрязнению культур. Рост загрязняющих бактерий может тормозиться антибиотиками, но биохимические изменения могут все же иметь место. При селективных условиях происходит отбор резистентных к антибиотикам микроорганизмов, а затем эти микроорганизмы, как лесной пожар, могут распространиться по всем культурам лаборатории. [c.114]

Отдельные клетки (изолированные протопласты) важны для клоповой селекции мутантных, гибридных, трансформированных линий. Обычно в эти клетки вводят маркерные гены или создают маркерные признаки для обеспечения селективных условий отбора. Мацерированные клетки ткани растения являются хорошей моделью для сравнительного изучения физиологических процессов в ткани и отдельной тканевой клетке. В частности, сравнение процесса фотосинтеза на уровне отдельных клеток мезофилла листа и тканевом представляет большой интерес для изучения фотодыхания. [c.28]

Чтобы избежать вырезания F /a +, штаммы Hfr выращивают в селективных условиях. Важно быстро выделить и использовать эти штаммы Hfr. Если перед тем, как их использовать, с этими штаммами длительно работали (т. е. проводили повторную их очистку или хранили их), то в них могли произойти перестройки, затрудняющие интерпретацию полученных результатов. Если же штаммы Hfr использовали сразу же после их выделения, то ориентация вставок Тп/0 может быть определена однозначно. [c.56]

Трансформированные побеги можно регенерировать непосредственно из каллуса, развивающегося на эксплантатах в селективных условиях, используя среду для индукции побегов, содержащую антибиотики. [c.118]

Способы получения требуемых последовательностей нуклеотидов из клонотек генов можно разделить на три группы. При использовании первой группы методов рекомбинантные бактерии или фаговые частицы исследуют на присутствие в них искомых последовательностей нуклеотидов путем последовательного перебора случайных клонов. При таком подходе, получившем название скрининга, творческие усилия исследователя направлены только на облегчение самого процесса анализа клонов, например, на его автоматизацию. Во втором случае, присутствие нужных последовательностей обнаруживают косвенно, по появлению в бактериальных клетках или фаговых лизатах бляшек продуктов экспрессии искомых генов - РНК, белков или ферментативной активности, т.е. определенного фенотипа, который отличает такие клоны от соседних, не содержащих соответствующих последовательностей. В этом случае исследователь среди большого количества суммарных клонов осуществляет выбор тех, которые резко отличаются от соседних по своему фенотипу, например, цвету колоний. При таком подходе производится выбор требуемого фенотипа среди большого числа других фенотипов. Реализация третьего подхода требует создания селективных условий, при которых преимущество в размножении получают те клоны, которые отвечают требованиям отбора, например, приобрели способность к росту на селективных питательных средах в присутствии антибиотика или в отсутствие аминокислоты в случае исходно ауксотрофного штамма. Последний подход, кроме своего необыкновенного изящества в замысле, демонстрирует самую высокую эффективность, так как позволяет в одно касание освободиться от всех нежелательных примесей в виде ненужных клонов. [c.162]

Была проверена степень стабильности признака резистентности при длительном культивировании в неселективных условиях, т.е. в отсутствие давления отбора по селективному признаку. Последующий перевод в селективные условия показал, что все клоны сохраняли резистентность и были способны к росту как в массовом, так и в разреженном посеве, что подтвердило их мутационную природу. Тем не менее степень резистентности клонов значительно варьировала, что указывало на возможность сохранения у не- [c.264]

После получения различных сомаклональных вариаций от исходного растения наступает следующий этап — отбор необходимых сочетаний признаков. Данный вопрос решается с помощью клеточной селекции, которую проводят практически на любом объекте, введенном в культуру in vitro. Однако удобнее использовать суспензионную культуру или изолированные протопласты. Преимущество этих объектов состоит в быстром росте культуры и равномерном действии селективного фактора на все клетки. Для отбора сомаклональных вариаций соответствующие селективные факторы (соли в высоких концентрациях, гербициды и др.) добавляют в питательную среду для выращивания культуры клеток либо растущие культуры помещают в селективные условия (низкая или высокая температура, освещенность и т.д.). Существует несколько методов клеточной селекции [c.187]

Использование экстракционно-фотометрических методов (с экстракцией окрашенного или флуоресцирующего соединения) дает возможность не только применить более селективную реакцию или более селективные условия выполнения реакции для количественной оценки содержания микрокомпонента, но и значительно повысить чувствительность определешм. Так, например, экстрагируя небольшим объемом органического растворителя (0,5 мл) окрашенное соединение — мышьяковомолибденовую синь [c.3]

Гидролиз и декарбоксилирование эфиров замещенных малоновых кислот с образованием уксусных кислот проводят обычно либо действием соляной кислоты, которая сразу приводит к гидролизу и декарбоксилированию, либо действием гидроксида натрия или калия, приводящих первоначально к образованию соли малоновой кислоты, которая затем при нагревании с кислотой подвергается декарбоксилированию схема (209) . Синтез глутаровой кислоты [схема (210) может служить примером этой методики. -Кето-эфиры обычно гидролизуются под действием кислот до соответствующих -кетокислот, которые самопроизвольно декарбоксилируются с образованием кетонов схема (211) использование кислоты в качестве катализатора позволяет избежать катализируемого основаниями деацилирования. Селективное декарбоксилирование эфиров малоновой кислоты до эфиров уксусной кислоты и превращение -кетоэфиров в кетоны может протекать в более мягких и более селективных условиях. Так, нагревание эфира с цианидом натрия в присутствии диметилсульфоксида и контролируемого количества воды рекомендовано [186] и применено [187] для селективного гидролиза синтетического интермедиата (90) (R = OaEt-v R = Н). Показано [188], что хлорид натрия в диметилсульфоксиде служит более эффективным реагентом и что реакция может протекать даже в присутствии одного влажного диметилсульфоксида. Примеры реакции этого типа представлены на схемах (212) и (213) указанный метод применим также [c.341]

Две специфические защитные группы, используемые в химии природных соединений, расщепляются в селективных условиях. Это 0-нитробензоильная группа, которую можно удалить восстановительным расщеплением [191] схема (216) путем внутримолекулярного нуклеофильного расщепления, и Р-бензоилпропио-нильная группа, которая удаляется действием гидразина [192] опять же за счет внутримолекулярной нуклеофильной атаки схема (217) . Кратко мы еще остановимся на внутримолекулярном взаимодействии подобного типа в следующей части этого раздела. [c.343]

Выделенную ДНК добавили к культуре клеток линии D98/AH-2, не способной к синтезу этого фермента. Это привело к появлению трансформированных клеток, содержащих ИМФ-пирофосфорилазу. Такие клетки обнаруживают, выращивая их в определенных селективных условиях. ДНК-аза снимала трансформирующую активность, РНК-аза Н е таким действием не обладала [21]. [c.304]

В книге даны теоретические основы метода абсорбционной спектроскопии (спектрофотометрни). Рассмотрены отдельные методы количественного абсорбционно-спектроскопического анализа спектрофотометрического титрования, многокомпонентной системы, дифференциального, экстракционно-спектрофотометрического я кинетического. Приведены примеры применения абсорбционно-спектрофотометрическогс метода для изучения равновесий в растворах и ряд конкретных примеров определения констант диссоциации реагентов, констант устойчивости комплексов и их состава. Уделено большое внимание определению отдельных элементов, в том числе редких. В предлагаемых методах показано нахождение селективных условий определения элементов в присутствии сопутствующих элементов, близких по свойствам. Даны оптические схемы и принципы действия отдельных спектрофотометрических приборов. Приведены методы статической обработки полученных результатов. [c.2]

Селекция растений на клеточном уровне. Значительный интерес представляет вопрос об использовании клеточной селекции в комплексе с получением сомаклонов. Одна из наиболее сильных сторон культуры in vitro в создании технологий для сельского хозяйства — возможность на основе сомаклональных вариаций или индуцированных мутаций отбирать в жестких селективных условиях клетки, характеризующиеся искомыми признаками. [c.142]

Получение стабильно устойчивых линий — процесс длительный. Как правило, селекция начинается с получения достаточного количества каллусной массы из изолированных растительных эксплантов, использующейся в дальнейшем для определения концентрации селективного фактора (построение дозовой кривой), при которой наблюдается одновременно рост каллусной ткани, и в то же время часть каллусных колоний погибает. Выбранная концентрация селективного фактора признается оптимальной и используется в дальнейших экспериментах. Так как первично полученные на средах с селективными факторами колонии клеток могли возникнуть вследствие физиологической адаптации или определенного состояния дифференцировки клеток и не быть генетически устойчивыми, то в течение последующих А—6 субкультивирований на селективной среде проверяется стабильность устойчивости полученных клонов. Затем их переносят на среду без селективного фактора и субкультивируют еще 2—3 пассажа. И только после повторного возвращения в селективные условия отбирают стабильные клоны, из которых пытаются получить рас-тения-регенеранты. Однако работы, проведенные с получением растений, устойчивых к повышенным солям, а также к токсинам, выделенным из грибов — возбудителей болезней, показали, что устойчивость клетки и растения к исследуемому селективному фактору может совпадать и не совпадать. Прямая корреляция между устойчивостью растений и клеток in vitro отмечена лишь для низких температур, устойчивостью к гербицидам, высоким концентрациям алюминия и другим факторам. [c.143]

Работы по клеточной селекции растений на устойчивость к ионным стрессам начаты недавно, но уже имеют положительный результат. Во всех экспериментах используется метод прямой селекции, при котором в качестве селективного агента применяли токсические концентрации солей. Однако создание стрессовых селективных условий in vitro, идентичных таковым в природе, крайне затруднительно. В природных условиях помимо токсического действия ионов накладываются другие факторы, в частности наличие различных веществ, кислотность почвы и т. д. Для селекции на клеточном уровне используют питательные среды, которые хотя не полностью соответствовали естественным стрессовым условиям, все же обеспечивали экспрессию признака устойчивости и давали возможность отбирать нужные варианты. [c.148]

Клеточная селекция — метод выделения генетически модифицированных мутантных клеток и сомаклональных вариаций с помощью селективных условий. [c.462]

ЭТОТ газон перепечатывали с помощью бархата (гл. VI) на чашку с минимальным селективным агаром, поверхность которого была покрыта плотным слоем ауксотрофных Р -бактерий, неспособных расти на этой среде. Генетический состав F - и F -штаммов был подобран таким образом, чтобы сделать возможным возникновение таких генетических рекомбинантов, которые были бы способны расти на селективном агаре чашки-реплики. Часть редких Hfr-клонов среди F -бактерий исходной чашки, способных образовывать селектируемый рекомбинантный тип, захватывается бархатом и переносится на газон F -бактерий чашки-реплики. В результате на этой чашке возникают рекомбинантные колонии. Местоположение такой рекомбинантной колонии указывает, таким образом, зону на газоне F -бактерий исходной чашки, в которой возникли Hfr-бактерии. Эту зону газона отбирали, высевали на вторую чашку и повторяли один или два раза процедуру отпечатков для селективного обогащения культуры Hfr-клетками. Наконец, отдельные Hfr-колонии обогащенной популяции F -клеток проверяли на плодовитость и среди них находили чистые клоны Hfr-клеток. Изменяя генотип Р -клеток и селективные условия исходной чашки, Вольман и Жакоб выделили из одного и того же родительского Р+-штамма различные Hfr-штаммы, некоторые из которых, подобно HfrH, переносят с высокой частотой участок генома thr-leu, а другие — иные участки генома. Таким образом, было доказано, что плодовитость скрещиваний F Х F действительно определяется небольшим колн-4e TB0M Hfr-6aKTepHn, возникающих спонтанно во время роста F -куль-туры. [c.229]

Клеточная селекция — метод выделения мутантных клеток и сомаклональных вариаций с помощью селективных условий. [c.8]

На число хромосом культивируемых клеток влияет концентрация регуляторов роста. Так, высокие концентрации кинетина способствуют возникновению полиплоидии. 3. Важно для полученной диплоидной культуры поддерживать селективные условия, которые благоприятствовали бы доминированию данной популяции (по Е. Evans, J. Bravo, 1983). [c.36]

Этап 8) важно, чтобы на этих чашках-репликах сохранились селективные условия (среда Е), так как в противном случае сможет расти исходный реципиентный штамм TR5989 ригВ12). [c.27]

Трансформация через стадию каллуса будет описана на примере проростков льна [10], однако с помощью сходной методики были трансформированы и другие виды (приложение 2[УП1]). В предварительных экспериментах на растениях льна комбинация эксплантатов гипокотиля размером 1—2 мм, вырезанных из стерильных проростков двухдневного возраста, давала наиболее воспроизводимую индукцию каллуса и регенерацию на среде М804Х2. К сожалению, при всех комбинациях эксплантатов и среды большинство побегов возникает путем прямого формирования зародышей в глубоких клеточных слоях ткани исходного эксплантата. В этом заключена основная трудность, поскольку такие клетки не чувствительны к трансформации агробактериями. Однако часто бывает так, что образовавшийся на эксплантатах каллус, в котором происходит развитие большого числа зачатков побегов, тоже способен к регенерации, особенно если он еще прикреплен к первоначальному эксплантату. Такой каллус, предварительно заложенный благодаря росту в местах поранения на регенерирующих эксплантатах, может продолжать регенерировать после срезания и переноса на свежую среду для регенерации по крайней мере в продолжение одного или двух пассажей. Способность такого каллуса регенерировать в селективных условиях после удаления из ткани первоначального эксплантата сильно уменьшает вероятность того, что какие-либо регенерирующие побеги могут возникнуть путем непосредственного формирования зародыша без дедифференциации клеток, [c.131]

Поскольку в экспериментальных условиях невозможно работать с одной копией гена, создание необходимого числа идентичных копий гена (или его частей) является первой и одной из основных задач генной инженерии. Для ее решения используют метод молекулярного клонирования [61]. Сущность метода заключается в том, что нуклеотидная последовательность, которую необходимо выделить или размножить, ковалентно встраивается в самореплицирующиеся молекулы нуклеиновой кислоты, называемые векторами. Далее такая последовательность нуклеотидов в составе вектора вводится в клетки про- или эукариотического организма, и эти гибридные клетки в селективных условиях, обеспечивающих сохранение вектора внутри клеток, выращивают на питательной среде. В результате образуется клон клеток, теоретически содержащих идентичные векторные молекулы с одной и той же вставкой чужеродной последовательности нуклеотидов. Объединение молекул клонируемой последовательности нуклеотидов и вектора является не чем иным как рекомбинацией ш vitro, поэтому такие гибридные молекулы называют рекомбинантными молекулами. [c.39]

Подготовка миеломных клеток. В гибридомной технологии используют различные миеломные линии (см. обзор [Ю]). Все они имеют генетические маркеры, позволяющие работать с ними в селективных условиях. Наиболее распространены в настоящее время две линии — 5р 2/0 Agl4 и Х63Ад8 6.5.3. Эти клеточные линии имеются во Всесоюзной коллекции клеточных культур. Обе они являются цроизводными линии РЗК, полученной из миеломы мышей ВАЬВ/с МОРС-21. Преимуществом этих клеток является вторичная утрата ими способности синтезировать собственные иммуноглобулины. Клетки дефектны по ферменту гипоксантин-гуанинфосфорибозил-трансфераза, благодаря чему устойчивы к 8-азагуанину и чувствительны к среде ГАТ (см. ниже). Реверсии в этих клетках являются чрезвычайно редким событием, тем не менее рекомендуют каждые 3—б мес эти клетки культивировать в течение 2—3 пассажей на среде с 8-азагуанином (2- 10 М). [c.196]

Основными методами, позволяющими проводить широкий круг экспериментов на этих клетках, являются методы получения клонов, происходящих из одной клетки, и методы создания селективных условий, позволяющих выявлять и изолировать мутантные формы, частота спонтанного возникновения которых равна примерно 1(Н в популяции клеток дикого типа. Это относится также к генно-инженерным модифицированным клеткам, которые получаются с относительно низким выходом, но могут быть селектированы с помощью стандартных приемов селекции соматических клеток. Особо следует отметить методы направленного изменения функций тех или иных генов с помощью гомологичной рекомбинации (таргетинг генов). [c.250]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология