Белки уксусным ангидридом

Для того чтобы освободить фосфатные группы НК от белков, препарат обрабатывают уксусным ангидридом при 45 или 60° в течение 4 часов. При этом ацетилируют аминогруппы лизина и аргинина и достигают максимального связывания красителя. Идеальным является одновременное блокирование карбоксильных групп белка, которые в слабокислой среде могут конкурировать за краситель. [c.159]

Для раздельного определения ДНК и РНК в параллельных препаратах гидролизом в 1 н. НС1 при 60° в течение б—10 минут удаляют РНК. Затем в обработанных и необработанных кислотой препаратах ацетилируют блокирующие группы белка в течение 18—24 часов при 60° в 100%-ном уксусном ангидриде. Подготовленные таким образом препараты окрашивают следующим образом. [c.160]

Неспецифическое связывание красителя учитывается в параллельных препаратах, обработанных сначала хлорамином Т или уксусным ангидридом, затем РНК-азой. Неспецифическое связывание красителя после обработки хлорамином Т и уксусным ангидридом обусловлено двумя факторами. Во-первых, наличием в протоплазме свободных кислых групп белков и полисахаридов, во-вторых, некоторым смещением ИЭТ белка в кислую сторону за счет блокирования или удаления аминогрупп. [c.169]

Правда, имеются и строго специфические реагенты на отдельные функциональные группы белков. Так, весьма селективными являются большинство реагентов на 5Н-группы избирательно реагирует с аминогруппами уксусный ангидрид и с карбоксильными группами — этерифицирующие агенты (метиловый и этиловый спирты) селективными по отношению к ОН-группам оксикислот являются серная кислота и фосфорный ангидрид. Однако для ряда белков условия этерификации или обработка серной кислотой и фосфорным ангидридом оказываются губительными и приводят к денатурации или распаду белка. Здесь мы сталкиваемся с третьей особенностью химических реакций белков проведение реакций в условиях, удовлетворительных для аминокислот, может привести к денатурации белка. Поэтому эти реакции приходится осуществлять возможно более мягким путем, не приводящим к необратимым структурным изменениям. [c.63]

Уксусный ангидрид наиболее широко применяется для ацилирования белков. Он более специфичен, чем кетен, не вызывает денатурации белков и не требует использования специальной аппаратуры. Для проведения реакции белок растворяют или суспендируют в охлажденном растворе ацетата натрия и к суспензии медленно добавляют уксусный ангидрид [c.69]

Реакции ацетилирования белков были изучены очень подробно. Для селективной реакции с аминогруппами ряда белков удобным реагентом оказался уксусный ангидрид, применяющийся при пониженной или нормальной температуре в ацетатном буферном растворе при pH 7—8. причем для этой цели уксусный ангидрид берут в определенном, строго ограниченном количестве [50, 61]. Реакцию проводят очень просто. К 1 й белка, растворенного или суспендированного в 20 мл раствора ацетата натрия (концентрация которого вдвое меньше концентрации насыщенного раствора), при охлаждении в ледяной бане прибавляют при перемешивании в несколько приемов в течение примерно 1 час уксусный ангидрид в количестве 1,2 мл. После исчезновения запаха уксусного ангидрида образовавшееся производное белка выделяют (количественно) путем диализа. Содержание аминного азота в получающемся продукте составляет для большинства белков 5—40% от первоначального значения. Определение количества введенных ацетильных групп дает результаты, соответствующие данным по уменьшению содержания аминного азота. [c.338]

Действие уксусного ангидрида на некоторые белки [c.340]

Принцип. Метод основан на осаждении белков спиртом, экстрагировании холестерина хлороформом. При взаимодействии холестерина, уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты в безводной среде разживается интенсивно зеленая окраска. [c.69]

Чувствительность детектирования белков можно повысить, если ввести в них радиоактивные изотопы. Для этого используют радиоактивный иод, а также меченные С иодацетамид, уксусный ангидрид [1170] или формальдегид [1084]. Некоторые из перечисленных соединений применяют для изучения топографии мембранных или рибосомных белков [265, 1003]. В зависимости от удельной активности реагентов метод позволяет обнаруживать 0,1 —1,0 мкг белка. [c.224]

Смесь нагревают при 50 °С в течение 2 ч, затем добавляют еще 100 мг тиоцианата аммония и нагревают еще 18 ч. Для разрушения избытка уксусного ангидрида добавляют воду (3,0 мл). Тиогидантоин белка отделяют от побочных продуктов на сефадексе G-25. [c.503]

Для оценки молекулярного веса белков, образующих при электрофорезе отдельные полосы, необходимо параллельно на той же пластинке проводить электрофорез смеси белков с известными молекулярными весами. В качестве стандартов не рекомендуется брать протеолитические ферменты (например, трипсин или химотрипсин), так как они сохраняют активность и после кипячения с 2% ДСН. При идентификации белков методом радиоавтография удобно использовать белковые стандарты, меченные С-иодацетатом или С-уксусным ангидридом. [c.117]

Еше один метод определения N-концевой аминокислоты в белках и пептидах был предложен Шоу (1961). В этом методе используется кристаллический а-ацетил-р-этокси-Н-карбэтоксиакриламид II, получаемый присоединением уретана к дикетену с последующей реакцией образовавшегося N-ацетоацетилуретана I с ортомуравьиным эфиром и уксусным ангидридом. Реагент II в слабощелочном водном растворе быстро реагирует с пептидом, при этом образуется соответствующее 5-ацетилурацильное производное III. При последующем кислотном гидролизе получается смесь аминокислот и замещенный урацил IV из концевой аминокислоты. [c.692]

Аналогичным методом определяли аминогруппы, содержащиеся в липидах [100]. В работе 101] описано определение различных аминокислот в пробах белка величиной 2 мкг с применением изотопа Н в качестве индикатора. С применением реагента, меченного изотопом Н, и индикаторного изотопа (в виде N-ацетильного производного) или определили тироксин (3,5,3, 5 -тетраиод-трионин) [102]. Кроме этого, используя уксусный ангидрид, меченный тритием, для образования производных, и ацетил- С-произ-водное в качестве индикатора, определили 3-иодтирозин и 3,5-ди-иодтирозин [103]. Вместо моноацетильных производных тироксина и трииодтрионина в работе [104] рекомендуется применять их ди-ацетильные производные, которые более стабильны, более растворимы в полярных растворителях и легче очищаются. [c.313]

Гидролиз белков ЗМ /г-толуолсульфокислотой или АМ метан-сульфокислотой [7,8], содержащей 0,2% триптамина, в вакууме при 110°С, в течение 3 суток с хорощим выходом приводит к аминокислотам, включая триптофан, однако углеводы могут мешать. Триптофан можно определять также после щелочного гидролиза, но при этом разрушаются полностью аргинин, цист(е)ин, серин и треонин. Общее содержание амидов, обусловленное наличием аспарагина и глутамина, можно определить после гидролиза 10 М НС1 при 37°С в течение 10 суток и последующего анализа на аммиак с помощью микродиффузионной техники. Раздельное определение аспарагина и глутамина можно провести с помощью предварительной этерификации (метанол-уксусный ангидрид) свободных карбоксильных групп, последующего восстановления (борогидрид лития) образовавшихся сложноэфирных групп и определения аспарагиновой и глутаминовой кислоты после кислотного гидролиза соответственно в виде v-гидрокси-а-аминомасляной кислоты и б-гидрокси-а-аминовалериановой кислоты. Содержание аспарагина и глутамина получают путем вычитания этих величин из содержания аспарагиновой и глутаминовой кислот после полного гидролиза немодифицированного белка. Полный ферментативный гидролиз белков без деструкции аминокислот можно осуществить, используя смешанные конъюгаты Сефарозы с трипсином, химотрипсином, пролидазой и аминопептидазой М [9] [c.260]

Белок является полифункциональным соединением, в котором каждый аминокислотный остаток выполняет определенную роль в поддержании нативиой конформации или проявлении биологической функции. Если используются модифицирующие агенты достаточно широкой специфичности, конечный результат зависит от доступности тех или иных функциональных групп белка в данных условиях. В частности, ацилирование с помощью радиоактивно меченного уксусного ангидрида было предложено в качестве метода локализации остатков лизина, расположенных на поверхности белковой глобулы (Б. Хартли). Этот прием широко применяется и для исследования топографии мембранных белков, когда доступными действию так называемых непроникающих реагентов оказываются лишь группировки, расположенные вне мембраны. [c.160]

Основная область научных исследований — химия белка. Разработал (1920—1930) методы получения пептидов, в частности ами-нолизом азлактонов аминокислотами или их эфирами (реакция Бергманна). Открыл (1926) реакцию циклизации К-галогенацил-аминокислот с одновременным де-галогенированием при нагревании с уксусным ангидридом в пиридине с образованием азлакюнов (реакция Бергманна). Установил (1928) способность натрия и лития присоединяться к многоядерным ароматическим углеводородам. Совместно с Л. Зервасом предложил (1932—1936) способы получения исходных производных аминокислот, в частности способ создания К-карбоксипроизводных. Провел цикл исследований, посвященных протеолитическим ферментам и положенных в основу современной классификации последних. Открыл (1934) реакцию определения С-концевой аминокислоты в пептидах через соответствующие альдегиды, полученные превращением пептида в азид, затем в карбобенз-оксипроизводное с последующими гидрированием и гидролизом (карбобензокси-метод, или реакция Бергманна). Издал труды Э. Г. Фи- [c.50]

Были также разработаны ультрамикрометоды, основанные на сочетании двойного изотопного разбавления, бумажной хроматографии и электрофореза [193]. В настоящее время для полного аминокислотного анализа требуется только 2 мкг белка. Первоначально аминокислоты метили с помощью и содержащихся в г-иодфенилсульфонилхлориде, получая при этом их шипсильные производные [94]. Однако в дальнейшем оказалось более удобным получать изотопы с более длинным периодом полураспада для этого аминокислоты ацетилировали уксусным ангидридом, содержащим тритий и [193]. [c.402]

Пиронин связывается РНК клетки только за счет ее свободных фосфатных групп [3]. Если микроскопический препарат перед окрашиванием обработать хлорамином Т или уксусным ангидридом, т. е. дезаминировать или блокировать аминогруппы белка, то связывание пиронина клеточными структурами, содержащими РНК, усилится. Объясняется это тем, что блокирование аминогрупп белка сопровождается освобождением фосфатных групп РНК, участвующих в образовании фосфоамидных связей [1], [7]. [c.152]

Освобождение фосфатных групп РНК хлорамином Т, азотистой кислотой и уксусным ангидридом. Освобождение связанных с белком фосфатных групп РНК хлорамином Т (НзС — —СбН4 —502 — Ы = ЫаС1) и азотистой кислотой происходит в результате дезаминирования аминогрупп белкового компонента. Безводный уксусный ангидрид (СНзСО)20 блокирует эти группы [10], [12]. [c.168]

Процедура анализа аминокислотного состава белка сводилась к следующему. Белок гидролизовали 6 н. НС1 в запаянных под разрежением трубках в течение 24 час. Избыток НС1 удаляли выпариванием под вакуумом. Остаток разбавляли в небольшом количестве воды, затем подщелачивали 6 н. NaOH до щелочной реакции по тимолфталсину. Часть гидролизата, соответствующую 25 мг бе.лка, ацетилировали пятикратным внесением 5 мл 4 н. NaOH и 1 мл уксусного ангидрида в течение 15 мин. Между прибавлением реактивов раствор каждый раз встряхивали и о-хлаждали. Затем щелочной раствор оставляли стоять 10 мин.,после чего подкисляли 10%-ной серной кислотой (с контролем по тимол-синему). Ацетилированные аминокислоты экстрагировались из полученного раствора смесью хлороформа и 17%-ного бутилового спирта. Экстракт упаривали досуха и остаток растворяли в 1—2 мл хлороформа, содержащего 1% бутилового спирта. В таком виде смесь ацетилированных аминокислот была готова для хроматографического анализа. [c.144]

В последнее время для этой цели был избран уксусный ангидрид. Сейчас разработан (и включен в переработанную таблицу) также метод гуанидирования — превращение остатков лизина в остатки гомоаргинина с помощью О-метилизомочевины. Этот метод, повидимому, специфичен по отношению к аминогруппам, и, вероятно, реакция проходит только с остатками лизина. Он является перспективным для изучения влияния заряда и конфигурации на физические и биологические свойства белков. [c.282]

В основе этого метода лежит реакция между С-концевой аминокислотой пептида или белка и роданидом аммония в среде уксусного ангидрида, приводящая к образованию ацилтиогидантоина. Это производное разлагается гидратом окиси бария на тиогидантоин С-концевой аминокислоты и оставшуюся часть пептидной цепочки. [c.488]

Данный метод в принципе аналогичоуу методу П 108 (50 мг белка, 20 жг роданистого аммония, 4 ли смеси уксусного ангидрида и уксусной кислоту.у). Раствор белка ууо ny>yino нагреушть иа водяной бане [c.783]

Десять или немногим более лет назад кетен был одним из наиболее широко используемых для модификации белков реагентом. В связи с этим была детально изучена реакционная способность и специфичность его по отношению к разным функциональным группам белков по широте и многообразию применения этот реагент приближался к азотной кислоте и формальдегиду, использовавшимся для модификации сывороточных белков, антигенов и антител. Позднее, однако, применение кетена значительно сократилось, что было связано с его очень высокой реакционной способностью и вытекающей отсюда в ряде случаев неспецифичностью, а также токсичностью и относительным неудобством его использования по сравнению с другими ацетилирующими агентами типа уксусного ангидрида [54]. [c.361]

Преимуществом этого метода является прямое определение холестерина в сыворотке. При этом уксусная кислота и уксусный ангидрид экстрагируют холестерин, осаждают белки и обеспечивают обезвоживание (К1сЬ-1ег1сЬ, ЬаиЬег). Определение холестерина в желтушных сыворотках ведет к завышенным результатам. Билирубин с холестериновым реактивом дает оранжевую окраску, а добавление серной кислоты ведет к быстрому [c.71]

Осн. направления исследований — химия высокомол. соед., биохимия и химия красителей. Выделил ксантопурпурин, псевдопурпурин, карминовую к-ту. Открыл карбонильные соед. платины. Получил циангидриды глюкозы и левулезы и гидролизовал их до к-т, что в конечном счете привело к созданию метода доказательства структуры сахаров. Получил (1869) ацетилцеллюлозу действием уксусного ангидрида (при 180 С) на целлюлозу. Сформулировал (1875) уреидную теорию строения белков. Президент Французского хим. об-ва (1871, 1872, 1885). [c.516]

Сначала клетки обрабатывают колцемидом, чтобы заблокировать образование веретена зто приводит к накоплению метафазных клеток в культуре. Такие клетки имеют более округлую форму и слабее прикреплены к пластику, чем другие клетки популяции, поэтому при встряхивании флакона они легко отделяются от субстрата. Метафазные клетки затем обрабатывают гипотоническим раствором (что приводит к их набуханию), после чего фиксируют в смеси метанол — уксусная кислота. Когда суспензию таких клеток по каплям наносят на предметное стекло, клетки лопаются и хромосомы расправляются на стекле по мере высыхания раствора. Реактивы для этой процедуры приведены в табл. 8.12, а сам метод описан в табл. 8.13. На следующем этапе хромосомы обрабатывают РНКазой, чтобы исключить гибридизацию зонда с хромосомной РНК, и затем уксусным ангидридом, который ацетилирует хромосомные белки и тем самым еще более уменьшает неспецифическое связывание зонда. Хромосомную ДНК денатурируют нагреванием и гибридизуют с зондом, предварительно меченным I- TP. Избыток меченого зонда удаляют серией промывок в низкосолевом буферном растворе и покрывают препарат фотоэмульсией. После необходимой экспозиции выявляют участки образования зерен серебра, соответствующие сайтам амплификации гена. Необходимые реагенты приведены в табл. 8.14, а сама процедура описана в табл. 8.15. [c.266]

Третий вариант был разработан для белков. Поскольку большинство белков нерастворимо в безводном диоксане, используемом при мечении пептидов, этот растворитель был заменен на смесь водного пиридина, и уксусного ангидрида. В такой системе три реакции проходят в одну стадию (рис. 18.3). Предполагается, что включение метки происходит с образованием промежуточного оксазолинона, находящегося в равновесии с исходным С-концевым пептидом. [c.490]

При использовании системы пиридин — НгО — уксусный ангидрид (4 2 1) в условиях, изложенных ранее, протекает быстрый катализируемый основанием гидролиз уксусного ангидрида, что приводит к разрушению ангидрида до завершения образования оксазолинона и к снижению выхода реакции. Использование большого избытка уксусного ангидрида не улучшает результаты, так как значительно возрастает температура реакции, что влияет на растворимость белка и происходят нежелательные побочные реак-цчи [14, 38]. При использовании смеси пиридин — НгО — уксусный ангидрид (3 1 3) на холоду включение трития в С-концевой остаток Leu лизо-ц 1ма яичного белка увеличилось в 20 раз [57]. [c.491]

Методика 3 [481 Отщепляют тиогидантоин 0,5 М триэтиламином. 18.4.1.2. Расщепление белков при помощи тиоцианата. Поскольку белки плохо растворимы в смеси уксусная кислота — уксусный ангидрид, было предложено использовать тригидрат гексафтороацетона [18] и трифтороуксусный лнгидрид [96[. [c.503]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология