Белки кривая нуклеиновой кислотой

Установлено, что эффективность удерживания белков и нуклеиновых кислот целлюлозным волокном, помещенным в постоянное электрическое поле, прямо пропорциональна напряженности этого поля и обратно пропорциональна скорости протока испытуемого раствора в рабочей камере. На рис. 40 представлены экспериментальные кривые изменения концентрации некоторых белков и нуклеиновых кислот вытекающей из рабочей камеры жидкости в зависимости от напряженности поля и скорости протока растворов. [c.179]

Однако, как это указывалось выше, кривые потенциометрического титрования даже для аминокислот и нуклеотидов, не говоря уже о белках и нуклеиновых кислотах, имеют более сложный характер. Отметим, что по кривой потенциометрического титрования нельзя установить однозначно, какие группы титруются в той или иной области кривой — кислотные или основные, [c.26]

Выберем два наиболее удобных значения температуры 5 и 20°. Для плавучей плотности частиц можно ограничиться тремя значениями 1,3, 1,4 и 1,5 г/см . Из приведенных выше данных следует, что значения р для любых белков и нуклеиновых кислот лежат вблизи одного из этих значений. Выбор плотности, как будет видно далее, не сильно влияет на характер соответствующих кривых, в оценочных расчетах вполне можно принимать, что для белков р=1,3 г/ м для ДНК—1,4, а для РНК—1,5. [c.224]

Использование методов ДОВ и КД для получения информации о макромолекулах определяется в первую очередь доступностью необходимой аппаратуры. Вначале были доступны только приборы для измерения ДОВ. Кроме того, приблизительно до 1960 г. на этих приборах можно было работать только в области значительно больших длин волн, чем длины волн, соответствующие полосам поглощения белков и нуклеиновых кислот. В результате этого доступными для изучения были только плавные кривые. Кривые ДОВ такого типа обычно анализировали с помощью отношения, называемого уравнением Друде [c.460]

В последнее время появилось несколько работ, связанных с изучением явлений хемилюминесценции в облученных белках, нуклеиновых кислотах и синтетических полимерах. Было обнаружено [301, 302] явление свечения сухих облученных синтетических полимеров и биополимеров. Оказалось, что некоторые кинетические характеристики свечения и уменьшения концентрации радикалов, измеренные методом ЭПР, совпадают. На рис. 117 приведены кинетические кривые свечения (сплошная линия) и изменения концентрации радикалов (точки) в облученном сывороточном альбумине при 65° С на воздухе. На рис. 118 показана температурная зависимость интенсивности свечения и скорости гибели радикалов в аррениусовских координатах. Из рисунков видно, что энергия активации временной ход свечения и концентрации радикалов совпадают в пределах ошибок опытов. [c.236]

Прекращение деления и быстрый рост клеток сопровождаются значительным повьшением содержания как нуклеиновых кислот, так и белка. Кривая изменения РНК-азной активности в этот период полностью совпадает с изменением содержания РНК. [c.137]

Для белков коэффициент экстинкции при 280 нм намного ниже, чем соответствующая величина для нуклеиновых кислот при 260 нм, и зависит от содержания в белках тирозина и триптофана. Поэтому определение белков в УФ-свете по поглощению при 280 нм представляет собой менее чувствительную процедуру, чем методы окрашивания (рис. 70), К тому же для количественной оценки получаемых данных необходимо учитывать, что разные белки имеют неодинаковые коэффициенты экстинкции. Без построения специальных калибровочных кривых денситометрия в УФ-свете не позволяет производить прямое количественное сравнение кривых различных белковых зон. С помощью отдельных денситометров можно выявлять до [c.182]

На рис. 73 и 74 представлены некоторые данные, характеризующие электрохимическое поведение нуклеиновых кислот и белков на парафинированном графитовом электроде. На импульсных кривых нуклеиновых кислот наблюдаются два пика — вблизи 0,9 и 1,2 В. Их высота увеличивается при денатурации ДНА. Сопоставление с данными для пуринов позволяет прийти к выводу, что эти максимумы соответствуют окислению гуанино-вых и адениновых остатков [67]. При окислении адсорбированных белков (не содержащих сульфидных и сульфгидрильных групп) наблюдается максимум вблизи н.к,э. = 0,8 В. Он выражен особенно отчетливо на импульсных кривых (рис. 74, кривая 1), но отсутствует при повторном измерении линейных /, -кривых (рис. 74, кривая 3). На основании анализа результатов по окислению аминокислот авторы работ [67, 264] делают предположение, что исследованные ими белки окисляются преимущественно по тиразиновым и триптофановым остаткам. [c.163]

Получение ультрафиолетовых спектров поглощения вирусов — метод в наши дни весьма доступный, так как регистрирующие спектрофотометры имеются сейчас почти во всех лабораториях. Для регистрации спектра требуется всего лишь 0,05—0,2 мг вируса, причем материал этот может быть использован повторно. По характеру кривой поглощения можно судить о содержании в вирусе белков и нуклеиновых кислот. Отношение величины поглощения при 260 и 280 нм ( 260/ 280)1 а также отношение ыакс/ мин характеризует относительное содержание нуклеиновых кислот и белков в пробе, а отсутствие изменений в характере спектра после дальнейшей очистки и фракционирования препаратов вируса служит дополнительным указанием на чистоту выделенного вируса (см. гл. IV, разд. В). [c.48]

Адсорбция — это процесс, обусловленный вандерва-альсовыми силами, электростатическим и гидрофобным взаимодействиями, а также стерическими факторами. Адсорбция индивидуального вещества описывается типичной изотермой адсорбции Ленгмюра, которая представляет собой гиперболу на графике зависимости концентрации растворенного вещества от количества адсорбированного вещества. Такой же кривой описывается и насыщение фермента субстратом, а также закон убывающего плодородия . Поверхностную сорбцию и элюцию неполярных веществ успешно осуществляют с помощью силикагеля, кизельгура, окиси алюминия, фло-рисила и активированного угля. Полярные макромолекулы, такие, как белки и нуклеиновые кислоты, очищают либо методом статической сорбции, либо в условиях колоночной хроматографии с использованием гидрокси-апатита, кальций-фосфатного геля или Су -модификации окиси алюминия. [c.202]

На основании этих данных строят график хроматографического опыта. На горизонтальной оси откладывают номера фракций или объем элюируемой жидкости, а на вертикальной оси — вышеуказанные характеристики фракций На графике также строят кривую нарастания концентрации (градиент) соли. Для качественной и количеств вейной оценки этого этапа очистки необходимо иметь характеристики исходной вируссодержащей жидкости до нанесения на колонку. На основании этих данных рассчитывают эффективность концентрирования и очистки виру-са на обменнике нроцент выхода вируса и процент очист-ки его по белку и нуклеиновой кислоте (см. раздел Кри терии чистоты вирусных препаратов ). [c.115]

Методы анализа фракций могут быть физическими, химическими и биологическими. Одним из лучших методов считается детектирование радиоактивных изотопов. Результаты измерений оформляют в виде кривой зависимости определяемой величины от объема злюата. По распределению пиков на хроматограмме судят о возможности объединения некоторых фракций, совершенно чистых, без примесей других компонентов. Методом ионообменной хроматографии можно разделять различные катионы и анионы, четвертичные аммониевые основания, амины, аминокислоты, белки, продукты гидролиза пептидов, физиологические жидкости, гидролизаты клеточных оболочек микробов, антибиотики, витамины, нуклеиновые кислоты. [c.361]

Отсюда следует вывод, что определение молекулярной массы нативиых белков с помощью гель-фильтрации, даже проведенное на уровне описанного выше современного подхода к этой задаче, может дать лишь приближенный результат. Тем более это справедливо в случае весьма распространенного упрощенного способа использования калибровочных кривых, построенных по молекулярным массам маркерных белков без учета их формы. То же относится к определению гель-фильтрацией молекулярных масс нативных нуклеиновых кислот с помощью маркерных НК известной массы, когда в число таких маркеров тРНК включают наряду с рибосомаль-пыми РНК, а нередко и фрагментами ДНК. Говорить же серьезно [c.150]

Кривые титрования нуклеиновых кислот, казалось бы, должны выглядеть проще, чем кривые титрования белков, так как нуклеиновые кислоты содержат менее разнообразные титруемые группы. Однако форма этих кривых усложняется вследствие необратимых изменений. Некоторые типичные кривые, полученные Пикоком и сотрудниками для препарата дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), показаны на рис. 173. [c.640]

При центрифугировании под действием центробежных сил между слоем воздуха и раствором образуется граница, называС мая мениском. Вместе с тем происходит седиментация растворенных веществ, в результате чего образуется граница раздела между чистым растворителем и раствором белка, которая постепенно смещается ко дну ячейки. Поскольку всегда происходит диффузия высокомолекулярных частиц из раствора в растворитель, то граница раздела не представляет собой плоскости, а всегда несколько размыта. Естественно, что степень поглощения света при переходе от растворителя к раствору будет меняться хотя и круто, но постепенно, равно как и изменение концентрации седиментирующих молекул. Если через такую систему пропустить ультрафиолетовый свет, то это изменение концентрации может выразиться в неодинаковом почернении фотопленки по длине ячейки. В месте границы раздела будет происходить изменение степени почернения пленки от максимального для непоглощающего растворителя до минимального для поглощающего раствора (рис. 39, а). Определяя степень почернения путем микрофотомет-рирования, можно получить кривую распределения концентрации седиментирующего белка. Проведя такие измерения через определенные промежутки времени седиментации, можно получить кривую распределения концентрации вдоль радиуса ячейки. При этом обработка фотопленок, при использовании абсорбционных оптических систем, позволяет сразу получить интегральные кривые седиментации (рис. 39, б). Абсорбционные системы, снабженные кварцевой оптикой, используются чаще всего для исследования разбавленных растворов нуклеиновых кислот и их производных. [c.144]

Рентгенограммы под большими углами порошка вируса мозаики желтого турнепса (содержащего 40% РНК) и белков оболочки этого вируса показывают, что кривая рассеяния вируса не является простой суммой рассеяния, обусловленного белком и свободной вирусной РНК. Возможно, что вторичная структура РНК в этом вирусе (на которую, по-видимому, влияет белок) отличается от вторичной структуры изолированной вирусной нуклеиновой кислоты [364]. Однако рентгенографический анализ рибонуклеонротеидных частиц из Е. соИ [365], дрожжей и печени крысы [366] указывает на то, что структура РНК в этих частицах сходна со структурой свободных РНК [365, 366]. Изменение характера рентгенограмм этих частиц с изменением влажности напоминает результаты, полученные для нуклеогистонов, которые показывают, что структура нуклеиновой кислоты и структура белка в известной степени независимы друг от друга. [c.629]

Парди и Або удалось синхронизировать деление клеток Е. соИ простым способом, отфильтровав от культуры примерно 10% самых маленьких, а следовательно, и самых молодых клеток. На рис. 143 изображены кривая роста числа клеток в такой культуре и одновременно количеств белка, РНК и ДНК. Так как обе нуклеиновые кислоты и белок растут экспоненциально все время, то независимо от актов деления клеток скорость синтеза ДНК пропорциональна наличной живой массе клеток. В молодых клетках Е. oli количество белка составляет 10" г на 1 клетку, количества ДНК и РНК практически одинаковы и равны 10" г на 1 клетку. В конце цикла роста перед делением количества удваиваются. Значит, процессы внутриклеточного синтеза идут < j npaKTH4e KH постоянной скоростью. Конечно, если наблюдать за ростом культуры бактерий в течение нескольких десятков времен деления, то обнаруживается нарушение стационарности. Постепенно синтетические процессы в культуре затухают и рост останавливается. Иногда рост лимитирует какой-либо компонент питания, который истощается в питательной среде, иногда процесс роста отравляется вследствие накопления в среде продуктов метаболизма. [c.448]

На минимум иоглощения белков, наблюдаемый приблизительно ири 248 нм, оказывает большое влияние примесь нуклеиновой кислоты, а минимум спектра поглощения нуклеиновых кислот, лежащий вблизи 228 нм, служит еще более чувствительным индикатором примеси белков (все белки сильно поглощают в этой области) [141]. Особенности кривой поглощения белков при нейтральном значении рИ и те изменения в характере этой кривой, которые происходят под влиянием щелочи, добавленной до концентрации 0,1 М, можно использовать для идентификации и количественного определения в них тирозина и триптофана [131]. По характеру спектра поглощения белков и нуклеиновых кис.лот можно судить таки<е и об их конформации. Так, денатурация белков обычно сопровождается заметными изменениями их спектра поглощения (главным образом незначительный сдвиг максимума поглощения в сторону более коротких длин волн). По спектру поглощеиия можно судить и о состоянии нуклеиновых кислот (гипер- и гинохром-ный эффекты). При этом в зависимости от температуры и ионной силы различия в поглощении между ними соста-в.ляют 20—40%. И наконец, определение характерных спектров поглощения компонентов нуклеиновых кислот используется в большинстве методов идентификации и количественной оценки этих комионентов (см. разд. А гл. VI). [c.59]

Фотоденатурация нуклеиновых кислот является следствием разрушения кооперативной системы слабых нековалентных связей (водородные, гидрофобные и т. д.) и частичного (локального) или полного нарушения двуспиральной структуры Уотсона — Крика (эффект расплетания ). Наиболее вероятно, что денатурация нуклеиновых кислот представляет собой вторичный темновой процесс, вызванный образованием фотопродуктов, хотя не исключена возможность прямого разрыва слабых связей при тепловой диссипации энергии электронного возбуждения оснований, как это предполагается для белков. Несмотря на то, что спектр действия денатурации ДНК совпадает со спектром поглощения тимидина, причастность тиминовых димеров к образованию денатурированных участков в ДНК остается до сих пор сомнительной. Г. Б. Завильгельским твердо установлено, что локальные нарушения вторичной структуры ДНК при ее облучении коротковолновым светом определяются индукцией сшивок между комплементарными нитями ДНК. Наиболее точно такой вывод подтверждается опытами, в которых миграционным путем с ацетофенона на тимин изменялось количество тиминовых димеров в ДНК. При этом каких-либо различий в кривых плавления, отражающих состояние вторичной структуры, у образцов ДНК, содержащих 0,17 и 30% димеров, обнаружить не удалось. В то же время кинетика образования сшивок и локальных денатурационных участков в ДНК идентична. [c.241]

Несмотря на наличие одного пика на элюционной кривой гари фракционировании на сефадексе G-25 протаминсульфата фирмы Weddel pharma euti al , степень осаждения нуклеиновых кислот и кислых белков у неочищенного препарата была в IV2—2 раза ниже, чем у этого же препарата после гельфильтрации. [c.239]

Количественный спектрофотометрический анализ. Ряд важных биологических соединений можно полуколичественно изучать с помощью спектрофотометрии в видимой и ультрафиолетовой областях, например, измеряя поглощение белков при 280 нм, а нуклеиновых кислот при 260 нм — длинах волн, соответствующих максимуму поглощения этих соединений. Экстинкция белка при 280 нм зависит от содержания в нем ароматических аминокислот — тирозина и триптофана, поэтому значения молярной экстинкции при 280 нм для всех белков различны, и для определения содержания каждого из них требуется индивидуальная калибровочная кривая. Как правило, биохимики работают со смесью белков, и тогда можно пользоваться градуировочной кривой, полученной для белка или смеси белков со средним содержанием тирозина и триптофана. Это может быть, например, сывороточный альбумин или смесь сывороточных белков. Таким образом, для контрольных измерений надо выбирать соответствующий белок. Проводя измерения при длинах волн, где примесь поглощает больше исследуемого вещества, можно с помощью соответствующих формул оценить количество примеси в образце. Так, пользуясь методом Мортона и Стубса, определяют содержание витамина А в омыленных экстрактах природных масел, а по соотношению экстинкций при 260 и 280 нм (Еш/хо) находят содержание белка в препарате нуклеиновых кислот. [c.155]

Эти фазы можно изобразить фафически в виде отрезков кривой размножения бактерий, отражающей зависимость логарифма числа живых клеток от времени их культивирования (рис. 3.2). Л а г-фаза (от англ. lag — запаздывание) — период между посевом бактерий и началом размножения. Продолжительность лаг-фазы в среднем 4—5 ч. Бактерии при этом увеличиваются в размерах и готовятся к делению нарастает количество нуклеиновых кислот, белка и других компонентов. Фаза логарифм и- [c.49]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология