Гелио-красители

За ходом электрофореза следят по перемещению в геле красителя -заряженного низкомолекулярного вешества, которое вносят в каждую лунку перед началом электрофореза. Когда краситель достигает конца пластины, электрофорез останавливают, а гель окрашивают красителем, прочно связывающимся с белками или нуклеиновыми кислотами. Если образец представляет собой дискретный набор макромолекул разного размера, то после электрофореза получается набор четких полос, рас- [c.54]

Короткие фрагменты в агарозном геле мигрируют намного быстрее, чем длинные, при этом подвижность фрагментов ДНК в геле обратно пропорциональна логарифму массы (заряда) этого фрагмента. При окрашивании гелей красителями (например, бромистым этидием), связывающимися с ДНК, выявляется набор полос, каждая из которых отвечает ре- [c.27]

Что же произойдет если смесь белков, растворенных в ДСН, подвергнуть электрофорезу в блоке полиакриламидного геля. Каждая молекула белка связывает значительное количество негативно заряженных молекул детергента, общий заряд которых превосходит общий заряд белка. По этой причине белок после того, как будет приложено напряжение, начнет двигаться в направлении положительного электрода. Белки одного размера ведут себя сходным образом, поскольку, во-первых, их природная структура полностью нарушена ДСН так, что их форма идентична, во-вторых, они связывают одинаковое количество ДСН и приобретают одинаковый негативный заряд. Крупные белки, обладающие большим зарядом, подвергаются действию значительных электрических сил, а также более существенном торможению. В обычных растворах эти эффекты, как правило, взаимно погашаются, но в порах полиакриламидного геля, действующего как молекулярное сито, большие белки тормозятся значительно сильнее, чем малые белки. Вследствие этого сложная смесь белков делится на ряд полос, расположенных в соответствии с их молекулярной массой. Окрасив гель красителем кумасси синим, можно выявить основные фракции полипептидов Минорные белки идентифицируют серебрением минимальное [c.215]

При адсорбции из растворов, наряду с поглощением нейтральных молекул, может происходить и адсорбция ионов, содержащихся в растворе. Это приводит к некоторым своеобразным явлениям. Например, основной (по своим химическим свойствам) краситель, у которого окрашенный ион заряжен положительно, адсорбируется преимущественно на электроотрицательных (кислотного характера) адсорбентах, и наоборот. Подобные процессы называются полярной адсорбцией и обычно сопровождаются явлением обмена ионами ионного обмена) между адсорбентом и раствором — явле нием, называемым обменной адсорбцией. Так, метиленовая синяя — основной (по химическим свойствам) краситель, адсорбируется отрицательно заряженными гелями, в частности гелем кремневой кислоты. При этом, однако, на кремневую кислоту переходит лишь положительно заряженный ион красителя, а отрицательный ион (ион хлора) остается в растворе. Компенсация зарядов этих анионов достигается тем, что из кремневой кислоты переходит в раствор ион натрия, который в небольшом количестве почти всегда содержится в геле кремневой кислоты при обычных способах его приготовления. [c.372]

Этих усложнений удается избежать при выборе подходящей линии газового лазера гелии-неоновый лазер дает линию при 632,8 нм, аргоновый — при 488,0 и 514,5 нм, криптоновый — при 568,2 и 647,1 нм. Применение лазеров на красителях с подстройкой и узкополосных светофильтров расширяет диапазон длин волн и обеспечивает монохроматичность излучения. [c.274]

Такие системы в одних условиях могут быть истинными растворами, а в других — становятся золями или обнаруживают более грубую дисперсность. Взаимные переходы истинный раствор золь гель можно осуществить путем изменения концентрации дисперсной фазы, температуры, pH или введением в систему электролита. Системы, в которых происходят названные переходы, называются полуколлоидами (семи-коллоидами). К ним относятся водные растворы мыл, таннидов (дубильных веществ) и некоторых красителей. [c.351]

Для определения содержания иммобилизованного белка можно в принципе использовать все известные методы, применяющиеся при работе с растворимыми белками. Однако из-за светорассеяния, характерного для гелей агарозы, быстрого оседания их частиц, а также адсорбции красителей на гелях в определение содержания белка внесены отдельные модификации. Могут быть рекомендованы спектрофотометрический и колориметрический методы. [c.84]

Широкое распространение в настоящее время получил так называемый зональный электрофорез — электрофорез на твердом носителе (на бумажных полосах, агаре, крахмале, акриламиде), пропитанном буферным раствором с нужным значением pH. Положение белков на бумаге или геле определяют путем фиксации и последующего окрашивания их тем или иным красителем (обычно бромфеноловым синим, ами-довым черным или кумасси синим). Количество белка в каждой фракции можно ориентировочно определять по интенсивности окраски связанного красителя. Такое определение не дает строго количественного соотношения белковых фракций, так как количество красителя, связываемого различными белками, неодинаково. [c.89]

Обработка агаровых пластинок. После окончания электрофореза ток выключают, предметные стекла с агаровым гелем тотчас извлекают из камеры и помещают на 30 мин в 5%-ный раствор СНзСООН. Каждую пластинку покрывают листочком фильтровальной бумаги, смоченным в 5%-ном растворе СНзСООН, для удаления воды и солей и высушивают при комнатной температуре в течение ночи. Для ускорения высушивания его проводят при температуре 37 °С или под струей теплого воздуха. Бумагу, приставшую к агаровой пленке, осторожно снимают, предварительно смочив ее водой. Перед окрашиванием агаровое поле должно быть совершенно сухим и прозрачным. Окрашивание белков на электрофореграммах проводят амидовым черным 10 Б в течение ночи. Не связавшийся с белком краситель отмывают 5%-ным раствором уксусной кислоты. Отмытые электрофореграммы высушивают при 37 °С. [c.93]

В абсолютно идентичных условиях проводить разделение сразу нескольких (10—13) проб белка. На пластины можно наносить меньше белка, чем на цилиндрические гели. В зависимости от используемого красителя, а также от природы белка на пластине полиакриламида удается обнаружить от 5 до 50 мкг белка, [c.97]

Проведение электрофореза. Разделение можно проводить как в трубочках (с. 95), так и на пластинах для вертикального электрофореза (с. 97). После обработки ДСН к образцам добавляют сахарозу (до концентрации 10%) и в качестве лидирующего красителя — бромфеноловый синий (до концентрации 0,001%). Образцы исследуемых белков и белков-маркеров наносят на поверхность геля в объеме от 20 до 100 мкл (каждого или смеси нескольких образцов) и осторожно наслаивают электродный буфер. Нагрузка на гель определяется методом окраски гелей, а также способностью того или иного белка связывать используемый краситель. Как правило, при электрофорезе в трубочках удается обнаружить от 20 до 100 мкг белка, при электрофорезе в пластинке — от 4 до 15 мкг. В электродный буфер катодного отделения добавляют ДСН до концентрации 0,1%. Электрофоретическое разделение проводят при комнатной температуре и силе тока 8 мА на трубочку. При этом сначала устанавливают силу тока - [c.120]

Обработка электрофореграмм. Определяют расстояние, пройденное каждым белком от стартовой линии. Определение можно проводить визуально или с помощью денситометра при 550—600 нм. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс длину пути 1а, пройденного данным белком, а по оси ординат — логарифм его молекулярной массы. Определив длину пути, пройденного белком с неизвестной молекулярной массой 1х, пользуясь калибровочным графиком, определяют молекулярную массу исследуемого белка. При проведении электрофореза в трубочках часто трудно получить хорошо воспроизводимые результаты на разных трубках. В этом случае определяют не абсолютную, а относительную подвижность белков. Для этого определяют отношение длины пробега белковой зоны либо к общей длине геля, либо к длине пробега лидирующего красителя. После этого строят зависимость относительной подвижности белков от логарифма их молекулярной массы. [c.121]

Для построения калибровочной кривой при определении молекулярных масс используют белки-стандарты тропонин С (18 000 Да), тропонин I (24 000 Да), тропонин Т (38 000 Да), яичный альбумин (42 000 Да) и бычий сывороточный альбумин (68 000 Да), а также стандартный набор для определения молекулярной массы белков. При электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия препарат миозина дает расположенную почти у старта интенсивную полосу тяжелых цепей с м. м. ок. 20 ООО Да и три слабые, но отчетливые полоски легких цепей с м. м. ок. 20 ООО Да для самой тяжелой из них и около 16 000 Да — для самой легкой. Подвижность этих полос в описанных выше условиях высока, поэтому при достаточно большой продолжительности электрофореза эти полоски могут обнаружиться почти у фронта красителя (бромфенолового синего). [c.397]

Групповой БСС с аффинностью к большому числу ферментов (киназ, дегидрогеназ, трансфераз, редуктаз, мутаз) и других белков. Образован иммобилизацией на поперечносшитом агарозном геле красителя iba ron Blue F3G-A, содержащего полициклические хромофоры и первичные, вторичные и третичные [c.227]

В рассмотренном примере использования аминокислот в качестве спейсеров изотахофорез проводили в 6,4%-ном ПААГ. После окончания фракционирования (формирования четких зон) белки фиксировали и окрашивали в геле красителем СВВ G-250. В приборе Тахофор изотахофорез микроколичеств белковой смеси и амфолинов проводят в жидкости, заполняющей длинный (до 80 см), хорошо термостатированный тефлоновый капилляр диаметром 0,5 мм. Препарат вводят с помощью микрошприца. Благодаря низкой концентрации амфолинов и белков, а также большой длине капилляра рабочие напряжения в приборе достигают десятка тысяч и более вольт. Регистрацию белковых зон на выходе из капилляра осуществляют с помощью денситометра по УФ-поглощению при 280 нм. Зоны белков и амфолинов в этом приборе мигрируют быстро, и весь анализ белковой смеси обычно занимает менее часа. Однако главный недостаток метода остается в силе —заранее е известно, какие белки и в какой степени будут раздвинуты амфолина-ми. Концентрацию последних приходится брать низкой, чтобы не помешать проявлению проводимости за счет белков. Но смесь амфолинов многокомпонентна. Количество одной из аминокарбоновых кислот, внесенных в составе этой смеси, например как раз той, которая разобщает два близких по своей подвижности [c.77]

Степень замещения — важный показатель при хроматографии на окрашенных сорбентах. Это справедливо и для других методов аффинной хроматографии. Если в связывании участвует не одна, а большее число молекул красителя, то этим достигается более прочная адсорбция (см. рис. 4.40). Кроме того, чем выше значение mt, тем больше оказывается а [уравнение (4.5)]. Иногда бывает так, что высокозамещеннын гель связывает нужный фермент так прочно, что последующий его выход оказывается очень низким. Б таком случае следует использовать менее замещенные гели, уменьшая время обработки геля красителем в ходе приготовления адсорбента. Для получения устойчивых результатов следует фиксировать степень замещения [98]. [c.169]

Для обнаружения нуклеаз при полимеризации геля в него вносят ДНК (10 мкг/мл) или РНК (25 мкг/мл). Если нуклеазы для своего действия нуждаются в ионах Mg " , Са " или то в их растворе ПААГ вымачивают после окончания электрофореза. Далее следует окрашивание геля красителем для нуклеиновых кислот—бромистым этидием (см. главу 4). Окрашивается весь гель, за исключением полос, содержащих нуклеазы, где нуклеиновая кислота разрушена. Можно вести разделение нуклеаз и в присутствии ДДС-Na, блокирующего их действие во время электрофореза. Перед обработкой бромистым этидием ДДС-Na из геля вымьюают. [c.103]

Рис. 10.21. Электрофоретическое разделение белков эритроцитарной мембраны на ДСН-полиакрил-амидном геле. Краситель кумасси синий. (Печатается с любезного разрешения д-ра V. МагсЬез .)

А8ТМ О 1319, на основе которого разработан международный метод 150 3837—75. Аналогичный метод подготовлен в СССР (ФИА метод ПГ 401-308—73) и в рекомендациях СЭВ (РС 3378—72). По этим методам микродоза топлива разделяется На группы углеводородов в капиллярной колонке, заполненной активным адсорбентом [3]. В разделительную часть колонки засыпают небольшой слой геля, окрашенного флюоресцирующим красителем. Колонка (рис. 59) в нижней части сужена в верхнюю Часть колонки в слой адсорбента вводят (шприцем) топливо и на кончике шприца каплю флюоресцирующего индикатора (если он Жидкий). Дозу топлива с индикатором продвигают вниз по столбу адсорбента при помощи безводного изопропилового спирта мета-Но-нафтеновые углеводороды группируются в нижней части столба адсорбента, над ними располагаются непредельные углеводороды и в верхней части — ароматические. Колонку подвергают дейст- [c.140]

Адсорбентом в методе ASTM служит силикагель фирмы В. Р. Грасс с зернами размером 8,3—Ш,6 мм, индикатор — стандартный окрашенный гель — смесь красителя красного нефтяного АВ4 и очищенных красителей олефинового и ароматического. [c.141]

В качестве флюоресцирующего индикатора применяют смесь Судана П1 с олефиновым и ароматическим красителями, растворенную в ксилоле, или какие-либо другие подходящие вещества, с том числе жидкие индикаторы (не только гели). Достоинства метода — малое количество топлива, требуемого для анализа, и отсутствие необходимости в концентрированной серной кислоте. Однако метод не позволяет определить абсолютное количество ароматических углеводородов в топливе, так как вместе с ними в зону попадают сернистые и кислородные соединения, а также, по-видимому, и алкенилароматические углеводороды (фенилалке-ны). Кроме того, точность определения в значительной степени зависит от качества индикатора. [c.141]

Ацилированные препараты хитозана в водной среде набухают, образуя системы, обладающие высокой селективной сорбционной способностью по отношению к аминокислотам, красителям, а также к разделению рацемических смесей. Это обусловливает интерес, который представляют данные препараты в качестве полимерного носителя в гель-хроматофафии, а также при изготовлении волокнистых и пленочных материалов медико-биологического назначения. Под влиянием гидрофобных ацильнЫх радикалов сорбированная этими препаратами при набухании вода частично гидратирует полимерный субстрат, а частично остается инклюдйрованной в порах геля. При этом изменяется структура жидкой воды, обусловливая возможность регулирования интенсивности гидрофобных взаимодействий в системе. В табл. 6.6 приведены результаты экспериментов по изучению взаимодействия воды в изотермических условиях (298 К) с ацилированными препаратами хитозана. [c.334]

Вопрос. Применение ацилированных препаратов хитозана в качестве полимерного носителя для гель-хроматографии позволяет добиться высокой селективности разделения органических соединений. Например, представляется возможным эффективное разделение различных аминокилот, красителей и даже рацемических смесей органических соединений. Какими физикохимическими факторами может быть обусловлено это свойство набухших гелей ацилхитозанов [c.334]

Применение углерода и его соединений. Алмаз (большей частью искусственный) иаходит широкое применение при изготовлении режущего и бурового инструмента, а также как абразивный материал. Природный ювелирный алмаз обрабатывают и получают бриллианты. Графит служит основой конструкционных, огнеупорных, электродных, электротехнических и анти-фрикционнЕлх материалов. Кроме того, графит применяется как замедлитель нейтронов в ядерных реакторах. Технический углерод (сажа) используется как иаполни гель резин и пластмасс. Из сажи вырабатываются краски — типографские, малярные, тушь, красители для кожи и лент пишущих машин. Стеклографит (стеклообразный углерод), получаемый пиролизом некоторых углеродсодержащих соединений, исключительно тугоплавок, механически прочен и химически инертен. Он применяется как конструкционный материал в химическом машиностроении, электротехнике, атомной энергетике, космической технике. [c.197]

Крашение такими красителями осуществляют непрерывным плюсовочно-эапарным и периодическим (на циркуляционных аппаратах) способами. Значит, кол-ва полиакри-лонитрильного волокна окрашивают, кроме того, в жгуте непосредственно при формовании (т. н. крашение в геле). Во всех случаях в состав красильной ванны вводят к-ту (СНзСООН, Н2804), а при крашении периодич. способов — также и выравниватель (обычно глауберову соль). При использ. К. к. можно получить широкую гамму окрасок с вы-со сой устойчивостью к стирке, свету и др. воздействиям. [c.250]

Проверку качества набивки колонки с апиопообменнпком нельзя вести с помощью голубого декстрана, как рекомендовалось для гель-фильтрации, так как голубой декстран на нем сорбируется. Его следует заменить раствором щелочного красителя, например малахитового зеленого. Для катиоиообменников рекомендуется использовать кислый краситель (например, кислый оранжевый II). [c.281]

После завершения электрофореза прибор отключают от источника тока, сливают буферный раствор, трубочки вынимают из прибора и с помощью стальной иглы (под слоем воды) или водой, вводимой шприцом между поверхностью геля и стенкой трубочки, выталкивают столбик геля в 7%-ный раствор уксусной кислоты. Столбики геля помещают в пробирки и добавляют раствор красителя амидового черного 10 Б. Время окрашивания 5—10 мин. В качестве красителя можно использовать кумасси R-250. В этом случае прокрашивают 1—2 ч при комнатной температуре. После окрашивания избыток красителя отмывают 7%-ным раствором уксусной кислоты, цилиндрики геля сохраняют в том же растворе кислоты. [c.96]

Д и ее дихлор- и дибромпроизводиые-промежут продукты в произ-ве кубовых краси гелей См также Полициклические кубовые красители [c.70]

Крашение ПАНВ катионными красителями (одним или их смесью, т. н. смесовое крашение) ведут при постепенном нагревании (ок. 1,5 ч) красильной ванны до т-ры, близкой к кипению. Скорость выбирания разл. К. к. из ванны волокном неодинакова для ее характеристики пользуются эмпирич коэф. совместимости (1-2-быстрое выбирание, 3 среднее, 4-5 - медленное). В случае смесового крашения следует подбирать К. к., имеющие близкие величины этого коэффициента. Наиб, применение в СССР приобрел непрерывный способ крашения в геле, когда в произ-ве ПАНВ свежеполученные нити ( мокрый жгут ) пропускают через [c.354]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология