Активированный пептид

Три основные подхода к созданию полипептидной цепи показаны на схеме (55), части (а) — (в). Первый подход, состоящий в постепенном наращивании со стороны концевой аминогруппы участок (а) на схеме , применяется редко, хотя он и имеет прямую аналогию с биосинтезом белка. Он включает удаление защиты карбоксигруппы и активирование концевой карбоксигруппы пептида. Этот подход, следовательно, делает максимальной возможность рацемизации и других возможных побочных реакций, затрагивающих активированный пептид. Противоположный процесс, т. е. ступенчатое наращивание со стороны концевой карбоксильной груп- [c.408]

Легче представляется обычная проблема растворимости пептида в буфере для конденсации. При плохом растворении пептида в обычном буфере перед добавлением носителя можно попробовать добавить пиридин и (или) ДМФА. При конденсации ДИТЦ-активированного пептида с носителем, содержащем аминогруппы, реагент имеет разную склонность к выпадению в осадок в виде производного мочевины в зависимости от содержания воды, необходимой для растворения пептида. [c.389]

Существует большое число методов образования пептидной связи между замещенными аминокислотами или пептидами. Обычно их разделяют на методы, при которых активируется карбоксильная группа, и методы, связанные с активированием аминогруппы. [c.386]

Активированные эфиры нового типа, были получены при обработке защищенных аминокислот или пептидов в ацетонитриле или в нитрометане Ы-этил-5-(3 -сульфофенил)-оксазолом. Получаемый при этом эфир даег с эфиром аминокислоты пептидное производное и растворимый в воде ароматический иродукт (Вудворд, 1961) [c.684]

Для синтеза пептидов применялись, кроме эфиров фенолов, и другие сложные эфиры, обычно называемые активированными. Из них наиболее полезны цианметиловые эфиры. [c.249]

Имеющее регуляторное значение изменение активности фермента часто усиливается при помощи каскадного механизма первый фермент воздействует на второй, второй — на третий и т. д. Этот механизм обеспечивает быстрое появление больших количеств активной формы последнего фермента цепи. Примером каскадного механизма может служить механизм свертывания крови [89], представленный схематически на рис. 6-16. Мы видим последовательность, состоящую из пяти ферментов и начинающуюся с фактора XII, в которой каждый фермент активирует следующий путем отщепления небольшой части пептидной цепи (ограниченный протеолиз). На конечном этапе тромбин воздействует на фибриноген и, отщепляя небольшой пептид, превращает его в фибрин — специализированный белок, который спонтанно свертывается. Какие факторы препятствуют выходу каскадного механизма из-под контроля Почему при небольшом кровоподтеке весь протромбин в нашем организме не превращается в тромбин и не происходит свертывания всей крови Здесь, несомненно, имеет место та же ситуация, что и в случае сАМР, который быстро удаляется из системы с помощью специфического фермента существуют механизмы удаления активированного фермента из каскадной последовательности, представленной на рис. 6-16. Помимо этого имеется специальная ферментная система, растворяющая сгусток крови при заживлении раны [89]. [c.72]

Одной из главных проблем синтеза пептидов является легкая рацемизация хиральных аминокислот с активированной карбоксильной группой при действии оснований. Такая изомеризация особенно вероятна у аминокислот, имеющих ацильную группу при атоме азота, так как в этом случае возможно промежуточное образование 5-оксазолона. При этом рацемизация протекает через енольную форму [c.561]

Уже при зарождении синтетической пептидной химии для образования пептидной связи использовалась ацилирующая способность метиловых и этиловых эфиров аминокислот. Первые работы, проведенные Курциусом и Фищером, хотя и не получили практического применения, однако способствовали пониманию того, что эфиры ацилированных аминокислот и пептидов являются активированными соединениями. Спустя примерно 80 лет Виланд и сотр. (257], применив для образования пептидной связи тиоэфиры N-замещенных аминокислот, сделали метод активированных эфиров достоянием современной пептидной химии. Немного позже Швицеру и сотр. [c.146]

Применение метода Уги. Преимущество метода четырехкомпонентной конденсации (разд. 2.2.5.6) состоит в том, что в отличие от обычных методов конденсации активированные производные пептидов не рацемизуются. [c.173]

Пуромицин. Пуромицин обладает явным структурным сходством с ами-ноацил-8-РНК. Он блокирует белковый синтез, функционируя как аналог аминоацил-5-РНК. Специфическое действие пуромицина основывается на том, что он заменяет собой вновь поступающую аминоацил-х-РНК, служащую акцептором активированного пептида, и сам связывается с пептидом (атака по атому азота, указанному стрелкой). Образовавшийся в результате этого пептидилпуромицин не может быть переброшен на следующую амино-ацил-8-РНК (по связи, указанной волнистой линией, трансацилирование [c.533]

Ввиду биологической важности производных адениловой кислоты основное внимание было сосредоточено на ацил- и аминоацил-ангидридах аденозин-5 -фосфата. Однако в клетках асцитной карциномы Эрлиха было обнаружено производное аспарагиновой кислоты и уридин-5 -фосфата [306], а в экстрактах из дрожжей (Гоги1ор815 ШШз) отмечено также присутствие аспарагинового, глутаминового, аргининового и аланинового производных уридин-5 -пирофосфата [307]. Из печени и лактирующих млечных желез выделены производные глутаминовой и аспарагиновой кислот и аденозин-5 -пирофосфата [308]. В связи с рассмотрением такого рода соединений интересно отметить, что в пекарских дрожжах обнаружена обусловленная нуклеозид-5 -трифосфатом активация пептидов, которая связана с протеолитическими процессами (поскольку к диализированной неочищенной фракции белка не было добавлено никаких аминокислот или пептидов). На 1 моль образовавшегося (из активированного пептида) гидроксамата приходилось стехио-метрическое количество освобожденного неорганического фосфата. Та же ферментативная фракция катализирует обмен радиоактивного фосфата с каждым из четырех рибонуклеозид-5 -трифосфатов [309]. [c.231]

Недавно предложен простой и удобный метод активации карбоксильной группы пептида перед его иммобилизацией. При растворении и выдерживании пептида в смеси ТФУ и ангидрида ТФУ, по-видимому, образуется смешанный ангидрид. Затем удаляют легколетучие соединения. Активированный пептид растворяют в ДМФА, добавляют аминокислоту. Предварительное растворение образца в ТФУ облегчает последующее растворение в ДМФА [70]. Выходы стадии присоединения малых и средних по размерам пептидов колеблются от 55% до 98% высокие выходы свидетельствуют о том, что трифтороацетильная группа является легко уходящей [66]. При обработке пептидов, содержащих Gin, может произойти частичное дезамидирование последнего, а в случае пептидов, содержащих Asp, возможно образование циклических имидов. Вышеуказанные проблемы можно сделать менее острыми, если найти способ активации только части карбоксильных групп. Возможно, затем удастся провести селективную активацию С-концевых остатков с образованием промежуточных оксазолинонов. [c.446]

Существует много способов синтеза более длинных пептидов. Например, можно провести конденсацию пептида (у которого защитная группа V снята, а Т. блокирует СООН) с 1ЫН—СНК —СОХ. Другим способом синтеза может служить реакция активированного пептида с У-защищеиной аминогруппой и пептида с 2-защищенной карбоксильной группой. Приведенный ниже синтез глициллейци-на иллюстрирует одни из возможных путей, который может быть использован для получения дипептида [c.123]

Полипептиды, Понятие о пептидной связи. Проблема синтеза пептидной связи. Защита аминогруппы, методы удаления защитных групп. Определение концевых групп. Активирование карбоксильной группы для образования пептидной связи. Синтез пептидов на твердых носителях (Меррифильд). Аминокислотные анализаторы. [c.248]

Обзорная работа Вилапда и др. [660, 661] дает хорошее представление о других способах синтеза пептидов при помощи активированных таким образом сложны зфирои. [c.457]

Курциус получил карбоксиметиловый эфир гиппуровой кис Лоты в 1888 г. [300], но Первое использование активированных эфиров для синтеза пептидов опйсали в ряде исследований начиная с 19М г. Швейцер, Изслин, Фейрер и их сотрудники. [c.249]

Для синтеза пептидов цианметиловые сложные эфир1=1 обладают явными преимуществами по сравнению с другими активированными эфирами. [c.253]

Скорость образования пептидов зависит от применяемых активных групп. Со смешанными ангидридами, карбодиимидом и этоксиацетиле-ном реакция протекает быстро и фактически заканчивается в течение 10—30 мин. Активированные эфиры аминокислот реагируют значительно медленнее. Биркофер предложил воспользоваться этим различием для синтеза трипептидов без предварительного выделения промежуточно образующихся дипептидов. [c.495]

Для получения аспартама и его аналогов также широко использовали классические пути синтеза пептидов (карбоди-имидный метод, метод смешанных ангидридов или активированных эфиров [81, 82]). Преимущества и недостатки этих методов хорошо известны. Описан синтез аспартама с использованием трифтороацетокснсукцинимида [83]. Этот реагент обеспечивает быструю и полную замену Ы.р-О-замещен-ного карбоксильного компонента на соответствующий эфир, который легко вступает в реакцию аминолнза. [c.95]

О синтезе эфиров нуклеотидил-(5 -М)-аминокислот и пептидов путем связывания соответствующих аминокислотных и нуклеотидных производных карбодиимидным и карбонилдиимидазольным методами сообщалось в работе [209]. Стереорегулярные гомонуклеотиды из активированных производных урацил-N -/3-аланина получили Швачкин и сотр. [210]. [c.76]

Вторая аминокислота Б (аминокомпонент) атакует активированный карбоксильный компонент аминогруппой с образованием пептидной связи. Незащищенная аминофункция карбоксильного компонента А тоже может реагировать, что приводит (рис. 2-4) к нежелательным побочным продуктам — линейным и циклическим пептидам. Из этого следует вывод, что для однозначного течения пептидного синтеза следует временно блокировать все функциональные группы, не участвующие в образовании пептидной связи. [c.95]

Активирование карбоксильного компонента и следующее за ним образование пептидной связи, т. е. так называемая реакция конденсации, в идеальных условиях должны протекать с высокой скоростью без рацемизащ1и, без побочных реакций и с высоким выходом при соединении эквимолярных количеств карбокси- и аминокомпонентов. К сожалению, в настоящее время еще неизвестно такого метода конденсации, который удовлетворял бы всем этим требованиям. Приходится выбирать из относительно большого набора методов подходящие варианты в соответствии со специфическими целями синтеза. Решение зависит в каждом случае от выбранной тактики синтеза, в соответствии с которой для каждого отрезка синтезируемой последовательности подбираются оптимальные методы конденсации. Набор методов, которые применяются для практического проведения синтеза пептидов, относительно мал по сравнению с примерно 130 описанными методами синтеза. [c.98]

Можно исходить также из эфиров аминокислот и удалять эфирную группу после тритилирования. Однако омыление часто бывает затруднительным. Встречаются сложности и при селективном гидрогенолитическом отщеплении бензильной группы от соответствующих тритилированных бензиловых эфиров аминокислот. При применении в качестве растворителя диоксана удаляется только бензильная эфирная группировка. Активированию карбоксильной группы тритилированных аминокислот мешают стерические препятствия, создаваемые тремя объемными фенильными остатками. Наилучшие результаты дает применение карбодиимидного метода (разд. 2.2.5.4). Кроме того, хорошие результаты получаются с Ы-гидроксисукцинимидными эфирами [124]. Отрицательное стерическое влияние тритильной группы меньше сказывается на поведении карбоксильной Функции пептидов, поэтому в случае пептидов омыление и активирование протекают без особых трудностей. Можно использовать преимущество тритильной защиты, заменив ею другую защитную группу на какой-то стадии синтеза пептида. Тритильная группа может отщепляться в мягких ус- [c.113]

Полученный 4-метилсульфонилфениловый зфир обладает свойствами активированного эфира и может использоваться для дальнейших синтезов в качестве карбоксильного компонента (К—N-зaмeщeнный остаток пептида). [c.124]

В N-кapбoк иaнгидpидax карбоксильная группа находится в активированном состоянии, в то время как аминогруппа блокирована. Такие производные аминокислот могут служить прекрасными исходными соединениями для синтеза пептидов. [c.144]

Постепенное наращивание пептидной цепи с применением Ы-защитных групп уретанового типа. Аминокислоты и пептиды с такими защитами (см. разд. 2.2.4.1.1.1.) не образуют азлактонов в активированном состоянии. Алкоксикарбониламинокислоты 111 могут, правда в активированной форме (X = С1), давать Ы-карбоксиангидриды [1,3-оксазолидин-2,5-дионы] IV, однако алкоксигруппы препятствуют образованию азлактонного кольца. [c.172]

Активирование Ы-защищенных фрагментов пептидов с С-концевым пролином. При введении карбоксикомпонента с С-концевым пролином образование азлактона невозможно, так что такие пептиды можно активировать, не опасаясь рацемизации. Нет опасности рацемизации также при активировании фрагментов с С-концевым глицином из-за отсутствия хиральности у этой аминокислоты. [c.172]

Речь идет, собственно, не о синтезе на полимерном носителе, так как растущая пептидная цепь постоянно находится в растворе. В реакцию с аминокомпонентом вводится нерастворимое активированное полимером карбоксильное производное, причем образуется растворимый защищенный пептид и освобождается полимер. Преимущество этого метода состоит в том, что полимерные реагенты могут вводиться в избытке, а отделение синтезированного пептида от нерастворимого полимера не представляет трудностей. Для этой цели подходят разные типы полимерных активированных эфиров. Метод был разработан одновременно группами Пачорника [478] и Виланда [479]. Такие полимерные реагенты должны быть механически устойчивы, обладать хорощей набухаемостью и иметь высокую химическую активность и малую стерическую затрудненность. Виланд и сотр. предложили вести процесс непрерывно (рис. 2-24). [c.199]

Для реакций циклизации в принципе подходят те же методы конденсации, которые используются и для синтеза линейных пептидов. Из линейного пептида с незащищенной аминофункцией при активировании карбоксила наряду с циклическим пептидом I могут получаться также линейные полимеры П (рис. 2-25). [c.201]

Для того чтобы подавить легко идущую линейную конденсацию, реакцию проводят при больщом разбавлении, в соответствии с принципом Руггли — Циглера. В этих условиях вероятность мономолекулярной реакции замыкания кольца не снижается, в то время как бимолекулярная поликонденсация заметно уменьщается. На практике циклизующиеся компоненты очень медленно вводят в реакционную среду. Активирование карбоксильной функции линейных пептидов можно проводить различными методами. [c.201]

Активирование при блокированной аминофункции. Этот метод основан на применении активированных эфиров N-защищенных пептидов. После отщеплении Ы -защитной группы происходит промежуточное блокирование солеобразованием, которое в нужное время снимается добавлением основания. [c.202]

Активирование незащищенных пептидов. Применяется для циклиза-ВД1И пептидных фрагментов путем введения в реакщюнную среду дициклогексилкарбодиимида (также с добавками), водорастворимых карбодиимидов или других активирующих средств. [c.202]

Активирование в виде полимерных активированных эфиров. Принцип активирования карбоксильной группы полимерным носителем для синтеза циклических пептидов был использован Фридкиным и сотр. [488]. N-Защищенная пептидная последовательность, подлежащая циклизации, присоединяется к подходящему полимерному активирующему реагенту. После деблокирования циклический пептид получается путем внутримолекулярного аминолиза [c.202]

В случае применения принципа безопасного захвата вначале синтезируют линейные фрагменты на соответствующем носителе, затем якорная группировка активируется, и после отщепления N -зaщиtнoй группы активированная полимерная карбоксильная функция взаимодействует со свободной аминогруппой с образованием циклического пептида [489]. [c.202]

S-защищенным пептидом без предварительного деблокирования. При этом цистеин или блокированное производное цистеина с электрофильно-отщепляемой S-защитной группой сначала переводится иодом, дироданом [496] или метоксикарбонилсульфенилхлоридом [494, 495] в активированное промежуточное соединение. Последнее реагирует со второй молекулой цистеина или S-блокированного цистеина (R = Н или электрофильно-отщепляемая защитная группа, такая как Trt, Dpm, A m, Thp и др.) и дает производное цистииа [c.205]