Инсулин антитела

Инсулин + Антитело 5 Комплекс инсулин-антитело [Комплекс инсулин-антитело] [c.217]

Антитела к свиному инсулину. [c.327]

Опыт ставится обычно следующим образом. В серию про--бирок наливают различные объемы пробы, в которой требуется определить концентрацию гормона, например инсулина.-Одновременно готовят пробы, содержащие известное количество этого гормона. Затем в каждую пробирку добавляют стандартное количество меченого гормона (обычно используются гормоны, меченные испускающим улучи) и специфического к гормону антитела. Раствор инкубируют некоторое-время (несколько минут или часов) для достижения равновесия между гормоном (антигеном) и комплексом антитело — гормон. Далее отделяют комплекс гормон — антитело, например, методом гель-фильтрации или осаждением сульфатом аммония и измеряют радиоактивность полученного комплекса. Если в определяемой пробе гормон содержится в высокой-концентрации, то разведение меченого гормона окажется выше, а радиоактивность комплекса гормон — антитело соответственно ниже по сравнению с пробой, где данный гормон присутствует в более низкой концентрации. Используя известные концентрации гормона, строят стандартную кривую, с помощью которой непосредственно определяют концентрацию-гормона в исследуемой пробе. [c.318]

Белки являются специфическими антигенами антитела, образующиеся при впрыскивании чужеродного белка, дают осадки только с этим белком. Так, например, гемоглобин человека производит в сыворотке кролика антитело, осаждающееся гемоглобином человека, но не осаждающееся гемоглобином быка. Только в случае родственных животных родов антитела не дифференцируются белки сыворотки лошади производят в сыворотке кролика антитело, осаждающееся также белками сыворотки осла. С другой стороны, миоглобин быка обусловливает образование антитела, не осаждающегося гемоглобином того же животного ввиду того что оба вещества содержат гем, разумеется, что специфичность обусловлена не последним, а белковым участком молекулы. Белки теряют антигенные свойства в результате денатурации или частичного гидролиза протеолитическими ферментами. Желатина не обладает антигенными свойствами, потому что ее молекулы сильно расщеплены, а у инсулина, по-видимому, отсутствие антигенных свойств обусловлено слишком малым размером его молекул. [c.448]

Это отнюдь не новая область. Выпекать хлеб и сбраживать сусло люди научились тысячи лет назад. Процессы ферментации, разделения и очистки давно и хорошо известны. Но с появлением сведений о молекулярной структуре и основных аспектах химии генетического материала в биотехнологии началась новая эра. (см. разд. Ш-Е). Она ознаменовалась разработкой процедур сращивания генов, позволяющих химикам использовать бактерии для производства сложных биологически активных молекул. Были найдены ферменты, способные разрывать цепи ДНК в нужных местах и вводить в них чужеродную ДНК с новыми химическими связями. Модифицированная ДНК вырабатывает белки в соответствии с заложенным в нее измененным кодом. Этими белковыми продуктами могут быть гормоны, антитела или другие нужные нам сложные химические соединения со специфическими свойствами и функциями. Вырабатываемый бактериями с внедренным геном человека интерферон, по-видимому, окажется ценным средством лечения целого ряда болезней. Уже появился на рынке инсулин человека, производимый методом сращивания генов. Активность в этой области высока, и коммерческие предприятия возникают быстро. [c.130]

Крупные открытия в науке обычно делаются при разработке фундаментальных проблем. Мы разделяем мнение большинства врачей о том, что последние достижения биотехнологии, нашедшие применение в самых важных отраслях медицины, оказывают и будут оказывать революционизирующее воздействие на диагностику, лечение и понимание основ патологии многих тяжелых заболеваний. Ориентируясь на читателей, не имеющих медицинской подготовки, мы расскажем о том, какую важную роль играют в клинической практике некоторые новые подходы, а также широко используемые методы диагностики. Мы по необходимости ограничимся лишь немногими примерами, но читатель может без труда дополнить их множеством других использованием в терапии белков, которые можно синтезировать при помощи видоизмененных методами генетической инженерии микроорганизмов, применением моноклональных антител, ферментов и т. д. Мы не обсуждаем использующиеся при этом технологические процессы сколько-нибудь подробно (о них речь идет в других главах) исключение составляет лишь раздел о синтезе инсулина человека дело в том, что инсулин был первым белком, полученным с помощью технологии рекомбинантных ДНК и испытанным на людях, а также первым или одним из первых) препаратом такого рода, нашедшим применение в клинике. [c.325]

Антитела против инсулина Инсулин 13 [c.37]

Такие продукты, как интерферон, моноклональные антитела, антигены, вирусы и гормоны, могут извлекаться как непрерывным, так и периодическим способом. Были исследованы процессы с применением мембранных реакторов, в которых использовались панкреатические клетки для синтеза инсулина, а также для получения других белковых гормонов и энзимов. Периодический способ давно применялся для выращивания бактерий и дрожжевых клеток ферментацией. Основной стадией непрерывной ферментации является выделение токсичных продуктов. Легче всего эта операция осуществляется путем рециркуляции клеток через блок полых волокон [26]. [c.96]

Наконец, при денатурации происходит утрата белками биологической активности. Воздействие денатурирующих агентов приводит к инактивации ферментов, гормонов и вирусов. Эта потеря специфических биологических свойств считается важным критерием денатурации. Однако имеется и ряд исключений. Например, активность инсулина сохраняется при денатурации мочевиной, в растворах которой сохраняют свою активность также трипсин, папаин и пепсин рибонуклеаза и лизоцим обладают тепловой устойчивостью, и их активность слабо изменяется при кипячении в разбавленной кислоте. Наряду с потерей ферментативной активности наблюдается и изменение иммунологических свойств. Как известно, иммунологическая активность белков характеризуется двумя показателями — антигенностью, т. е. способностью возбуждать образование антител, и специфичностью. Исследование этих показателей привело к выводу, что при денатурации ряда белков происходит понижение антигенности, но сохраняется иммунологическая специфичность. [c.191]

Выполняют функции ферментов, антител и в некоторых случаях гормонов (например, инсулин), а также ряд других важных функций [c.130]

Глобулины — это белки с очень крупными молекулами, содержание которьгх в крови составляет около 3,4 г%. а- и (3-Глобулины связывают и переносят гормоны (включая тироксин и инсулин), холестерол, липиды, железо, витамины В , А, В и К. Гамма-глобулины представляют собой антитела и образуются не печенью, а лимфоцитами и другими клетками иммунной системы. Они участвуют в иммунном ответе (разд. 14.9). К другим важным белкам плазмы относятся факторы свертывания крови, в том числе протромбин и фибриноген, функции которьгх описаны в разд. 14.8.5. [c.427]

Среди них наибольший интерес вызывают датчики на основе кислородного электрода. В качестве ферментных меток обычно применяют глюкозоксидазу или каталазу. На этом принципе, например, работает иммуноферментный амперометрический датчик для определения инсулина. Антитела инсулина иммобилизуют на капроновой сетке и закрепляют ее на поверхности кислородного электрода. При внесении электрода в анализируемый раствор антитела взаимодействуют с инсулином, к которому пришита глюкозоксидаза, с образованием комплексов АТ-инсулин-Е, где Е - фермент. Когда в растворе, наряду с меченым инсулином, присутствуют молекулы инсулина без фермента, то количество фермента на электроде будет тем меньше, чем выше концентрация инсулина. При внесении электрода в раствор глюкозы изменение величины тока будет соответствовать концентрации инсулина в анализируемом растворе. Кислородный электрод используется также для определения альбумина в сыворотке крови человека. Основные характеристики некоторых иммуноферментных электродов приведены в табл. 14.3. [c.506]

Инсулины различных видов животных не идентичны друг другу (рис. 95), поэтому инсулин одного вида может проявлять антигенное действие при введении его особи другого вида [1568]. Обычно терапевтическое применение инсулинов животного происхождения не сопровождается образованием антител в количестве, достаточном для того, чтобы вызвать осложнения. Все же иногда наблюдались аллергические реакции, а также выработка организмом иммунитета по отношению к инородному инсулину эти явления приписывались образованию в плазме человека связывающих инсулин антител [75а, 219, 2590]. В таких случаях полезно перейти на лечение инсулином другого вида. (Более подробно вопрос об образовании антител, связывающих инсулин, рассматривается в обзорах [1776а, 17766].) [c.470]

Вы хотите измерить концентрацию инсулина (молекулярш масса 11 466) в образце, пользуясь инсулином, меченным радиоа тивным йодом (период полураспада 7 сут). Предположим, чт мечение производится из расчета один атом радиоактивного йод на молекулу инсулина, что йод не влияет на связывание инсулин антителами, что эффективность счета (вероятность зарегистриро вать каждый радиоактивный распад как импульс ) составляв 50%, а минимальное общее количество радиоактивности (связав ная + свободная) для данного метода должно быть не менее 1 ОН импульсов в минуту (имп/мин). [c.218]

Готовят растворы двух препаратов инсулина в концентрации 100 мкг/мл и раститровывают в микропланшете для ИФА в концентрациях от 10 мкг до 5-10-5 мкг в лунку. Инкубируют в течение ночи при 4°С, тщательно отмывают. В лунки вносят раствор антител к свиному инсулину в концентрации 10 мкг/мл по 100 мкл. Инкубируют в течение часа при 37 °С, тщательно отмывают. Вносят конъюгат антимышиных антител с ферментной меткой и инкубируют в течение часа при 37 °С. Тщательно отмывают и вносят соответствующий субстрат (с. 319). Через 30 мин определяют величину оптической плотности при соответствующей длине волны (с. 320). Строят графики зависимости величины оптической плотности от разведения антигена. Полученные графики должны свидетельствовать о том, что специфичность связывания антител к свиному инсулину значительно выше по сравнению со связыванием бычьего инсулина, хотя в последнем случае и наблюдается специфическое связывание. Такой результат свидетельствует [c.327]

В 20-40-е гг. получили развитие физ.-хим. методы анализа Б. Седиментациоиными и диффузионными методами были определены мол. массы многих Б., получены данные о сферич. форме молекул глобулярных Б. (Т. Сведберг, 1926), выполнены первые рентгеноструктурные анализы аминокислот и пептидов (Дж. Д. Бернал, 1931), разработаны хроматографич. методы анализа (А. Мартин, Р. Синг, 1944). Существенно расширились представления о функциональной роли Б. был выделен первый белковый гормон-инсулин (Ф. Бантинг, Ч. Г. Бест, i922 антитела были идентифицированы как фракция у-глобулинов (1939) и тем самым обнаружена новая ф-ция Б.-защитная. Важным этапом явилось открытие ферментативной ф-ции мышечного миозина (В.А. Энгельгардт, М. Н. Любимова, 1939) и получение первьк кристаллич. ферментов (уреазы-Дж. Б. Самнер, 1926 пепсина-Дж.X. Нортроп, 1929 лизоцима-Э. П. Абрахам, Р. Робинсон, 1937). [c.248]

Синтезированный из проинсулина инсулин может существовать в нескольких формах, различающихся по биологическим, иммунологическим и физико-химическим свойствам. Различают две формы инсулина 1) свободную, вступающую во взаимодействие с антителами, полученными к кристаллическому инсулину, и стимулирующую усвоение глюкозы мышечной и жировой тканями 2) связанную, не реагирующую с антителами и активную только в отношении жировой ткани. В настоящее время доказано существование связанной формы инсулина и установлена локали- [c.268]

Биологические функции белков исключительно разнооб разны. Некоторые из них обладают свойствами гормонов, ре гулирующих различные процессы обмена веществ (например инсулин поддерживает уровень сахара в крови) другие белкв действуют как катализаторы (ферменты) биологических про цессов, и, наконец, ряд белков является биологическим стро ительным материалом (например, коллаген соединительны тканей и кератин волос). Выше уже были упомянуты свойств гемоглобина млекопитающих как переносчика кислорода Функция некоторых белков крови заключается в обраЕэваниЕ антител, обусловливающих сопротивляемость к заболеваниям а так называемые нуклеопротеиды входят в качестве важной составной части в гены, которые несут наследственную инфор мадию и передают ее в процессе деления клетки. Вирусы, на пример вирус табачной мозаики, состоят из нуклеопротеидов заключенных в белковую оболочку. Структура многих вирусо настолько регулярна, что они могут быть получены в виде хо рошо образованных кристаллов. [c.512]

Из рис 46 следует, что ионный канал в н-холинорецепторе создается самим рецептором Теперь доказано, что женщины, болеющие раком молочной железы и не имеющие на раковых клетках рецепторов эстрогена, излечиваются эндокринными препаратами лишь в 10% случаев Напротив, при наличии таких рецепторрв излечиваются подобными средствами в 50-65% случаев и более Заболевания типа тяжелой миастении (Myastenia gravis) и редкой устойчивой к инсулину формы диабета обусловливаются аутоиммунными реакциями, когда собственные антитела блокируют рецепторы, вызывают их транспозицию (перемещение) внутрь клетки и разрушение [c.132]

Агрегация молекул инсулина часто затрудняет его точную идентификацию при гель-хроматографии тем не менее в подходящем растворителе с помощью теля декстрана удалось, например, выделить кристаллический инсулин из одного экземпляра рыбы [37], из 10— 20 г поджелудочной железы быка [38] и из одной железы кошки [39]. Инсулин, меченный 1г (см., напри-Мер, [40]), служит для обнаружения взаимодействия антигена с антителом. Комплекс, образующийся в сыворотке, был отделен от свободного инсулина на сефадексе 0-75 [41]. С помощью хроматографии на сефадексе 0-200 было показано, что имеется по крайней мере две белковые фракции, с которыми связывается инсулин [42]. Ингибитор инсулина из альбуминовой фракции был частично очищен в препаративных масштабах [43]. С другой стороны, наблюдалось, что часть [c.216]

Комплексы сывороточных белков с другими веществами белковой природы могут быть также выделены с помощью гель-хроматографии, как это было уже показано на примере комплекса гемоглобин — гаптоглобин (фиг. 16) [49]. Еще проще количественно определить емкость гемоглобина (способность гемоглобина к комплексообразованию) на сефадексе G-100 [50]. Фракция макроглобулинов (выделение на сефадексе G-200), очевидно, содержит белок, связывающий трипсин [51, 52]. Активность при этом сохраняется лишь частично [51, 52]. Комплексы антиген — антитело часто выделяли на пористых гелях, а затем после разложения на составные части исследовали более подробно (см. литературу, приложение IX). В предыдущем разделе на примере инсулина были рассмотрены возможности изучения растворимых иммунокомплексов. Иммунологические методы в сочетании с гель-фильтрацией играют важную роль в исследовании строения Y-глобулинов. Среди работ на эту тему (см. литературу, приложение X) имеются блестящие исследования, посвященные восстановительному расщеплению и выделению L- и Н-цепей, их рекомбинации, ограниченному действию папаина и, наконец, иммунологическим свойствам интактного белка и его фрагментов. [c.218]

В качестве иллюстрации рассмотрим пример иммуноадсорбции, Куатреказас [4] выделял инсулин на колонках с сефарозой, содержащей антитела против свиного инсулина, привязанных при pH 6,5 и 9,5. Как показано в разд. 8.2.4, белок привязывается к активированной бромцианом сефарозе аминогруппами в непрото-нировапной форме. При понижении pH происходит также уменьшение числа связывающихся групп. Различие в pH привязки бел- [c.74]

Цистеин заслуживает особого упоминания по другой причине. Он может присутствовать в белках в двух формах-либо в форме собственно цистеина, либо в форме цистина, молекула которого представляет собой две молекулы цистеина, ковалентно связанные друг с другом при помощи дисульфид-ного мостика, образующегося при окислении обеих тиоловых групп (рис. 5-7). Цистин играет важную роль в формировании некоторых белков, например гормона инсулина и иммуноглобулинов (антител). В этих белках две половины молекулы цистина служат строительными блоками двух разных полипептидных цепей, и благодаря дисульфид-ной связи они оказьшаются поперечно связанными между собой (разд. 6.8). Такие поперечные связи обычно отсутствуют во внутриклеточных белках, но широко представлены в белках, секрети-руемых во внеклеточную жидкость, в которой они выполняют свои функции. [c.117]

Если в качестве аффинного лиганда используется кофактор, согласно данным Лоу и Дина [57], очень важно, чтобы нативная конформация, кофактора сохранялась даже после его связывания. Это справедливо также в том случае, если аффинным лигандом является биологически активный белок. Он должен быть присоединен к носителю минимально возможным числом связей, так как при этом увеличивается вероятность сохранения нативной третичной структуры белка. В качестве примера приведем работу Куатреказаса по выделению инсулина [14] на колонке с сефарозой с присоединенными при pH 6,5 или 9,5 антителами к свиному инсулину. Как будет показано ниже, белок связывается с активированной бромцианом сефарозой посредством непротонированных аминогрупп. Снижение pH уменьшает число связавшихся групп. Различия в величинах pH в процессе присоединения приводят к тому, что первое производное (pH 6,5) характеризуется почти 80%-ной теоретически возможной емкостью по инсулину, в то время как у второго производного (pH 9,5) эта емкость равна только 7%. Поскольку общее содержание белка одинаково в обоих случаях, второе производное должно содержать иммуноглобулин, который не способен [c.11]

В настоящее время при помощи хроматографии производят полное удаление солей из воды (получение дистиллированной воды без перегонки), разделение сложных смесей аминокислот и гидролизатов белков (см. рис. 56), разделение сложных смесей фосфоса-харидов, пуриновых и пиримидиновых оснований (рис. 57), фракционирование белков (цитохрома, рибонуклеазы, инсулина и др.), фракционирование нуклеиновых кислот и различных полимеров, отделение пепсина, трипсина, алкогольдегидрогеназы, очистку антител, выделение стрептомицина, хлортетрациклина, полимиксина и других антибиотиков, а также алкалоидов, гормонов, антигиста-минных веществ. Большой интерес представляет также терапевтическое использование ионообменных смол для регулирования состава ионной среды в желудочно-кишечном тракте и для диагностических целей. [c.116]

Белки, функции. По функциональному признаку белки можно раздедйть на ферменты (РНК-азы, цитохромы, трипсин и др.), запасные белки (казеиноген, зеин, глиадин и др.), транспортные (гемоглобин, церулоплазмин и др.), сократительные (миозин, актин и др.), защитные (антитела, фибриноген и др.), токсины (дифтерийный токсин, змеиные яды и др.), гормоны (инсулин, адренокортикотропный гормон и др.), структурные белки (гликопротеиды, а-керотин, фиброин, мукопротеиды и др.). [c.17]

Испытания на способность нейтрализовать антитела, связывающие бычий инсулин, показали, что это соединение обладает иммунологическими свойствами, подобными свойствам природного бычьего инсулина. Напротив, А-тресковый-В-бычий инсулин проявляет свойства, аналогичные свойствам природного трескового инсулина. Эти данные свидетельствуют о том, что иммунологические свойства инсулина определяются главным образом структурой цепи А. Берсон и Ялоу [218] (ср. [1482]) нашли, что свиной инсулин индуцирует образование антител в организме человека. Свиной инсулин отличается от инсулина человека природой С-концевого остатка цепи В. Оказалось, что после отщепления этого остатка или даже восьми С-концевых остатков цепи В образуется модифицированный инсулин, все еще сохраняющий способность реагировать с антителами организма человека, образовавшимися при действии свиного инсулина. Эти исследователи указывали также на различие трехмерных структур инсулина человека и свиньи как на одну из причин, определяющих природу антигенных свойств гормона. [c.475]

Катсояннис и сотр. [1195а] осуществили рекомбинацию синтетической цепи А с природной цепью В и получили вещество, активность которого составляла 0,5—1,2% активности инсулина (испытания на диафрагме мыши и иммунологический тест). Активность нейтрализовали антителами, связывающими бычий инсулин. Активное вещество было получено также [1189а] рекомбинацией природной цепи А с синтетической цепью В и рекомбинацией двух синтетических цепей [1183а]. Подробные данные об активности двух последних веществ не приведены. [c.489]

Нарущения метаболизма инсулина ведут к сахарному диабету у 10% больных имеет место инсулинзависимый диабет (в крови мало инсулина, катаболические процессы преобладают над анаболическими) у 90% — инсулиннезависимый диабет (в крови достаточно инсулина, но снижено количество инсулиновых рецепторов тучные люди). Причинами диабета являются дегенерация или истощение островков Лангерганса снижение чувствительности тканей к инсулину (нарущение метаболизма рецепторов и накопление антител к ним) повыщение активности инсулиназы множественные молекулярные дефекты биосинтеза инсулина. [c.392]

Химическая индивидуальность, или видовая специфичность, белков легко выявляется серологическим путем. Если животному, например кролику, ввести в кровь чужеродный ему белок (антиген), то в организме вырабатываются специфические антитела, являющиеся белками глобулино-ной природы и находящиеся, главным образом, в у-глобулиновой фракции белков сыворотки крови. Антигены и антитела взаимодействуют друг с другом с образованием осадков (преципитата), что можно наблюдать при добавлении к сыворотке крови животного, которому ввели в кровяное русло чужеродный белок ( иммунизированного животного), того же белка (антигена). Образование осадка носит название реакции преципитации . Эта реакция весьма тонкая и позволяет выявить свойства белков, неуловимые при их хими ческом изучении. Так, например, тщательное химическое изучение гемоглобина крови лошади, овцы и собаки не выявляет каких-либо особенностей в их химической структуре. Между тем при введении этих гемоглобинов в кровь кролика образуются специфические для каждого из них антитела. Известны, однако, некоторые белки, почти не вызывающие образования антител. Гормоны белковой природы (инсулин, некоторые гормоны гипофиза и др.), изолированные из желез внутренней секреции крупного рогатого скота, при введении их в кровь человека (а также животных) практически не вызывают образования антител. Надо полагать, что химические различия в структуре белков-гормонов животных и белков-гормонов человека настолько малы, что они не всегда выявляются серологически. Это обстоятельство имеет большое практическое значение, так как оно позволяет широко применять в медицинской практике белки-гормоны без опасения вызвать при повторном введении их в организм человека реакцию преципитации. [c.38]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология