Глутаровый альдегид, в реакциях

Рис. 18.9. Зависимость активности иммобилизованной уреазы (в единицах активности на 1 г сухого адсорбента-носителя) от количества белка, иммобилизованного на макропористом силохроме (<г= 180 нм, 5 = = 41 м /г), поверхность которого была модифицирована сначала реакцией с у-аминопропилтриэтоксисила-ном, а затем реакцией с глутаровым альдегидом

Получение конъюгатов с помощью гомобифункциональных сшивающих реагентов. Весьма удобным в качестве сшивающего реагента оказался глутаровый альдегид, который взаимодействует с е-аминогруппами лизиновых остатков антител и фермента. Механизм реакции глутарового альдегида с белками до конца не изучен. Одновременно протекает несколько реакций, приводящих к появлению смеси продукта, содержащих более прочные химические связи, чем в простых основаниях Шиффа. Однако в общем виде схему реакций можно записать в следующем виде [c.183]

ПодготоЕ ленная путем модифицирования реакцией с -амино-пропилтриэтоксисиланом поверхность достаточно крупнопористого силохрома или силикагеля может быть использована для иммобилизации белков и, в частности, ферментов, нужных для проведения -биокаталитических реакций. Для этого, как указывалось в лек-дии 5, надо провести дальнейшее модифицирование поверхности адсорбента-носителя прививкой агента (глутарового альдегида), способного вступить в реакцию с аминогруппами как модификатора, так и балка. Адсорбент-носитель с привитыми теперь уже альдегидными концевыми группами вводится в реакцию с различными белками. Ра ссмотрим иммобилизацию уреазы — важного фермента, находящего также применение в аналитическом определении мочевины и в аппарате искусственная почка . На рис. 18.9 представлена зависимость активности иммобилизованной уреазы от количества иммобилизованного белка. Адсорбентом-носителем является макропористый силохром со средним диаметром пор 180 нм. Этот размер пор значительно превышает размер глобулы уреазы. Вместе с тем удельная поверхность этого силохрома еще достаточно высока (5 = 41 м /г), чтобы обеспечить иммобилизацию значительного количества уреазы. Из рис. 18.9 видно, что при этом удается иммобилизовать до 120 мг белка на 1 г сухого адсорбента-носителя (это составляет около 3 мг/м ). Активность уреазы снижается не более, чем наполовину, даже при большом количестве уреазы в силикагеле, зато иммобилизованный так фермент можно многократно применять в проточных системах, и он не теряет активности при хранении по крайней мере в течение полугода. [c.341]

Наньо и Гюильбо [548] разработали новый ферментный электрод на L-аминокислоты на основе электрода — датчика растворенного кислорода, который представляет собой платиновый дисковый электрод (Бекман 39273), запрессованный в пластмассовый цилиндрический корпус. Иммобилизованный сополимер фермента, полученный смешением оксидазы L-аминокислоты, альбумина и глутарового альдегида в 0,1 М фосфатном буферном растворе (pH 7,3), наносят на поверхность платины. Чтобы защитить слой фермента, на электрод надевают чехол из найлоновой ткани, укрепленный резиновым кольцом. Снижение концентрации растворенного кислорода в результате ферментативной реакции [см. реакцию (15.2)] измеряют полярографическим методом. Порядок работы в этом случае такой же, как и при определении спиртов (см. разд. 7.1). Электрод стабилен в течение по крайней мере 4 месяцев, время отклика составляет 1 мин. [c.191]

Следует учитывать, что из-за вариабельности п число сшивок определить трудно, однако можно надеяться, что при достаточной длительности реакции число затронутых свободных аминогрупп будет приближаться к максимально возможному (для БСА — около 70 на молекулу). Причем для эффективной сшивки концентрацию глутарового альдегида необходимо подбирать таким образом, чтобы количество функциональных (альдегидных) групп реагента не превышало количества реакционноспособных функциональных (аминогрупп) в закрепляемом белке. По причине невозможности точного определения п и неизвестной доступности аминогрупп и расстояний между ними в белковой макромолекуле это соотношение нужно подбирать эмпирически. [c.552]

Модифицированные полимеры на акриламидной основе (см. разд. 31, 87) намного превосходят по инертности целлюлозные носители неспецифическая адсорбция белков проявляется на них значительно слабее. Для иммобилизации крупных лигандов применяют также исходные, немодифицированные полиакриламидные гели (см. разд. 31) — посредством реакции с глутаровым альдегидом (см. разд. 125/11). [c.228]

Глутаровый альдегид способен полимеризоваться по механизму чередования между- и внутримолекулярных реакций, образуя полимер, состоящий из 6-членных циклов, соединенных через атомы О [c.175]

Иммуноферментный анализ. Метод широко внедрен в лабораторную практику в последнее время. В основе метода— использование антител, меченных ферментами (чаще всего пероксидазой). Конъюгацию осуществляют глутаровым альдегидом или другим бифункциональным реагентом. Реакцию проводят в условиях, исключающих инактивацию фермента. Техника постановки реакции состоит в следующем. Антиген адсорбируют на поверхности лунок в пластинах из полистирола. Если антитела, меченные ферментом, направлены к адсорбированному антигену, они окажутся фиксированными в лунках. Затем в лунки вносят раствор субстрата (если к антителам присоединена пероксидаза, то это перекись водорода и индикатор — диаминобензидин). В результате ферментативного превращения субстрата появится цветной продукт. Степень окраски пропорциональна количеству сорбированных антител с ферментом. [c.263]

Чтобы проследить судьбу антигена на всем пути от исходных клеток до очищенного препарата, мы используем непрямую реакцию торможения связывания МКА на фиксированных глутаровым альдегидом клетках-мишенях [15]. Однако существует и другой подход на каждой стадии очистки полученный материал адсорбируют на нитроцеллюлозной мембране и выявляют содержание- в нем антигена по связыванию МКА непрямым методом [34]. [c.181]

Сшивание трипсина с альбумином человека и свойства конъюгатов как потенциальных тромболитических агентов изучены в работах [137,138]. Сохранение ферментативной активности зависело от условий реакции, причем активность снижалась с увеличением концентрации сшивающего агента, pH и продолжительности реакции, т. е. при многоточечных сшивках и образовании массивных конгломератов (М 2 млн.). Блокирование свободных альдегидных групп приостанавливало снижение активности. Оптимум pH конъюгатов оказался не смещенным, а взаимодействие с соевым ингибитором снижено в результате влияния одноименно с ним заряженной альбуминовой части конъюгата. Активность по казеину была лишь 17 % для невосстановленного конъюгата и 84 % для восстановленного борогидридом. Повышение физиологической активности белка при снижении концентрации сшивающего агента (глутарового альдегида) наблюдалось и в других случаях. [c.200]

К сожалению, этот метод имеет два принципиальных недостатка 1) гель создает большие диффузионные барьеры для субстратов и образующихся продуктов, что приводит к замедлению реакции, особенно в случаях субстратов с большим молекулярным весом, например рибонуклеазы, трипсина и декстраназы 2) утечка фермента -из геля через крупные поры приводит к непрерывному снижению ферментативной) активности. Последняя проблема часто решается при помощи поперечной сшивки захваченного белка глутаровым альдегидом. [c.85]

Мягким и селективным восстановителем является тетракарбонилгидридо-феррат калия. Так, из глутарового альдегида 4, КНРе(СО)4 и этаноламина, взятых в эквимолярных количествах, синтезирован М-гидроксиэтилпиперидин 5 [11]. Реакция протекает в мягких условиях (20°С), в атмосфере оксида углерода(П) (схема 2) [c.66]

Здесь мы не будем рассматривать преднамеренную модификацию аминокислотных остатков в белках, которая, разумеется, щи-роко используется для изучения их структуры. Артефакты, образующиеся в результате нагревания белков или при обработке химическими препаратами для других целей, также не столь редки. Например, термическая обработка протеинов молока в результате взаимодействия глюкозы с е-аминогруппой лизина приводит к образованию кислотоустойчивых соединений пиридозина (1) и фу-ранозина (2) [7]. Использование глутарового альдегида для сщи-вания цепей белка также вовлекает в реакцию лизин, при этом образуется [8] пиридиниевое производное (3). [c.229]

Иммуноанализ проводят следующим образом. Полистирольные пробирки (80X11 мм) покрываются антителами при обработке 1 мл раствора антител. Растворы антител разбавляют ОД М N a-карбонатного буфера (pH 9,8) или фосфатным (солевым) буфером. Пробирки с этими растворами оставляют на 3 ч при 37 °С для хранения раствор оставляют в пробирках на холоду. Перед определением необходимое число пробирок промывают 0,9%-ным хлоридом натрия, содержащим 0,05% твина 20. В каждую пробирку помещают 0,5 мл одного из следующих растворов 1) стандартный раствор иммуноглобулина G, 2) неизвестный образец, 3) буферный раствор. После этого добавляют 0,1 мл разбавленного конъюгата щелочной фосфатазы и иммуноглобулина G (приготовленного с помощью сщивапия глутаровым альдегидом). Для разбавления используют фосфатный (солевой) буферный раствор, содержащий 1% сывороточного альбумина человека и 0,02% азида натрия. Пробирки инкубируют при комнатной температуре в течение ночи (16 ч) на роторной мешалке так, чтобы поверхность, покрытая антителами, покрывалась 0,6 мл раствора, находящегося в каждой пробирке. Затем пробирки промывают три раза раствором Na l-твин. Количество фермента, присоединенного к иммуноглобулину G, связанному стенками пробирок, покрытых антителами, определяют, добавляя 1 мл 0,05 М Na-карбонатного буфера (pH 9,8), содержащего 1 мг/мл п-нитрофенилфосфата и 1 ммоль/л хлорида. магния. Через 30 мин реакцию останавливают, добавляя 0,1 мл 1 М ХаОН. Измеряют оптическую плотность при 400 нм и строят стандартный график зави-си.мости ферментативной активности (изменение оптической плотности в единицу времени) индивидуальных образцов от содержания в них иммуноглобулина G. [c.382]

Из схемы видно, что все многообразие структур растительных хиноли-зидиновых оснований создается путем ферментативных реакций всего двух молекул пиперидеина 6.157 и глутарового альдегида 6.209. Обе они образуются окислением кадаверина 6.22, который сам является продуктом окисления аминокислоты лизина (см. схему 118). [c.473]

Реакция протекает в присутствии г-толуолсульфокислоты. Полис гш-роацетали из глиоксаля, малонового или терефталевого альдегида плавятся выиге 300° С. Полиспироацеталь из пентаэритрита и дииентаэри-трита с глутаровый альдегидом дает гибкие теплостойкие пленки [76]. [c.226]

Практические синтезы Э-кето-Е-2-деценовой кислоты, позволяющие получать большие количества вещества, основаны на реакции Виттига [777— 782). Так, глутаровый альдегид с фосфорилидом (26I) (схема 9I) переводят в альдегидоэфир (262), который с ацетоном дает кетоэфир (270). После гидрирования эфира (270) получают кислоту f257) (схема 91). [c.134]

Реакция фосфина с диальдегидами в присутствии соляной кислоты приводит к образованию спироциклических фосфониевых солей. Так, с глутаровым альдегидом был выделен 1,5,7,11-тетраоксиспирО Л5,5 ундекан-б-фосфоний-хлорид (69%), а с янтарным—1,4,6,9 тетраоксиспйро[4,4]нонан-5-фосфонийхлорид (34%) > [c.23]

Уэстон И Аврамес [86] разработали метод прямого связывания аффинных лигандов полиакриламидными гелями с помощью глутарового альдегида, который, присутствуя в избытке, реагирует одной из своих альдегидных групп со свободной амидной группой полиакриламидного геля. Остающаяся свободная активная группа реагирует затем с аминогруппой аффинного лиганда, вводимого в последующей реакции связывания. Таким образом возникает прочная связь между носителем и аффинным лигандом. [c.204]

Реакция протекает в присутствии ге-толуолсульфокислоты. Полиспироацетали из глиоксаля, малонового или терефталевого альдегида плавятся выше 300° С. Полиснироацеталь из пентаэритрита и динентаэри-трита с глутаровым альдегидом даст гибкие теплостойкие пленки [76]. [c.226]

В присутствии кислых агентов (обычно трехфтористого бора) карбонилируются также ацетали винилуксусного альдегида. При проведении реакции с добавками ортоэфира получаются бис-диал-килацетали глутарового альдегида [981—983] [c.112]

Полимеризация глутарового альдегида по реакции Тищенко дает только ннзкомолекулярный полимер, поскольку одновременно протекает циклополимеризация, инициируемая следами воды [Y о к о t а К., 11 о У., I s h i i Y., Kogyo Kagaku Zasshi, 66, 1112 (1963)] [c.165]

Постановка РПГА из инактивированной и истощенной эритроцитами барана исследуемой сыворотки готовят 2 ряда двойных раз-ведений, начиная с 1 2, на разводящей жидкости (0,2% раствор желатина на физиологическом растворе). При постановке реакции в пробирках разведения делают в объеме 0,5 мл, а при микрометоде — в объеме 0,05 мл. В первый (основной) ряд добавляют сенсибилизированные эритроциты, а во второй (контрольный) — танизи-рованные или обработанные глутаровым альдегидом эритроциты, взвешенные в разводящей жидкости в том же объеме, что и сенсибилизированные. При пробирочном варианте эритроциты добавляют пастеровской пипеткой по 1 капле, при микрометоде—по 0,025 мл. Кроме этого контроля, проверяющего полноту истощения сыворотки, ставят еще два контроля на спонтанную агглютинацию для первого к объему разводящей жидкости (0,5 или 0,05 мл в зависимости от методики) добавляют контрольные, а для второго — сенсибилизированные эритроциты (по 1 капле или 0,025 мл в зависимости от методики). Инкубируют при комнатной температуре при постановке в пробирках в течение 18 ч, при микрометодике — в течение IV2—2 ч. [c.218]

Межмолекулярная циклизация фосфористого водорода с диальдегидами. Установлено , что диальдегиды легко взаимодействуют с фосфористым водородом в присутствии соляной кислоты в тех случаях, когда могут образоваться относительно устойчивые пяти- и щестичленные циклы. Этим путем были получены спироциклические соли фосфония. Например, в результате реакции фосфористого водорода с глутаровым альдегидом получается хлористый 1,5,7,11-тетраокси-6-фосфсниа-спиро[5,51 ундекан (п = 3) с Еыходом 65 (1, а по реакции с янтарным альдегидом — хлористый 1,4,6,9-тетраокси--5-фосфониа-спиро[4,4]нонан п == 2) с выходом 3 4 о [c.660]

Гладко идет реакция бмс-диэтилацеталя глутарового альдегида с Р,р-дпметилвпнилэтиловым эфиром [821] [c.227]

Введение альдегидных групп в полимеры, содержащие аминогруппы, можно проводить с помощью диальдегидов, например глутарового альдегида. Таким способом можно активировать аминоэтилцеллюлозу, аминополистирол, ПААГ, полиамиды, белковые носители и т. д. Реакцию активации аминогрупп можно представить так [c.30]

Иммобилизация антител на силохроме, макропористом силикагеле и пористом стекле. Силохромы — неорганические пористые носители на основе кремнезема, выпускаются отечественной промышленностью для целей хроматографии. Различные марки сило-хромов отличаются диаметром пор (35—250 нм) и удельной поверхностью (25—130 м /г). Для иммобилизации антител чаще всего используют силохром, предварительно модифицированный 7-аминопропилтриэтоксисиланом ( у-АПТЗС) и глутаровым альдегидом. Схема реакции [c.204]

Рис. 14-1. Сопоставление последовательности реакций в методе a-ELISA и в других антиген-специфических вариантах ELISA. ЩФ — щелочная фосфатаза темный шестиугольник— иммобилизованный антиген светлые Y-образные молекулы — первые антитела темные Y-образные молекулы — изотип-специфи-ческие антиглобулины Y-образные молекулы, помеченные точками — третьи антитела, в одном из вариантов конъюгированные с фосфатазой заштрихованные Y-образные молекулы — антитела против ЩФ. В двух вариантах (в середине схемы) используются обычные конъюгаты, полученные в одну стадию с помощью глутарового альдегида.

Отсюда определенный интерес представляет использование в анализе иммуносорбентов, полученных путем аффинного связывания специфических антител с иммобилизованным на носителе антигеном. Связь антиген — антитело обратима, поэтому для предотвращения смывания антител с сорбента разработаны пути последующего ковалентного закрепления молекул, образовавших специфический комплекс на носителе. Для стабилизации комплекса эффективно применяются обычные сшивающие агенты глутаровый альдегид, диазиды, изоцианаты. Процедура иммобилизации включает инкубацию связанного с носителем антигена с антисывороткой, отмывку носителя, проведение реакции с сшивающим антигеном и заключительную отмывку для удаления избытка (рис. 24). Процесс может проводиться как в реакторах перемешивания, так и в колоночном режиме. Данный подход детально изучен на примере иммобилизации антител против сывороточного альбумина человека на сефарозном сорбенте. В результате такого связывания по крайней мере половина активных центров иммобилизованных антител способна принимать- участие в последующих реакциях с антигеном, что является недостатком метода. Однако [c.210]

Разнообразны также реакции карбонильных соединений с аминопропильными группами ХМК. Широко используется метод иммобилизации ферментов через глутаровый альдегид, разработанный ранее для полимерных носителей. Твг КИМ способом удалось приготовить эффективный сорбент для разделения сахаров (иммобилизация коновалина А) [58], а прививкой через глутаровый альде-ттед бъ1л получен эффективный сорбент ддя гель- [c.106]

Закономерен вопрос о способе фиксации полученной сшивки. Во-первых, необходимо устранить непрореагировавшие альдегидные группы для предотвращения возможного химического взаимодействия покрытия частиц с компонентами пробы и друг с другом. Для этой цели можно использовать различные агенты, содержащие аминогруппы, или восстановители, например ТРИС, лизин, сульфат аммония, бисульфит или борогидрид натрия. Кинетика реакции и стабильность образующихся продуктов описаны в работе [100]. Во-вторых, некоторые образующиеся альдиминные связи неустойчивы в различных средах, поэтому также нуждаются в восстановлении. Таким образом, в качестве терминатора реакции используется борогидрид натрия. Восстановление непрореагировавших альдегидных групп и образовавшихся связей происходит быстро (20-30 мин. при 6°С) и количественно при соотношении реагент] / [СНО-группы] = 0,5 моль/моль. Временное восстановление и, возможно, частичное перераспределение дисульфидных связей уже после сорбции и межмолекулярной сшивки глутаровым альдегидом не должно существенно нарушить глобулярную структуру белкового покрытия [11-13, 98, 99]. [c.552]

В качестве промежуточного носителя авторы выбрали диальдегиддекстран, к которому по реакции восстановительного алкилирования присоединяли сначала дауномицин, а затем антитела. Конъюгат содержал 20 мооть антибиотика на моль антитела, но как противоопухолевая, так и иммунологическая активность была понижена более чем вдвое по сравнению с исходными веществами. Полиакрилоилгидразид, обработанный глутаровым альдегидом, дал еще худшие результаты. С окисленной перйодатом тРНК были связаны ковалентно антитела и комплексно присоединен дауномицин. В этом случае сохранилась почти вся противоопухолевая активность и я 50% иммунологической активности. Наконец, дауномицин был присоединен к антителам через вставку — в виде N-ацильных произ- [c.127]

Реакцию активной гемагглютинации вверху слева) используют для выявления антител к антигенам эритроцитов. Сыворотку последовательно разводят (обычно используют двукратные разведения) физиологическим раствором и вносят в лунки планшета (внизу ряды 1 - 10 слева направо). Ряды 11 и 12 служат для положительного и отрицательного контролей. В данном примере исследовано 8 разных антисывороток (А -Н). В каждую лунку вносят суспензию эритроцитов (содержащую особый белок для предотвращения неспецифической агглютинации эритроцитов) до концентрации клеток 1 %. Если количество антител в лунке достаточно для агглютинации (перекрестного связывания) всех эритроцитов, они осаждаются на дно лунки, образуя пятно. Если же антител недостаточно, клетки, скатываясь по стенкам лунки на дно, формируют небольшую плотную пуговку . Некоторые антитела плохо агглютинируют зритроциты и для их выявления необходимо ставить реакцию непрямой агглютинации в лунки добавляют другие антитела, которые соединяются с неагглютинирующими антителами, уже связавшимися с эритроцитами. С помощью реакции гемагглютинации можно определять и другие, не зри-троцитарные антигены, ковалентно или нековалентно присоединенные к эритроцитам. Для того чтобы связать антиген с поверхностью эритроцитов (сенсибилизировать их), используют хлорид хрома, таннино-вую кислоту, глутаровый альдегид и ряд других химических агентов. [c.531]

Для закрепления глюкамилазы на пористом силикагеле разработана [7] следующая методика силикагель предварительно обрабатывают тетрохлоридом титана, высушивают и вводят в химическую реакцию с 1,6-диаминогексаном в четыреххлористом углероде. После промывки его приводят в контакт с глутаровым альдегидом, чтобы закрепить фермент на подложке. [c.80]

Сшивание при помощи лутарового альдегида с бычьим сывороточным альбумином на электроде Pd — PdO Сшивание при помощи глутарового альдегида с бычьим сывороточным альбумином на платине Реакция с нерастворимым коллагеном, медиатор диме-тилсуберимидат Захват в желатиновом слое Соиммобилизация [c.82]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология